专利名称：一种丹参丹酚酸a固体制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中药制药技术领域，具体涉及一种丹参丹酚酸A固体制剂及其制备方法。
背景技术：
丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的根。味苦、性微寒，丹参是最常用的药材之一，用于治疗心绞痛、高血压、冠心病和中风等心脑血管疾病，具有活血化瘀、养血安神、凉血排痈和排毒生肌的功效，是中药活血化瘀的常用药味。现有丹参制剂大部分都是丹参中提取的粗提物或直接用丹参饮片，体内吸收代谢快，制剂难以保持口服给药血药浓度的稳定性。丹酚酸Asalvianolic acid A是丹参有效成分之一，其结构式为 杜冠华基础医学与临床，2000，20(5)10～14等人对丹酚酸A的活性进行了大量研究，发现丹酚酸A对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤有保护作用，对樟柳碱或东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍具有明显的改善作用，对大鼠半乳糖性白内障形成或有抑制作用，因此在心脑血管方向有良好的疗效，胡义扬中药药理学报，1997，18(5)478-480等人报道了丹酚酸A对肝损伤和肝纤维化的保护作用。
丹酚酸A是自然界抗氧化活性较强的化合物，易于被氧化，高温时更容易降解，因此，将丹参丹酚酸A开发成临床上可以应用的中药制剂是我们医药研究人员需待解决的难题。中国专利CN1397276A、CN1352985A中公开了丹参丹酚酸A制备成固体制剂，但其只是公开了简单的制备方法，而没有对制剂进行合理、科学的定量分析；在制剂加工过程中，加入了抗氧剂保护，但只是针对丹酚酸A的基本性质进行的简单叠加，并且加入的抗氧剂是根据制剂的总量进行的变化，其比例在制剂过程中无法有定量的关系，并且其量的关系是从0.01％-95％，相差近10000倍，这在制剂过程中对辅料的选择范围过大，会对制备制剂过程产生很大的困难，而且该专利没有针对制剂性质进行深入的研究，特别是在制备固体制剂中是否需要加入抗氧剂这一问题没有进行深入的研究。为了制备一种稳定性好、安全可靠的丹参丹酚酸A固体制剂，必须针对丹参丹酚酸A的物理、化学性质和中药固体制剂的制剂过程的特殊要求，进行更深入的研究，得到安全可靠的制剂。
现有技术在中药固体制剂质量检测中采用崩解时限的方法，但依靠崩解时限检查作为所有制剂在体内吸收的评定标准显然是不够完善的，因为药物溶解后通过崩解仪筛网粒径常在1.6-2.0mm之间，而药物需呈溶液状态才能被机体吸收，其粒子大小以来计算，所以崩解仅仅是药物溶出的最初阶段，而后面的继续分散和溶解过程，崩解时限检查是无法控制的，且制剂的崩解还要受到处方设计，制剂制备，贮存过程及体内许多复杂因素的影响，所以崩解时限检查不能客观反映药物与赋形剂之间的关系和影响，而溶出度检查却包括了崩解及溶解过程，因此研究中药制剂溶出度就有更重要的意义。
发明内容
基于上述原因，我们通过长期的研究，制备成合格的丹参丹酚酸A固体制剂，对制剂进行高效液相法分析得3个共有峰；记录时间为90分钟，以丹参丹酚酸A为参照物，其保留时间为1，2个杂质的相对保留时间分别为0.71、1.36；以丹参丹酚酸A为对照，相对保留时间为0.71的杂质，其含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，确定其为丹参丹酚酸C，总杂质含量不大于10.0％。根据丹参丹酚酸A物理和化学性质，在制备制剂中加入药用辅料，在45分钟的溶出度大于80％，特别是辅料中不加任何抗氧剂，通过其它药用辅料对丹参丹酚酸的保护作用，使丹参丹酚酸A不能降解，以达到有效成分稳定的目的；药理实验表明，本发明固体制剂不仅在治疗和/或预防心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、衰老疾病方面具有很好的作用，并且对肿瘤也具有很好的治疗作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
丹参丹酚酸A制备方法丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5-9.0、30-80℃温度、加热1-6小时或调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度、0.05MPa-0.17MPa压强，加热1-6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，用水洗脱后，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，洗脱液回收洗脱剂至尽；浓缩液用硅胶或葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺层析柱分离，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，洗脱液回收洗脱剂至尽；浓缩液液调PH值至2-5，经有机溶剂萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；其制备方法中所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
其制备方法中所述大孔树脂柱层析分离，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱。
其制备方法中硅胶柱层析采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1为洗脱溶剂。
其制备方法中所述葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺层析柱分离，先用水、20-50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％乙醇溶液洗脱。
其制备方法中所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种。
制剂的制备胶囊剂、颗粒剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A40-60重量份、填充剂50-200重量份、崩解剂1-6重量份、润滑剂1-4重量份、润湿剂无水乙醇20-30重量份(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
胶囊剂、颗粒剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A40-60重量份、填充剂150-200重量份、崩解剂4-6重量份、润滑剂1-4重量份、润湿剂无水乙醇20-30重量份。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的颗粒剂；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的胶囊剂；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂、润滑剂混合均匀，加无水乙醇，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的微丸剂；软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A2-3重量份、聚乙二醇400或植物油10-15重量份；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂；
滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A2-3重量份、聚乙二醇6000 10-15重量份。
