治疗和预防纤维化的方法

专利名称：治疗和预防纤维化的方法
技术领域：
技术人员已知的其它方法生产 单克隆抗体。已经开发了一个示例的方法，称为"组合抗体展示"方法， 用于鉴定并分离具有特定抗原特异性的抗体片段，该方法可用于生产单 克隆抗体(组合抗体展示的描述参见例如Sastry et al. (1989)尸rac. Ato/. Jed Sc. [/Si 86:5728-32; Huse et al. (1989) 246:1275-81;和
Orlandietal. (1989)/Voc.A^/.^cac/.S". 86:3833-37 )。用免疫原
免疫动物后，克隆所得B细胞集合的抗体所有组成成分。使用寡聚引物 混合物和PCR,可以获取多种免疫球蛋白分子群体的可变区的DNA序 列。例如，对应于5'前导(信号肽)序列和/或构架1 (FRl)序列的混合寡核 苦酸引物，以及针对保守的3'恒定区引物的引物，可用于从各种鼠抗体 PCR扩增重链可变区和轻链可变区(Larrick et al. (1991), Aorec/zmgw^ 11: 152-156)。类似的策略也可用于从人抗体扩增人重链可变区和轻链可 变区(Larrick et al. (1991) Me/7zo<iy: C0wp"w/0;7 A/e/7zo<is' z力￡>2z_yOTo/ogy 2: 106-10)。嵌合抗体，包括嵌合免疫球蛋白链，可通过本领域已知的重 组DNA技术制备。例如，用限制酶消化编码鼠(或其它物种)单克隆抗体 分子的Fc恒定区的基因，以去除鼠Fc编码区，并且用人Fc恒定区编码 基因的等同部分来取代(参见PCT/US86/02269; EP 184,187; EP 171,496; EP 173,494; WO 86/01533;美国专利No. 4,816,567; EP 125,023; Better et al. (1988) 240:1041-43; Lm et al. (1987)尸亂淑/.爿cac/. 5"".
84:3439-43; Liu et al. (1987) </. /w附丽o/. 139:3521-26; Sun et al. (1987)尸rac. M^/. Jem/. 84:214-18; Nishimura et al. (1987)
Omc. 47:999-1005; Wood et al. (1985) W^w/^ 314:446-49;和Shaw etal. (1988)丄Ato/. Qmcer/"W. 80:1553-59 )。如果需要，可以通过本领域已知方法，使抗体或免疫球蛋白 链人源化。可通过用人Fv可变区的等同序列取代不直接参与抗原结合 的Fv可变区的序列，而产生人源化抗体，包括人源化免疫球蛋白^T连。 产生人源化抗体的通用方法由以下文献提供Momson， S. L. (1985) S".6wce 229: 1202-07, Oi等(1986) Bwrec/m&w^y 4: 214，禾口美国专利Nos. 5,585,089、 5,693,761和5,693,762,所述文献的内容通过引用全部结合 到本文中。这些方法包括编码至少一个重链或轻嗜连的全部或部分免疫5求 蛋白Fv可变区的核酸序列的分离、操纵和表达。对于本领域技术人员 来说，所述核酸的来源是众所周知的，例如可得自产生针对预先确定的 耙的抗体的杂交瘤。然后，编码人源化抗体或其片段的重组DNA可以 克隆到合适的表达载体中。可通过CDR移植或CDR取代，制备人源化或CDR移植的 抗体分子或免疫球蛋白，其中一个、两个或所有免疫球蛋白链的CDR 都可以被取代。参见例如美国专利No.5,225,539; Jones et al. (1986) 7Vafwe 321:552-25; Verhoeyan et al. (1988) Scze"ce 239:1534-36;和Beidler etal. (1988)/./附w丽o/. 141:4053-60,所有这些文献的内容通过引用全部 结合到本文中。美国专利No. 5,225,539描述了 CDR移植方法，所述方 法可用于制备本发明的人源化抗体(也参见GB 2188638A)。特定人抗体 的所有CDRs都可以被至少一部分非人类CDR取代，或者仅有部分 CDRs可以被非人CDRs取代。仅有必要取代人源化抗体与预先确定的 抗原结合所需的CDRs的数量。通过例如缺失、添加或取代抗体其它部分(例如恒定区)而修 饰的单克隆抗体、嵌合抗体和人源化抗体，也包括在本发明范围内。例 如，抗体可以通过以下方法修饰(i)击夫失恒定区；(ii)用另一个恒定区取 代原有恒定区，所述另一个恒定区例如能增加抗体半衰期、稳定性或亲 和力的恒定区，或者所述恒定区来自另一物种或抗体类别；或(iii)修饰 恒定区内的一个或多个氨基酸，以改变例如糖基化位点的数目、效应细 胞功能、Fc受体(FcR)结合、补体固定等。改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。可以通过在抗体恒 定部分用不同的残基取代至少一个氨基酸残基，产生具有功能改变(例如 对细胞上的FcR或补体Cl成分等效应配体的亲和力发生改变)的抗体(参见例如E.P. 388,151A1、 U.S. 5,624,821和U.S. 5,648,260，所述文献 的内容全都通过引用结合到本文中)。也可以将类似的改变类型用于鼠免 疫球蛋白或其它物种的免疫球蛋白。例如，可通过用侧链上具有合适官 能团的残基取代指定残基，或者通过引入带电荷的官能团，例如谷氨酸 或天冬氨酸，或许芳族非极性残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或 丙氨酸，来改变抗体(例如IgG，例如人IgG)的Fc区对FcR (例如Fc 丫R1) 或对Clq结合的亲和力(参见例如U.S. 5,624,821)。此外，可以用经过^f务饰的转基因非人动物反应于抗原攻击而 生产IL-21和/或IL-21R的人抗体，以生产全人抗体，而不是动物的内源 抗体。参见例如PCR^HfWO 94/02602。已经使非人宿主中编码重和轻 免疫球蛋白链的内源基因丧失能力，并将有活性的编码人重和轻链免疫 球蛋白的基因座插入宿主基因组。使用例如含有必要人DNA区段的酵 母人工染色体，掺入人基因。然后，通过使含有比修饰的完全互补序列 少的修饰的中间转基因动物杂交，得到提供所有需要的修饰的动物后 代。这样的非人动物的一个实施方案是小鼠，并称作XENOMOUSETM， 如在PCT/^开WO 96/33735和WO 96/34096中4皮露的。该动物生产分 泌全人免疫球蛋白的B细胞。