内脏脂肪蓄积抑制剂的制作方法

专利名称：：内脏脂肪蓄积抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有3-0-(3-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为有效成分的内脏脂肪蓄积抑制剂、以及含有该抑制剂的饮料食品。更具体地说，本发明涉及可降低蓄积在腹腔内的脂肪、预防或改善代谢综合征可能为主要原因的内脏脂肪型肥胖的内脏脂肪蓄积抑制剂，以及含有该内脏脂肪蓄积抑制剂的特定保健用食品等功能性饮料食品。
背景技术：
：近年来，伴随着生活方式的欧美化，激增的肥胖成为严峻的问题。肥胖是指由于摄取卡路里的过剩和运动不足等导致消耗卡路里降低，从而使能量蓄积过剩，是指"身体中脂肪组织(体脂肪)过量蓄积的状态"，被认为是糖尿病、高血压、高血脂等所谓的生活方式病的发病基础。肥胖是过剩的体脂肪的蓄积状态和体重增加的现象，有报道指出为改善肥胖而急剧减体重时，负担能量消耗的肌肉也与脂肪一起减少，对于老年人来说，有引起血压障碍、股关节破损等症状的危险性(非专利文献1)。在不伴随体重减轻、只进行脂肪量减少时，有人提出了有望获得肌肉组织改善效果的运动疗法(非专利文献2)。这样，不单纯减轻体重，而是通过抑制体脂肪蓄积来改善肥胖的方法近年受到人们关注。脂肪组织有蓄积在皮肤下的皮下脂肪和蓄积在腹腔内脏周围的内脏脂肪，将它们统称为体脂肪。已知肥胖有皮下脂肪蓄积的皮下脂肪型肥胖和内脏脂肪蓄积的内脏脂肪型肥胖，特别是内脏脂肪的蓄积对于肥胖中的代谢异常、循环系统疾病等并发症发病频率和重症度有很强的影响。以往已知，4艮多生活方式病在一个人身上并发的病态、即多危险因素综合征使动脉硬化性疾病的发病危险急剧提高，作为动脉硬化危险因素，人们提出了X综合征、内脏脂肪综合征等概念。为了更综合的进行危险评价和动脉石更化发病的预防，人们从这些多危险因素综合征中总结了代谢综合征的定义和国际统一的诊断基准(非专利文献3)。2005年4月发表的日本代谢综合征诊断基准中，表示肥胖程度的尺度不是通常使用的身体质量指数(BMI)或体脂肪率，与100m2以上内脏脂肪面积相当的腰围被采纳为必须项目，确立了代谢综合征的成因与内脏脂肪的蓄积有很深的关系的认识。体脂肪减少的方法提倡运动、饮食、行动疗法等，这些方法的实行或持续困难时，可以进行药物疗法或外科手术。目前，作为肥胖治疗药使用的药物有食欲抑制剂马吲哚，但基本上只对BMI为35以上的高度肥胖症发行处方，不仅具有头痛或口渴等副作用，具有严重的肾或肝、胰脏功能障碍时则禁止服用，也显示有依赖性，因此不能长期给药等，存在很多问题。已知P-谷甾醇或菜籽甾醇、豆甾醇等植物甾醇类具有通过抑制胆固醇的吸收来降低血液中胆固醇的效果，有人公开了以甘油二酯和植物甾醇作为有效成分的脂质代谢改善剂(专利文献1)。还有人公开了含有胆甾酮化合物等、或4-胆甾烯-3-酮作为有效成分的抗肥胖剂或脂质代谢改善剂，其中，胆甾酮化合物以P-谷甾醇或菜籽甾醇等植物甾醇类作为起始物质合成(专利文献2-5)。属于百合科的植物中，已知芦荟属04/oe)的代表性的植物有库拉索,荟(^4/oe6a由(ie"/i^M7/er)或木立，荟(/4/oea/^omsrms'緒〃ermto/e似wBerge厂)等，报道其具有各种功能。其中，有人公开了芦荟的提取物具有预防改善肥胖的效果(专利文献6)。还有人公开含有0.25。/。库拉索，荟粉末的增补剂可作为具有体重减轻作用的增补剂(专利文献7)。还公开了用于调节体重的精油组合物中含有库拉索芦荟(专利文献8)。并且还有报告指出将木立，荟全叶给予大鼠，则浓度相关性地体重显著减轻(非专利文献4，或非专利文献5)。专利文献1:日本特开2005-15425号公报专利文献2:日本特开平7-165587号公报专利文献3:日本特开平11-193296号公报专利文献4:日本特开2001-240544号公报专利文献5:日本特开平5-170651号公报专利文献6:日本特开2000-319190号公报专利文献7:新西兰专利第330439号公报专利文献8:美国专利第6280751号公报非专利文献l:JournalofAppliedPhysiology、第95巻、第1728~1736页、2003年非专利文献2:JournalofAppliedPhysiology,第99巻、第12201225页、2005年非专利文献3:Adiposcience、第2巻、第1115页、2005年非专利文献4:医学和生物学，第125巻，第5号，189194页非专利文献5:藤田学园医学会志，第22巻，第2号，第153157页
