专利名称：：一种α-亚麻酸复合剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及a-亚麻酸，具体涉及一种or亚麻酸与维生素的复合剂。本发明的(X-亚麻酸复合剂具有抗衰老、延长寿命的作用。
背景技术：
：a-亚麻酸，学名9,12,15-十八碳三烯酸，.为全顺式非共扼立体构型。动物体内的a-亚麻酸必须来源于食物。绿色植物的叶、根、茎和果实及苔癣类、蕨类等低等植物、浮游生物中均含有一定量的a-亚麻酸，植物种子所含的植物油中a-亚麻酸含量丰富，其中以亚麻籽和苏子油中含量最高，可达50%以上。or亚麻酸可以在人体内通过去饱和酶和碳链延长酶的催化作用，合成多烯不饱和脂肪酸二十碳五价不饱和脂肪酸(Ecosapeatanolicacid,EPA)和二十二碳六价不饱和脂肪酸(ducosahexenoicacid,DHA)，因此，cr亚麻酸是人体的必需脂肪酸。or亚麻酸的健康保健作用主要有1.降低血脂a-亚麻酸可以通过增加类固醇排泄，减少内源性胆固醇。3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A(HMG-C0A)还原酶和脂肪酰辅酶A胆固醇脂肪酰酶转移酶(ACAT)是胆固醇合成的主要限速酶，a-亚麻酸能使HMG-COA还原酶活性降低，ACAT活性升高，通过减少极低密度脂蛋白中的甘油三脂及载脂蛋白B的生物合成，达到降低血清甘油三脂的作用，抑制低密度脂蛋白合成。2.降低血压or亚麻酸能使血浆中的中性脂肪和胆固醇下降，而降低血压。人群实验也发现EPA和DHA有显著的降压作用。l抑制血栓性疾病，预防心肌梗塞和脑梗塞a-亚麻酸能改变血小板对刺激的反应性及血小板表面受体数目，从而导致血小板聚集率降低和出血时间延长。4.预防过敏反应or亚麻酸能抑制产生过敏性疾病因子，从而调节过敏反应。5.抑制癌症的发生和转移a-亚麻酸及其衍生物EPA和DHA具有预防肿瘤发生和抑制肿瘤细胞增殖的作用。6.抑制人体衰老，预防老年痴呆a-亚麻酸可以增加血小板和红细胞中的EPA和DHA，减少花生四稀酸，也能清除肌体在代谢过程中产生过量的自由基，防止蛋白质变性，核酸代谢紊乱以及生物膜损伤和交联键的形成，预防各种脏器损伤，从而抑制人体衰老。7.保护视力，提髙学习记忆功能w-3系列不饱和脂肪酸是维系人类脑进化的核心生命物质，尤其是w-3系列多不饱和脂肪酸的母体a-亚麻酸，它的代谢物DHA和EPA是组成神经细胞膜的重要成分，能促进脑内核酸(DNA和RNA)及蛋白的合成。8.保护肝脏or亚麻酸能合成前列腺素，能明显降低血清透明质酸，层粘连蛋白和肿瘤坏死因子的含量，因而能防止肝炎肝硬变，对肝功能有损的患者有抗纤维化的作用。9.抗心律失常or亚麻酸抗心律失常的机制可能是由于心肌细胞膜磷脂脂肪酸成分的变化引起了TXA2等生理活性物质水平的变化及心肌转导系统如钙通道、受体蛋白和酶活性及其功能的改变，使心律失常不易发生。由于以ot-亚麻酸为母体的0)-3脂肪酸所具有的特异生理活性，引起了世界各国科学家的高度重视。德国和日本等国家将a-亚麻酸及其衍生物作为药物或食品添加剂，用来预防和治疗心血管疾病，美国已开发出了富含a-亚麻酸的保健品如亚麻酸保健油、亚麻酸胶等，用于预防和治疗心血管疾病。在我国，富含or亚麻酸及其衍生物的一些植物也开始在药物或食品添加剂、保健品、饲料等方面应用。虽然研究证明a-亚麻酸具有明显的抗自由基作用，对维持细胞膜的正常结构与功能起重要作用，维生素A、C、E也具有抗自由基抗衰老作用，但目前还缺少证明联合应用亚麻酸与维生素是否能增强抗衰老、延长寿命的作用。
