专利名称：一种提高免疫力的复合核苷酸口服液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种保健品，尤其涉及一种可双向调节人体白细胞数量、提高人体免疫力的复合核苷酸口服液及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术：
1868年在法国杜宾大学细胞实验室瑞士生物学家米歇尔在人体细胞中分离得到一种含磷的酸性新物质，取名为“核素”。后经同一实验室的科学家阿特曼分离出不含蛋白质的物质，呈酸性，重新定名为核酸，这是世界公认的最早发现的核酸，由于核酸对生命科学的重要性，围绕核酸相关的研究至今已有八十余位生物学家、化学家、医学家、生理学家获得诺贝尔奖。1953年4月25日在世界著名的“遗传”杂志上发表的DNA(脱氧核糖核酸)双螺旋结构改变了生命科学。美英科学家沃森和克里克因此而获得1963年诺贝尔奖，这是基因的伟大科学成就。
1977年美国生物化学家桑格把RNA(核糖核酸)通过酶切割，确定了RNA上的碱基序列，发明了直读法。于1977年成功测定细菌病毒中x-174DNA分子全部5386个核苷酸序列，这是对核苷酸分子结构最精确的测定。于1980年获诺贝尔化学奖。这些基础科学研究给国际“人类基因组”奠定了科学基础，是人类认识自己的生命科学。
现有的核苷酸制品不能将人体内过高的的白血球数量降至正常水平，不具有双向调节人体白细胞数量的功能。人体因白血病、高烧、肌体发炎时会产生超过健康水平10000个/mm3上的白血球，虽然白血球有免疫功能，但数量太多就会对人体产生伤害，此时需要将过多的白血球降低下来。所以需要一种既能将人体内过低的白血球数量提升至正常水平，又能将体内过高的白血球数量降低下来的具有双向调节功能的核苷酸制品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种能够调控人体白血球数量的复合核苷酸口服液。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的一种提高免疫力的复合核苷酸口服液，每1毫升该口服液中含有以下重量的核苷酸腺嘌呤核苷酸0.68-0.76mg、鸟嘌呤核苷酸0.43-0.52mg、尿嘧啶核苷酸0.5-0.67mg、胞嘧啶核苷酸0.42-0.55mg和胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.22-0.25mg。
优选的，每1毫升本发明复合核苷酸口服液中含有以下重量的核苷酸腺嘌呤核苷酸0.722mg、鸟嘌呤核苷酸0.472mg、尿嘧啶核苷酸0.508mg、胞嘧啶核苷酸0.485mg、胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.235mg。
本发明复合核苷酸口服液除含有上述主要成份外，还可适量加入人体所必需的微量元素如铁、钙等，以扩大其保健功效。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种制备上述复合核苷酸口服液的方法。
本发明所要解决的第二个技术问题是通过以下技术方案来实现的一种制备复合核苷酸口服液的方法，包括以下步骤(1)、按照现有技术方法从酵母粉中提取并分离得到腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸和胞嘧啶核苷酸；(2)、将步骤(1)从酵母粉中所分离到的腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、胞嘧啶核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸按照下述比例混合每1毫升口服液中含有腺嘌呤核苷酸0.68-0.76mg、鸟嘌呤核苷酸0.43-0.52mg、尿嘧啶核苷酸0.5-0.67mg、胞嘧啶核苷酸0.42-0.55mg和胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.22-0.25mg；加入灭菌水，定容，灭菌，即得。
本发明中所用到原料酵母粉均可从市场购买得到，例如可以购自于湖北宜昌安琪酵母股份有限公司，其商品名称是“酵母粉”。
本发明中所用到的核苷酸是从酵母粉中提取、分离得到(本发明中所用到的胸腺嘧啶脱氧核苷酸既可以从酵母粉中提取、分离得到，也可以利用从商业途径购买得到的产品，例如，可以购自于中国科学院上海生物化学研究所)。从酵母粉中所提取的核苷酸，生物相溶性好。分子量小，平均分子量在340，易被人吸收，因分子量小，能直接进入细胞修复受损细胞恢复细胞功能，既补充核苷酸的不足，又能修复人体缺损基因，效果良好，可以迅速增加白血球数量，提高人体免疫功能，能有效提高因化疗、放疗所造成的白血球损失。
本发明核苷酸口服液功效高，具有双向调节白细胞数量的功效。当人体免疫力低下或因放疗或化疗导致白细胞数量过低时，服用本发明核苷酸制品可将过低的白细胞数量提到正常的水平，增强人体免疫力；而当人体因白血病、高烧、肌体发炎产生会超过健康水平10000个/mm3上的白血球，虽然白血球有免疫功能，但太多人体就承受不了，本发明的核苷酸生物制品能将过高的白血球降至正常范围值内(4000-10000个/mm3)，使人体的免疫力保持在健康的免疫功能范围内，这是目前所有国内外核苷酸生物制品所达不到的。此外，本发明核苷酸制品对肠道营养作用明显，能够增长和修复肠道，因此能增强食欲，刺激双岐杆菌的生长，提高消化功能，增加体力，延缓衰老。
