抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体及应用的制作方法

专利名称：：抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体及应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及单克隆抗体领域，尤其涉及抗人甲状腺球蛋白的特异性单克隆抗体及其应用。
背景技术：
：甲状腺癌是常见的内分泌系统肿瘤，发病率女性多于男性。目前对分化型的甲状腺癌常规以碘放射治疗为主要方法，但对不能摄取mI的分化差和未分化型的甲状腺癌的转移灶的定性、定位显像及治疗尚无有效方法。随着杂交瘤技术的发展，肿瘤放射免疫诊断和导向治疗作为一种系统的特异靶向性的肿瘤诊断和治疗手段，正受到人们的重视。近年来，随着高亲和力单克隆抗体(McAb)的制备，核素标记技术的改进，肿瘤微环境的改善，肿瘤放射免疫诊断和靶向治疗的研究已经取得了令人瞩目的成绩。单克隆抗体(McAb，简称单抗)通过特殊的识别系统辨别出肿瘤细胞致命的信息，识别它们特异的靶肿瘤组织表面的蛋白结构。但是，对于由小鼠或大鼠的B细胞产生出来的单抗，对人类机体而言，其自身就是强抗原。鼠源性单克隆抗体在应用于人体治疗时有诸多限制一是不能有效地激活人体中补体和Fc受体相关的效应系统；二是被人体免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体(h咖anantigenmouseantibody,HAMA);三是在人体循环系统中被很快清除掉。因此，在保持对特异性抗原表位高亲和力的基础上进行人源化改造，减少异源抗体的免疫原性，成为单克隆抗体研究的热点。目前在甲状腺癌的诊断和治疗领域，迫切需要提供一种特异性强、同时免疫原性低的针对人甲状腺球蛋白(humanthyroglobulin，hTg)的单克隆抗体，从而使不能摄取mI的分化差和未分化型的甲状腺癌及其转移灶的定性、定位显像及治疗获得实现。
发明内容本发明的目的提供一种特异性抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体。本发明的另一目的是提供一种特异性检测人甲状腺球蛋白的试剂盒。在本发明的第一方面，提供了一种免疫球蛋白，它具有VH链，VJ连的互补决定区CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDN0:3所示的CDR1，SEQIDN0:4所示的CDR2，SEQIDN0:5所示的CDR3。在另一优选例中，VH链具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。在本发明的第二方面，提供了一种免疫球蛋白，它具有、链，、链的互补决定区CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDN0:6所示的CDR1，SEQIDN0:7所示的CDR2，SEQIDN0:8所示的CDR3。在另一优选例中，Vl链具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。在本发明的第三方面，提供了一种免疫球蛋白，其VH链和VJ连分别具有SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的免疫球蛋白是单克隆抗体。在本发明的第四方面，提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物具有VH链，该VH链的CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDN0:3所示的CDR1，SEQIDNO:4所示的CDR2，SEQIDNO:5所示的CDR3;或者，该免疫偶联物具有、链，该、链的CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDN0:6所示的CDR1，SEQIDNO:7所示的CDR2，SEQIDN0:8所示的CDR3。在另一优选例中，所述的免疫偶联物是免疫毒素。在本发明的第五方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质如上所述的免疫球蛋白VH链；VH链的互补决定区CDR的氨基酸序列选自SEQIDNO:3所示的CDRl，SEQIDNO:4所示的CDR2，和SEQIDNO:5所示的CDR3;较佳地，VH链具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；如上所述的免疫球蛋白、链；、链的互补决定区CDR的氨基酸序列选自SEQIDNO:6所示的CDRl，SEQIDNO:7所示的CDR2，和SEQIDNO:8所示的CDR3;较佳地，VL链具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；或如上所述的免疫球蛋白；其VH链和、链分别具有SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。