可以在用感兴趣的免疫原免疫后从动物直 接得到抗体，例如，多克隆抗体的制备物，或者从源自动物的永生化B 细胞(例如生产单克隆抗体的杂交瘤)得到抗体。另外，可以回收编码 含有人可变区的免疫球蛋白的基因，并表达，以直接得到抗体，或可以 进一步修饰，以得到抗体类似物，例如单链Fv分子。也-可以用其它蛋白结合分子调节IL-21和/或IL-21R的活 性。这样的蛋白结合分子包括小模块免疫药物(SMI )药物(Tmbion Pharmaceuticals, Seattle, WA) 。 SMIP是一种单《连多肽，由相关结构 (例如抗原，反受体等)的结合结构域、具有1个或没有半胱氨酸残基 的铰链区多肽、和免疫球蛋白CH2和CH3结构域组成(也参见 www.tmbion. com ) 。 SMIP和它们的用法和用途，/>开在例如，美国 开专利申请Nos. 2003/0118592 , 2003/0133939 , 2004/0058445 , 2005/0136049 ,2005/0175614 ,2005/0180970 ,2005/0186216 , 2005/0202012 , 2005/0202023 , 2005/0202028 , 2005/0202534 和 2005/0238646及其相关专利家族成员中，它们都在本文中整体引作参 考。
其它实施方案中，本文所述的IL-21R/IL-21拮抗剂可与至少 一种以下药物联用IL-13拮抗剂，例如可溶性IL-13受体和/或抗IL-13 抗体；IL-2拮抗剂，例如IL-2融合蛋白(如Seragen制备的DAB 486-IL-2 和/或DAB 389-IL-2 ,参见例如Sewell et al. (1993)血/72〃",y脸膽.36:1223-33)和抗IL-2R抗体(例如抗Tac (人源化抗体；Protem Design Labs,参见Junghans et al. (1990) C朋cer 50:1495-502)。另 一种联合 疗法包括IL-21R/IL-21拮抗剂与非消除性抗CD4抑制剂如IDEC-CE9.1/SB 210396 (抗CD4抗体，GlaxoSmith幻ine)的联用。其它的联合 包括IL-21R/IL-21拮抗剂与CD80 (B7.1)和CD86 (B7.2)共刺激途径拮抗 剂(如抗体、可溶性受体或拮抗性配体)；p-选择蛋白糖蛋白配体(PSGL) 和PSGL-l抑制剂(如PSGL和/或PSGL-1的抗体和小分子抑制剂)、T 细胞和B细胞消除剂(如抗CD4或抗CD22抗体)和抗炎细胞因子及其 激动剂(如抗体)。抗炎细胞因子可以包括IL-4 (如Schenng-Plough Biopharma) ; IL-10 (如SCH 52000;重组IL-IO, Schering-Plough Biopharma) ; IL-11; IL-13和TGFp或其激动剂(例如，激动剂抗体)。
在其它实施方案中，至少一种IL-21R/IL-21拮抗剂可以与至 少一种抗炎药物、免疫抑制剂、代谢抑制剂和酶抑制剂共同配制和/或共 同施用。可以与本文所述IL-21R/IL-21拮抗剂联合施用的药物或抑制剂 的非限制性实例包括但不限于，下述的至少一种非甾体类抗炎药 (NSAIDs)(包括但不限于阿司匹林、双水杨酯、二氟尼柳、布洛芬、 酮基布洛芬、萘丁美酮、吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸、茚曱新、舒林 酸、托美汀、依托度酸、酮洛来克、奥沙普溱、替尼达普、美洛昔康、 吡罗昔康、醋氯芬酸、托美汀、噻洛芬酸、尼美舒利等)；柳氮磺胺吡 啶；皮质类固醇(例如泼尼松龙)；细胞因子抑制性抗炎药(CSAIDs); 核苷酸生物合成抑制剂(例如，嘌呤生物合成抑制剂(如叶酸拮抗剂， 例如，曱氨蝶呤))；和嘧啶生物合成抑制剂，例如，二氲乳清酸脱氢 酶(DHODH )抑制剂，例如，来氟米特(参见例如Kraan et al. (2004) j肌 A/^w附.Dw 63:1056-61)。与IL-21/IL-21R拮抗剂耳关合施用的治疗剂可以 包括NSAIDs、 CSAIDs、 DHODH抑制剂(例如，来氟米特)和叶酸拮 抗剂(例如，甲氨蝶呤)中的一种或多种。
可以与IL-21/IL-21R拮抗剂联合使用的其它试剂的实例包括 下述的至少一种皮质类固醇(口服的、吸入的和局部注射剂)；免疫 抑制剂(例如，环孢菌素和他克莫司(FK-506 ) ) ; mTOR抑制剂(例 如，西罗莫司(雷帕霉素)或雷帕霉素类似物和/或衍生物，例如雷帕霉 素酯衍生物，例如，CCI-779 (参见例如Elit(2002)Cwr. (9pm./m^y"g. Z)nig《3:1249-53; Huang et al. (2002) Cwrr Z>wgs 3:295-304)));干扰促炎细胞因子例如TNFa或IL-1的信号传递的试剂(例 如IRAK, NIK, IKK， p38或MAP激酶抑制剂)；TPL-2、 Mk-2和NFKb 抑制剂；COX2抑制剂(例如，塞来考昔，罗非考昔等及其变体)；磷 酸二酯酶抑制剂(例如环戊苯丙酮)；磷脂酶抑制剂(例如，胞质溶胶 磷脂酶2 (cPLA2)的抑制剂，例如，三氟曱酮类似物(美国专利 6,350,892 ));血管内皮细胞生长因子(VEGF)抑制剂；VEGF受体抑制 剂；血管发生抑制剂；RAGE和可溶性RAGE;雌激素受体p ( ERB ) 激动剂、ERB-NFKb拮抗剂；千扰素-(3 (例如IFN (3-la和IFN (3-lb ); 考帕松；和皮质类固醇。
可与IL-21R/IL-21拮抗剂联合使用的其它有用治疗剂包括 布地缩松；表皮生长因子；氨基水杨酸酯；6-巯基噤呤；硫唑噤呤；甲 硝唑；脂加氧酶抑制剂；美沙拉秦；奥沙拉秦；巴柳氮；抗氧化剂；血 栓烷抑制剂；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；葡 糖苷酸或葡萄糖缀合的泼尼松的前药；地塞米松或布地缩松；ICAM-反 义硫代磷酸酯寡脱氧核糖核苷酸(ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); 可溶性补体受体1(TP10; T Cell Sciences, Inc.);緩释美沙拉秦；血小板 激活因子(PAF)的桔抗剂；环丙沙星；利诺卡因；环孢菌素A;羟氯喹 (PLAQUENIL );米诺环素(MINOCINTM)和anakmra (KINERET )。
选择用于与本发明的IL-21/IL-21R拮抗剂联合施用的特定治 疗剂将很大程度取决于一些因素，如特定受试者、需要的靶和治疗的选 定长度。所述确定在本领域技术人员的技术和知识范围内。