发明内容上述专利文献1中并未记载单独给予植物甾醇的效果，对内脏脂肪的作用也毫无记载。上述专利文献2中公开的3-甾酮类化合物、专利文献3中公开的胆甾酮化合物、专利文献4中公开的24-甲基胆甾-5-烯-3-酮等24-烷基胆甾烯-3-酮化合物群的任意化合物均公开了具有体重、体脂肪量和血脂量减少的作用，但是对于口服摄取量，或者有关对体重增加没有影响、显示内脏脂肪蓄积的抑制作用的效果毫无记载。上述专利文献5中公开的4-胆甾烯-3-酮与本发明的有效成分明显不同，特别是专利文献5所公开的作用效果显示使正常小鼠摄取卡路里时，减少过量的腹腔内脂肪的同时，也使被视为正常范围的脂肪成分降低很多，与本发明的只有效地抑制肥胖状态或摄取过量卡路里时内脏蓄积的必要以上的脂肪成分的效果明显地效果性质不同。上述专利文献6所述的肥胖预防改善剂公开抑制伴随有体重增加的肥胖的进程，无需过度限制饮食，可有效保持标准的体重。但是对于体脂肪的作用则没有记载，对于不伴随有体重减轻、只使内脏脂肪减少的内脏脂肪蓄积的抑制效果也毫无记载。专利文献6的有效成分是，荟提取物，但并未特别给出抑制伴随体重增加的肥胖进程的相关成分，对于与此性质不同的不伴随有体重减轻、只减少内脏脂肪的内脏脂肪蓄积抑制效果，包括该效果的存在均难以从专利文献6的记载中预测。即，对于可选择性地减少与代谢综合征发病有很深相关性的内脏脂肪或预防、抑制蓄积的药物，人们希望进一步开发可日常安全摄取、尽可能不伴随痛苦、可有效地减少内脏脂肪的功能性材料。本发明人等针对上述课题，对于可预防或改善可能是代谢综合征主要原因的内脏脂肪型肥胖的内脏脂肪蓄积抑制剂进行了深入的研究，结果发现3-0-l3-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇具有有效地降低蓄积在腹腔内的脂肪的效果。另外，该效果不伴随有体重的减轻，可保持标准的体重，也不进行过度的饮食限制等，对于肥胖的进程或抑制有效。本发明的目的在于提供内脏脂肪蓄积抑制剂，该内脏脂肪蓄积抑制剂含有上述3-0-(3-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇作为有效成分。本发明的另一目的在于提供含有上述内脏脂肪蓄积抑制剂的特定保健用食品等功能性饮料食品。可解决上述课题的本申请的第一发明是含有下述化学式(l)所示的化合物作为有效成分的内脏脂肪蓄积抑制剂。可解决上述课题的本申请的第二发明是内脏脂肪蓄积抑制剂，该内脏脂肪蓄积抑制剂含有含下述化学式(l)所示的化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物或压榨液或者它们的分级组分作为有效成分，其中，上述植物的有才/L溶剂提取物、热水提取物或压榨液或者它们的分级组分含有干燥质量至少为0.001%质量的下述化学式(l)所示的化合物，上述植物的优选方案为百合科植物。解决上述课题的本申请的第三发明是含有上述第一或第二发明中记载的内脏脂肪蓄积抑制剂的饮料食品，其优选的方案是该饮料食品含有0.0001%质量以上的上述化学式(1)所示的化合物。解决上述课题的本申请的第四发明是上述化学式(l)所示化合物、或者含有干燥质量至少为0.001%质量的该化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物、压榨液或它们的分级组分在制备内脏脂肪蓄积抑制剂中的应用，其优选方案是上迷植物为百合科植物。解决上述课题的本申请的第五发明是抑制内脏脂肪蓄积的方法，其特征在于将上述化学式(l)所示的化合物、或者含有干燥质量至少为0.001%质量的该化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物、压榨液或它们的分级组分给予要抑制内脏脂肪蓄积的对象，其优选方案是上述植物为百合科^t物。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂和含有该内脏脂肪蓄积抑制剂的饮料食品可以安全地给予或摄取，具有有效地抑制内脏脂肪蓄积的作用。另外，本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂的有效成分在饮食经验上考虑可安全地摄取，可以由容易获得的百合科植物等例如库拉索声荟简便地制备。实施发明的最佳方式以下，对本发明的优选实施方案进行详细iji明。本发明并不限于以下的优选实施方案，可以在本发明的范围内自由变更。本说明书中，如无特别限定，百分率是以质量表示。本发明中，内脏脂肪蓄积抑制作用是指使蓄积在腹腔内的脂肪量降低的作用。因此，内脏脂肪的蓄积抑制作用可通过测定腹腔内的脂肪量、例如肠系膜脂肪的重量进行评价。作为本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂(以下也称为"本发明的药物")的有效成分使用的化合物(以下称为"本发明的化合物")是具有上述通式(l)所示结构的化合物，即3-0(3-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。本发明的化合物具有4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的3位羟基与D-葡萄糖的1位羟基脱水缩合的结构。作为本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂的有效成分使用的组合物(以下称为"本发明的组合物")是含有干燥质量至少为0.001%质量、优选0.01%质量以上、更优选0.1%质量以上的上述本发明化合物的百合科植物的提取物或其分级组分。对本发明化合物的含量的上限没有特别限定，优选10%质量，可例举50%质量或70%质量或90%质量。本发明中，干燥质量是按照第十四改正日本药局方(2001年3月30日厚生劳动省告示第111号)的一般试验法"干燥减量试验法"中规定的干燥方法，将化合物干燥后测定的质量，例如可如下规定约取lg本发明的化合物，将其在105。C下干燥4小时，在干燥器内放置冷却，通过称量测定其质量。