专利名称：：山竹果皮提取物在制备用于抗心肌缺血药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药新药材中的提取物及其提取方法及其药物用途。技术背景山竹(yz7a/7g(951tee/Carcj'/7ia/as/^osfa"aL.)，原名莽吉柿。原产马来西亚群岛，今广西、海南盛产。属藤黄科常绿中型乔木，树高10-20米，树型美观。单叶对生，椭圆形、革质，花顶生，花瓣红色，2-4月开花，果实成熟时紫红色，内有种子l-2粒，褐色，果肉白色透明，味清甜软滑。,用山竹子生长慢，种后8-10年才结果，果熟期6-7月，果肉含可溶性固形物16.8%、柠檬酸0.63%，还含有其它维生素B1、B2、C4和矿物质，是典型热带水果。山竹是具有浓密树冠的常绿乔木,树高10-25米。水果单性繁殖，果的直径6-7厘米表皮坚实光滑，皮色未成熟时为绿色，成熟时转为黑紫或粉红色，内有4-8瓣的可食用果肉，风味清香甜中微酸。每个果实中有1-2粒种子。山竹一般种植10年才开始结果，对环境要求非常严格，因此是名副其实的绿色水果，非常名贵，其幽香气爽，滑润而不腻滞，与榴莲齐名，号称"果中皇后"。功效净化血液、降低胆固醇。山竹果肉约占总重量的20-30%左右，其余部分为果皮，作为废弃物扔掉。经过初步的化学及药效学研究表明山竹果皮中含有大量的黄酮类化合物，在降低高血脂方面具有较强的生物活性。将资源丰富的山竹果皮开发成为降血脂新药，针对广大的高血脂患者人群，具有广泛的应用前景。目前，有关山竹果皮总提取物及其提取方法及其药物用途未见到报道。
发明内容本发明的目的提供了山竹果皮提取物在制备用于抗高血脂症、抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的药物中的应用。本发明山竹果皮提取物的提取精制方法是a.将山竹果皮粉碎，在30-8(TC条件下，用20-25倍量30°/。-95%乙醇提取3次，每次分别为3h、2h、lh，过滤，合并提取液；b.将步骤a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。因山竹子生长慢，种后8-10年才结果，果熟期6-7月，果肉含可溶性固形物仅16.8%，而果皮占果实的70%-80%以上，资源非常丰富，经过研究表明其富含总黄酮等有效成分，是十分珍贵的新的药材，未见到报道，其降血脂药物用途属首次发现。山竹果皮提取物其特征为浅黄色至褐色，粉末状，味苦，可溶于水、乙醇等。该山竹果皮提取物总黄酮的含量占山竹果皮干重的2%以上。当本发明用于制备抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等:当该药物肠胃外给药时，可采取任何常规形式，例如注射剂如静脉内注射、软膏剂、栓剂、经皮给药、吸入剂等。本发明制备抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的药物是由有效成芬单体或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。本发明的有益效果是，山竹果皮提取物属于山竹新药材提取物，其药物用途属首次发现，为抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛发现了新的药源。有效物质的剂量可以根据服用方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变，口服量为70120mg/次，每日12次服用注射3070mg/次，每日一次。具体实施方式本发明可通过下面的实验例进一步说明。山竹果皮提取物以下简称SZGPT。实验例一、SZGPT预防和治疗高血脂症的初步试验1、材料与方法1.1动物SD大鼠,40只，雌雄各半,体质量130g-150g，购自本校实验动物中心。1.2药物山竹果皮提取物SZGPT:自制；月见草油，白求恩医科大学制药厂生产。胆固醇粉(AR),由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供(批号F20030410)。1.3高脂兔饲料及各种含药物高脂饲料的配制高脂饲料配制:基础饲料100g中加入胆固醇0.4g，猪油2mL;在高脂饲料的基础上加入不同含量的药物配制成含药物的高脂饲料供实验喂养。