专利名称：：淫羊藿总黄酮在制备靶器官保护药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明属中药领域，涉及中药有效成分淫羊藿总黄酮的新药用用途，具体涉及中药有效成分淫羊藿总黄酮在防治呼吸道过敏性疾病中的新用途，尤其是淫羊藿总黄酮在制备耙器官保护药物中的用途
背景技术：
：随着现代工业化进程的加速，人们生活水平的提高，环境的改变，呼吸道过敏性疾病(过敏性鼻炎、哮喘)的发病率不断升高。过敏性鼻炎、哮喘是一种变态反应性疾病，临床以鼻痒、反复喷嚏，清水鼻涕、鼻塞或呼吸困难为特征，发作时极其痛苦，重症哮喘可危及生命，严重影响人们生活质量，给社会带来沉重的经济负担。呼吸道粘膜变态反应性炎症改变是过敏性鼻炎、哮喘患者发生临床症状的主要病理基础之一。淋巴细胞是机体发生变态反应性炎症的主要效应细胞，在变应原的刺激下发生克隆增殖、活化，CD4+T淋巴细胞数目增多，形成T辅助细胞2(Th2)偏移，是过敏性鼻炎、哮喘患者免疫功能紊乱的主要特征。已有研究表明过敏性鼻炎患者局部的T辅助细胞数目增多，其中大部分是Th2细胞。Th2细胞分泌IL-4、IL_5、IL-13等细胞因子，介导B细胞分泌IgE，促使肥大细胞脱颗粒，募集嗜酸性粒细胞，最终导致一系列病理生理变化。Thl细胞分泌IFN，和IL-2，促进Th0细胞向Thl分化，同时拮抗Th2型细胞因子的分泌。随着Th2效应的增强和Thl效应的减弱，其相应的细胞因子比例也发生改变，尤其IL-4/IFN-Y的比值与疾病的进展、转归密切相关，并随有效治疗而下降。二者产生的不平衡与过敏性鼻炎、哮喘患者体内IgE升高关系密切，是导致IgE异常及过敏性鼻炎、哮喘发作的主要原因。抑制Th2，促进Thl,调节Th2/Thl细胞比例平衡，是目前治疗呼吸道变态反应性疾病的策略之一。由于变态反应所致的呼吸道粘膜炎性病变由多种独立的因素引起，目前的化学合成药品多是针对其中某一条途径而设计，因此往往只能获得部分疗效。淫羊藿是我国传统的中草药，性温，味辛、甘甜，入肝、肾二经。有补肾壮阳，强筋骨，祛风湿的作用，用于阳痿，妇人宫冷不孕，肾阳虚性高血压，更年期症候群，腰膝无力，牙齿松动，头发脱落以及风湿筋骨疼痛等症。淫羊藿总黄酮(EF)是小檗科植物淫羊蕾epimediumbrevicornummaxim、箭叶淫羊蘼epimedi亂sagit'taUim.(sieb.et.zucc)maxim、柔毛淫羊蕴epimediumpubescens.maxin、巫山淫羊藿印imedium.wushanense.t.s.ying或卓月鱼羊淫羊藿印imedium.nakai.的干燥地上部分晒干或阴干后的乙醇提取物，是淫羊藿的主要有效成分，性状为棕黄色精细粉末，具有增加脑血流量和冠脉流量、抗肿瘤、抗氧化和增强机体免疫力等作用。
发明内容本发明的目的是提供中药有效成分淫羊藿总黄酮在防治呼吸道过敏性疾病中的新用途，尤其是淫羊藿总黄酮在制备靶器官保护药物中的用途。本发明的淫羊藿总黄酮采用常规水提法提取取朝鲜淫羊藿epimedium.nakai的干燥地上部分，晒干后打成粗粉，加水煎煮，合并提取液，用大孔吸附树脂柱(内径10cm，长100cm)纯化，以的蒸馏水洗脱，流速为2BV/h,弃去水洗脱液，再以60。/。乙醇洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至稠膏，相对密度为1.30-1.35,减压干燥、粉碎、过筛，即得所述的淫羊藿总黄酮(EF)。按2005版药典紫外一可见分光光度法，以淫羊藿苷为标准品，在270nm波长下测定吸光度，计算总黄酮含量；结果在0.15mg0.52rug范围内，淫羊藿苷mg数与吸光度A值线性关系良好,平均回收率为100.1%,RSD=1.61%,r=0.998。