属于百合科植物、含有本发明化合物的植物或其一部分或它们的破碎物中，用有机溶剂或热水提取含有该化合物的组分，并浓缩来进行制备。上述属于百合科的植物有声荟属或葱属04//"朋)植物。^荟属植物有库拉索芦荟、开普，荟(」/oe/era;cA//〃e。、非洲芦荟(^4/oeq/Wc朋aAf/〃w)、木立芦荟、穗花声荟G4/oe^zcatoM/〃w)等。本发明的化合物或含有本发明化合物的组合物的制备中，可以使用上述植物全体部分，优选使用叶肉(透明凝胶部分)。上述植物或其一部分优选用匀浆器等进行破碎，形成液状，然后用有机溶剂或热水提取。有机溶剂有曱醇、乙醇、丁醇等醇；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等酯；丙酮、曱基异丁基酮等酮；二乙基醚、石油醚等醚；己烷、环己烷、曱苯、苯等烃；四氯化碳、二氯甲烷、氯仿等卤代烃；吡啶等杂环化合物、乙二醇等二醇；聚乙二醇等多元醇；乙腈等腈溶剂；以及这些溶剂的混合液等。这些溶剂可以是无水的，也可以是含水状态。这些溶剂中，优选乙酸乙酯/丁醇混合液(3:l)或氯仿/曱醇混合液(2:l)。提取方法可以采用通常植物成分提取中使用的方法。通常，相对于1质量份新鲜的植物或干燥植物使用1~300质量份有机溶剂，搅拌或振荡，同时以溶剂沸点以下的温度进行加热回流，或者在常温下通过超声波提取的方法。j是取液通过过滤或离心等适当的方法，将不溶物质分离，可获得粗提取物。粗提取物可以通过各种色谱例如正相或反相硅胶柱色谱进行纯化。正相硅胶柱色i普中，如果洗脱溶剂使用氯仿/曱醇混合液的梯度，则以氯仿:曱醇=5:1左右即可以使本发明的化合物洗脱。另外，反相硅胶柱色i普中，如果洗脱溶剂使用曱醇/水混合物的梯度，则以95%左右浓度的曱醇可以使本发明的化合物洗脱。所得的组分可进一步通过HPLC等进行纯化。化合物，这例如可以通过后述实施例所示的方法，以内脏脂肪蓄积抑制作用为指标进行确认。例如，为在苷元部分结合葡萄糖的苷、以及苷元部分为4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇，这可通过130核磁共振波谱法(NMR)等确认。本发明的化合物还可以通过使D-葡萄糖与4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇缩合来制备。4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇可由植物进行提取和纯化获得。D-葡萄糖与4-曱基麦角甾-7-歸-3-醇的缩合例如可将第4版实验化学讲座26、1992年(分别于第272、297、342页记载)所示的方法组合进行。即，将D-葡萄糖完全乙酰化后，将端基异构位变换为a-溴化物。在二乙基醚中，使4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇与a-溴化物反应，实现P-糖基化，然后在曱醇钠/甲醇中将乙酰基水解，可获得目标物质。本发明的化合物可以直接用作本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂或含有该内脏脂肪蓄积抑制剂的^r大料食品的有效成分。含有本发明化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物或压榨液或者它们的分级组分(以下称为"提取物等，，)也可以作为内脏脂肪蓄积抑制剂或含有内脏脂肪蓄积抑制剂的饮料食品的有效成分使用。本发明中，压榨液是将植物的粉碎物加入到压榨机中，回收植物压榨原液，用滤器或滤布等除去不溶性组分(杂质)所得。例如，植物使用属于百合科的库拉索F荟时，将除去了库拉索,荟叶外皮的叶肉凝胶部分用粉碎机破碎，将其加入到压榨机中，回收库拉索芦荟原液，将该库拉索芦荟原液用滤器或滤布等除去杂质，由此可制备库拉索芦荟压榨液。此时，在库拉索声荟叶外皮中较多含有的，荟素和，荟大黄素的含量合计优选为5ppm以下。此时，在内脏脂肪蓄积抑制剂中含有的上述提取物等优选含有干燥质量至少为0.001%质量、更优选含有0.011%质量、特别优选含有0.051%质量的本发明的化合物。饮料食品中含有的上述提取物等优选含有千燥质量至少为0.0001%质量、更优选含有0.0011%质量、特别优选含有0.005~1%质量的本发明的化合物。上述提取物等可以含有两种以上本发明的化合物。上述提取物等可以是溶液，也可以通过常规方法进行冷冻干燥或喷雾干燥，以粉末的形式保存直至使用。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂可以是将本发明的化合物或含有受的制剂载体组合，口服或非口服给予包括人的哺乳动物。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂中，本发明的化合物可以制成药物可接受的盐。药物可接受的盐包括金属盐(无机盐)和有机盐两者，应用清单如"Remington'sPharmaceuticalSciences、第17版、第1418页、1985年"中的记载。具体包含盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐和氢溴酸盐等无机酸盐，或者苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、曱磺酸盐、对曱苯磺酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、水杨酸盐和硬脂酸盐等有机酸盐，但并不限于此。