或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂。
胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、软胶囊剂、微丸剂45分钟的溶出度大于80％。
填充剂为乳糖、淀粉、糊精、糖粉、微晶纤维素、预胶化淀粉、甘露醇、磷酸氢钙、硫酸钙中的一种；崩解剂为羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、羟丙纤维素、淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素中的一种；润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、聚乙二醇中的一种；以丹酚酸A计单位剂量为5-1000mg；单位剂量小于5mg临床应用中显效较差，单位剂量大于1000mg临床应用有安全性的问题；以丹酚酸A计单位剂量为20-500mg。
丹参丹酚酸A固体制剂在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤药物中的应用。
本发明在于提供一种丹参丹酚酸A固体制剂，制剂进行高效液相色谱法检测，含有2个杂质峰，其中1个杂质为丹参丹酚酸C，总杂质含量不大于10.0％。
本发明在于提供一种不需要加入抗氧剂制备的丹参丹酚酸A固体制剂。
本发明还在于提供一种丹参丹酚酸A固体制剂的制备方法。
二.检测方法实验方法色谱柱C18反相色谱柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS预柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/mim柱温35℃；检测波长286nm；理论板数按丹酚酸A计应不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例进行洗脱。
丹参丹酚酸A对照品溶液的配制精密称取丹酚酸A对照品10mg到50ml容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度。
供试品溶液的配制精密称取样品，经过处理后定容到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录90分钟的色谱图，采用按外标法以峰面积计算，即得按照本申请工艺方法得到丹参丹酚酸A固体制剂，检测结果见表1表1丹参丹酚酸A固体制剂样品测定结果
实验结论通过上述实验表明，本申请丹参丹酚酸A固体制剂中丹参丹酚酸A与杂质在含量、保留时间的规律采用高效液相色谱法测定，得到3个共有峰，其中包含2个杂质；记录时间为90分钟，以丹参丹酚酸A为参照物，其保留时间为1，2个杂质的相对保留时间分别为0.71、1.36；以丹参丹酚酸A为对照，相对保留时间为0.71的杂质，其含量为O.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为O.11-5.97％，确定其为丹参丹酚酸C，总杂质的含量不大于10.0％。
三.丹参丹酚酸A结构确证资料丹酚酸A(1HNMR，D-丙酮，ppm，Hz)6.83(1H，d，J＝8.7Hz，A-5)，7.21(1H，d，J＝8.4Hz，A-6)，8.06(1H，d，J＝15.8Hz，A-7)，6.33(1H，d，J＝15.8Hz，A-8)，6.82(1H，d，J=2.4Hz，B-2)，6.71(1H，d，J=8.0Hz，B-5)，6.62(1H，dd，J＝2.0、8.0Hz，B-6)，3.10(1H，dd，J＝4.2、14.3Hz，B-7α)，2.99(1H，dd，J＝8.7、14.3Hz，B-7β)，5.21(1H，dd，J＝4.2、8.7Hz，B-8)，7.13(1H，d，J＝2.0Hz，C-2)，6.85(1H，d，J＝8.4Hz，C-5)，6.93(1H，dd，J＝1.9、8.2Hz，C-6)，7.16(1H，d，J＝16.4Hz，C-7)，6.72(1H，d，J=16.4Hz，C-8)。(13CNMR，D-丙酮，ppm，Hz)125.9(A-1)，130.9(A-2)，146.1(A-3)，147.4(A-4)，116.0(A-5)，121.7(A-6)，145.8(A-7)，116.1(A-8)，166.9(A-9)，129.1(B-1)，117.1(B-2)，144.7(B-3)，143.9(B-4)，114.8(B-5)，120.3(B-6)，37.5(B-7)，73.7(B-8)，171.1(B-9)，127.6(C-1)，119.8(C-2)，145.7(C-3)，146.4(C-4)，113.7(C-5)，120.2(C-6)．137.4(C-7)，116.2(C-8)。
四.丹参丹酚酸C结构确证资料丹参丹酚酸C(1HNMR，CD3OD，ppm，Hz)6.87(d，J＝8.2，A-5)，7.35(d，J＝8.3，A-6)，7.91(d，J＝16.0，A-7)，6.45(d，J＝16.0，A-8)，6.79(d，J＝1.7，B-2)，6.72(d，J＝9.4，B-5)，6.65(d，J＝8.1，1.7，B-6)，3.13(dd，J＝14.3，4.2，B-7α)，3.06(dd，J＝14.3，8.2，B-7β)，5.24(dd，J＝8.1，4.3，B-8)，7.38(d，J＝1.9，C-2)，6.72(d，J＝9.4，C-5)，7.36(dd，J＝8.2，2.1，C-6)，7.19(s，C-8)。(13CNMR，CD3OD，ppm，Hz)123.7(A-1)，132.7(A-2)，146.1(A-3)，148.0(A-4)，111.8(A-5)，118.8(A-6)，145.2(A-7)，116.7(A-8)，168.7(A-9)，129.4(B-1)，117.7(B-2)，145.3(B-3)，144.1(B-4)，116.3(B-5)，121.9(B-6)，38.0(B-7)，74.8(B-8)，173.8(B-9)，119.6(C-1)，114.9(C-2)，146.0(C-3)，146.7(C-4)，113.4(C-5)，126.3(C-6)，159.4(C-7)，99.3(C-8)。
五.药用辅料选择抗氧剂的实验本领域的技术人员查阅文献可以得知丹参丹酚酸A是自然界抗氧化活性较强的化合物，易于被氧化，因此认为应该在固体制剂制备中应该加入一定量的抗氧剂，我们经过实验发现，在固体制剂中不加入抗氧剂，也能很好的保持有效成分丹参丹酚酸A的含量。
实验方案方案1丹参丹酚酸A40克、填充剂150克、崩解剂4克、润滑剂1克、润湿剂无水乙醇30克，抗氧剂40克；方案2丹参丹酚酸A60克、填充剂200克、崩解剂6克、润滑剂4克、润湿剂无水乙醇30克，抗氧剂30克；方案3丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂2克、润湿剂无水乙醇25克，抗氧剂12.5克；
方案4丹参丹酚酸A45克、填充剂160克、崩解剂4.5克、润滑剂3克、润湿剂无水乙醇22克，抗氧剂9克；方案5丹参丹酚酸A55克、填充剂190克、崩解剂5.5克、润滑剂2.5克、润湿剂无水乙醇28克，抗氧剂5克；方案6丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂3.5克、润湿剂无水乙醇25克，抗氧剂0克；方案7丹参丹酚酸A40克、聚乙二醇6000 200克、抗氧剂40克；方案8丹参丹酚酸A60克、聚乙二醇6000 300克、抗氧剂50克；方案9丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇6000 250克、抗氧剂20克；方案10丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇6000 250克、抗氧剂5克；方案11丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇6000 250克、抗氧剂0克；方案12丹参丹酚酸A40克、聚乙二醇400 200克、抗氧剂40克；方案13丹参丹酚酸A60克、聚乙二醇400 300克、抗氧剂50克；方案14丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇400 250克、抗氧剂20克；方案15丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇400 250克、抗氧剂10克；方案16丹参丹酚酸A50克、聚乙二醇400 250克、抗氧剂0克；实验方法按照上述实验方案原料药处方进行制备固体制剂，制备合格后按照上述分析实验方案进行检测分析，得到丹参丹酚酸A含量；将固体制剂在常温下放置3个月，再进行检测，得到丹参丹酚酸A含量，实验结果见表2表2不同方案丹参丹酚酸A含量变化