动物试验证实，本发明核苷酸制品具有增强非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫功能。本产品服用安全，进行急毒性试验，结果是按急毒性分级，属实际无毒物；遗传毒性试验，结果为阴性。
在此基础上将本发明产品送交中国科学院微生物所检测真菌和桔青霉，结果在产品中均未检出真菌和桔青霉。产品清澈透明，无悬浮物和沉淀物，在安全和功效完全达到符合要求。
用法与用量以口服液为例，每天服用两次，每次服用一支，每支10ml(每1毫升含复合核苷酸2.25-2.75mg)分早晚服用。
具体实施例方式
以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。
实施例1核苷酸的提取和分离1、核苷酸的提取发酵生物酵母是提取核酸的原料，从酵母中提取核苷酸(RNA)。将酵母粉(购自湖北宜昌安琪酵母股份有限公司，商品名称“酵母粉”，规格食品级生物酵母)投入浓度为8-10％的饱和盐水中，加热到90-95℃，搅拌反应3-5小时，冷却到10-15℃，过滤后得核苷酸混合粗液，用6N盐酸调到pH2.5酸化沉淀4小时后，用乙醇纯化后过滤，得到核酸泥，再用乙醇沉淀，温度95℃，24小时，调pH3，降温到20℃沉淀24小时后，用二甲氧基乙醇提纯，温度为95℃，调pH3，回收二甲氧基乙醇，12小时后测5’-核苷酸含量80％以上即完成。
2、核苷酸的分离采用NH-1树脂(购自南京工业大学制药与生命科学学院；说明，也可采用其它的阳离子交换树脂来代替，例如阳离子交换树脂732等)按照说明书的方法(优选的分离条件为1、上柱液pH值为3.2；2、上柱液洗脱流速为0.5m/h；3、层析柱高径比(H/D)为1∶15；4、上柱量为0.02g/ml·resin)进行分离得到5’-尿嘧啶核苷磷酸(5’-UMP)，5’-鸟嘌呤核苷-磷酸(5’-GMP)，5’胞嘧啶核苷-磷酸(5’-CMP)，5’-腺嘌呤核苷-磷酸(5’-AMP)和5’-胸腺嘧啶脱氧核苷酸，经干燥得到纯度90％以上、收率80％左右的单核苷酸。
NH-1阳离子的结构和理化特性为凝胶型聚苯乙烯；全交换容量＞2.0ml/L；装载密度820-860g/L；含水量48-52％；湿真密度1.28g/ml；最大膨胀率5(Na-H)％；粒度0.71mm-1.25mm＞95％；混合核苷酸经树脂交换后5’-UM纯度80％，因无氨基直接流出，5’-AMP 5’-GMP，5’-CMP平均收率均大于1，达到93％，纯度95％可达到国内最高水平。
实施例2本发明核苷酸口服液的制备按配1万瓶计，称取实施例1所制备的核苷酸腺嘌呤核苷酸71g、鸟嘌呤核苷酸45g、尿嘧啶核苷酸62g、胞嘧啶核苷酸49g和胸腺嘧啶脱氧核苷酸23g；加入无菌离子水，混合均匀，定容至100升，每瓶10毫升分装为1万瓶，灭菌。
实施例3本发明核苷酸口服液的制备按配1万瓶计，称取实施例1所制备的核苷酸腺嘌呤核苷酸68g、鸟嘌呤核苷酸43g、尿嘧啶核苷酸50g、胞嘧啶核苷酸42g和胸腺嘧啶脱氧核苷酸22g；加入无菌离子水，混合均匀，定容至100升，每瓶10毫升分装为1万瓶，灭菌。
实施例4本发明核苷酸口服液的制备按配1万瓶计，称取实施例1所制备的核苷酸腺嘌呤核苷酸76g、鸟嘌呤核苷酸52g、尿嘧啶核苷酸67g、胞嘧啶核苷酸55g和胸腺嘧啶脱氧核苷酸25g；加入无菌离子水，混合均匀，定容至100升，每瓶10毫升分装为1万瓶，灭菌。
试验例1本发明复合核苷酸口服液毒理学安全检验试验内容急性毒性试验；四项遗传试验(Ames试验，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，小鼠精子畸形试验，小鼠睾丸染色体畸变试验)；大鼠传统致畸试验和大鼠30天喂养试验。
试验结果本发明复合核苷酸口服液对两种性别的大小鼠经口急性毒性LD50均大于10.00/kgbw，根据急性毒性分级属实际无毒物；四项遗传毒性试验结果均为阴性；大鼠传统致畸试验结果，无致畸作用；大鼠30天喂养试验中临床检查，血液学检查，血液生化学检查，脏器称重，病理组织学检查，各检验项目的实验组与对照组比较差异不显著。
试验例2本发明复合核苷酸口服液免疫调节作用试验将18-22g昆明种雄性小鼠随机分为4个组，即三个实验组和一个蒸镏水对照组，将本发明复合核苷酸口服液按照10.00ml/kgbw，6.67ml/kgbw，3.3ml/kgbw的剂量给三个实验组的小鼠给药，每日灌胃一次，连续30天后选做小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法，DNFB诱导小鼠DTH试验(耳肿胀法)血清溶血素测定(血凝度)。
试验结果实验动物体重和体重增加重，对胸腺/体重、脾脏/体重无明显影响，有增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，能促进二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)形成，能提高小鼠血球凝集程度，根据卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法中3.1.3项，判定本发明复合核苷酸口服液具有增强非特异免疫和细胞免疫及体液免疫功能。