还可以制成与钠、钾、钙、镁、铝等的金属盐，与赖氨酸等氨基酸的盐。上述化合物或其药物上可接受的盐的水合物等溶剂合物也包含在本发明中。对本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂的制剂形式没有特别限定，可根据治疗目的适当选择，具体可例举片剂、丸剂、散剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶嚢剂、糖浆剂、栓剂、注射剂、软膏剂、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂等。在制成制剂时，制剂载体可以使用通常内脏脂肪蓄积抑制用药物中常用的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂、稀释剂、表面活性剂、注射剂用溶剂等添加剂。在不损害本发明效果的范围内，本发明的化合物或含有本发明化合物的提取物等可以与其它具有内脏脂肪蓄积抑制作用的药物结合使用。对本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂中所含的本发明化合物或含有本发明化合物的提取物等的量没有特别限定，可适当选择，例如，本发明化合物的量在制剂中至少为0.001%质量，优选0.011%质量，特別优选0.05~1%质量。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂具有抑制内脏脂肪蓄积的作用，因此可以预防内脏脂肪型肥胖。内脏脂肪型肥胖通常是指内脏脂肪面积1001112以上的状态，根据代谢综合征的诊断基准，是指日本男性腰围85cm以上、女性90cm以上的情况(日本内科学杂志、第94巻、第188203页、2005年)。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂适合对内脏脂肪比正常人的值处于蓄积的状态的患者的治疗使用。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂可以改善或预防由内脏脂肪的蓄积引起的疾病、并发症等例如脂肪代谢异常、循环系统疾病等，以及降低这些疾病、并发症等的危险。所述起因于内脏脂肪蓄积的各种疾病可例举肥胖，特别是内脏脂肪型肥胖、高血脂、糖尿病、高血压、动脉硬化等。起因于这些疾病的并发症可例举糖尿病的糖尿病性视网膜病、肾病、神经障s竽、糖尿病性坏死，高血压的脑卒中、肾硬化、肾功能不全，动脉硬化的脑卒中或脑梗塞、心绞痛或心肌梗塞等心血管疾病，尿毒症、肾硬化、肾功能不全等肾病等。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂可用于预防代谢综合征的发病。这样，抑制或减少内脏脂肪的蓄积在预防代谢综合征，以及相关的动脉硬化性疾病，被认为是危险因素的糖尿病、高血压、高血脂等本发明的代谢综合征是指多危险因素综合征中可见的病态，即高胰岛素血症、糖耐能异常或高血糖、脂肪代谢异常、高血脂(高三甘油血症、低HDL胆固醇血症)、高血压、肥胖、被视为内脏脂肪蓄积等的危险因素的症状复合并发的动脉硬化易发症状态。本发明人等发现本发明的化合物可以使血红蛋白Alc值降低，具有改善高血糖的作用(国际公开2005/095436号)。本发明的内脏脂肪蓄积抑制剂所适用的疾病优选血红蛋白Alc的值不处于比正常人高的状态。对本发明的药物的给药时间没有特别限定，可根据对象疾病的治疗方法选择适当的给药时期。给药形式优选根据制剂形态、患者的年龄、性别、其它条件、患者的症状程度等确定。本发明的药物的给药量可根据用法、患者的年龄、性别、疾病的程度、其它条件等适当选择。通常，作为有效成分的本发明化合物的量可以大致为0.00150mg/kg/天，优选0.011mg/kg/天的范围的量。使用含有本发明化合物的提取物等时，提取物等的干燥质量可以大致为0.11000mg/kg/天，优选1~100mg/kg/天。上述情况均可以每天一次或分多次给药。(饮料或食品)中含有，可以制成具有内脏脂肪蓄积抑制效果的饮料食品。只要不损害上述有效成分的效果，只要是可以口服摄取，对饮料食品的形态或性状没有特别限定，除含有上述有效成分之外，可以通过使用通常饮料食品中采用的原料，按照常规方法进行制备。的提取物等的量没有特别限定，可适当选择，例如，本发明化合物的量在饮料食品中可以至少为0.0001%质量，优选0.0011%质量，特别优选0.005~1%质量。本发明的饮料食品的用途可以如利用内脏脂肪降低的效果，可获得各种用途。可例举适合开始注重腰围的人士的饮料食品，适合注重血脂成分的人士的饮料食品，在降低或除去代谢综合征的危险因素方面起作用的饮料食品等用途。本发明的饮料食品中，"抑制内脏脂肪蓄积"是指改善或预防起因于内脏脂肪蓄积而导致的各种对健康有害的情况，"改善内脏脂肪型肥胖"、"预防内脏脂肪型肥胖"、"降低内脏脂肪"、"预防内脏脂肪蓄积"等与上述"抑制内脏脂肪蓄积"同样含义，在本发明中均有例举。本发明的饮料食品对于由内脏脂肪蓄积引起的疾病、例如以高血脂为代表的脂肪代谢异常、循环器官疾病等的改善或预防有用。