可以与IL-21R/IL-21拮抗剂联合的治疗剂的其它实例包括以 下一种或多种6-巯基。票呤(6-MP);硫哇噤呤；柳氮磺胺吡啶；美沙拉 秦；奥沙拉秦；氯喹；羟氯喹(PLAQUENII^);青霉胺；金硫丁盐 (aurothiornalate)(肌内和口服)；碌u唑噤呤；秋水仙石成；p-2肾上腺素受 体激动剂(沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗)；黄。票呤(茶砵、氨茶碱)；色 甘酸盐；奈多罗米；酮替芬；异丙阿托铵和氧托铵；麦考酚酸吗乙酯； 腺苷激动剂；抗血栓剂；补体抑制剂；和肾上腺素能药剂。
在本申请中引用的所有参考文献、专利、和公开的专利申请 的完整内容，都在本文引作参考。实施例
下面的实施例提供了本发明的解释性实施方案，但是不以任 意方式限制本发明。本领域普通技术人员可以认识到，在本发明的范围 内包括许多其它的实施方案。实施例1:材料和方法实施例1.1:小鼠、寄生虫感染和抗原制备
从Taconic Farms (Germantown, NY)获得雌性或雄性 C57BL/6, C57BL/6/Ai-IL画10KO/IL-4KO小鼠(Hoffmann et al. (1999)丄 /mmw"o/. 163:927-938)。 C57BL/6背景上的IL-21R7—小鼠杂交对，是获自 饲养在哈佛公共卫生学院(Boston, MA)的杂交群落(Kasaian et al. (2002) /mmwm(y 16:559-69)。所有的小鼠都在国家卫生部的美国实'验动物管理 批准设施鉴定协会的特定无抗原条件下飼养。NIAID动物管理和使用委 员会批准了所有实验程序。曼氏血吸虫卵是按照以前的描述(Wynn et al. (1995) A^ e 376:594-96)/人受感染的小鼠(Biomedical Research Institute, Rockville, MD)的肝提取。为了诱导同步的原发肺肉芽肺，静脉内(i.v.) 给予小鼠5,000个卵。为了诱导继发肉芽肿，用5000个活卵腹膜内(i.p.) 给小鼠致敏，然后用5,000个活卵静脉内攻击(Wynn et al. (1994) </. Ejc/ . A/e J. 179:551-61)。在感染实验中，用获自感染的S w w/^a/ana g/Wrata 虫呙牛(Biomedical Research Institute, Rockville, MD)的曼氏血吸虫波多黎 各抹(NMRI)的25 - 30个尾蚴通过尾部经皮感染小鼠。从曼氏血吸虫卵 纯化可溶性卵抗原(SEA)和可溶性蠕虫抗原制剂(SWAP),并且匀 浆(Cheever etal. (1994)/./附附w"o/. 153:753-59)。所有动物在处死时都进行灌注，使得能够按照其它部分的描述(W.)确定蠕虫和组织卵负荷。按照以前的描述(Katona et al. (1983) 乂 /附ww朋/. 130:350-56)制备巴西曰圆 线虫(A/7p/ os7yowgy/1^ 6nxs7/ze"wi )幺力虫(L3)。通过皮下:;主射500个L3 接种小鼠。接种后第7天，收集肺组织和纵隔淋巴结进行细胞因子分析。实施例1.2:组织病理学和纤维化
在Wright吉姆萨染色的组织切片上确定肺和肝肉芽肺的大 小(Histopath of America, Clinton, MD)。所有分析中包括了每只小鼠大约 30个肉芽肺。熟练的病理学家评价了相同切片中的嗜酸性粒细胞、肥大 细胞和其它类型的细胞的百分比。按照以前的描述确定通过羟脯氨酸水 平测量的肝和肠中的血吸虫卵凄t目和肝的月交原含量(Cheever et al., sw; ra)。具体地，110°C下在5 ml 6N HCl中水解肝的200mg的部分18 小时后，通过Bergman和Loxley的技术(Bergman and Loxley (1963) j"^yhca/ B^c/zew. 35:1961-65)将肝胶原测量为羟脯氨酸。肝的羟脯氨 酸的增加与所有实验中的卵数目正相关，肝胶原报道为每10,000个卵中 以微摩尔表示的高于正常肝胶原的增加；(感染的肝胶原_正常肝胶 原)/肝中卵的数目X 10—4或每对蠕虫的微摩尔数。在慢性时间点的晚 期，纤维化报道为每个肝的总肝胶原。同一个体对所有组织特征进行评 分，并且不知道实-验:没计。实施例1.3:FACS分析
收获整个肺，并且置于RPMI中。挤压通过70微米的尼龙 网(BD Falcon, San Diego, CA)而使组织石皮碎。洗涤单细胞悬浮液，通过 用ACK裂解溶液温育3分钟，裂解红细胞。4。C下用PE-Cy5标记的抗 CD4和Fc阻断抗体(两种抗体都来自BD Pharmmgen, San Diego, CA ) 一起在FACS緩冲液中将肺淋巴细胞标记15分钟。洗涤后，用FLOWJOTM 软件(Treestar, Inc.， Ashland, OR)在FACS Calibur上分析细胞。实施例1.4:用sIL-21R-Fc进行的IL-21阻断实验
无菌取出脾和肠系膜淋巴结(感染模型)或肺相关的淋巴结 (肺模型)，按照以前的描述制备单细胞悬浮液(Hesse et al. (2000) 尸w/zo/. 157:945-55)。培养物在湿化的5% C02气氛下，37。C下温育。用 SEA (20 ju g/ml)、 SWAP (50 ju g/ml)、伴刀豆球蛋白A(Con A; 1 ju g/ml) 或单独的培养基刺激细胞。在72小时收获上清液，测定细胞因子的产 生。用成对抗体(BD Pharmmgen, San Diego, CA)按照以前的描述(W.), 通过夹心ELISA测量IFN-y、 IL-5和IL-IO。用重组鼠细月包因子(BD Pharmingen， San Diego, CA)构建的标准曲线计算细胞因子水平。用鼠 IL-13 ELISA试剂盒(R&D Systems, Minneapolis,画)，根据制造商的方 案测量IL-13水平。用小鼠TGF-13 1 DUOSET ELISA显示系统(R&D Systems, Minneapolis, MN)，根据制造商的方案对TGF-13 1水平进行定 量。为了避免来源于牛的TGF-P 1污染，用PBS将细胞洗涤3次，在含 有0.5%小鼠血清的培养基中培养。实施例1.6: RNA分离和纯化以及实时聚合酶链反应