本发明的淫羊藿总黄酮经动物实验，结果表明，能改善致敏实验小鼠临床症状和局部细胞浸润，调节血清细胞因子和Thl/Th2平衡；能抑制致敏实验大鼠脾淋巴细胞增殖的量效关系；抑制D10.G4.1细胞系增殖分化，调节相应细胞因子。实验结果证实，所述的淫羊藿总黄酮具有提高机体免疫力，防治变态反应状态呼吸道炎症的作用。本发明所述的淫羊藿总黄酮可作为药物制剂的原料；进一步制备靶器官保护药物，尤其是制备提高机体免疫力、防治呼吸道过敏性的药物。图1是淫羊藿总黄酮对致敏小鼠肺组织形态学的影响，其中，1正常组个别淋巴细胞浸润，未见其他异常；2模型组中等量淋巴细胞浸润，细支气管平滑肌增厚，部分细支气管上皮增生；3EF组少量淋巴细胞浸润，个别细支气管平滑肌增厚；5地塞米松组个别淋巴细胞浸润，未见明显细支气管平滑肌增厚。图2是淫羊藿总黄酮对抑制致敏大鼠脾淋巴增殖量效关系的影响。具体实施例方式实施例1淫羊藿总黄酮对致敏小鼠行为学、形态学以及血清细胞因子的影响实验提取制备淫羊藿总黄酮取朝鲜淫羊藿epimedium.nakai的干燥地上部分，晒干后打成粗粉，加10倍水量煎煮2小时，共3次，合并提取液，用大孔吸附树脂柱(内径10cm，长100cm)纯化，以5倍柱床体积量的蒸馏水洗脱，流速为2BV/h，弃去水洗脱液，再以10倍柱床体积量的60%乙醇洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，回收乙醇并浓縮至稠膏，相对密度为1.30-1.35，减压干燥、粉碎、过筛，即得所述的淫羊藿总黄酮(EF)。按2005版药典紫外一可见分光光度法，以淫羊藿苷为标准品，在270nm波长下测定吸光度，计算总黄酮含量；结果在0.15mg0.52rug范围内，淫羊藿苷mg数与吸光度A值线性关系良好，平均回收率为100.1%，RSD=1.61%，r=0.998。采用6周龄SPF级雄性BALB/C小鼠，体重20士2g，随机分成正常对照组、模型对照组、淫羊藿总黄酮组和地塞米松组每组各6只。模型组和各用药组小鼠于第一天腹腔注射卵清蛋白(OVA)100ug与氢氧化铝凝胶混合液0.3ml使之致敏，第7天、第14天用同样方法加强致敏2次。第21天至第27天每日给予2.5%0VA生理盐水溶液20yl滴鼻激发。正常组给予生理盐水腹腔注射及滴鼻，方式与其它各组相同。将淫羊藿总黄酮和地塞米松粉末用无菌水溶解，配成混悬液(淫羊藿总黄酮60mg/Kg,地塞米松组为lmg/Kg)，各用药组小鼠从第一天开始灌服，至第27天结束，每日每只小鼠灌胃体积0.5ml，正常组和模型组小鼠给予饮用水0.5ml灌胃。观察淫羊藿总黄酮对致敏小鼠行为学的影响-在造模与给药结束后(即第27天)，对各组小鼠滴鼻结束后5min内的喷嚏及抓鼻次数进行计数。结果显示模型组小鼠无论是喷嚏数还是抓鼻数都显著增加；淫羊藿总黄酮组小鼠喷嚏数、抓鼻数均明显低于明显模型对照组；地塞米松组喷嚏数、抓鼻数均明显低于明显模型对照组。结果表明经淫羊藿总黄酮、地塞米松治疗，致敏小鼠的临床症状均有不同程度地改善。表1是淫羊藿总黄酮对致敏小鼠喷嚏及抓鼻数的影响(次/5min;±S)。_组另lj_^_喷嚏数_抓鼻数_正常对照组60.40土0.69"0.10±0.32"模型对照组68.33±1.735.56±2.01淫羊藿总黄酮组65.36土3.01'2.55±1.75"地塞米松组62.30土0.95"1.60±2.4广注与模型对照组比较*P<0.05;**P<0.01观察淫羊藿总黄酮对致敏小鼠肺组织形态学的影响造模28天后，小鼠经戊巴比妥钠麻醉，取肺组织，经福尔马林固定，制作石蜡、切片、常规he染色并观察。光镜下观察肺组织内淋巴细胞浸润、支气管平滑肌和上皮增生、支气管腔内渗出情况，并对每个组织标本随机选取5个视野，进行嗜酸性粒细胞计数，取其均值。