另外，也可用于预防内脏脂肪型肥胖或代谢综合征等的发病。并且，本发明的饮料食品与本发明的药物所例举的同样，可以治疗或预防起因于内脏脂肪蓄积而引起的各种疾病、并发症等，以及降低这些疾病、并发症等的危险。本发明的饮料食品优选以附有标明用于抑制内脏脂肪蓄积的标示的饮料食品，例如优选以"标示用于抑制内脏脂肪蓄积、含有具内脏脂肪蓄积抑制效果的化合物的饮料食品"、或者"标示用于抑制内脏脂肪蓄积、含有植物提取物的^t料食品"等形式销售。本发明的化合物或含有本发明化合物的组合物等具有抑制内脏脂肪蓄积的作用，因此在饮料食品上标示抑制内脏脂肪蓄积，可认为也具有改善内脏脂肪型肥胖的含义。因此，本发明的饮料食品可以标示"用于改善内脏脂肪型肥胖"。即，上述用于抑制内脏脂肪蓄积的标示也可以是上述的"用于改善内脏脂肪型肥胖"的标示。为进行上述标示而使用的文字不只限于"用于抑制内脏脂肪蓄积"、或"用于改善内脏脂肪型肥胖"这样的字样，除此以外的文字只要是表示抑制内脏脂肪的蓄积、或预防、改善内脏脂肪型肥胖的效果的文字均包含在本发明的范围内。上述文字可以是基于各种用途的标示，例如使所需要的人识别抑制内脏脂肪蓄积或改善内脏脂肪型肥胖的效果。可例举"适合关注腰围的人士"、"适合有内脏脂肪型肥胖倾向的人士"、"有利于代谢综合征危险因素(危险)的降低或除去"等标示。上述"标示"是指对于所需要人士为了使其了解上述用途而进行的所有的行为，只要是可以联想、类推到上述用途的标示即可，不管其标示的目的、标示的内容、标示的对象物、介质等如何，所有都适合本发明的"标示"。但是，优选用所需要人士可直接识别上述用途的的表现方式来标示。具体来说，可例举在本发明的饮料食品所涉及的商品或商品包装上记我上述用途的行为；将在商品或商品包装上记载了上述用途的物品进行转让、交付，或为了转让或交付而进行的展示、进口的行为；商品相关的广告、价格表或合同文件上记栽上述用途并展示、或者颁布；或者以这些为内容的信息上记载上述用途并通过电磁性(互联网)方法进行提供的行为等。另一方面，标示优选经行政等认定的标示(例如根据行政所规定的各种制度接受认定，根据上述认定的方式进行的标示)，特别优选包装、容器、产品目录、手册、POP等销售现场的宣传材料、其它文件等上的标示。例如，可例举健康食品、功能性食品、经肠道营养食品、特别用途食品、营养功能食品、准医药品等形式的标示，还可以例举其它由厚生劳动省认定的标示，例如由特定保健用食品以及与其类似的制度认定的标示。后者的例子可以例举特定保健用食品的标示、附加条件的特定保健用食品的标示、表明对身体的结构或功能有影响的标示、降低疾病危险的标示等，更具体地说，典型的例子是由健康增进法施行规则(2003年4月30日日本国厚生劳动省令第86号)所规定的特定保健用食品的标示(特别是保健用途标示)以及与其类似的标示。下面给出实施例，进一步详细说明本发明，但本发明并不受以下实施例的限定。首先，在制备例中给出本发明的化合物或组合物可由百合科植物制备的例子。[制备例1]以下，作为来自百合科植物的制备例，给出了由库拉索,荟制备3-0-|3-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇的制备例子。使用匀浆器将100kg库拉索芦荟的叶肉(透明凝胶部分)制成液状，向其中添加100L乙酸乙酯/丁醇混合液(3:l),搅拌。放置过夜，然后将乙酸乙酯/丁醇混合液与水层分液，回收乙酸乙酯/丁醇混合液。在减压下使该乙酸乙酯/丁醇混合液浓缩，所得乙酸乙酯/丁醇混合液提取物的质量为13.5g。使用上述水层和乙酸乙酯/丁醇混合液提取物，通过后述实施例1所示的肠系膜脂肪重量的测定，对内脏脂肪蓄积抑制作用进行评价，乙酸乙酯/丁醇混合液提取物中可见该作用，因此尝试对该提取物中的成分进行分离、纯化。首先，将上述提取物通过薄层色谱(Merck公司制备，硅胶60F254和RP-18F2543)进行研究，结果可以认为使用氯仿/曱醇混合液的正相硅胶柱色谱的分离方法是适当的。因此，填充400g硅胶60(Merck制备)，向柱中通入将13g该提取物溶解于1ml氯仿/曱醇(混合液1:1)所得的溶液，使其吸附于柱上，然后使用氯仿/曱醇混合液，通过使曱醇浓度分阶段升高的阶式梯度法(氯仿:曱醇=100:1、25:1、10:1、5:1和1:1的各混合比)进行洗脱，在上述混合液的每种混合比下将洗脱液进行分级。各组分在除去溶剂后的粗纯化物收量分别为1.44g、3.0g、1.17g、1.28g、2.27g。这些组分中，在用氯仿:甲醇=5:1洗脱的组分(粗纯化物A)中存在活性成分，这可通过对上述内脏脂肪蓄积抑制作用的评价来确认。为了进一步由上述粗纯化物A进行活性成分的分离纯化，将该粗纯化物A用薄层色谱(Merck公司制备，硅胶60F254和RP-18F2543)进行研究，结果使用甲醇的反相硅胶柱色谱的分离方法是适当的。因此，将上述粗纯化物A溶解于1ml氯仿/曱醇混合液(l:l)，填充180gCOSMOSIL140(NacalaiTesque公司制造)，使其吸附于柱上，然后用600ml85%曱醇溶液、600ml95%甲醇溶液、100ml100%甲醇依次洗脱。3-0-l3-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇在95%曱醇洗脱组分中浓缩分离，除去其溶剂后的质量为370mg。以下将其称为化合物1。