从肺和肝组织样品提取总RNA,分别置于1 ml TRIZOLtm試 剂 (Invitrogen, Carlsbad, CA)中。用组织polytron(Omni International Inc.， Marietta, GA)将样品匀浆，根据制造商的推荐提取总RNA，用来自Qiagen 的RNEASY 孩i试剂盒(Qiagen Sciences, Germantown, MD)进一步纯 化。用SUPERSCRIPT IITM (Invitrogen,Carlsbad, CA)和寡核苷酸(dT)的混 合物以及随机引物对各个样品RNA(l fig)进行逆转录。在ABI PRISM 7900序列;险测系统(Applied Biosystems, Foster City, CA)上进4亍实时聚合 酶链反应(RT-PCR)。采用SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City， CA), 并且通过Applied Biosystems针对ABI PRISM 7700/7900序列检测系统(Applied Biosystems, Foster City, CA) 描述的比较性阈循环方法，确定一些基因的mRNA的相对量。在该方法 中，将每个样品的mRNA水平标准化为次黄。票呤鸟噤呤磷酸核糖基转移酶mRNA水平，然后表示为与未感染的对照水平的相对增加或减少。用 PRIMER EXPRESS 软件(Applied Biosystems, Foster City, CA)设计引 物。以前发表过IL-13、 IL隱4、 IL-IO、 HPRT (Hesse et al. (2001)丄/ww朋o/. 167:6533-44) 、 IL-13R oc 2 (Chiaramonte et al. (2003)丄￡"平 197:687-701)、 Yml、 FIZZ1和酸性几丁质酶(AMCase) (Sandler et al., sw/ ra)的引物,包4舌
IL-215， GCCAG ATCGC CTCCT GATTA 3， (sense) (SEQ ID NO:28); 5， CATGC TCACA GTGCC CCTTT 3， (antisense) (SEQ ID NO:29);
IL隱21R5， CTCCC CCCTT GAACG TGACT 3， (sense) (SEQ ID NO:30); 5， TTGCC CCTCA GCACG TAGTT 3， (antisense) (SEQ ID NO:31);
用BD OPTEIATM小鼠IgE ELISA Set (BD Biosciences Pharmmgen, San Diego, CA),根据制造商的方案测量总IgE。通过间接 ELISA评估SEA特异性IgGl和IgG2b同种型特异性抗体(Ab)滴度。用 PBS稀释的IO jug/mlSEA(100 ju 1/孑L)包被IMMULON 4板(Thermo Labsystems Inc., Beverly MA)，用系列2倍稀释液分析血清样品。以1:1000 的稀释度使用生物素-大鼠抗小鼠IgGl (Zymed, San Francisco, CA)。此 后使用过氧化物酶标记的链霉亲和素(KPL, Gaithersburg, MD)底物酶。以 1:1000的稀释度使用第二步辣根过氧化物酶缀合的大鼠抗小鼠IgG2b (Zymed, San Francisco, CA) Ab。加入100 n 1单成分ABTS过氧化物酶 底物(KPL, Gaithersburg, MD)后，用VMAXTM动态微量滴定板读数器 (Molecular Devices)在405 nm读出孑L中的吸光度。
肝纤维化(针对卵数目调整)随着感染强度(蠕虫对)的增 加而减轻。因此，通过分析协方差比较这些变量，其中采用了作为协变 量的活卵总数的对数和每个卵的羟脯氨酸含量的对数。通过单向 ANOVA或斯氏14全-验(Cheever et al., s比较不随感染强度改变的变 量。用ANOVA评估细胞因子mRNA表达和肉芽肿大小的改变。当 p<0.05*， pO.0P承或口<0.001***时，认为差异是显著的。实施例2:调节1型和2型极化反应期间的IL-21和IL-21R
与IL-21 (Wurster et al. (2002)， w戸;Mehta et al. (2004) /www朋/. Wev. 202:84-95)相比,对IL-21受体的调节和功能知之甚少。为 了确定IL-21及其受体在体内的病理性TH2反应中是否受到调节，采用 了曼氏血吸虫肉芽肿形成的模型。在该模型中，已知Th2細胞因子在病 变形成中起显著作用(Pearce and MacDonald，認/ ra)。最初的研究设计用 于确定IL-21和IL-21RmRNA表达是否与体内极化的TH2细胞因子反应 相关。通过采用暴露于曼氏血吸虫卵后产生高度加剧的TH1 (IL-4- IL-10,或TH2 (IL-12勺IL-10,细胞因子反应的小鼠实现了该目的。在IL-4:/IL匿10i "Th1"小鼠中，到攻击后4天，IFN隱y mRNA表达在肺中比 基线增加了 75倍，到第14天，保持比背景高大约50倍(

图16A)。 在任何时间点都不能在这些小鼠中检测到IL-13 mRNA，证实建立了高 度极化的THl炎症反应。相反，IL-12勺IL-10: "TH2"小鼠显示在攻击后 所有时间点IL-13 mRNA增加200 -250倍，IFN-y改变很少到没有改 变。与展示高度极化的表达模式的Th1/Th2细胞因子相反，IL-21与极 化的表型不相关(图16B)。在这两组中，在血吸虫卵攻击后，IL-21 mRNA 水平比基线至少增加50倍，但在THl-极化的小鼠中观察到的增加平均 比TH2极化的动物高3-4倍(图16B;下图)。IL-21R也不与TH1或 TH2免疫反应特异性相关。但是，与在倾向于TH1的动物中更显著的 IL-21相反，在TH2-极化的小鼠中观察到对I1-21R的最大反应(图16B;上图)。实施例3:在对血吸虫卵的肺反应期间IL-21R缺陷型小鼠肺中的2 型细胞因子产生减少