照片采用德国zeiss显微镜拍摄。结果显示(图l):正常对照组小鼠肺组织未见明显异常；模型对照组小鼠肺组织见大量嗜酸性细胞的浸润，中等量淋巴细胞浸润，细支气管平滑肌增厚，部分细支气管縮窄，上皮增生、脱落；淫羊藿总黄酮组小鼠嗜酸性粒细胞降低，淋巴细胞浸润减少；地塞米松组小鼠肺组织个别淋巴细胞浸润，未见明显细支气管平滑肌增厚。结果证实经淫羊藿总黄酮、地塞米松治疗，致敏小鼠肺部变应性炎症有不同程度改善。表2是淫羊藿总黄酮对致敏小鼠肺组织嗜酸性粒细胞计数的影响(S土s)。表2组另lj_2_嗜酸细胞数(个/HP)正常对照组61.97±2.42'模型对照组619.00±6.36淫羊藿总黄酮62.36±1.02*地塞米松组61.87±1.05'注与模型组比较*P<0.01观察淫羊藿总黄酮对致敏小鼠血清细胞因子的影响-造模28天后，小鼠经戊巴比妥钠麻醉取血，3000转/分，离心15分钟，分离血清，-20。C留存，待测细胞因子。小鼠血清IL-4、IL-5、IFN-y、TGF-P采用Biosource公司小鼠eia试剂盒，采用双抗体夹心abc-elisa法，用抗小鼠单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的il-4、il-5、ifn-y、tgf-e与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠IL-4、IL-5、IFN-y、TGF-P形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Str印tavidin与生物素结合，加入酶底物0PD，出现黄色，加终止液硫酸，颜色变深，在492nm处测0D值，IL-4浓度与0D值成正比，通过绘制的标准曲线求出标本中IL-4、IL-5、IFN-y、TGF-e浓度。结果显示与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清IFN-y显著降低，IL-4、IL-5显著升高，TGF-e含量显著下降；与模型对照组比较，淫羊藿总黄酮组IFN-y回升，IL-4、IL-5下降，TGF-P明显升高；地塞米松组与模型对照组比较，IL-4、IL-5显著降低，TGF-P明显升高。结果证实淫羊藿总黄酮能调节致敏小鼠血清细胞因子向正常状态转化，与淫羊藿总黄酮能改善致敏小鼠行为学和呼吸道变应性炎症相一致；地塞米松也有该作用。表3是淫羊藿总黄酮对小鼠血清IFN-y、IL-4、IL-5含量的影响(；士s)。表4淫羊藿总黄酮对小鼠血清IL-10、TGF-e含量的影响(S土s)。表^_组另ij_nIFN-y(pg/ml)_IL-4(pg/ml)IL-5(pg/ml)正常对照组6109.43±18.15"49.90土5.54"21.51土1.54"模型对照组648.50±11.3773.53±8.4739.47±13.74淫羊藿总黄酮组685.89±10.40*66.21±5.66*26.63±3.48*地塞米松组660.37±15.1257.68±6.12"21.95土3.01"注与模型组比较，*尸<0.05,**尸<0.01表4组另ljnIL-IO(pg/ml)TGF-P(ng/ml)正常对照组620.20±0.81*33.77±1.82"模型对照组614.63±4.8125.55±5.59黄芩苷组615.90±4.3141.66士5.49"淫羊藿总黄酮组622.95土1.45'32.03±2.98"地塞米松组638.65±1.14**33.63±4.37'*注与模型组比较，'尸<0.05,''*尸<0.01致敏小鼠脾脏Thl/Th2流式荧光抗体检测造模28天后，按常规方法用Ficoll淋巴细胞分离液以梯度密度离心法分离脾脏淋巴细胞。