将化合物1进行薄层色谱研究，结果显示与P-谷甾醇葡糖苷极为接近的Rf值，因此预测是苷元部分结合有一个分子的糖形成糖苷。为了进一步对于化合物1的糖组成进行研究，将化合物1进行曱醇分解，然后以TMS衍生物的形式采用GC-MS进行测定。结果，在测定化合物1糖部分的TMS衍生物时，在保留时间14.28分钟、14.61分钟、16.34分钟可见主峰，与标准品葡萄糖(NacalaiTesque公司制备)的主峰14.27分钟、14.60分钟、16.33分钟几乎一致。另外未见与标准品半乳糖(Kishida化学制剂公司制备)和标准品木糖(Kishida化学制剂公司制备)的主峰对应的峰。因此，化合物1所含的糖的种类确认为葡萄糖。由以上结果推定化合物1是在苷元部分结合有一个分子的葡萄糖的糖苷。但将化合物1通过l3C-NMR(125MHz、CDC1》进行测定，结果可见杂质的存在，因此为了确认构造必须进一步纯化。因此，再将化合物1进行甲醇分解，然后乙酰化，确认苷元部分的结构、以及苷元部分与糖的结合部位。以下给出该方法。将50mg化合物1溶解于50ml含有5%盐酸的曱醇中，然后加热回流6小时，进行甲醇分解，使其干燥，得到约30mg残余物。将该残余物通过硅胶柱色谱(己烷:氯仿=9:1)纯化，得到10mg化合物2。向5mg该化合物2中加入乙酸酐和吡啶各两滴，在70。C下加热30分钟，实施乙酰化，然后馏去反应液中的溶剂，得到化合物3。将该化合物3用GC-MS和13C-NMR(125MHz、CDC1》进行分析。GC-MS和13C-NMR(125MHz、CDCl3)的测定条件和结果如下。作为标准物使用的3-乙酰氧基-4-曱基麦角甾-7-烯是由芦荟提取纯化后，通过nC-NMR确认结构，然后乙酰化制备。[13C-NMR波谱(5值，在CDC13中)];C誦l:36.8,C-2:27.3,C-3:78.7,C-4:37.0,C画5:46.9,C画6:26.8,C-7:117.4,C-8:139.4，C-9:49.7,C-10:34.9,C-ll:21.6,C-12:39.7,C-13:43.6,C-14:55.1,C-15:23.1,C-16:28.2,C-17:56.3，C画18:12.0,C-19:14.2,C-20:36.5,C-21:19.0,C-22:33.9,C-23:30.6,C誦24:39.1,C-25:32.6,C-26:20.4,C-27:18.4，C-28:15.6,C-29:15.3[GC-MS]装置GC-17A7GCMS5050A(岛津)GC柱NEUTRABOND國5(GLScienses)柱温100。C(2分钟)—(1(TC/分钟)—300°C(28分钟)注入温度250°C载气He(1.3mL/分钟)接口温度300°CMS模式EI离子化能量70eV[结果]标准物质3-乙酰氧基-4-曱基麦角甾-7-烯:tR[mm]=39.4;m/z456网+，441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+,381[M-CH3-AcOH]+化合物3:tR[mm]=39.2;m/z456[M]+,441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+,381[M-CH3-AcOH]+NMR的测定结果显示化合物3与3-乙酰氧基-4-曱基麦角甾-7-烯的文献值一致(油化学、笫36巻、第5号、第301319页、1987年)。该结果表明化合物2是4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。使用FAB曙MS的测定结果，化合物1的分子量为576。化合物2(香元部分)与葡萄糖脱水缩合时，所得化合物的分子量是414(化合物2)+180(葡萄糖)-l8(水)=576，与化合物1的分子量一致。由以上结果表明，化合物1的结构是3-0-(3-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇。以下分别给出分子式、分子量、化学式。C化合物1)分子式C35H6e06分子量576化学式下述化学式(l)C化合物2)分子式C29H50O分子量414化学式下述化学式(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>…(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(化合物3)分子式C31H5202分子量456化学式下述化学式(3)[制备例2〗将库拉索声荟的叶肉(透明凝胶部分)加热干燥，向0.3g粉碎的干燥库拉索芦荟粉末中加入60ml60%、80%、或100%乙醇，然后在60。C下加热回流1小时。将^是取液以1500rpm离心20分钟，将上清在减压下浓缩，完全除去乙醇，得到粗提取物。用60%、80%和100。/。乙醇提取得到的粗提取物的干燥质量分别为65mg、42mg、18mg。通过薄层色语确认这些粗提取物含有3-0-P-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇。[制备例3]将库拉索芦荟的叶肉(透明凝胶部分)力。热干燥，向0.3g粉碎的干燥库拉索，荟粉末中加入60ml水，然后在95。C下加热回流5小时。将提取液以1500rpm离心20分钟，将上清冷冻干燥，得到75mg粗提取物。