为了确定TH2效应物反应的减少是否对于曼氏血吸虫肺肉 芽肿形成是特异性的，用肠线虫巴西诺卡氏菌感染WT和IL-21R:小 鼠。通过将第三阶段的幼虫(L3)接种到皮肤下，建立感染。随着寄生 虫成熟，它们从接种部位迁移，通过循环系统进入肺。 一旦进入肺，寄 生虫引发剧烈和高度极化的TH2反应(Urban et al. (1993) /■ /附m節o/. 151:7086-94),通过分析一些TH2相关基因在肺(图18A)和肺相关淋 巴结(图18B)中的表达而证实该反应。巴西诺卡氏菌感染后，WT小 鼠的肺和淋巴结展示出IL-4、 IL-13、 AMCase、 FIZZ1/RELM1 a和Yml mRNA表达的显著增加(图18A和18B)。但是，与肺肉芽肺模型一致， 观察到了 IL画21R- 、鼠肺内IL画4、 IL-13和AMCase的水平显著减少，以 及Yml和FIZZl mRNA水平轻微减少(图18A)。引流淋巴结显示出相似的减少，但Yml和FIZZ1的减少在淋巴结中更显著(图18B)。两 种组织之间仅有的其它主要区别是AMCase mRNA反应，其似乎局限于 肺。综合起来，这些数据证实了 IL-21R在体内的TH2反应发生中的重 要作用。但是，显著的是，尽管发生了显著减弱的TH2反应，巴西诺卡 氏菌感染的IL-21R— 、鼠在成虫排驱方面没有显示显著延迟(未示出)。实施例5: 2型细胞因子驱动的炎症在IL-21R〃-小鼠的肺中减少
设计随后的实验系列，用于确定IL-21R是否调节继发TH2 反应的发生。为了进行这些实验，用曼氏血吸虫卵使WT和IL-21R—〃小 鼠致敏，2周后静脉内攻击。如预期的，致敏的小鼠发生了强肉芽肿反 应，其比初次攻击的动物(图17C)强4-5倍(图19C)。如在初次攻 击的模型中观察到的，暴露于卵后肺内IL-21和IL-21R mRNA显著增 加，但11-21反应在第二次攻击过程中到达峰值要早得多。与IL-21相比， IL-21R仅轻度增加，但在两个时间点都保持显著升高，而IL-21 mRNA 水平在第4天达到峰值后开始减少(图19A)。因此，证明配体在组织 中更紧密的调节。IL-21R- 、鼠中的IL-21表达也显著减少，证明受体及 其配体之间存在强反馈机制。在TH2相关细胞因子中，IL-13是最强的 反应，显示在WT小鼠中比基线增加50 - 100倍。但是，它在IL-21R: 小鼠中减少到比背景高10-20倍，证明IL-21R是最大程度发生继发性 TH2反应所需要的。再次，IL-21R-z—小鼠中TH2细胞因子表达的减少不 伴随IFN-y的显著增加。实际上，IFN-y mRNA表达在IL-21R:小鼠的 肺内减少。然而，敲除在淋巴结和肺中显示轻度但持续的IFN-y产生增 加，表明悉体上Th2细胞因子的更强抑制(图19B)。与初次卵攻击模 型一致，TH2和TH1细胞因子产生的减少在肉芽肿组织中更显箸(图 19A)，但SEA诱导的TW反应在脾中也部分减少(图19B)。继发性 肉芽肿炎症的显著减少与肺中较弱的TH2反应的发生一致(图19C)。 此外，FIZZ1、 Yml和AMCase表达显著减少(图19D)，进一步证实 了 IL-21R—A小鼠中继发性TH2效应物反应的显箸受损。实施例6: IgG抗体、肉芽肿形成和2型细胞因子在感染的IL-21R 缺陷小鼠中显著减少
随后，为了确定IL-21信号传递是否是维持慢性TH2占优势的反应所必须的，使动物经皮暴露于曼氏血吸虫尾蚴，分析它们在感染 后的急性和慢性时间点的病理反应和免疫反应。如在肺肉芽肿研究中观察到的，受感染的WT小鼠的肝中IL-21R和IL-21 mRNA表达显箸上 调。相反，IL-21mRNA甚至在慢性感染后在IL-21R- 、鼠中也是几乎检 测不到的(图20A)。在感染后的急性阶段，IL-21R— 、鼠也表现出TH2 细胞因子mRNA表达的显著减少(图20A)。但是，所述改变仍然局限 于肉芽肺组织，因为这两组的淋巴结和脾细胞反应在寄生虫抗原体外刺 激后是相似的(图20B)。在体外测定中注意到的唯——致的差异是脾 细胞培养物中IL-5和11-10产生减少2 - 3倍。IL-21R:小鼠在感染后的 急性期也发生了显著更小的肉芽肿(图20C),这与肝中IL-4和IL-13 mRNA反应的减少一致(图20A)。但是，这不伴随肉芽肿中嗜酸性细 胞百分比的任何明显改变(图20C)。病变的更详细显微镜分析证明肉 芽肿的总体组成没有可检测的改变(图21A )。也进行了实验，确定IL-21R 缺陷是否特异性影响CD4+ T细胞募集到肉芽肿组织。为了解决该问题， 使用肺肉芽肿模型，以使炎症细胞的募集同步。但是，与肝肉芽肿的显 微镜评估(图21A) —致，肺中CD4+ T细胞的百分比在暴露于卵之前 和之后在WT和IL-21R- 、鼠中是相似的(图21B)。因此，CD4+T细 胞募集或扩增的改变不太可能解释在组织中观察到的Thl/Th2细胞因子 反应减少。相反，它们似乎由于总体炎症反应的更普遍减少而导致。重 要的是，到感染后12周，这两组都有效下调了它们的肉芽肿反应(Pearce and MacDonald, swpra)。因此，在慢性时间点，肉芽肺大小没有显著差 异(图20C)。在慢性感染的敲除小鼠中观察到了 TH2细胞因子反应的 最小损害(图20A)。在急性期观察到的FIZZ1和Yml的显箸减少在 慢性感染的IL-21R—7—动物中也减少(图20D)。但是，在第12周，AMCase 的表达仍保持显著低水平，表明慢性感染的IL-21R— 、鼠中至少一个亚 组的TH2驱动的反应持续减少。
也检验了 IL-21R:小鼠血清抗体水平的改变(图22)。与它 们受抑制的细胞因子反应一致(图20A) , IL-21R:小鼠表现出寄生虫 特异性IgG! (TH2-相关抗体)和IgG2b (THl-相关抗体)滴度的显著减少，这 种减少在慢性时间点保持(图22B)。但是，令人感兴趣的是，这不伴 随IgE的任何显著改变(图22C)，表明选择性受损仅仅是血清抗体同 种型的一个亚型。已经表明外源性IL-21抑制IgE产生(Suto etal. (2002)100:4565-73),这可以解释IgE在慢性感染的IL-21R一小鼠中IgE 的轻微升高。重要的是，IL-21RV-小鼠中2型反应的总体减少不是归因 于寄生虫负荷的差异，因为在所有时间点，在这两个组的组织中发现了 相似数目的卵和成对的成虫(图22A)。实施例7: IL-21R缺陷减慢肝纤维化的进展
由于认为TH2细胞因子在组织纤维生成中起主要作用(Wynn (2004), w/ ra)，随后检查了曼氏血吸虫感染的IL-21R,小鼠中肝纤维化 的发生和进展。在感染后的多个时间点测定肝羟脯氨酸水平，作为组织 胶原含量的直接测量值。如所预期的，在受感染的WT小鼠中观察到了 显著的肝纤维化(图22D)。相反，IL-21R一展示出在急性和慢性时间 点的显著更少的纤维化。显著的是，到感染后第29周，IL-21R— 、鼠显 示出与WT小鼠相比，总的肝胶原含量减少了 50%以上(图22E)，由 此证实了 IL-21R在TH2-依赖性纤维化进展中的重要和必不可少的作 用。