发明内容本发明的目的是提供一种具有延缓衰老与延长寿命功效的a-亚麻酸复合剂。本发明的a-亚麻酸复合剂是以a-亚麻酸、维生素A、维生素C和维生素E为活性成分制成的药剂，每Kg药剂中含有活性成分a-亚麻酸60~80g维生素A10~15mg维生素C200~500mg维生素El~4g，优选地，每Kg药剂中含有活性成分a-亚麻酸60~70g维生素A12~15mg维生素C200~400mg维生素El~3g。本发明将上述a-亚麻酸复合剂制成滴丸使用，其具体制备方法是将含有600~800mga-亚麻酸有效成分、120~150ug维生素A有效成分、2~4mg维生素C有效成分、10~30mg维生素E有效成分的各种原料药混合，并加入10g吐温-80，补充蒸馏水至lKg，充分撹拌使乳化均匀，制成a-亚麻酸复合剂药剂。按照明胶甘油水=1:0.3:G.8的比例配制成可药用载体明胶液，作为制备滴丸的基质材料。按照药剂基质材料=1:1的重量比将上述两种原料注入滴丸机中，釆用常规滴丸制备工艺生产a-亚麻酸复合剂滴丸。通过or亚麻酸复合剂对老年小鼠血清中血脂含量、抗自由基、延长果蝇寿命作用及对小鼠肝脏中端粒酶mRNA表达变化的作用进行研究，证明本发明的a-亚麻酸复合剂具有降低血脂、抗自由基及具有延缓衰老和延长寿命的功效。具体实施例方式实施例1取明胶10Kg、甘油3Kg、蒸馏水8Kg混合搅拌均匀，制成作为基质的可药用载体明胶液。于2Kg蒸馏水中加入100g吐温-80并溶解均句，连续搅拌下依次加入80%a-亚麻酸800g,1.2%维生素A油11.5g，3%维生素C水剂750mL和65%维生素E油30g配成乳剂，以蒸馏水补足至10Kg，制成a-亚麻酸复合剂药剂。釆用滴制法，将10Kga-亚麻酸复合剂药剂与10Kg明胶液基质分别装入滴制机中，滴制机的滴制喷头口径1.2mm/1.3mm(内/外)，距液面滴距70ram,滴速10滴/min。将药剂与基质加热至7(TC,通过同心管从滴制喷头喷出，基质液从同心管的外层流下，药剂从中心管流出，在滴制喷头的下端出口处，基质液将药剂包裹起来，并滴入到不相溶的液体石蜡冷却液(温度15°C)中，凝固成滴丸。在滴制过程中配合以鼓风干燥(干燥温度25X:)。实施例2取明胶10Kg、甘油4Kg、蒸馏水9Kg混合搅拌均匀，制成作为基质的可药用载体明胶液。于2Kg蒸馏水中加入100g吐温-80并溶解均匀，连续搅拌下依次加入8Wa-亚麻酸750g,1.2%维生素A油12g,3%维生素C水剂550mL和65%维生素E油35g配成乳剂，以蒸馏水补足至10Kg，制成a-亚麻酸复合剂药剂。釆用滴制法，将10Kga-亚麻酸复合剂药剂与10Kg明胶液基质分别装入滴制机中，滴制机的滴制喷头口径1.2mm/1.3ram(内/外)，距液面滴距"mra,滴速10滴/min。将药剂与基质加热至6(TC,通过同心管从滴制喷头喷出，基质液从同心管的外层流下，药剂从中心管流出，在滴制喷头的下端出口处，基质液将药剂包裹起来，并滴入到不相溶的液体石蜡冷却液(温度irc)中，凝固成滴丸。在滴制过程中配合以鼓风干燥(干燥温度22T)。实施例3于2Kg蒸馏水中加入100g吐温-80并溶解均匀，连续搅拌下依次加入80%a-亚麻酸900g,1.2%维生素A油10g,3%维生素C水剂400mL和6M维生素E油30g配成乳剂，.以蒸馏水补足至10Kg,制成a-亚麻酸复合剂药剂。采用滴制法，将a-亚麻酸复合剂药剂与实施例1明胶液基质按照1:1的比例装入滴制机中，以实施例1工艺滴制滴丸。应用例1or亚麻酸复合剂对老龄小鼠血脂的影响本实验通过不同浓度的or亚麻酸与维生素A、C、E联合应用，考察其对老年小鼠血脂的改变，以达到a-亚麻酸与维生素A、C、E复合剂的最佳比例，并为a-亚麻酸与维生素A、C、E混合制剂的开发利用提供理论依据。实验动物分组及取材.，将kunMing老年实验鼠随机分为IO个实验组老年对照组及根据不同复合剂和不同剂量分成的9个实验组(a-亚麻酸设500、1500、2500mg/kg三个剂量组"、a2、a3);维生素E(Ve)设22、40、50mg/kg三个浓度，维生素C(Vc)设4、8、10mg/kg三个浓度，维生素A(Va)设18、90、200u/100g三个浓度，Va、Vc、Ve三者低浓度与低浓度混合，中浓度与中浓度混合，高浓度与高浓度混合，作为复合剂Vace低、中、髙剂量组(VC,、VC2、VC3)),另设1组青年对照。每组10只，所有受试小鼠先喂基础饲料3天，作适应性饲养，然后除对照组外，将不同剂量的or亚麻酸与Vace复合剂按照受试小鼠的体重进行灌胃，试验期为30天。