在本发明的第六方面，提供了一种检测人甲状腺球蛋白的试剂盒，所述的试剂盒含有如上所述的免疫球蛋白或如上所述的免疫偶联物；所述免疫球蛋白的VH链和VJ连分别具有SEQIDNO:l和SEQIDN0:2所示的氨基酸序列；所述免疫偶联物具有VH链，该VH链的CDR的氨基酸序列选自SEQIDNO:3所示的CDRl，SEQIDNO:4所示的CDR2，和SEQIDNO:5所示的CDR3;或者，所述免疫偶联物具有、链，该VH链的CDR的氨基酸序列选自SEQIDNO:6所示的CDRl，SEQIDNO:7所示的CDR2，和SEQIDNO:8所示的CDR3。据此，本发明提供了一种特异性强、同时免疫原性低的针对人甲状腺球蛋白(humanthyroglobulin，hTg)的单克隆抗体，从而使不能摄取131I的分化差和未分化型的甲状腺癌及其转移灶的定性、定位显像及治疗获得实现。图1显示了鼠源性单克隆抗体mTg-60杂交瘤细胞株重链和轻链基因的电泳图；其中1为重链基因，2为轻链基因，M为分子量为DL-2000标准物。图2显示了人源化单克隆抗体重链和轻链基因的电泳图；其中1为重链基因，2为轻链基因，M为分子量为DL-2000标准物。图3显示了人源化hTgVH、VL基因克隆用BamHI和HindIII双酶切的琼脂糖凝胶电泳分析；其中1、2.pCMV_CH-VH克隆用BamHI和Hindi11双酶切；3、4.pVL_CL_VL克隆用BamHI和Hindi11双酶切基因；M.DL-2000标准物。图4显示人源化单克隆抗体的电泳图；其中1为纯化的抗体，2为阳性对照人IgG，M为标准物。图5显示了人源化单克隆抗体的电泳图；其中1为纯化的抗体，2为阳性对照人IgG，3为阴性对照无血清培养基，M为标准物。图6显示了荧光标记的人源化单克隆抗体与细胞内人甲状腺球蛋白的结合；其中[OO46]A为阴性对照(未加一抗)，B为纯化抗体(一抗加纯化后抗体)。具体实施例方式发明人经过广泛而深入的研究，利用分泌抗人甲状腺球蛋白的杂交瘤细胞株获得鼠源性单克隆抗体mTg-60，此抗体经多年研究证实稳定性好，和人甲状腺球蛋白结合的特异性强。进一步地，发明人根据RT-PCR扩增出的鼠源性单克隆抗体mTg-60的Vj连和Vj连基因，经基因测序分析，设计出人源化抗体的引物，以mTg-60VH链和、链基因为模板，PCR扩增获得人源化抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体hTg-37VH链和、链基因，并将其克隆入真核表达载体，转染CHO细胞，小量表达人源化抗人甲状腺球蛋白抗体hTg-37，并成功筛选到能稳定分泌人源化抗人甲状腺球蛋白抗体hTg-37的CHO细胞株。该人源化抗人甲状腺球蛋白抗体活性检测证明其保持了鼠源性单抗对特异抗原表位的高亲和力。在此基础上完成了本发明。定义如本文所用，"鼠源性单克隆抗体"是指由小鼠的B淋巴细胞分化形成的浆细胞合成、分泌的，针对一种抗原决定簇的抗体。即应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫小鼠获得的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞，这种融合细胞即具有瘤细胞不断分裂的能力，又具有免疫细胞能产生抗体的能力，融合后的杂交细胞(杂种瘤)产生大量的鼠源性单克隆抗体。如本文所用，"人源化单克隆抗体"(humanizedmonoclonalantibody)都是指利用基因工程技术扩增出鼠源性单克隆抗体轻、重链可变区或将抗体的VH和VL序例人工合成或定点突变，然后与表达载体中人免疫球蛋白恒定区拼接后制备的单克隆抗体。制备的抗体具有鼠源单抗的特异性，又基本消除了鼠源单抗异种蛋白的免疫原性。如本文所用，"免疫毒素"指对靶细胞有特异性亲和力和杀伤力的物质，例如免疫偶联物及融合表达产物包括药物、毒素、细胞因子(cytokine)、放射性核素或其他治疗分子与人源化单抗hTg-37或其片段结合的而形成的偶联物。具体的例子有例如^I-hTg-37，MTX-hTg-37偶联物等。此处鉴定的V链的超变区或互补决定区(complementaritydeterminingregion，CDR)特别令人感兴趣，因为它们中至少部分涉及结合抗原。