(1)'淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏Thl(IFN-y+CD4+)、Th2(IL-4+CD4+)细胞分类计数的影响调整细胞浓度为5X107ml，接种于24孔板，每孔lml，以佛波醇乙酯(PMA终浓度20ng/ml)为剌激剂培养12小时，最后4小时加入离子霉素(1Wg/ml)及蛋白转运抑制剂莫能霉素(2"mol/ml)共培养，收集后分别标记FITCanti-mouseCD4和PEanti-mouseIFN-Y或PEanti-mouseIL_4。收集细胞等分于2个离心管中用染色缓冲液洗涤l次(2000r/min，5min)后弃上清，每管加入FITCanti-mouseCD4，细胞混匀，室温避光放置30分钟。加入染色缓冲液洗涤，2000r/rain离心5min后弃上清，每管加入500ul预冷(4°C)固定液，室温孵育10min,离心后弃上清，每管加入1.5ml破膜剂，室温避光放置15min，离心去上清，加PEanti-mouseIFN-Y或PEanti-mouseIL-4，室温避光放置30min，1ml洗涤液洗涤2次，离心去上清，用350ul固定液固定，24h内进行流式细胞仪检测分析。结果表明与正常组小鼠比较，模型组Th2细胞百分率及Th2/Thl比值显著增高，Thl细胞百分率显著下降；与模型组比较，淫羊藿总黄酮组Thl细胞百分率显著增高，Th2细胞百分率、Th2/Thl比值均显著下降。结果证实淫羊藿总黄酮能调节致敏小鼠T辅助细胞亚群向正常状态转化，与淫羊藿总黄酮能改善致敏小鼠行为学和呼吸道变应性炎症、血清细胞因子向正常状态转化相一致；地塞米松也有此作用。表5是淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏TH1/TH2细胞分类计数的影响(；±s)。表5组另lj_2_TH1(%)_TH2(%)_TH2/TH1正常对照63.39±0.48*1.24±0.17"0.39±0.11"模型对照62.69±0.442.51±0.580.95±0.23淫羊藿总黄酮63.85士0.4(T1.69土0.4r0.46±0.21*地塞米松63.02±0.761.21土0.52"_0.41±0.16"注与模型组比较，*尸<0.05，"尸<0.01(2)淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞计数的影响取1X106个脾脏淋巴细胞，用直接染色法标记FITCanti-mouseCD4、PEanti-mouseCD25。收集细胞于离心管中，用染色缓冲液洗涤(2000r/rain，5min)后弃上清，每管加入FITCanti-mouseCD4和PEanti-mouseCD25,细胞混匀，室温避光放置30分钟。加入染色缓冲液洗涤2次，2000r/min离心5min后弃上清，用350ul固定液固定，进行流式细胞仪检测分析。8另取1X1()6个细胞，经表面标记FITCanti-mouseCD4后，破膜后胞内染AlexaFluor647anti-mouse/ratFoxp3。管中加入FITCanti-mouseCD4,细胞混匀，室温避光放置30分钟。加入染色缓冲液洗涤，2000r/min离心5min后弃上清，每管加入500ul预冷(4°C)固定液，室温孵育10min。离心后弃上清，每管加入1.5ml破膜剂，室温避光放置15min。离心去上清，加AlexaFluor647anti-mouse/ratFoxp3，室温避光放置30min，lml洗涤液洗涤2次，离心去上清，用350ul固定液固定，进行流式细胞仪检测分析。