实验开始时，先对各组动物进行称重，并记录进食量以及动物的活动、体毛、采食情况。每天定时在下午2:00开始灌胃，饲养结東后，对各组小鼠进行最后称重。空腹5h后，采用摘除眼球法眼眶取血，并及时离心分离血清，测定总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)和高密度脂蛋白(HDL)浓度。统计学处理结果以^士s表示，数据用SPSS10.5软件进行单因素方差分析、析因分析统计。结果l.各组小鼠灌胃饲养后体重均有不同程度增加，九个实验组与老年对照组比较，增重明显(P<0.01);与青年动物比较，a+VC:、a2+Vd、a2+VC2、a3+VC2、a:'+VC3组体重增加明显(P<0.01),且较其它实验组体重增加明显(P<0.05),说明or亚麻酸与Vace联用有强身健体的作用(表l)。表1a.亚麻酸+Vace对小鼠体重的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与老年对照组相比*P<0.05**P<0.01;与青年对照组相比#p<0.05;2.九个实验组的TC、TG、HDL与老年对照组比较，TC、TG含量低于老年对照组(P〈0.01),而HDL含量高于老年对照组(P〈0.01);与青年对照比较，除HDL有差异(P<0.05)夕卜，TC、TG没有差异(P>0.05)。各实验组之间比较，ci2+Vd、a2+VC2组的TC较其他七个实验组明显降低(P〈0.05),a2+Vd、a2+VC2、ci3+VC3组的TG较其他六个实验组明显降低(P〈0.05),HDL之间没有差别(P〉0.05);说明a-亚麻酸+Vace联用有降低血脂，预防心血管疾病发生的作用(表2)。表2a-亚麻酸+Vace对小鼠血脂的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注与老年对照组相比*P<0.05**P<0.01;与青年对照组相比*P<0.01讨论通过不同浓度的a-亚麻酸+Vace复合剂饲喂动物发现，九个实验组与老年对照组比较，体重明显增加，但血清中TC、TG含量低于老年对照组，HDL含量高于老年对照组，说明实验组动物并不因为体重增加而血脂增加，而是降低了心血管疾病危险因子TC、TG的含量，升高了与心血管疾病、动脉粥样硬化呈负相关的因子HDL。九个实验组与青年对照组比较，基本没有差别。九个实验组之间比较，(X2+Vd、a2+VC2组较其它实验组体重增加明显，TC、TG含量较其他实验组低(P〈0,05)。仏+Vd与ci2+VC2组比较，TC、TG含量低，HDL含量高，说明a2+VC2组比ct2+VCj且更具有降低血脂的作用，(X2+VC2复合剂预防冠心病与动脉粥样硬化等作用更强。应用例2a-亚麻酸复合剂的抗氧化作用根据应用例1实验结果,得出a2+VC2复合剂组有预防冠心病与动脉粥样硬化等作用，本实验选用a-亚麻酸及Va、Vc、Ve、Vace复合剂添加到实验组动物饲料中，通过不同组别的小鼠灌胃饲养，测定超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)含量，探讨a-亚麻酸与维生素A、C、E联合应用的抗自由基能力。实验动物分组及取材kunMing老年试验鼠，无特定病原体级动物，60只，18~22月龄，雌雄各半。随机分为老年对照组(基础饲料灌胃)、a-亚麻酸组(1500mg/kg)、a-亚麻酸+Ve(40mg/kg)组，or亚麻酸+Vc(8tng/kg)组,or亚麻酸+Va(90U/100g)组，a-亚麻酸+Vace组，另设青年对照组(l.5~2月龄，基础饲料灌胃)。每组10只，雌雄各半，所有受试鼠先喂基础饲料3天，适应环境后灌胃给药，保持适宜的温度和湿度，自由摄取自来水，持续30天。第30天空腹5h后，眼眶取血，测定自由基相关指标。立即分离出肝脏，冷生理血水冲洗干净，滤纸吸干表面，-70°C冰箱中冷冻，用于逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定端粒酶活性。