因此，本发明包括那些具有带CDR的免疫球蛋白轻链和重链可变链的分子，只要其CDR与此处鉴定的CDR具有90%以上5(较佳地95%以上)的同源性。本发明的鼠源性单克隆抗体mTg-60或其片段可用于甲状腺癌的放射性定位的诊断成像，还可用于免疫治疗，例如通过直接或间接地将鼠源性单克隆抗体mTg-60或其片段与化学治疗剂、或放疗剂相连从而使其能直接导向肿瘤细胞。为了具有临床价值，单克隆抗体应满足下列标准l)标记表面，即结合于活肿瘤细胞，2)识别细胞周期非依赖的肿瘤特异性抗原，和3)在体外能同样好地与肿瘤细胞结合，而不论它们的培养活力、生长特征或培养密度。本发明的鼠源性单克隆抗体mTg-60满足这些标准。本发明的人源化单抗hTg-37或其片段不但具有上述鼠源性单克隆抗体mTg-60或其片段的特点，同时还降低了鼠源性单克隆抗体mTg-60对于人体而言的强免疫原性。本发明还提供了编码鼠源性单克隆抗体mTg-60或人源化单抗hTg-37的可变区的轻链和重链的cDNA序列。本发明包括相应的氨基酸序列和具有所述特征的可变区链的单克隆抗体，以及具有这些链的其他蛋白质或蛋白质偶联物及融合表达产物。具体地，本发明包括具有含超变区(互补决定区，CDR)的轻链和重链的任何蛋白质或蛋白质偶联物及融合表达产物(即免疫偶联物及融合表达产物)，只要该超变区与本发明的轻链和重链的超变区相同或至少90%同源性，较佳地至少95%同源性。如本领域技术人员所知，免疫偶联物及融合表达产物包括药物、毒素、细胞因子(cytokine)、放射性核素、酶和其他诊断或治疗分子与鼠源性单克隆抗体mTg-60、人源化单抗hTg-37、或其片段结合的而形成的偶联物。本发明还包括与本发明的鼠源性单克隆抗体mTg-60、人源化单抗hTg-37、或其片段结合的细胞表面标记物或抗原。本发明不仅包括完整的单克隆抗体，还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab或(Fab')2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但保留来自人的抗体部分的抗体。本发明还提供了编码上述免疫球蛋白或其片段的DNA分子。本发明的鼠源性单克隆抗体mTg-60或人源化单抗hTg-37的核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，按本领域技术人员已知的常规方法制备模板，通过扩增而得到有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。此外，还可将轻链和重链的编码序列融合在一起，形成单链抗体。—旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高6等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CH0、C0S7、293细胞、或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔，脂质体包装等。获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。此外，本发明还提供了一种检测甲状腺球蛋白的试剂盒，它含有上述的免疫球蛋白或免疫偶联物，或其活性片段。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1鼠源性单克隆抗体mTg-60的制备和纯化小鼠免疫取Tg蛋白(lmg/mL)与等体积弗氏完全佐剂充分乳化，经皮下多点注射免疫8周龄雌性BALB/c小鼠，间隔2周用弗氏不完全佐剂乳化抗原加强免疫2次，细胞融合前3天用200g纯化蛋白抗原腹腔注射进行加强免疫。细胞融合及杂交瘤细胞的筛选免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。融合后用HAT选择培养基于37t:、50mL/LC02培养箱中培养，融合后第3、6d半量换HAT选择培养基，第9d换HT选择培养基。待融合细胞长满1/4至1/2孔时，用Tg蛋白作为检测抗原，以10ug/mL包被96孔板，对融合细胞培养上清液进行间接ELISA检测，以筛选阳性细胞克隆。将初步筛选出的阳性细胞用梯度稀释法进行克隆，以Tg蛋白作为抗原进行ELISA检测，得到分泌特异性抗体的杂交瘤细胞克隆。单克隆抗体腹水的制备取8周龄昆明小鼠10只，腹腔内注入弗氏不完全佐剂(0.2mL/只)，1周后将扩大培养的阳性杂交瘤细胞分别以1X106/mL剂量注入每只小鼠腹腔，约1周后密切观察小鼠精神状态与腹腔变化，当小鼠腹腔增大时无菌抽取腹水，10000r/min离心取上清。