结果显示与正常组小鼠比较，模型组CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞显著下降；与模型组比较，EF组CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞显著升高。结果证实淫羊藿总黄酮能调节致敏小鼠脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞分类计数向正常状态转化，与淫羊藿总黄酮能改善致敏小鼠行为学和呼吸道变应性炎症、血清细胞因子、T辅助细胞亚群向正常状态转化相一致；地塞米松也有该作用。表6是淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞分类计数的影响G±s)。表6组另ij_5_CD4tD25+T(%)_Foxp3WT(%)正常对照组68.12±2.56*4.40土1.67"模型对照组65.98±0.782.66±0.79淫羊藿总黄酮组67.22±1.12'3.29土0.60'地塞米松组_§_7.38±0.48*_4.62±1.69"注与模型组比较，*尸<0.05，材尸<0.01致敏小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞抑制功能检测(1)淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏CD4+CD25+T抑制模型组CD4+CD25—T细胞增殖的影响用CD4+CD25+T细胞磁珠分离试剂盒分离脾脏CD4+T细胞、CD4+CD25+T及CD4+CD25—T细胞。小鼠全脾细胞经3000Rad放射性照射后用作抗原递呈细胞(APC5*106/ml)。在抗原OVA(100ug/ml)刺激下，加入APC后各组小鼠CD4+CD25+T细胞分别与模型组CD4tD25—T细胞(5W07ml)按1:4比例混合培养72小时。其中，部分培养于24孔板中，检测上清细胞因子IFN-y、IL-4、IL-5含量；另外一部分培养于96孔板中，在培养结束前12小时掺入M-TdR，检测细胞增殖。每个样本三复份。用磁珠分离法，分出小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞，纯度〉95%。结果表明各组小鼠脾脏CD4+CD25+T对模型组CD4+CD25T的增殖均有抑制能力。与正常组比较，模型组CD4+CD25+T对模型组CD4+CD25—T细胞增殖的抑制能力减弱。与模型组比较，EF组CD4+CD25+T对模型组CD4+CD25—T细胞增殖的抑制能力增强，地塞米松组CD4tD25+T对模型组CD4+CD25T细胞增殖的抑制能力增强。结果证实淫羊藿总黄酮能调节致敏小鼠脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞分类计数向正常状态转化，与淫羊藿总黄酮能改善致敏小鼠行为学和呼吸道变应性炎症，使血清细胞因子、T辅助细胞亚群向正常状态转化相一致；地塞米松也有该作用。表7是各组小鼠脾脏CD4+CD25+T与模型组CD4+CD25—T共培养CPM计数。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注control为模型组小鼠脾脏CM+CD25T细胞。其余组均为各组CD4+CD25+T与control细胞共培养CPM计数。与control比较，厶尸<0.05，厶，<0.01;与模型组比较，*尸<0.05，**尸<0.01(2)淫羊藿总黄酮对小鼠脾脏CD4+CD25+T对CD4+CD25T细胞产生细胞因子的影响上述细胞培养上清液检测细胞因子，方法同上。