实验结论通过上述实验表明，在制剂过程中加入抗氧剂和不加入抗氧剂对丹参丹酚酸A的含量没有影响，从制剂制备过程和经济角度考虑，我们确定在制剂处方中不加入任何抗氧剂。
六．润湿剂选择实验实验方案方案1丹参丹酚酸A40克、填充剂150克、崩解剂4克、润滑剂1克、润湿剂水30克；方案2丹参丹酚酸A60克、填充剂200克、崩解剂6克、润滑剂4克、润湿剂30％乙醇30克；方案3丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂2克、润湿剂40％乙醇25克；方案4丹参丹酚酸A45克、填充剂160克、崩解剂4.5克、润滑剂3克、润湿剂50％乙醇22克；方案5丹参丹酚酸A55克、填充剂190克、崩解剂5.5克、润滑剂3克、润湿剂60％乙醇28克；方案6丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂3克、润湿剂70％乙醇25克；
方案7丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂2克、润湿剂80％乙醇25克；方案8丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂3克、润湿剂90％乙醇25克；方案9丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂2克、润湿剂95％乙醇25克；方案10丹参丹酚酸A50克、填充剂180克、崩解剂5克、润滑剂3克、润湿剂100％乙醇25克；实验结果按照上述实验方案进行制剂制备，在制粒过程中，方案1-方案8根本制不出颗粒，所有原料粘结在一起；方案9虽能够制备出颗粒，但其颗粒大小等指标不合格；方案10可以制备出合格的颗粒。
实验结论通过上述实验表明，颗粒剂、胶囊剂原料药中润湿剂应该确定为无水乙醇。
七.溶出度的检测实验方法取本申请固体制剂，按照《中华人民共和国药典二部》(2005年版)溶出度实验方法(第一法)进行检测分析(检测分析方法按照本申请检测实验进行)，实验结果见表3表3本申请固体制剂溶出度结果
实验结论本申请制剂处方是在优选实验下确定的，通过本申请处方制备的制剂，有着很好的溶出率，在45分钟可以溶出80％以上。
七.药理实验实验11.对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用实验方法取健康SD大鼠108只，体重240-260g，随机分组空白对照组、复方丹参滴丸组、本申请丹参丹酚酸固体制剂组。置于相同环境预饲养2天，自由饮食。预饲养结束后，进行试验，动物称重，20％乌拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉满意后，仰卧固定于鼠板上，气管插管，接呼吸机，按10～12ml潮气量，70次/分的频率给予呼气，持续正压呼吸，吸∶呼比为1∶1。根据呼吸频率及深度调整呼吸参数。随后接心电图机，测正常心电图。剪去胸前手术区毛，碘酒消毒，剪开皮肤、皮下组织、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管钳沿第三肋间钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔及心包膜，记录心电图，撑开3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右侧胸腔，助手用眼科镊将胸腺向上推，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到结扎标志血管左冠状静脉，在左心耳下方2mm处用无创小圆针带6-0丝线穿线，进针深度为1～1.5mm，宽2～3mm，穿线后记录心电图，经尾静脉给予相应药液，给药10min后记录心电图，并用一带凹槽的小塑料管垫在结扎部位，两端线头在其上结扎。结扎后即刻记录心电图，以左室前壁呈紫绀或II导联S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持续0.5h以上为结扎成功标志(S-T段无改变者淘汰)。结扎后10min再次记录心电图，结扎30min后剪开结扎线，实现再灌注，并记录再灌注即刻心电图，清除胸腔内积血后逐层缝合胸壁，撤呼吸机，动物恢复自主呼吸，气管切口不做处理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分别记录心电图。将心脏在冰箱中冷冻10min后，自心尖向心底平行房室沟方向将左室切成相等厚度的5片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未坏死区为暗红色，坏死区呈灰白色。数码相机拍照。将坏死区和非坏死区分别称重，计算坏死区占左心室重量的百分比，即梗死范围。
表4丹酚酸A固体制剂对结扎/再通大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血/再灌注损伤心肌梗死范围(％)的影响(
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注与空白对照组比较，**P＜0.01；与阳性复方丹参滴丸组比较#P＜0.05实验2对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤保护作用的研究实验方法动物随机分组，每组12只分别为空白对照组、复方丹参滴丸组、本申请丹参丹酚酸固体制剂组。各剂量组连续灌胃给药3天，第4天药后20分钟用改良线栓法制成大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，将其仰卧固定。分离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，插入一端加热成光滑球形并涂了0.1％多聚赖氨酸的尼龙线(直径为0.25mm，距球端18mm处作标记，插入前沾肝素溶液)，插入深度为18mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h内用电热毯维持大鼠的体温，体温维持在肛温36.5～37.5℃。动物入选标准，按Longa五级评分法，取神经功能行为评分为1、2、3、4分的动物，(0分无神经缺损症状；1分对侧前肢不能完全伸直；2分向对侧旋转；3分向对侧倾倒；4分不能自己行走或昏迷)。脑梗塞范围测定，模型大鼠再灌注24h，行为学评分后，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在-20℃冰箱冷冻10min，在冰盘上冠状切成6片，迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光温孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量百分比作为脑梗塞范围。