统计学处理全部统计分析采用SPSS10.5软件包进行。结果以^iS表示，组间比较用单因素方差分析，P<0.05表示差异具有显著性，P〈0.01有高度显著性。结果正常青年动物SOD、GSH-PX高于老年动物(P〈0.01),MDA低于老年动物(P<0.01)，表明随着年龄的增加，动物抗氧化能力减低。与老年对照组比较，a-亚麻酸能显著提高动物血清SOD、GSH-PX水平(P〈0.05)，显示a-亚麻酸能提高动物抗自由基能力。a-亚麻酸+Vace组SOD、GSH-PX差别有高度显著性(P<0.01)，而且MDA比老年动物有所降低(P<0.05)，显示a-亚麻酸+Vace能明显提高动物的抗自由基能力。a-亚麻酸、a-亚麻酸+Ve、a-亚麻酸+Vc、cr亚麻酸+Va四个实验组比较，SOD、GSH-PX、MDA均没有差别。以上试验说明虽然在抗氧化中起主要作用的成分是a-亚麻酸，但a-亚麻酸+Vace联合应用提高SOD的作用相当显著，甚至好于青年对照组，而其提高GSH-PX的能力也高于a-亚麻酸、a-亚麻酸+Ve、a-亚麻酸+Vc、a-亚麻酸+Va四个实验组，可达到青年组水平(P<0.05),进一步显示a-亚麻酸+Vace复合剂抗氧化作用最强。(表3)表3a-亚麻酸及其复合剂对小鼠自由基清除酶的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与老年对照组相比*P<0.05**P<0.01,与靑年对照组相比#P>0.05##<0.05讨论从实验结果分析可以看出，老年对照组与青年对照组的MDA值有显著差别(P<0.01)，而a-亚麻酸、a-亚麻酸+Ve、a-亚麻酸+Vc、a-亚麻酸+Va、a-亚麻酸+Vace五个实验组的MDA值与青年对照组没有差别(P〉0.05)，但与老年对照组差别显著(P〈0.01);同时，实验结果测得老年对照组SOD、GSH-PX的活性明显低于青年对照组(P".01)，五个实验组的SOD、GSH-PX的活性比老年对照组明显增高，尤其a-亚麻酸+Vace组的SOD甚至好于青年对照组(P〈0.01)。五个实验组之间比较，MDA浓度没有差异，但是a-亚麻酸+Vace组的SOD活性明显高于a-亚麻酸、a-亚麻酸+Ve、or亚麻酸+Vc、a-亚麻酸+Va四个实验组(P<0.01);GSH-PX活性也较其它四个实验组有所增高，考虑随着样本例数增加，实验组间可能出现统计学差异。以上结果反映出，随着年龄增长，机体内的抗氧化酶活性降低，抗氧化剂含量减少，而脂质过氧化产物MDA增加，自由基清除能力减弱。通过给老年小鼠饲喂a-亚麻酸与Ve、Va、Vc的不同组合，均可以使老年动物的抗氧化能力增强，尤其是or亚麻酸+Vace联合应用的抗氧化作用最强，能够显著提高SOD、GSH-PX的活性，而减少脂质过氧化产物MDA的产生。应用例3or亚麻酸复合剂对果蝇寿命的影响通过不同组别的美国野生型黑腹果蝇饲养，观察果蝇的平均寿命和最髙寿命，以进一步证实cr亚麻酸+Vace复合剂对动物延缓寿命.的作用。实验动物分组及方法收集10h内孵化的果蝇成虫，恩氟烷麻醉后，依雌雄和大小进行分组，分为or亚麻酸(60mg/g)+Ve(0.9mg/g)、or亚麻酸+Vc(0.4tng/g)、a_亚麻酸+Vace(Va3.6U/g)三个实验组与一个对照组，每管50只，雌雄分养，每组雌雄果绳各100只。对照组用基础饲料，实验组将抗氧化剂混入基础饲料中。每五天更换一次培养伺料，每天定时统计果蝇存活数、死亡数，直到全部死亡。统计学处理规定每组中所有果蝇存活天数的代数和除以果蝇数目为果蝇平均寿命(ALS)，每组最后死亡的IO只果绳寿命的平均数为最高寿命(MLS)。结果以^士S表示，数据用SPSS10.5软件进行单因素分析。结果果蝇寿命实验显示，a-亚麻酸与Vc、Ve联用延长了雌雄性果蝇的ALS，其中or亚麻酸+Vace复合剂雌雄性果錄的延长率分别为38.8/、47.5%，与对照组比较有显著性(P〈0.01)。a-亚麻酸与Vc、Ve联用延长了雌雄性果蝇的MLS,其中or亚麻酸+Vace复合剂雌雄性果蝇的延长率分别为43.7%、49.6%;与对照组比较有显著性(P〈0.01)。