结果显示各组小鼠脾脏CD4+CD25+T对CD4+CD25—T产生细胞因子IFN-y、IL-4、IL-5均有抑制能力。与正常组比较，模型组CD4+CD25+T对CD4+CD25—T产生细胞因子的抑制能力减弱。EF组CD4+CD25+T对CD4+CD25—T细胞产生细胞因子的抑制能力增强。地塞米松组CD4+CD25+T对CD4+CD25—T细胞产生细胞因子的抑制能力增强。结果证实淫羊藿总黄酮能使致敏小鼠脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T分泌的细胞因子向正常状态转化，与淫羊藿总黄酮能改善致敏小鼠行为学和呼吸道变应性炎症，使血清细胞因子、T抑制细胞亚群、脾脏CD4+CD25+T及。04卞0邓3+T细胞分类计数向正常状态转化相一致；地塞米松也有这一作用。表8是各组小鼠CD4+CD25+T对CD4+CD25T细胞产生细胞因子的影响(；土s)。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注control为模型组小鼠脾脏CD4+CD25—T细胞。其余组均为各组CD4+CD25'T与control细胞共培养CPM计数。与control比较，&尸<0.05，*V<0.01;与模型组比较，*P<0.05，**尸<0.01实施例2.淫羊藿总黄酮抑制致敏大鼠脾淋巴细胞增殖的量效关系实验淫羊藿总黄酮粉末20mg用200ulDMS0溶解后，调整PH值为7.0，再用RPMI-1640定容，浓度为10mg/ral，DMS0含量小于1%>。淫羊藿总黄酮溶液经0.2ura微滤器过滤除菌后，用RPMI-1640倍比稀释至0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0g/L。6只SD雄性大鼠250g，用卵白蛋白(0VA)lmg、氢氧化铝凝胶0.5ml的生理盐水混悬液lml腹腔注射使动物致敏，七天后用同样的方法加强致敏一次，至28天，按常规方法，用Ficoll淋巴细胞分离液分离脾脏淋巴细胞，调整细胞浓度为2X107ml，接种于96孔板，每孔100u1。加入0VA(终浓度25ug/ml)促进淋巴细胞增殖，每孔10iU。加入淫羊藿总黄酮溶液,每孔10y1，每个样品均做双复份，培养48h后加3H-TdRluCi/孔，继续培养18h后，将细胞收集在滤膜上，通过液闪计数仪测cpm数。结果显示(图2):随着淫羊藿总黄酮剂量的加大，因致敏引起的脾淋巴细胞增殖被逐步地抑制，并呈现出良好的量效关系。结果证实淫羊藿总黄酮在抑制致敏引起的脾淋巴细胞增殖时有明显的量效关系。实施例3.淫羊藿总黄酮抑制D10.G4.1细胞系增殖分化，调节相应细胞因子的平衡实验设淫羊藿总黄酮低、中、高剂量组(0.5ug、5ug、50ug/ml)、地塞米松组(地塞米松郭」量为lug/ml)和空白对照组。采用的D10.G4.1细胞系(ATCCNUMBER:TIB-224)购自ATCC公司。淫羊藿总黄酮粉末用少量PBS溶解后，调整PH值为7.0，再用RPMI-1640定容,浓度为10mg/ml。地塞米松用少量聚乙二醇溶解，再用RPMI-1640定容，浓度为lmg/ml，聚乙二醇含量小于1%。。上述药品经0.2um微滤器过滤除菌后，4'C冰箱保存。两周内使用，使用时稀释至所需浓度。观察淫羊藿总黄酮.对D10.G4.1细胞增殖的影响实验前用Ficoll淋巴细胞分离液分离D10.G4.1细胞，去除碎片与死细胞。调整D10.G4.1细胞浓度为2Xl()S细胞/nil,接种于96孔板，每孔100ixl。加入APC/10ul以刺激D10.G4.1细胞，然后分别加入各药液10y1，对照组加同体积RPMI-1640培养液，各样品均做三复份,培养72h，在最后18h加3H-TdRluCi/孔。