脑含水量测定TTC染色称重后，将大脑置于120℃真空干燥器内烘干12h称干重。脑含水量＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100％。实验结果详见表5。
表5对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞范围及脑水含量的影响(
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注与空白对照组比较，**P＜0.01；与阳性复方丹参滴丸组比较#P＜0.05实验3对CCl4致大鼠肝纤维化的影响实验方法选择雄性健康Wistar大鼠60只，体重180-200g，将大鼠均随机分正常组、秋水仙碱组(0.17mg/kg)、本申请丹参丹酚酸固体制剂组，除正常对照组外，其余各组大鼠首次于皮下注射CCl45ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％CCl4橄榄油3ml/kg，共6周。在实验期间除正常组外，第1～2周各组均给予20％猪油加0.5％胆固醇的玉米粉饲料，第3～6周饲以普通饲料。各给药组在造模开始时即同时灌胃给予相应剂量的药液，给药体积1ml/100g,给药时间共12周。各组用药周期完成后，乙醚麻醉下剖腹，经下腔门静脉采血，分别检测血清ALT、AST、Alb，并取一部分肝组织制成肝匀浆，用于检测羟脯氨酸(Hyp)含量。另取肝组织作HE染色用于组织病理学观察。实验结果见表6表6对肝纤维化模型大鼠肝组织中Hyp的影响(
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注与空白对照组比较**P＜0.01；与阳性组比较#P＜0.05实验4对小鼠肺纤维化模型的影响实验方法动物8-12周龄、雄性、昆明种小鼠，体重18-22g。试剂注射用博莱霉素A5，天津河北制药厂，醋酸泼尼松片仙居制药有限公司生产，用时研成粉末，以蒸馏水溶解配成50％的混悬液。PBS液，自己配制。采用博莱霉素A5复制动物弥漫性肺间质纤维化模型。将小鼠用乙醚麻醉后仰卧于实验台上，固定头部及四肢，切开颈部皮肤，由气管一次性注入博莱霉素A5溶液0.05ml(含药0.1mg，5mg/kg)。注药完毕后缝合皮肤，将小鼠直立、旋转，尽量使药液在肺内均匀分布。手术过程严格无菌操作。空白对照组以同样方法注入等量生理盐水代替博莱霉素A5，动物清醒后随意进食。小鼠造模24小时后随机分为6组，分别为空白对照组、醋酸泼尼松组(6.5mg/kg)、本申请固体制剂组、每组10只。空白对照组灌胃给予蒸馏水0.2ml/10g，每日三次；阳性对照组，造模后灌胃给予醋酸泼尼松，6.5mg/kg、0.2ml/10g，每日三次；给药组，造模后按0.2ml/10g灌胃给予各相应剂量的药液。以上各组，连续给药28天。结果详见表7。
表7对肺纤维化模型小鼠肺系数的影响(
)
注与空白对照组比较，**P＜0.01实验5
MTT还原法检测制剂抗肿瘤活性试验实验材料MTT用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解MTT终浓度5mg/ml，过滤除菌，分装后4℃避光保存。
MTT裂解液的配制80g十二烷基磺酸钠溶解在200ml的N-N-二甲基甲酞胺中，水浴加热助溶，加入200ml蒸馏水，用80％乙酸与1N盐酸(1∶1)混合调pH至4.7。
细胞株选用人正常细胞株，人肝癌细胞株和人大细胞肺癌细胞株。
实验方法单细胞悬液接种于96孔板(用RPM-1640基础培养基将细胞稀释至30000/ml,每孔加入200μl稀释好的细胞)， 7℃、5％二氧化碳饱和湿度下培养24小时；每组四个平行样；去除培养基，取新配制培养基按系列浓度制备抗癌药物(本申请制剂)溶液，每孔20μl，培养48小时；每孔加入2mg/ml的MTT20μl，孵育4小时；吸出孔内培养液(尽量完全)，加入DMSO液(150μl/孔)，振荡10分钟，使结晶物充分溶解；酶标仪检测各孔OD值，(检测波长560nm)；绘制细胞活力曲线图，求出IC50值。实验结果如表8所示表8细胞毒性实验结果
小结本申请固体制剂具有较强的细胞毒，其毒性对正常细胞和癌细胞具有一定的选择性，本申请固体制剂可用于制各抗肿瘤药物。
实验6对大鼠肝肿瘤抑制的比较实验动物大鼠，150g-180g,雌雄不分。
实验药物生理盐水；本发明各组制剂；市售斑蝥素钠片剂。
实验方法取大鼠分为生理盐水组、斑蝥素钠片剂组、本发明制剂组，作W256的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b2)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表9表9各组制剂对肿瘤的抑制比较
注与生理盐水组比较**P＜0.01；与阳性对照组比较#P＜0.05实验7抗衰老实验实验方法将老龄上海系小鼠随机分组，14只/组，雌雄各半，给药组每天灌胃本发明制剂15mg/kg，共给药3周。将小鼠断尾取血50μl，按照邻苯三酚自氧化的方法测定SOD的活性。将小鼠断头处死，取出肝脏，用滤纸吸去残血，剪碎称重，加生理盐水，制备成1％匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定肝组织中LPO的含量。实验结果见表10表10固体制剂对SOD、LPO的影响
注与对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05；与阳性对照组比较#P＜0.05实验结论本申请制剂服用剂量确定为5-1000mg，优选服用剂量为20-500mg，通过上述药理实验表明，本申请固体制剂具有很好的药理作用，充分说明本申请制剂具有实际意义。
1.图1横坐标单位是时间(min)，纵坐标单位是电压(mv)；图1是丹参丹酚酸A标准品的高效液相色谱图。
2.图2横坐标单位是时间(min)，纵坐标单位是电压(mv)；图2是丹参丹酚酸A固体制剂的高效液相色谱图。
3.图3横坐标单位是时间(min)，纵坐标单位是电压(mv)；图3是丹参丹酚酸C标准品的高效液相色谱图。
本发明与现有技术比较区别特征在于1.现有技术在制剂研究中，对丹参丹酚酸A有效成分含量进行了限定，对制剂中的杂质未进行任何研究，而本发明在保证有效成分含量的基础上，制剂中的杂质进行充分的研究，发现了杂质与有效成分在含量、保留时间的规律，并进行了限定；同时初步确定了一个杂质是丹参丹酚酸F或其同分异构体，一个杂质确定为丹参丹酚酸C，总杂质含量不大于10.0％。
2.现有技术中根据丹参丹酚酸A的性质，在制剂处方中加入了一定量的抗氧剂，而本发明在制剂研究中发现，制剂处方中不加入抗氧剂也可以很好的阻止丹参丹酚酸A的降解；现有技术制各颗粒剂、胶囊剂使用的润湿剂为水或者30％-70％乙醇，而我们在研究发现润湿剂的选择在制剂过程中非常重要，实验确定无水乙醇可以作为制剂制备的润湿剂。
3.现有中药制剂质量检测中采用崩解时限分析，我们科研人员采用溶出度实验确定了本申请制剂处方具有科学意义，本申请制剂的溶出度在45分钟时可以达到80％以上。