将杂交瘤细胞培养上清与腹水分别做10倍梯度稀释，以Tg蛋白为抗原，采用ELISA方法测定抗体效价。单克隆抗体纯化取适量腹水，10000rpm/10min离心，取500uL上清，用PBS稀释8倍，13000rpm/20min离心，取上清过0.22um微孔滤膜，以1.OmL/min流速上经过平衡、再生好的ProteinG亲和层析柱纯化，洗脱液(甘氨酸_HCL，pH2.7)—步洗脱，流速0.5mL/min。接收mAb洗脱峰。实施例2鼠源性单克隆抗体mTg-60的功能鉴定功能检测采用固相放免法。检测方法获得上海市科技成果完成证书(登记号931000948)。实施例3人源化单抗hTg-37的制备和纯化(1)人源化单抗hTg-37的制备1、使用PCR技术，扩增鼠单克隆抗体MTg-60杂交瘤细胞株重链和轻链基因，见图1;2、经过基因测序，测定重链、轻链基因的序列(SEQIDNO:13和14)，设计人源化引物(重链SEQIDNO:9禾P10)禾P(轻链SEQIDNO:11禾P12);3、扩增人源化单抗hTg-37重链、轻链基因，见图2;4、将回收的人源化的VH、VL基因PCR产物BamHI和HindIII双酶切并分别克隆到经相同酶切的pCMV_CH及pVL_CL载体中，以连接产物转化大肠杆菌DH5a，于37。C倒置培养过夜。挑取克隆，抽提质粒，用BamHI和HindIII双酶切酶切鉴定，可见有约400bp左右的条带切出(见图3)。5、将正确克隆送上海生物工程有限公司测序，经过基因测序，测定人源化单抗hTg-37重链、轻链基因序列(SEQIDNO:1和2)，结果完全正确。6、利用脂质体转染技术，将构建好的人源化单抗hTg-37重链、轻链表达载体转染入中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中，使用抗生素G418和HT缺乏双重压力筛选，制备单克隆细胞板筛选单克隆细胞株，最终筛选出可分泌人源化单抗hTg-37的单克隆细胞株。(2)人源化单抗hTg-37的纯化单克隆抗体纯化取细胞培养上清过0.22um微孔滤膜，以1.OmL/min流速上经过平衡、再生好的ProteinG亲和层析柱纯化，洗脱液(甘氨酸_HCL，pH2.7)—步洗脱，流速lmL/min，接收mAb洗脱峰。实施例4人源化单抗hTg-37的结构检测1、利用SDS-PAGE技术，取20ul细胞培养上清，加入5X上样缓冲液5ul，沸水中处理5min。煮沸后的样品进行SDS-PAGE电泳分离，最后考马斯亮蓝染色检测实施例3获得的纯化后人源化单抗hTg-37。结果见图4，其中55KD左右为重链条带，27KD左右为轻链条带。2、利用Western-blotting技术，检测实施例3获得的纯化后人源化单抗hTg_37。取20ul细胞培养上清，加入5X上样缓冲液5ul，沸水中处理5min。煮沸后的样品进行SDS-PAGE电泳分离，首先用5%脱脂奶粉封闭过夜，再用PBS洗2次，，加加抗人IgG的标记抗体，室温作用2h，再用含0.2%Tween-20的PBS洗5次，最后加DAB底物显色。结果见图5，其中55KD左右出现清晰重链条带。结果表明，重组的抗hTg抗体具有与人抗体相同的重链和轻链结构，成功构建了人源化抗体。实施例5人源化单抗hTg-37的功能鉴定1、利用放射免疫技术，将标记1251的TG与CHO细胞各单克隆无血清培养液混合37t:孵育一小时，加免疫沉淀剂混合离心后，测定沉淀的放射性(单位cpm)，结果见表1，其中阴性对照是指用水和标记1251的TG混合37t:孵育一小时，未转染组是指用未转染Tg表达载体的CH0细胞培养上清和标记1251的Tg混合37t:孵育一小时，1-6指的是6个表达Tg的CH0细胞克隆表1阴性未转染123456cpm5535927508948667061055798结果表明，各克隆均能分泌重组的人源化单抗hTg-37，所分泌的人源化单抗hTg-37均能与hTg相结合。2、取甲状腺癌细胞8505C106个，经固定、打孔后，加入实施例3获得的纯化后人源化单抗hTg-37，37t:孵育一小时，PBS清洗两遍，再加入FITC标记的抗人IgG的抗体，37t:孵育半小时，PBS清洗两遍后利用流式细胞术检测荧光强度。结果见图6。结果表明，FITC荧光标记的抗hTg人源化单克隆抗体hTg-37能够进入甲状腺癌细胞与细胞内hTg相结合。3、将原代培养正常甲状腺细胞、甲状腺癌细胞株8505C、甲状腺癌细胞株FTC-133，分别与1251标记的实施例4获得抗hTg纯化单克隆抗体hTg-37、1251标记的rT3(无关蛋白对照，购自北京原子能研究院)、1125标记的PAS单克隆抗体(无关抗体对照，购自北京北方所)，37t:孵育过夜，分别取相同数量细胞，利用Y计数器测定放射性(单位cpm)，结果见表2:表2原代正常甲状腺FTC-1338505C阴性对照1331451449<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果表明，1251标记的抗hTg人源化单克隆抗体hTg-37能够在细胞hTg介导的条件下进入甲状腺细胞以及甲状腺癌细胞。