2、对正常大鼠血脂水平的影响取大鼠40只,雌雄各半，禁食给水12h，称体质量,随机分为4组(各10只):正常对照组(生理盐水，lml/100g)、阳性对照组(月见草油1.2g/100g)、山竹果皮提取物大剂量组(0.84g/kg)、中剂量组((U2g/kg)和小剂量组(0.21g/kg)。上述药物均灌胃(ig)给药，每日1次，共15d，实验过程中每周称体质量1次，第16天摘除大鼠眼球,眼眶取血2-3ml,送血生化检査,测血清中TG和TC含量。3、山竹果皮提取物提取物降血脂试验结果见表l。表l山竹果皮提取物降血脂试验结果，组—....................TC(mmol/L)TG(mmol/L)正常对照组2.260±0.2251.513±0.351Rl性对照组1細±0.177*1.241±0.235山竹果皮提取物小剂量组1.960±0.292*1.073±0.365*中剂量组1.835±0.214*1.040±0.173*大剂量组1.637±0.205*1.035±0.154*4、结论实验结果表明山竹果皮提取物具有明显的降血脂作用。实验例二、SZGPT抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的初步试验1.材料与方法1.l动物健康成年杂种犬，雌、雄兼用，体重16.23士1.87kg。1.2药品及试剂山竹果皮提取物(药粉)，性状浅粽色粉末，纯度:样品中山竹果皮提取物总黄酮含量不少于2%，批号031007，由吉林大学再生医学科学研究所提供；阳性对照药银杏叶片，规格12mg/片，含总黄酮苷9.6mg，萜类内脂2.4mg，批号20031212，贵州信邦制药股份有限公司产品；戊巴比妥钠，规格分析纯(25g/瓶)，批号950427，北京通县育才精细化工厂产品；肝素钠注射液，规格12500U:2ml，批号0104108，徐州万邦生化制药有限公司产品；氯化硝基四氮唑蓝，规格分析纯，批号F20020830，中国医药(集团)上海化学试剂公司产品；谷草转氨酶(AST)检测试齐j盒，规格:10mlX10支，批号020151、肌酸激酶(CK)检测试剂盒，规格10mlX10支，批号090151、乳酸脱氢酶(LDH-L)检测试剂盒，规格10mlX10支，批号130081，中生北控生物科技股份有限公司产品；丙二醛(M[)A)检测试剂盒，规格50T/盒，批号20040322、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒，规格50T/盒，批号20040323，南京建成生物工程研究所产品。1.3仪器CBI-8000激光多普勒血流量仪(美国BI0PAC公司产品)，根据实验动物冠状动脉及主动脉直径选择适合口径血流量探头；Powerlab/8s型八导数据分析记录仪及相关附件(澳大利亚埃德公司产品)；SC-3型人工呼吸机(上海医疗设备厂产品)；HL-2型恒流泵(上海市沪西仪器厂产品)；TU-1800S型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司产品)；BI-2000医学图象分析仪(成都泰盟科技有限公司产品)。2.实验方法2.1分组及给药剂量将实验犬随机分为对照组；阳性对照药银杏叶片组(24mg/kg);山竹果皮提取物24mg/kg、12mg/kg和6mg/kg三个给药剂量组。每组6只。对照药物及受试药物用蒸馏水配制成所需浓度混悬液。2.2手术操作方法实验动物用3X戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射麻醉。颈部手术，气管插管，连接人工呼吸机，分离左侧颈总动脉，插管经压力换能器记录动脉血压；分离股静脉，插管供补充液体或麻药；分离右侧股动脉并插管至左心室，连接压力换能器测量左心室内压及左心室舒张期终末压，再经微分器测量左心室内压变化速率；腹部手术，做十二指肠插管，供十二指肠给药；开胸，纵向剪开心包膜，做荷包固定托起心脏，分离出冠状动脉左旋支及主动脉根部，放置适合口径的激光多普勒探头，分别测量冠状动脉血流量及主动脉血流量(心输出量)。3.观察指标及其检测方法3.l心肌缺血模型的建立手术完毕，稳定30min，待各项生理指标平稳后，先记录各项指标的正常曲线作为给药前对照。随后开始给药，阳性对照药银杏叶片和受试药洋参果冠心片经十二指肠给药，对照组动物经十二指肠给予等体积蒸馏水。给药后45min，结扎左冠状动脉左前降支中下1/3段，建立急性心肌缺血模型。分别于结扎后2min、5min、10min、20min、30min、60min、90min、120min、180min、240min、300min和360min时，测量记录冠状动脉结扎后6h心肌三酶、S0D、MDA、心肌梗死面积百分比。