六.制备实施例实施例1丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至5.0，120℃温度，0.10MPa压强，加热4小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-300大孔树脂柱层析分离，先用水、20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用50％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、35％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用75％乙醇溶液洗脱，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至3，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A20克、填充剂淀粉25克、崩解剂羧甲基淀粉钠0.5克、润滑剂硬脂酸镁0.5克，润湿剂无水乙醇10克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量为20mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量为20mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量为20mg；软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A20克、聚乙二醇400或植物油100克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为20mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A20克、聚乙二醇6000 100克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为20mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例2丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至9.0、80℃温度、加热6小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-400A大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20分离，先用水、50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用95％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至5，经有机溶剂异丙醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A40克、填充剂糊精150克、崩解剂羟丙基淀粉4克、润滑剂滑石粉1克、润湿剂无水乙醇20克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量40mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量40mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸。单位剂量40mg；软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A40克、聚乙二醇400或植物油200克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为40mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A40克、聚乙二醇6000 200克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为40mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例3丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至3.5，110℃温度，0.05MPa压强，加热1小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100大孔树脂柱层析分离，先用水、10％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、20％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用95％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至2，经乙酸乙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A500克、填充剂糖粉1800克、崩解剂羟丙纤维素50克、润滑剂微粉硅胶30克、润湿剂无水乙醇250克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂10000袋；单位剂量500mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂10000粒；单位剂量500mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂10000丸；单位剂量500mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A500克、聚乙二醇400或植物油2500克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂10000粒；单位剂量为500mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A500克、聚乙二醇6000 2500克；
或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂100000粒；单位剂量为500mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例4丹参丹酚酸A提取纯化丹参用乙醇溶液提取得到醇提取液，浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5，30℃温度，加热1小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-400大孔树脂柱层析分离，先用水、10％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用硅胶，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1为洗脱溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A60克、填充剂微晶纤维素200克、崩解剂淀粉6克、润滑剂、聚乙二醇4克、润湿剂无水乙醇30克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量60mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量60mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量60mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A60克、聚乙二醇400或植物油300克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为60mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A60克、聚乙二醇6000 300克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为60mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例5丹参丹酚酸A提取纯化丹参用乙醇溶液提取得到醇提取液，浓缩乙醇至尽，调PH值至6.0，130℃温度，0.17MPa压强，加热6小时；溶液进行过滤，滤液HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用70％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20，先用水、20％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用95％乙醇溶液洗脱；收集洗脱液，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至5，经有机溶剂乙酸丙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A450克、填充剂预胶化淀粉1700克、崩解剂交联聚维酮55克、润滑剂硬脂酸镁30克、润湿剂无水乙醇230克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量450mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂10000粒；单位剂量45mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂10000丸。