进行了实验，以检验IL-21抑制剂是否可以减慢受感染的 WT小鼠中的纤维化的进展。为了进行这些实验，从感染后第6周(大 约此时首先在肝中检测到卵)开始，用sIL-21R-Fc或对照蛋白处理各组 C57BL/6小鼠总共5周。尽管两组具有相似的蠕虫和组织卵负荷(数据 未示出)，接受IL-21阻断剂的小鼠显示在实验结束时肝纤维化减少 50%以上(图22F) 。 IL-4和IL-13 mRNA表达在肝中也减少，肉芽胂 大小减少大约15% (数据未示出)。因此，这些数据支持用IL-21R; 小鼠进行的实验。实施例8: IL-21信号传递促进替代激活的巨噬细胞发育
最近将IL-21表征为能够抑制未接触过抗原的Th細胞分化 未产生IFN- y的TH1细胞的TH2细胞因子(Wurster et al. (2002)， s甲ra)。 由于血吸虫中的免疫反应从早期IFN-Y进化为持续和显著的TH2反应 (Pearce and MacDonald, sw/ ra)， #^验了 IL-21R信号传递对蠕虫i秀导的TH2反应的发生的影响。用曼氏血吸虫感染WT小鼠，增加了肝中的IL-21 和IL-21R表达，证实11-21信号传递与蠕虫诱导的2型免疫的联系。但 是，在肺中，血吸虫卯在Th1和TH2极化的反应中都诱导显著ILJ1表 达。实际上，当小鼠极化为TH1反应时，IL-21表达增加最多。这些数 据表明IL-21相对于其它TH2-相关细胞因子表现出较受限的表达模式。 IL-21的受体也不能展示Th1/Th2-特弄性模式。但是，与TH1极化的小 鼠相比，在TH2极化的小鼠肺中几乎诱导了多4倍的IL-21受体，这提 供了一种最初提示，表明IL-21R信号传递可能参与TH2-介导的炎症的 调节。
为了确定2型效应物反应在缺乏IL-21R的条件下是否受 损，检验了在TH2极化条件下优先诱导的一些基因的表达。这些基因包 括AMCase、 Yml和FIZZl,认为所有这些都在TH2介导的炎症的调节 中起重要和非冗余的作用(Zhu et al., Chiaramonte et al. (2003),Nair et al.,認/ ra; Mentink-Kane et al.,認/ ra; Guo et al. (2000) 祝o/. C/zem. 275:8032-37)。尽管在原发、继发或慢性免疫反应过程中观 察到了一些变异，在每种情况下，IL-21R:小鼠展示这些&2-相关基因 的高度显著减少。Ym 1和AMCase是与低等生物的几丁质酶具有同源性 的蛋白家族成员(Nair et al.， s，ra)。尽管它们在宿主免疫反应中的确切 功能还不确定，但认为它们在嗜酸性细胞趋化、组织重塑和纤维化中起 重要作用。实际上，最近的研究表明，AMCase中和作用可以改善过敏 原驱动的炎症和气道高反应性，由此证实哺乳动物几丁质酶参与Th2免 疫(Zhu et al, w; ra)。 FIZZ1也与组织纤维生成相关(Mentmk-Kane et al., s，ra;Lmetal. (2004)/./mw丽o/. 173:3425-31)。因此，IL-21R的主要功能可能是调节伤口愈合和纤维化的机理。因此，除了参与蠕虫诱导的免 疫反应，IL-21R可以参与多种TW-介导的炎性病症的调节。[Ol卯]在血吸虫病中，IL-21R缺陷对疾病的进展具有显著作用。尽 管感染强度在WT和IL-21R一小鼠中相同，但在IL_21R不存在的条件 下，卵诱导的炎症反应显著减少。也存在肺中继发肉芽肿形成的显著减 少和原发肉芽肿的更快消退。综合起来，这些数据说明IL-21R在肉芽肿 性炎症中的必不可少的作用。以前的研究表明IL-4和11-13对病变形成 是关键的(Pearce and MacDonald; ^w/ ra)，因此认为IL-21R直接或间接影 响这些细胞因子的活性。这些研究提示IL-21不是单独作用，因为在IL-4/IL-10双敲除小鼠中观察到了极高水平的IL-21，而肉芽肿形成在这 些TH2缺陷动物中几乎完全消除(Hoffmann et al. (2000)丄/wmw"o/. 164:6406-16; Sandler et al. (2003) </. /wmw朋/. 171:3655-67)。因此，IL-21 似乎与IL-4和IL-13 —起作用，诱导最大反应。本文公开的数据表明 IL-21R一小鼠中肉芽肿的细胞组成没有可检测的改变，并且CD4+T细胞 募集没有特异性受损。综合起来，这些发现提示IL-21R通过调节TH2 效应物反应的总体强度，调节寄生虫诱导的病理学的发展。
为了进一步阐释涉及的机理，进行了实验，确定IL-21是否 直接调节巨噬细胞功能，因为体内数据表明与"替代激活的"表型相关 的一些基因显著;咸少(Gordon, A'w/7n2; Mantovani et al. (2005) /w附wm'/y 23:344-46)。表现替代激活的表型的巨噬细胞和成纤维细胞是血吸虫肉 芽肺的主要细胞组成成分，功能研究提示它们关键参与疾病进展(Hesse etal.(2001), s，ra)。实际上，Brombacher等人的一项重要研究显示完全缺乏替代激活的巨噬细胞的小鼠在曼氏血吸虫感染后发生致死性卵诱 导的病理(Herbertetal. (2004)/附m朋z(y 20:623-35)。此外，由于巨嗟细月包来源的TGF- (3 1参与IL-13介导的纤维化的机理(Lee et al. (2001) / ￡x/7. A/^/. 194:809-21; Fichtner-Feigletal. (2006) AAw. Met/. 12:99-106),进行了 实验，确定IL-21是否调节巨噬细胞中的TGF-p 1产生。为了研究这些 问题，在用IL-21、 IL-4和IL-13的多种组合刺激后，测量骨髓来源的巨 噬细胞中的Arg-1和FIZZ1 mRNA、精氨酸酶活性和TGF- (3 1蛋白反应。 Arg-1和FIZZ1是IL-4Roc/Stat6-依赖性基因(Lm et al.,《w/ ra; Hesse et al. (2001), sw;^a; Munder et al. (1998)/ /w附w"o/. 160:5347-54);因jt匕，它々]起替代的巨噬细胞激活的功能性标志物的作用。重要的是，这些发现提 示当巨噬细胞暴露于IL-21时，它们变得对IL-4和IL-13的Arg-1和FIZZ1 诱导活性更敏感。通过尿素的产生评估的精氨酸酶活性也显著增加，证 明IL-21是高度功能性替代激活的巨噬细胞发育的重要刺激物。相反， IL-21对巨噬细胞的TGF-P 1产生没有作用。因此，似乎并不涉及促纤 维化的细胞因子TGF- P 1,这与以前调查TGF- p 1在血吸虫病中的作用 的研究一致(Kaviratne et al. (2004)丄/w/m#w/. 173:4020-29)。相反，IL-21 显著增加BMM0S中的IL-4Roc和IL-13Rocl表达，并且减少可溶性 IL-13诱斜受体的体内产生，这可能解释它们对IL-4和IL-13的提高的敏 感性。因此，这些数据符合IL-21R;小鼠，并且提示IL-21R信号传递的 一个重要功能是增强AAM0的发育，这与纤维化的机理相关(Hesse etal. (2001), s甲ra; Hesse et al. (2000), sw/ ra)。此外，由于已经表明AAM0方文 大CD4+ TH2细胞分化(Bonecchi et al. (1998) 92:2668-71),这些数据也可以解释IL-21IT 、鼠中蠕虫诱导的TH2活性的总体减少。