3.2心肌梗塞面积测量方法实验结束时剪下心脏，用生理盐水洗净，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。剪去冠状沟以上心房，称心室重。顺房室沟从心尖到心基部平行将心室切成厚度为lcm的心肌切片，用生理盐水洗净。把心肌切片放置于0.025%硝基四氮唑蓝(NBT)溶液中，在37t:水浴中温孵15min染色，染色过程中不断凍拌染色液使之与心肌有充分的接触机会。染色后立即用水冲洗多余的染料，正常心肌被染成蓝色，梗塞心肌不被染色。通过BI-2000医学图象分析系统的录象装置将各组心肌切片以图片形式摄入电脑，再通过BI-2000医学图象分析系统处理面积的软件确定计算心肌梗死的面积及整块心肌面积，可用公式心肌梗塞面积=未染色面积和/心肌片总面积和X100%。4.结果与讨论山竹果皮提取物对心肌缺血犬心肌梗死面积的影响冠状动脉结扎后6h，通过心肌切片，大体标本经氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色，计算出心肌梗死面积占心肌总面积的百分比，可以直观的反映出结扎后心肌梗塞面积的大小和药物对心梗的预防治疗作用。由表2可以看出冠状动脉结扎后6h，对照组的心肌梗塞面积为25.7±4.0%;阳性对照相药银杏叶片24mg/kg组的心肌梗塞面积为18.1±2.0%(与对照组比较P<0.01)::受试新药山竹果皮提取物24mg/kg、12mg/kg和6mg/kg剂量组的心肌梗塞面积分别为13.1±2.9%、19.1±1.5%和23.6±1.5%(与对照组比较分别为P<0.001、P<0.01和PX).05)。此外，受试新药山竹果皮提取物24mg/kg剂量组的心肌梗塞面积还明显小于相同给药剂量的阳性对照药银杏叶片(PO.Ol)。上述实验结果表明，受试新药山竹果皮提取物在心肌缺血条件下，可以增加冠状动脉血流量，改善心肌供血供氧状况，治疗和预防冠心病、心绞痛、减少心肌梗塞面积。并且该作用明显优于相同剂量的阳性对照药银杏叶片。详细结果见表2。表2.山竹果皮提取物对心肌缺血犬心肌三酶、SOD、MDA和心肌梗塞面积的影响(；±sn=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注与对照组比较'PO.05;"PO.01;'"PO.OOl。与阳性对照药银杏叶片组比较AAP<0.01。提取方法的实施例l:a.将山竹果皮粉碎，在8(TC条件下，用25倍量30%乙醇提取3次，每次分别为3h、2h、lh，过滤，合并提取液；b.将步骤a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。提取方法的实施例2:a.将山竹果皮粉碎，在3(TC条件下，用20倍量95%乙醇提取3次，每次分别为3h、2h、lh，过滤，合并提取液；b.将步骤a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。.提取方法的实施例3:a.将山竹果皮粉碎，在5(TC条件下，用22倍量60%乙醇提取3次，每次分别为3h、2h、lh，过滤，合并提取液；b.将步骤a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。制备药剂的实施例l-取山竹果皮提取物50g，加入药用淀粉250g，二者充分混合，制成1000粒胶囊，每粒重0.3g，含山竹提取物50mg。制备药剂的实施例2:取山竹果皮提取物60g，加入药用淀粉240g，二者充分混合，制成1000片，每片重0.3g,含山竹果皮提取物60mg。权利要求1、山竹果皮提取物在制备用于抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种山竹果皮提取物在制备用于抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的药物中的应用。将山竹果皮粉碎后用30％-95％乙醇提取，回收乙醇可得到用于中药新药研究的原料药。本发明提取纯化的山竹果皮提取物具有抗心肌缺血、治疗冠心病、心绞痛的作用。文档编号A61K36/896GK101219183SQ200710300598公开日2008年7月16日申请日期2006年1月5日优先权日2006年1月5日发明者李平亚申请人:李平亚