单位剂量45mg；软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A450克、聚乙二醇400或植物油2300克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂10000粒；单位剂量为450mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A450克、聚乙二醇6000 2300克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂100000粒；单位剂量为450mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例6丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至5.0、120℃温度、0.10MPa压强，加热3.5小时；溶液进行过滤，滤液经AB-8大孔树脂柱层析分离，先用水20％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用45％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、35％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用85％乙醇溶液洗脱，浓缩乙醇至尽；洗脱液调PH值至3，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A1000克、填充剂甘露醇3600克、崩解剂交联羧甲基纤维素钠100克、润滑剂滑石粉60克、润湿剂无水乙醇500克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量1000mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂20000粒；单位剂量1000mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂20000丸；单位剂量1000mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A1000克、聚乙二醇400或植物油5000克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂10000粒；单位剂量为1000mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A1000克、聚乙二醇6000 5000克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂200000粒；单位剂量为1000mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例7丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.0、115℃温度、0.09MPa压强，加热2小时；溶液进行过滤，滤液经D101大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用35％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20分离，先用水、25％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用65％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至2.5，经有机溶剂乙酸乙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A900克、填充剂乳糖3200克、崩解剂微晶纤维素90克、润滑剂微粉硅胶40克、润湿剂无水乙醇420克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂10000袋；单位剂量900mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂10000粒；单位剂量900mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂10000丸；单位剂量900mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A900克、聚乙二醇400或植物油4600克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂10000粒；单位剂量为900mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A900克、聚乙二醇6000 4600克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂100000粒；单位剂量为900mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例8丹参丹酚酸A提取纯化丹参用乙醇溶液提取得到醇提取液，浓缩乙醇至尽，调PH值至8.5、75℃温度、加热5.5小时；溶液进行过滤，滤液经AB-8大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用55％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂正丁醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A42克、填充剂甘露醇85克、崩解剂羟丙基淀粉2克、润滑剂聚乙二醇1.5克、润湿剂无水乙醇20克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂100袋；单位剂量420mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量420mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量420mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A42克、聚乙二醇400或植物油220克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为420mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A42克、聚乙二醇6000 