结论上述实验结果显示，重组的抗hTg抗体hTg-37具有良好与hTg结合的亲和力，证明人源化过程较好地保存了鼠源性单克隆抗体mTg-60的亲和力。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。序列表〈110〉上海中医药大学附属普陀医院〈120〉抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体及应用〈130>084394〈160>14〈170>PatentInversion3.3〈210>1〈211>125〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈221>MISC_FEATURE〈223〉单克隆抗体重链〈400>1GluValGlnLeuValGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrSerTyr202530SerlieHisTrpValArgGinAlaProGlyGinArgLeuGluTrpMet354045GlyTrplieAsnGlyAlalieGlyAsnThrLysTyrSerGinAsnPhe505560GinGluArgValThrlieThrArgAspThrSerAlaSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerSerLeuArgSerGluAspMetAlaValTyrTyrCys859095AlaArgGlyProArgAsnAlaGlyAlaAlalieThrGlyAlaAlaLeu100105110AspLeuTrpGlyGinGlyThrMetValThrValSerSer115120125〈210>2〈211>108〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈221>MISC_FEATURE〈223〉单克隆抗体轻链〈400>2GluThrThrLeuThrGinSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrlieThrCysArgAlaSerGinGlylieSerAsnTyr202530LeuAlaTrpPheGinGinLysProGlyLysAlaProLysSerLeulie354045TyrAlaAlaSerSerLeuGinSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrlieSerSerLeuGinPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGinGinTyrAsnSerTyrLeuArg859095ThrPheGlyGinGlyThrLysValGlulieLysArg100105〈210>3〈211>5〈212>PRT〈213〉重链CDRl〈400>3SerTyrSerlieHis15〈210>4〈211>17〈212>PRT〈213〉重链CDR2〈400>4TrplieAsnGlyAlalieGlyAsnThrLysTyrSerGinAsnPheGin151015Glu〈210>5〈211>16〈212>PRT〈213〉重链CDR3〈400>5GlyProArgAsnAlaGlyAlaAlalieThrGlyAlaAlaLeuAspLeu151015〈210>6〈211>11〈212>PRT〈213〉轻链CDR1〈400>6ArgAlaSerGinGlylieSerAsnTyrLeuAla1510〈210>7〈211>7〈212>PRT〈213〉轻链CDR2〈400>7AlaAlaSerSerLeuGinSer15〈210>8〈211>9〈212>PRT〈213〉轻链CDR3〈400>8GinGinTyrAsnSerTyrLeuArgThr15〈210>9〈211>23<212>DNA〈213〉引物〈400>9gaggtgcagctggtggagtctgg23〈210>10〈211>2412〈212>DNA〈213〉引物〈400>10tg朋g3g3Cggtgaccattgtccc24〈210>11〈211>23〈212>DNA〈213〉引物〈400>11g朋3Cg3C3Ctcacgcagtctcc23〈210