在人类血吸虫病中，纤维化肝病理的发生是慢性发病率和致 死率的主要原因(Pearce and MacDonald， Wynn et al. (2004)/wmw"o/. Wev. 201:156_67)。由于已知TH2细胞因子应答在胶原沉积中起 重要作用(Wynn et al. (2004), A'w/ ra),最终的实验系列检验了 IL-21R对 肝纤维化进展的影响。显著的是，纤维化的发生在IL-21R— 、鼠中显著 减少，敲除动物到感染后第29周时显示肝纤维化减少50%以上。重要 的是，当用sIL-21R-Fc处理受感染的WT小鼠时也产生了相似的发现。 因此，IL-21受体也揭示为抗纤维化治疗的潜在的新靶。综上所述，这 些研究说明IL-21R在TH2细胞因子介导的疾病进展中的关键作用。因 此，IL-21R应该归为调节2型免疫和巨噬细胞极化的重要受体之一。实施例10:预示性治疗
给诊断患有肝硬化的受试者施用IL-21R融合蛋白，以减少 肝中纤维化组织的积累。IL-21R融合蛋白包括在C末端通过接头(对应 于SEQ ID NO:17的氨基酸236-243 )与人免疫球蛋白Gl (IgGl) Fc-突变 序列(对应于SEQIDNO:17的氨基酸244-467)融合的SEQIDNO:2的 氨基酸1-235。
给诊断感染血吸虫的受试者施用可溶性ILJ1R片段，以减 少纤维化组织的积累。该片段含有SEQIDNO:2的氨基酸20-538。
手术后，给受试者施用IL-21R抗体，以减少伤口愈合过程 中由于手术切口导致的纤维化积累。[0198给诊断患有肝硬化的受试者施用IL-21抗体，以减少肝中纤 维化组织的积累。
权利要求
1.治疗、改善或预防受试者中的纤维化或纤维化相关病症的方法，包括给受试者施用治疗有效量的减少受试者中IL-21和/或IL-21R的水平的试剂。
2. 权利要求l的方法，其中该试剂是IL-21/IL-21R拮抗剂，选自 抗IL-21R抗体、抗IL-21抗体、抗IL-21R抗体的抗原结合片段、抗IL-21抗体的抗原结合片段和IL-21R的可溶性片段。
3. 权利要求2的方法，其中该试剂是IL-21R的可溶性片段，并且 所述IL-21R的可溶性片段包含与选自下组的氨基酸序列具有至少90% 同一性的氨基酸序列SEQ ID NO:2的氨基酸1-538、 SEQIDNO:2的氨 基酸20-538、 SEQ ID NO:2的氨基酸1-235、 SEQ ID NO:2的氨基酸20-235、 SEQIDNO:2的氨基酸1-236、 SEQIDNO:2的氨基酸20-236、 SEQ ID NO:5的氨基酸1-529、 SEQ ID NO:5的氨基酸20-529、 SEQ ID NO:5 的氨基酸1-236和SEQ ID NO:5氨基酸20-236 。
4. 权利要求3的方法，其中所述IL-21R的可溶性片段结合于IL-21 多肽。
5. 权利要求l的方法，其中该试剂是IL-21R的可溶性片段，并且 所述IL-21R的可溶性片段包含与以下所示氨基酸序列基本相同的氨基 酸序列SEQIDNO:ll、 SEQIDNO:13、 SEQIDNO:15、 SEQIDNO:17、 SEQ IDNO:19、 SEQ ID NO:21、 SEQ IDNO:23、 SEQ IDNO:25或SEQ ID NO:27。
6. 权利要求5的方法，其中IL-21R的可溶性片段的氨基酸序列包 含与SEQ ID NO:l 1或SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列基本相同的氨基 酸序列。
7. 权利要求l的方法，其中该试剂是IL-21R的可溶性片段，并且 所述IL-21R的可溶性片段由与以下所示核酸序列基本相同的核苷酸序 列编码SEQIDNO:10、 SEQIDNO:12、 SEQIDNO:14、 SEQIDNO:16、 SEQ ID NO: 18、 SEQ ID NO:20 、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:26。
8. 权利要求7的方法，其中所述IL-21R的可溶性片段由与SEQID NO: 12或SEQ ID NO: 16所示核酸序列基本相同的核苷酸序列编码。
9. 权利要求2的方法，其中该试剂是IL-21R的可溶性片段，并且所述IL-21R的可溶性片段包含IL-21R的胞外域和免疫球蛋白Fc片段。
10. 权利要求9的方法，其中IL-21R的胞外域的氨基酸序列包含与 SEQ ID NO:2的氨基酸1-235或SEQ ID NO:2的氨基酸20-235具有至少 卯％同一性的氨基酸序列。
11. 权利要求9的方法，其中免疫球蛋白Fc片段具有改变的功能。
12. 权利要求11的方法，其中免疫球蛋白Fc片段具有SEQ ID NO:17 的氨基酸244-467的氨基酸序列。
13. 权利要求l的方法，其中纤维化或纤维化相关病症影响肝、表 皮、内皮、肌肉、腱、软骨、心脏、胰腺、肺、子宫、神经系统、睾丸、 卯巢、肾上腺、动脉、静脉、结肠、小肠、胆管或胃。
14. 权利要求13的方法，其中纤維化或纤维化相关病症影响肝、 表皮、内皮或肺。
15. 权利要求14的方法，其中纤维化或纤维化相关病症是肺间质 纤维化。
16. 权利要求13的方法，其中纤维化或纤维化相关病症是血吸虫 感染的结果。
17. 权利要求l的方法，其中纤维化或纤维化相关病症是伤口愈合 的结果。
18. 权利要求17的方法，其中伤口愈合由手术切口导致。
19. 权利要求l的方法，进一步包括给受试者施用至少一种另外的 治疗剂。
20. 权利要求19的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂选自 细胞因子抑制剂、生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、 酶抑制剂、细胞毒性剂和细力包抑制剂。