220克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为420mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例9丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至8.0、35℃温度、加热2小时；溶液进行过滤，滤液经1400大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用聚酰胺层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，洗脱液弃去，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至2.5，经有机溶剂乙酸丁酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A49克、填充剂磷酸氢钙135克、崩解剂淀粉3.5克、润滑剂硬脂酸镁2克、润湿剂无水乙醇24克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂100袋；单位剂量490mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量490mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量490mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A49克、聚乙二醇400或植物油240克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为490mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A49克、聚乙二醇6000 140克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为490mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例10丹参丹酚酸A提取纯化丹参用乙醇溶液提取得到醇提取液，浓缩乙醇至尽，调PH值至5.5、125℃温度、0.15MPa压强，加热5.5小时；溶液进行过滤，滤液经1300-I大孔树脂柱层析分离，先用水、25％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用65％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至4.5，经有机溶剂乙酸丙酯萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A55克、填充剂硫酸钙195克、崩解剂羧甲基淀粉钠5.5克、润滑剂聚乙二醇3.5克、润湿剂无水乙醇28克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量55mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量55mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量55mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A55克、聚乙二醇400或植物油260克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为55mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A55克、聚乙二醇6000 260克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为55mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
实施例11丹参丹酚酸A提取纯化丹参用水提取得到水提取液，调PH值至4.0、125℃温度、0.06MPa压强，加热5.5小时；溶液进行过滤，滤液经HPD-100A大孔树脂柱层析分离，先用水、15％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用60％浓度的乙醇洗脱，收集含有丹酚酸A部分，洗脱液浓缩至无醇味；浓缩液用葡聚糖凝胶LH-20分离，先用水、45％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用55％乙醇溶液洗脱，浓缩乙醇至尽；浓缩液调PH值至2.5，经有机溶剂异丙醇萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；颗粒剂、胶囊剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A58克、填充剂乳糖197克、崩解剂羟丙纤维素5.9克、润滑剂硬脂酸镁3.8克、润湿剂无水乙醇29克(润湿剂的重量是按照无水乙醇的密度和体积计算得到的即m＝v*ρ)。
取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的颗粒剂1000袋；单位剂量58mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的胶囊剂1000粒；单位剂量58mg；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成单位剂量的微丸剂1000丸；单位剂量58mg。
软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A58克、聚乙二醇400或植物油290克；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂1000粒；单位剂量为58mg；滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A58克、聚乙二醇6000 290克；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂10000粒；单位剂量为58mg。
制剂采用高效液相色谱法测定，以丹参丹酚酸A为参照物，相对保留时间为0.71的杂质含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质的含量不大于10.0％；溶出度经测定大于80％。
注本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。
权利要求
1.一种丹参丹酚酸A固体制剂，包括丹参丹酚酸A和药用辅料，制备成胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、软胶囊剂、滴丸剂，其特征在于制剂采用高效液相色谱法测定，得3个共有峰；记录时间为90分钟，以丹参丹酚酸A为参照物，其保留时间为1，2个杂质的相对保留时间分别为0.71、1.36；以丹参丹酚酸A为对照，相对保留时间为0.71的杂质，其含量为0.10-1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11-5.97％，总杂质含量不大于10.0％。
2.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中高效液相色谱图中相对保留时间为1.36的杂质为丹参丹酚酸C。