>12〈211>24〈212>DNA〈213〉引物〈400>12acgtttgatttccaccttggtccc24〈210>13〈211>375〈212>DNA〈213〉小鼠(Musmusculus)〈400>13g3tgtg朋gCttcaggagtctggggctgagtcatgc朋gacctccggatecaccttcactCCCgg3C3朋ggCttg3gtggEltgggEltggtcacagaatttCC3gg朋3g3gtC3CC3tt3tgg朋CtC3gtegccte朋atctg朋gaccggaacgcaggggcggccat雄gggtgcgctcacagtctcctca〈210>14〈211>324〈212>DNA〈213〉小鼠(Musmusculus)〈400>14caaattgttctcacccagtctccatcctcaatcacttgtcgggcg3gtc3gggc3ttegcgggaaagccccteagtccctgatctetgct朋gttcagcggcagtggatctgggacagatg朋gattttgcaacttettectgccaacagggg3C3朋gttgga朋te朋acgggtg郷朋gcctggggcctcactg朋gatt60agttettctetccattgggtgcgccaggcc120atc朋cggtgccattggteateca朋gtec1803CC朋gg3C3catccgcgagtecagtteac240acggctgtctattectgtgcgagaggaccc300gctctggatctctggggcca3ggg3CC3Ct360375ctgtctgcatctgtegg卿cagagtcacc60aattetttegcctggtttcagC3g朋3CC3120gcatccagtttgc腿gtggggtcccatca180ttcactctcaccatcagcagcctgcagcct240teteategttacctecggacgttcggccaa300权利要求一种免疫球蛋白，它具有VH链，其特征在于，它的互补决定区(CDR)的氨基酸序列选自下组SEQIDNO3所示的CDR1，SEQIDNO4所示的CDR2，SEQIDNO5所示的CDR3。2.如权利要求l所述的免疫球蛋白，其特征在于，VH链具有SEQIDNO:l所示的氨基酸序列。3.—种免疫球蛋白，它具有Vj连，其特征在于，它的互补决定区(CDR)的氨基酸序列选自下组SEQIDNO:6所示的CDRl，SEQIDNO:7所示的CDR2，SEQIDNO:8所示的CDR3。4.如权利要求l所述的免疫球蛋白，其特征在于，、链具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列。5.—种免疫球蛋白，其特征在于，其VH链和VL链分别具有SEQIDNO:l和SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。6.如权利要求5所述的免疫球蛋白，其特征在于，它是单克隆抗体。7.—种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物具有VH链，该VH链的CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDNO:3所示的CDRl，SEQIDNO:4所示的CDR2，SEQIDNO:5所示的CDR3;或者，该免疫偶联物具有、链，该、链的CDR的氨基酸序列选自下组SEQIDNO:6所示的CDRl，SEQIDNO:7所示的CDR2，SEQIDNO:8所示的CDR3。8.如权利要求7所述的免疫偶联物，其特征在于，所述的免疫偶联物是免疫毒素。9.一种DNA分子，其特征在于，它编码选自下组的蛋白质权利要求1所述的免疫球蛋白VH链；权利要求3所述的免疫球蛋白、链；权利要求5所述的免疫球蛋白。10.—种检测人甲状腺球蛋白的试剂盒，其特征在于，它含有权利要求5所述的免疫球蛋白或权利要求7所述的免疫偶联物。全文摘要本发明提供了一种抗人甲状腺球蛋白的特异性单克隆抗体。该单克隆抗体具有和人甲状腺球蛋白抗原结合的特异性强以及人源化程度高的特点。本发明还提供了所述抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体免疫球蛋白、及其片段和免疫偶联物以及含有上述免疫球蛋白、片段或免疫偶联物的药物组合物。本发明还提供了一种检测人甲状腺球蛋白的检测试剂盒。文档编号A61K49/00GK101759804SQ20081020780公开日2010年6月30日申请日期2008年12月25日优先权日2008年12月25日发明者康向东申请人:上海中医药大学附属普陀医院