另外，a-亚麻酸+Vace复合剂雌雄性果蝇的平均寿命与最高寿命明显高于a-亚麻酸+Vc、a-亚麻酸+Ve组(P〈0.05)，更证实a-亚麻酸+乂&(;6复合剂对延长动物寿命作用最显著(表4、5)。表4a-亚麻酸及其复合剂对果蝇平均寿命的影响雌雄组别例数平均寿命(天)延长率(%)例数平均寿命(天)延长率(W对照组4844.9±6,75241.2±6.8a-亚麻酸+Vc5051.2±10.3*145352.4±9.2*26.4a-亚麻酸+Ve5158.2±11.2*29.74853.7±10.4*30.3a-亚麻酸+Vace4962.3±10.7**38.85160.8±11.5**47.5注与对照组相比》P<0.05**P<0.01<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>a-亚麻酸复合剂增强小鼠端粒酶活性的研究增强端粒酶活性是潜在的基因治疗，以防止与年龄有关的疾病所产生的端粒缩短，从而预防过早老化。本实验通过a-亚麻酸+Vace联合应用饲养不同组别的小鼠，探讨or亚麻酸+Vace复合剂对肝脏中端粒酶mRNA表达的影响，以及增强端粒酶活性在延缓衰老的作用。实验动物分组及取材同应用例2。结果判定以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定端粒酶活性，采用photoshop软件进行亮度测定，将扩增产物与内参照亮度相比，得出相对定量。统计分析全部统计分析采用SPSSIO.5软件包进行。结果以^士S表示，组间比较用单因素分析，P<0.05表示差异具有显著性，P〈0.01有高度显著性。结果RT-PCR结果显示，青年与老年小鼠的肝脏均表达端粒酶mRM,青年组表达水平高于老年组(P〈0.05),说明随着年龄的增加，端粒酶的活性有所降低。与老年组比较，五个实验组的端粒晦mRNA表达明显增高(P〈0.01);a-亚麻酸与维生素复合剂四个实验组的端粒酶mRNA表达均高于青年组(P<0.01),尤其a-亚麻酸+Vace组最明显。5个实验组之间比较，a-亚麻酸+Vace组端粒酶mRNA表达明显高于其他四组(P〈0.01)，进一步证实or亚麻酸+Vace复合剂具有协同提髙端粒酶活性，延长端粒长度，延缓衰老的功效(表6)。表6肝脏中端粒酶mRNA表达分组平均吸光度(Mean0D)青年对照0.694±0.016老年对照0.560±0.012a-亚麻酸0.688±0.021*a-亚麻酸+Ve0.843±0.018*#a-亚麻酸+Vc0.763土0.026*#a-亚麻酸+Va'0.914±0.019*#a-亚麻酸+Vace1.737±0.012**##注与老年组相比*P<0.05,**P<0.01;与青年组相比*P<0.05，##P<0.0权利要求1、一种α-亚麻酸复合剂，是以α-亚麻酸、维生素A、维生素C和维生素E为活性成分制成的药剂，每kg药剂中含有活性成分α-亚麻酸60～80g维生素A10～15mg维生素C200～500mg维生素E1～4g。2、根据权利要求l所述的a-亚麻酸复合剂，其中每kg药剂中含有活性成分a-亚麻酸60~70g维生素A12~15mg维生素C200~400mg维生素El~3g。3、根据权利要求1或2所述的or亚麻酸复合剂，其特征是所述的药剂是滴丸。'全文摘要一种α-亚麻酸复合剂，每kg药剂中含有活性成分α-亚麻酸60～80g，以及10～15mg维生素A、200～500mg维生素C、1～4g维生素E，本发明将上述α-亚麻酸复合剂按照常规制备工艺制成滴丸。通过α-亚麻酸复合剂对老年小鼠血清中血脂含量、抗自由基、延长果蝇寿命作用及对小鼠肝脏中端粒酶mRNA表达变化的作用进行研究，证明本发明的α-亚麻酸复合剂具有降低血脂、抗自由基及具有延缓衰老和延长寿命的功效。文档编号A61P3/02GK101361734SQ20081007945公开日2009年2月11日申请日期2008年9月22日优先权日2008年9月22日发明者朱保忠,琳李申请人:琳李