专利名称：假马齿苋皂苷的提取方法及其在医药领域中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种从草药假马齿苋中提取分离得到假马齿苋皂苷及其在预防和治疗肿瘤、精神抑郁和老年痴呆等疾病的药物中的应用。
背景技术：
假马齿苋是玄参科植物假马齿苋(Bacopa Monninera)的全草，是印度一种传统草药。中医理论中其具有清热解毒、消炎退肿之功效，用于治疗赤目痢疾、目赤肿痛、丹毒、痔疮中痛、皮肤红肿等症状，在印度医药理论中认为假马齿苋具有安神、增进记忆力和智力，促进学习获得，并有抗氧化的作用。
发明内容
本发明的目的是，根据印度阿育吠陀医药理论和治疗经验，结合现代化学和药理手段，从假马齿苋中提取分离得到高效低毒，可用作治疗肿瘤、精神抑郁和老年痴呆等疾病药物的皂苷类化合物，即假马齿苋皂苷。
假马齿苋皂苷的提取工艺流程如下称取假马齿苋的全草，加入40％～90％的乙醇于超声波提取器中提取，将提取液浓缩得浓缩液；再将浓缩液过大孔树脂，先用10％～60％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色明显变浅时，再用60％～95％乙醇洗脱；最后将以60％～95％乙醇洗脱的洗脱液浓缩干燥，即得到较高含量的假马齿苋皂苷。
实验研究证明假马齿苋皂苷对体外人肿瘤细胞A-549(肺癌)、MCF-7(乳腺癌)、IA-9(卵巢癌)、CAKI-1(肾癌)、PC-3(前列腺癌)等细胞株的生长均有抑制作用；对抑郁病人和老年痴呆均有明显的改善作用。假马齿苋皂苷是有效的治疗肿瘤和老年痴呆的药物。
本发明对假马齿苋皂苷进行了抗肿瘤的评价实验。
(一)假马齿苋皂苷对体外人肿瘤细胞的抑制作用。
1、实验目的对体外人肿瘤细胞A-549(肺癌)、MCF-7(乳腺癌)、IA-9(卵巢癌)、CAKI-1(肾癌)、PC-3(前列腺癌)等细胞株生长的影响。
2、方法试验方法为国际通用的SRB法根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。
3、结果如下表1所示。
表1.假马齿苋皂苷抗人类肿瘤的疗效试验结果(ED50，μg/ml)
表1的结果表明，假马齿苋皂苷对5种不同肿瘤细胞株均显示明显抑制作用。
(二)假马齿苋皂苷对老年痴呆的治疗作用。
1、实验目的评价假马齿苋皂苷对老年痴呆的治疗作用。
2、方法
取ICR小鼠，雄性，体重20±5g。随机分为3组，阴性对照和阳性对照组每次均灌以等体积的生理盐水，其余1个实验组先分别给药7天，末次给药后，除阴性对照组外，其余各组均用东莨菪碱灌胃10mg/kg，给药后1小时进行跳台实验。
3、实验结果假马齿苋皂苷(10-50mg/kg)能显著延长小鼠跳台潜伏期并使错误次数明显减少(表2)。
表2假马齿苋皂苷对小鼠跳台作用影响
4、结论假马齿苋皂苷具有显著的治疗老年痴呆症作用和促智活性。
具体实施例方式
实施例1500g假马齿苋干燥全草，用65％乙醇在超声波提取器进行提取，提取三次，用量分别是10、8、6倍，每次提取1小时，将三次提取滤液合并浓缩至无醇，大孔树脂吸附，水洗至无色，用50％的乙醇洗脱，干燥，得产品34.5g，皂苷含量18.0％。
实施例2500g假马齿苋干燥全草，用75％乙醇在超声波提取器进行提取，提取三次，用量分别是10、8、6倍，每次提取1小时，将三次提取滤液合并浓缩至无醇，大孔树脂吸附，水洗至无色，先用10％的乙醇洗脱，再用50％乙醇洗脱液，浓缩50％乙醇洗脱液，干燥，得产品22.6g，皂苷含量39.6％。
实施例3500g假马齿苋干燥全草，用85％乙醇在超声波提取器进行提取，提取三次，用量分别是10、8、6倍，每次提取1小时，将三次提取滤液合并浓缩至无醇，大孔树脂吸附，水洗至无色，先用30％的乙醇洗脱，再用60％乙醇洗脱液，浓缩60％乙醇洗脱液，干燥，得产品17.5g，皂苷含量68.5％。
实施例4取假马齿苋皂苷100g，用适量注射用水分散，加入辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥。
按实施例所得的颗粒剂，按所需剂量分装于空胶壳中，即得胶囊剂。
按实施例所得的颗粒剂，直接压片，薄膜包衣，即得片剂。
用于治疗肿瘤和老年痴呆疾病。
实施例5将假马齿苋皂苷适量加注射用水分散，喷雾干燥或真空干燥，得假马齿苋皂苷干粉。取聚乙二醇400，加假马齿苋皂苷干粉，边加边搅拌至匀，采用压制法，制成软胶囊。用于治疗肿瘤和老年痴呆疾病。
实施例6取假马齿苋皂苷400mg，加注射用水适量溶解。加甘露醇400mg，按照常规冻干工艺冻干，即得假马齿苋皂苷冻干粉。用于治疗肿瘤和老年痴呆疾病。
权利要求
1.一种从假马齿苋中提取分离假马齿苋总皂苷的方法，其特征在于将干燥假马齿苋Bacopa monnieri.L的全草用40％～90％乙醇用超声波提取技术提取，提取液浓缩，得浓缩液；再用大孔吸附树脂法对浓缩后的提取液进行纯化和精制，用10-95％乙醇洗脱，收集洗脱，干燥，即得假马齿苋总皂苷。
2.按权利要求1所述假马齿苋的全草，其特征在于假马齿苋来源于玄参科植物假马齿苋的全草。
3.按权利要求1所述用超声波提取技术提取，其特征在于利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速假马齿苋全草的有效成分进入乙醇，这样就提高了提出率，缩短了提取时间，且避免了因长时间提取，而造成的提取液中含有较多杂质。
4.按权利要求1所述假马齿苋总皂苷，其特征在于包含有假马齿苋皂苷类化合物Bacopaside A。
5.权利要求1所述乙醇的洗脱过程，其特征在于先用10～60％的乙醇洗脱，再用60～95％的乙醇洗脱，这样得到的皂苷含量高。
6.按权利要求1所述的假马齿苋总皂苷化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
7.按权利要求1所述的假马齿苋总皂苷化合物在制备治疗老年痴呆病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种从玄参科植物假马齿苋(Bacopa Monninera)的全草中提取纯化假马齿苋皂苷的工艺。其工艺流程为称取假马齿苋的全草，加入40％～90％的乙醇于超声波提取器中提取，将提取液浓缩得浓缩液；再将浓缩液过大孔树脂，先用10％～60％的乙醇洗脱，至洗脱液颜色明显变浅时，再用60％～95％乙醇洗脱；最后将以60％～95％乙醇洗脱的洗脱液浓缩干燥，即得到较高含量的假马齿苋皂苷。实验研究证明，体外抗肿瘤试验表明，该化合物对A－549肺癌等5种人肿瘤细胞株有明显的抑制作用。假马齿苋皂苷对抑郁病人和老年痴呆均有明显的改善作用。本发明中的假马齿苋皂苷可制备成新的抗肿瘤和治疗老年痴呆症的药物。
文档编号A61P25/28GK101045107SQ200610155469
公开日2007年10月3日 申请日期2006年12月26日 优先权日2006年12月26日
发明者巫军 申请人:巫军