试验例3本发明核苷酸口服液的保健功效观察试验一、观察对象的一般资料共观察38例患者。男21例，女17例，平均年龄45岁。其中29例患者由于身体机能低下，免疫力较低，体内白血球的平均数量均低于4000个/立方毫米。另有9例分别因白血病、高烧或肌体发炎，体内白血球的平均数量均高于10000个/mm3上。
二、服用方法每天服用2支本发明核苷酸口服液，每次服用1支，每支10ml(每毫升含复合核苷酸2.5mg)分早晚服用，连续服用15天。
三、典型病例1、某男，年龄72岁；由于衰老，免疫功能低下，具体表现在白细胞数为2700/mm3，低于最低健康量4000/mm3，因此食欲不振、疲倦乏力，易感冒，住院治疗，亦未好转。服用本发明复合核苷酸口服液，每天二支，六天后测白血球，上升到5700/mm3，食欲好转，有力气，感冒亦康复。
2、某男，年龄50岁，北京工艺进出口公司干部，白血球长期在3000多一点，体力、睡眠均感到不适，服用本发明复合核苷口服液，开始一周每日二支，白血球上升到6000/mm3以上，长期服用每天一支，白血球保持6000-7000/mm3，精神状况感觉良好。
3、某女，28岁，因白血病住院治疗，白血球上升到40000/mm3，由于对人体、消耗过大，体温不正常，精神压力大，多方用药降不下来，服用本发明核苷酸口服液，每天二支，连续服用半月，白血球下降到12000/mm3，达到正常值。
4、某男，研究员，68岁，住四楼，四肢乏力，走到二楼就力不从心，休息后，方能再由二楼到四楼，服用本发明核苷酸15天左右，体力大增，可以一次上到四楼，中途不需休息。
四、观察结果所观察的29例白血球数量低于正常值患者，经连续服用本发明核苷酸口服液15天后，其体内白血球数量均恢复到4000个/立方毫米以上，并且患者的免疫力有显著提高，患者的身体机能和精神状态均有明显好转。所观察的9例白血球数量远高于正常值数量的患者，经连续服用本发明核苷酸口服液15天后，体内白血球的平均数量均降到接近12000个/立方毫米的水平，与此同时，患者的病情也都有了不同程度的改善。
权利要求
1.一种复合核苷酸口服液，其特征在于，每1毫升口服液中含有以下重量的核苷酸腺嘌呤核苷酸0.68-0.76mg、鸟嘌呤核苷酸0.43-0.52mg、尿嘧啶核苷酸0.5-0.67mg、胞嘧啶核苷酸0.42-0.55mg和胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.22-0.25mg。
2.按照权利要求1的复合核苷酸口服液，其特征在于，每1毫升口服液中含有以下重量的核苷酸腺嘌呤核苷酸0.71mg、鸟嘌呤核苷酸0.45mg、尿嘧啶核苷酸0.62mg、胞嘧啶核苷酸0.49mg、胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.23mg。
3.一种制备权利要求1复合核苷酸口服液的方法，包括以下步骤(1)、从酵母粉中按照现有技术方法提取并分离得到腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、胞嘧啶核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸；(2)、将步骤(1)所制备的腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、胞嘧啶核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸按照下述比例混合每1毫升口服液中含有腺嘌呤核苷酸0.68-0.76mg、鸟嘌呤核苷酸0.43-0.52mg、尿嘧啶核苷酸0.5-0.67mg、胞嘧啶核苷酸0.42-0.55mg和胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.22-0.25mg；加入灭菌水，定容，灭菌，即得。
全文摘要
本发明公开了一种新的复合核苷酸口服液及其制备方法。每1毫升本发明复合核苷酸口服液中含有以下重量的核苷酸腺嘌呤核苷酸0.68－0.76mg、鸟嘌呤核苷酸0.43－0.52mg、尿嘧啶核苷酸0.5－0.67mg、胞嘧啶核苷酸0.42－0.55mg和胸腺嘧啶脱氧核苷酸0.22－0.25mg。本发明复合核苷酸口服液具有增强非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫等功能，可以双向调节人体内白血球的数量，既能有效的将人体内过低的白血球的数量提升到正常水平，还能将人体内过多的白血球的数量降至正常的范围。此外，本发明核苷酸口服液对肠道营养作用明显，能够刺激肠道内双岐杆菌生长，增长和修复肠道，增强食欲，提高消化功能，延缓衰老。
文档编号A61P37/04GK1943588SQ200610138690
公开日2007年4月11日 申请日期2006年11月13日 优先权日2006年11月13日
发明者庄田, 许振亚 申请人:庄田, 许振亚