通过薄层色谱确认这些粗提取物含有3-0-(3-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇。[制备例4]将库拉索声荟的叶肉(透明凝胶部分)加热干燥，向21kg粉碎的干燥库拉索,荟粉末中加入90L氯仿/曱醇混合液(2:l)，然后在室温下浸泡过夜，然后过滤，再次向过滤残余物中添加90L氯仿/曱醇混合液(2:1),进行同样的操作，共进行四次。将所得350L滤液在28。C下浓缩，最终得到784g粗提取物。向其中780g粗提取物中添加2L氯仿/曱醇混合液(2:l),搅拌1小时后过滤，回收氯仿/甲醇混合液层(A)。向过滤的残余物中依次添加2.5L水和2L乙酸乙酯，搅拌1小时后回收乙酸乙酯层(B)，再向残余的水层中添加5L氯仿，搅拌1小时后回收氯仿层(C)。将回收的A、B和C的有机溶剂提取液混合，在23。C下浓缩，然后添加到硅胶柱[玻璃柱52mmx350mm,填充剂IR-63/210-W(Daiso抹式会社制备)]。接着通过薄层色谱监控洗脱物，同时依次向柱中通入10L己烷/氯仿混合液(l:l)、10L氯仿、20L氯仿/曱醇混合液(10:1)、20L氯仿/曱醇混合液(5:l),按照各洗脱溶剂的顺序回收组分1(约1L)、组分2(约1.5L)、组分3(约1.5L)、组分4(约1.5L)。其中，通过薄层色谱确认组分3中含有目标糖苷，然后除去溶剂，得到131.6g粗提取物。再将130g该粗提取物添加到硅胶柱[玻璃柱70mmx500mm,填充剂SP-60-40/60(Daiso林式会社制备)]中，分别以10L氯仿/曱醇混合液(30:l)、50L氯仿/曱醇混合液(20:l)、10L氯仿/甲醇混合液(10:l)、10L氯仿/曱醇混合液(l:l)作为洗脱溶剂，以压力10kgf'cm-2、流速40ml/分钟的条件依次洗脱。洗脱液通过组分收集器按每100ml分级，制成组分18。将回收组分通过薄层色谱进行确认，结果，组分7中存在目标糖苷和杂质，因此浓缩后再次添加到硅胶柱[玻璃柱70mmx500mm，填充剂SP-60-40/60(Daiso抹式会社制备)]中,分别以10L氯仿/甲醇混合液(20:l)、10L氯仿/曱醇混合液(10:l)作为洗脱溶剂，以压力lOkgf'cm-2、流速40ml/分钟的条件依次洗脱。结果，制备了25.3g在氯仿/曱醇混合液(10:l)的洗脱组分中含有的目标糖苷3-0-P-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇。实施例1本实施例1是使用肥胖糖尿病模型动物ZDF(ZuckerDiabeticFatty)大鼠，研究3-0-P-D-p比喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇和库拉索声荟凝胶压榨液对内脏脂肪蓄积的抑制作用。(1)试样的制备使用上述制备例1中制备的3-0-p-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7_烯_3-醇作为试样，溶解于DMSO,然后再用蒸馏水调节至试样浓度为15^g/ml和1.5〃g/ml，分别作为试验试样A-l和A-2。另外，将用榨汁器粉碎的库拉索,荟凝胶原液用200号筛网(NBC公司制造)过滤，将该库拉索，荟凝胶压榨液作为试验试样B-l,将再稀释为20倍的溶液作为试验试样B-2。确认上述库拉索芦荟凝胶压榨液含有0.1%质量3-0-|3-0-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7_烯-3_醇。另夕卜，DMSO的终浓度调节为0.2%。再以不含试样的溶液作为阴性试样。(2)试验方法使用高脂肪饲料(ResearchDiet公司制备)对6周龄雄性ZDF大鼠(购自美国CharlesRiverLaboratories公司)进行1个月的预备饲养，然后分成每组6只。对各组大鼠使用伺管(sonde),按每400g大鼠体重给予1ml，每天一次、连续44天分别口服给予阴性试样、试验试样A-1、A-2、B-l、B-2的各溶'液。此时，试验试样A-1和A-2中3-0-卩-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇的给予量分别为25^g/kg、2.5〃g/kg。试验试样B-l和B-2中库拉索芦荟固形物的给予量是2.5g/kg或0.125g/kg。给予开始第45天时测定肠系膜脂肪重量作为内脏脂肪量。(3)试验结果给予开始第45天的肠系膜脂肪重量如表1所示。与阴性试样给予组的大鼠肠系膜脂肪重量(6.83±1.10g)相比，在试验试样A-1给予组(给予量25〃g/kg)和A-2给予组(给予量2.5〃g/kg)中，各脂肪量分别为3.15±0.28g和4.99士0.53g,显示为阴性试样给予组的46.2%和73.1%,分别在统计学上可见显著的内脏脂肪蓄积抑制效果。在试验试样B-l给予组(给予量2.5g/kg)和B-2给予组(给予量0.125g/kg)中，各脂肪量分别为4.72±0.66g和4.75士0.79g,显示为阴性试样给予组的69.1%、69.5%,分别在统计学上可见显著的抑制内脏脂肪蓄积的效果。给予期间，完全未见病理学的副作用。表中的p值表示Tukey-Kramer，s检验的显著斗既率。[表l〗<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表中"*"表示可见统计学上显著的内脏脂肪蓄积抑制效果。