3.根据权利要求1或2所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中高效液相色谱法测定方法为色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长286nm；理论板数按丹酚酸A计应不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例进行洗脱；对照品溶液的配制精密称取丹酚酸A对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取样品，经过处理后定容到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，即得。
4.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中胶囊剂、颗粒剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A40-60重量份、填充剂50-200重量份、崩解剂1-6重量份、润滑剂1-4重量份、润湿剂无水乙醇20-30重量份。
5.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中胶囊剂、颗粒剂、微丸剂原料药为丹参丹酚酸A40-60重量份、填充剂150-200重量份、崩解剂4-6重量份、润滑剂1-4重量份、润湿剂无水乙醇20-30重量份。
6.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中软胶囊剂的原料药为丹参丹酚酸A2-3重量份、聚乙二醇400或植物油10-15重量份。
7.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中滴丸剂的原料药为丹参丹酚酸A2-3重量份、聚乙二醇6000 10-15重量份。
8.根据权利要求4或5所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中填充剂为乳糖、淀粉、糊精、糖粉、微晶纤维素、预胶化淀粉、甘露醇、磷酸氢钙、硫酸钙中的一种。
9.根据权利要求4或5所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中崩解剂为羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、羟丙纤维素、淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素中的一种。
10.根据权利要求4或5所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其中润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、聚乙二醇中的一种。
11.根据权利要求1、2、4、5任意一项所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法为丹参丹酚酸A制备方法丹参用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液浓缩乙醇至尽，调PH值至7.5-9.0、30-80℃温度、加热1-6小时或调PH值至3.5-6.0、110-130℃温度、0.05MPa-0.17MPa压强，加热1-6小时；溶液进行过滤，滤液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，用水洗脱后，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，洗脱液回收洗脱剂至尽；浓缩液用硅胶或葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺层析柱分离，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，洗脱液回收洗脱剂至尽；浓缩液液调PH值至2-5，经有机溶剂萃取，分离有机溶剂相，得含药溶液，浓缩，干燥或冷冻干燥，得丹参丹酚酸A；制剂制备原料药为丹参丹酚酸A和药用辅料；取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照颗粒剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的颗粒剂；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂混合均匀，加无水乙醇溶液制成软材，过18目筛选颗粒，60℃干燥40分钟，整粒，加入润滑剂，按照胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的胶囊剂；或取丹参丹酚酸A与填充剂、崩解剂、润滑剂混合均匀，加无水乙醇，按照微丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的微丸剂；或取丹参丹酚酸A与聚乙二醇400或植物油混合均匀，按照软胶囊剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的软胶囊剂；或取丹参A与聚乙二醇6000混合，融溶，按照滴丸剂的药剂学常规要求制备成以丹酚酸A计单位剂量的滴丸剂。
12.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
13.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中所述大孔树脂柱层析分离，先用水、10-30％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用30-70％浓度的乙醇洗脱。
14.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中硅胶柱层析采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1为洗脱溶剂。
15.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中所述葡聚糖凝胶LH-20或聚酰胺层析柱分离，先用水、20-50％乙醇溶液洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％乙醇溶液洗脱。
16.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种。
17.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中单位剂量为5-1000mg。
18.根据权利要求11所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂，其制备方法中单位剂量为20-500mg。
19.根据权利要求1、2、4、5、12-18任一项所述的一种丹参丹酚酸A固体制剂在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种丹参丹酚酸A固体制剂及其制备方法，其特征在于制剂采用高效液相色谱法测定，得3个共有峰，以丹参丹酚酸A为参照物，其保留时间为1，2个杂质的相对保留时间分别为0.71、1.36；以丹参丹酚酸A为对照，相对保留时间为0.71的杂质，其含量为0.10－1.96％，相对保留时间为1.36的杂质含量为0.11－5.97％，确定为丹参丹酚酸C，总杂质含量不大于10％；制剂原料药包括丹参丹酚酸A和药用辅料，不用加入抗氧剂可以防止制剂原料丹参丹酚酸A含量降低和降解，使制剂安全、稳定；药理实验表明，本发明各组制剂具有很好的药理作用。
文档编号A61K31/21GK1994277SQ200610156180
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月30日 优先权日2006年12月30日
发明者李志刚, 顾群, 金志刚, 米长江, 渠守峰, 栗艳彬, 郭晓鹏 申请人:北京本草天源药物研究院