21. 权利要求19的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂选自 TNF拮抗剂、抗TNF剂、IL-12拮抗剂、IL-15拮抗剂、IL-17拮抗剂、 IL-18拮抗剂、IL-22拮抗剂、T细胞消除剂、B细胞消除剂、环孢菌素、 FK-506、 CCI-779、依那西普、英夫单抗、利妥希玛、阿达木单抗、泼 尼松龙、硫唑。票呤、金、柳氮磺胺吡啶、羟氯喹、米诺环素、阿那白滞 素、阿巴他塞、曱氨蝶呤、来氟米特、雷帕霉素、雷帕霉素类似物、Cox-2 抑制剂、cPLA2抑制剂、NSAIDs、 p38抑制剂、B7.1、 B7.2、 ICOSL、 ICOS和/或CD28的拮抗剂和CTLA4激动剂。
22. 权利要求l的方法，其中所述受试者是人。
23. 鉴定用于治疗、改善或预防受试者中的纤维化或纤维化相关病 症的化合物的方法，包括(a)测量感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/ 或IL-21R水平；(b)使感兴趣的细胞或样品与化合物接触；和(c)测量与 化合物接触后感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平，其中与 未接触的感兴趣的细胞或样品相比，接触的感兴趣的细胞或样品中的 IL-21和/或IL-21R水平较低，则鉴定出化合物是可用于治疗、改善或预 防受试者中的纤维化或纤维化相关状况的化合物。
24. 鉴定用于治疗、改善或预防受试者中的纤维化或纤维化相关病 症的化合物的方法，包括(a)测量感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/ 或ILJ1R水平；(b)使感兴趣的细胞或样品与化合物接触；(c)测量与化 合物接触后感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平；和(d)比 较接触的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平与IL-21和/ 或IL-21R的参照水平，其中与IL-21和/或IL-21R的参照水平相比，接 触的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平较低，则筌定出化 合物是可用于治疗、改善或预防受试者中的纤维化或纤维化相关状况的 化合物。
25. 监测受试者中的纤维化或纤维化相关状况的进展的方法，包 括(a)在第一时间点测量来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21 和/或IL-21R水平；和(b)在第二时间点测量来自受试者的感兴趣的细胞 或样品中的IL-21和/或IL-21R水平；其中与第 一时间点时来自受试者的 感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平相比，第二时间点时来 自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平较低，提供 纤维化或纤维化相关状况的严重程度降低的指示。
26. 预测受试者中的纤维化或纤维化相关状况的方法，包括(a) 在第一时间点测量来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或 IL-21R水平；和(b)在第二时间点测量来自受试者的感兴趣的细胞或样品 中的IL-21和/或IL-21R水平；其中与第一时间点时来自受试者的感兴趣 的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平相比，第二时间点时来自受试 者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平较低，表明受试者 将发生纤维化或纤维化相关状况的可能性降低，或受试者中的纤维化或 纤维化相关状况将恶化的可能性降低。
27. 预测受试者中的纤维化或纤维化相关状况的方法，包括(a) 测量来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平；(b) 比较来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平与 IL-21和/或IL-21R的参照水平，其中与IL-21和/或IL-21R的参照水平 相比，来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平较 低，表明受试者将发生纤维化或纤维化相关状况的可能性降低，或受试 者中的纤维化或纤维化相关状况将恶化的可能性降低。
28. 诊断受试者中的纤维化或纤维化相关状况的方法，包括(a) 测量来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平；(b) 比较来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平与 IL-21和/或IL-21R的参照水平，其中与IL-21和/或IL-21R的参照水平 相比，来自受试者的感兴趣的细胞或样品中的IL-21和/或IL-21R水平较 高，表明受试者存在纤维化或纤维化相关状况。
全文摘要
本发明提供了通过测量IL-21和/或IL-21受体(IL-21R)水平(例如IL-21和/或IL-21R蛋白和/或mRNA的表达水平、IL-21和/或IL-21R的活性水平、IL-21与IL-21R的相互作用水平)的改变而筛选用于治疗、改善或预防纤维化和/或纤维化相关状况的组合物的方法。本发明进一步提供了用于治疗纤维化和/或纤维化相关状况的IL-21或IL-21R的拮抗剂。进一步提供了通过测量IL-21和/或IL-21R的水平(即IL-21和/或IL-21R的活性水平、IL-21和/或IL-21R的表达水平(如IL-21和/或IL-21R基因产物的水平)和/或IL-21与IL-21R的相互作用水平)而诊断、预测和监测纤维化和/或纤维化相关状况的进展(例如治疗过程)的方法。
文档编号A61P17/02GK101287759SQ200680021090
公开日2008年10月15日 申请日期2006年4月13日 优先权日2005年4月14日
发明者D·A·杨, M·格鲁斯比, M·科林斯, T·A·温 申请人:惠氏公司;美国政府卫生与公众服务部;哈佛大学校长及研究员协会