实施例2实施例2是研究3-0-P-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇和库拉索，荟凝胶压榨液对大鼠何料的摄取量(摄饵量)和体重增加(体重增加)的影响。(1)试样的制备使用上述制备例1中制备的3-0+0-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇作为试样，溶解于DMSO，然后再用蒸馏水调节至试样浓度为10^g/ml,作为试验试样C。另外，将用榨汁器粉碎的库拉索芦荟凝胶压榨液用200号筛网(NBC公司制造)过滤，将该库拉索芦荟凝胶压榨液作为试验试样D。确认上述库拉索芦荟凝胶压榨液含有0.1%质量3-0+D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇。另外，DMSO的终浓度调节为0.2%。再以不含试样的溶液作为阴性试样。(2)试5全方法使用高脂肪伺料(ResearchDiet公司制备)对6周龄雄性ZDF大鼠(购自美国CharlesRiverLaboratories公司)进行1个月的预备铜养，然后测定体重，分成每组6只。对各组大鼠使用饲管，按每400g大鼠体重给予1ml，每天一次、连续44天分别口服给予试验试样C、D和阴性试样的各溶液。此时，试验试样C中的3-0-(3-D-吡喃葡糖基-4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇的给予量为37.5〃g/kg。试验试样D中库拉索，荟固形物的给予量为3.75g/kg。给予开始第42天时测定大鼠体重，将与给予开始前的体重的差作为体重增加量。由给予开始日起，以每周一次的比例测定一天内消耗的饰料的重量，将该平均值作为每天的摄何量。(3)试验结果大鼠每只每天的摄斜量和42天期间的体重增加如表2所示。给予试验试样C和D的组与给予阴性试样的组相比，摄倂量未见显著增减。关于体重增加量(体重的增加量)，与给予阴性试样的组也大致同等。由此表明，3-0-P-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇对大鼠的何料摄取量和体重增加没有影响。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>产业实用性本发明可提供不伴随有体重的减轻，可以保持标准体重，同时不过度限制饮食等，对抑制肥胖的进程有效的内脏脂肪蓄积抑制剂、以及含有上述内脏脂肪蓄积抑制剂的特定保健用食品等功能性饮料食品。因此，可以改善或预防由内脏脂肪蓄积引起的疾病、并发症等例如脂肪代谢异常、循环系统疾病等，以及降低这些疾病、并发症等的危险。同时也兼具预防代谢综合征、以及被认为是危险因素的糖尿病、高血压、高血脂等生活方式病的发病的效果。权利要求1.内脏脂肪蓄积抑制剂，该内脏脂肪蓄积抑制剂含有下述化学式(1)所示的化合物作为有效成分2.内脏脂肪蓄积抑制剂，该内脏脂肪蓄积抑制剂含有含下述化学式(l)所示化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物或压榨液或者它们的分级组分，所述内脏脂肪蓄积抑制剂含有组合物作为有效成分，所述组合物是上述植物的有机溶剂提取物、热水提取物或压榨液或者它们的分级组分含有千燥质量至少为0.001%质量的下述化学式(l)所示的化合物形成的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.权利要求2的内脏脂肪蓄积抑制剂，其中上述植物是百合科植物。4.饮料食品，该饮料食品含有权利要求1~3中任一项的内脏脂肪蓄积抑制剂。5.权利要求4的饮料食品，该饮料食品含有至少为0.0001%质量的上述化学式(l)所示的化合物。6.下述化学式(l)所示化合物，或者含有干燥质量至少为0.001%质量的该化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物、压榨液或它们的分级组分在制备内脏脂肪蓄积抑制剂中的应用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>7.权利要求6的应用，其中上述植物是百合科植物。8.抑制内脏脂肪蓄积的方法，其特征在于将下述化学式(l)所示化合物，或者含有干燥质量至少为0.001%质量的该化合物的植物的有机溶剂提取物、热水提取物、压榨液或它们的分级组分给予要抑制内脏脂肪蓄积的对象<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>9.权利要求8的方法，其中上述植物是百合科植物。全文摘要为了降低蓄积在腹腔内的脂肪、预防或改善代谢综合征为主要原因的内脏脂肪型肥胖，本发明以3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇、或含有该化合物的百合科植物的有机溶剂提取物、热水提取物、压榨液或它们的分级组分作为药物或饮料食品的有效成分。文档编号A61K31/704GK101212979SQ20068002431公开日2008年7月2日申请日期2006年9月21日优先权日2005年9月22日发明者三泽江里子,田中美顺申请人:森永乳业株式会社