而后用多头吸滤器将细胞收集在滤膜上，通过液闪计数仪测cpm数。实验另重复一次。结果显示淫羊藿总黄酮(EF)在0.5ug/ml、5ug/ml对细胞增殖无明显抑制作用，50ug/ml能显著抑制D10G4.1细胞增殖；地塞米松能明显抑制D10G4.1细胞增殖。结果证实淫羊藿总黄酮在一定浓度内对D10G4.1细胞增殖有抑制作用。表9是淫羊藿总黄酮对D10G4.l细胞增殖的影响(；士s)。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注与对照比较，*尸<0.05，''*尸<0.01观察淫羊藿总黄酮对D10G4.1细胞分泌细胞因子的影响-调整细胞浓度为2Xl()5细胞/ml，接种于24孔板，每孔lml。分别加入各组浓度药物，以培养液为对照，各样品均做三复份。培养72h，离心收集培养上清液，保存于-20r冰箱。细胞因子IFN-y、IL-4、IL-5、TGF-0检测应用ELISA试剂盒，根据说明书指示操作。实验重复二次。"结果显示淫羊藿总黄酮组与对照组相比培养上清中IL-4、IL-5水平明显降低;TGF-P水平明显升高;而对IFN-y无变化。地塞米松组与对照组相比培养上清中IL-4、IL-5、IFN-y水平明显下降，而TGF-e水平明显上升。结果证实淫羊藿总黄酮不仅能抑制D10G4.1细胞增殖，而且能改变其所分泌的细胞因子。表10是淫羊藿总黄酮对D10G4.1细胞培养上清IL-4、IL-5、IFN-y、TGF-P含量变化(pg/ml，；c土s)。表10分组nIL-4IL-5IFN-、/TGF-P对照组688.98±6.9781.80±13.7078.08±6.942279.00±585.50EF低剂量组667.02±5.45*63.15±39.8467.51±7.63*3388.00±406.5"EF中剂量组664,11±4.28"57.41±9.54'58.71±13.97**3844.00±682.5"EF高剂量组663.12士1.43"55.49±16.05*58.55±6.76"3804.5±1092.0"地塞米松组660.22±4.3广46.06±5.26'47.02±3.19***5336.50±660.00"注与对照比较，*尸<0.05,**尸<0.011权利要求1、中药有效部位淫羊藿总黄酮在制备保护靶器官药物中的用途。2、按权利要求1的用途，其中所述的靶器官是致敏状态下的呼吸道粘膜和脾脏淋巴细胞。3、按权利要求1的用途，其中所述的靶器官保护是改善致敏症状和呼吸道变应性炎性细胞浸润，调节相应血清细胞因子、T抑制细胞亚群、脾脏CD4+CD25+T及CD4+Foxp3+T细胞分类计数向正常状态转化。4、按权利要求l的用途，其中所述的靶器官保护是抑制D10.G4.l细胞系增殖分化，并调节相应细胞因子。5、淫羊藿总黄酮在制备防治呼吸道变应性炎症药物中的用途。全文摘要本发明属中药领域，涉及中药有效部位淫羊藿总黄酮在制备靶器官保护药物中的新用途，具体涉及淫羊藿总黄酮在制备防治呼吸道变态反应性疾病药物中的新用途。本发明所述的淫羊藿总黄酮经动物实验，结果证明，所述淫羊藿总黄酮具有改善致敏小鼠临床症状和呼吸道变应性炎性细胞浸润、抑制致敏状态下的脾淋巴细胞增殖、调节Th1/Th2平衡和相应细胞因子，以及血清细胞因子向正常状态转化；抑制D10.G4.1细胞系增殖分化、调节相应细胞因子的平衡。本发明淫羊藿总黄酮可作为药物制剂的原料，制备保护靶器官的药物及制备防治呼吸道变态反应性疾病的药物。文档编号A61K36/185GK101450093SQ20081020784公开日2009年6月10日申请日期2008年12月25日优先权日2008年12月25日发明者刘闰红,张卫东,张新民,张素琴,顾一峰申请人:复旦大学附属华山医院