一种制备治疗耳聋的药物组合物的应用的制作方法

背景技术：
：：聋哑病人是指听觉和语言障碍兼有的病人。全世界聋哑人约2亿人。我国有聋哑人2700多万，每年新增2-3万人。一旦一个家庭有一位聋哑患儿，就会给这个家庭在经济上、思想上造成严重的困难和压力。感音神经性聋是由于外源性或自身衰老导致的耳蜗毛细胞的变性和逐渐消失，血管纹、螺旋神经节、听神经或听觉中枢的退行性病变引起的听力减退和听力丧失。目前这被认为是一种不可逆的病变且尚无特效药物或保守疗法能使感音神经性聋病人完全恢复听力。药物治疗对于改善听功能有一定疗效，但十分有限，有些药物还有较大的毒副作用。电子耳蜗植入和助听器的应用均依赖于螺旋神经节神经元的存活，螺旋神经节神经元的缺失会影响其效果。因此，寻找一种有效且低毒或无毒的治聋药物仍是一条重要途径。近年来，中药治聋的研究也取得了很大发展。中国专利CN1775254A公开了一种治疗耳聋的药物制剂及其制备方法(龙胆、黄芩、地黄、泽泻、川木通、栀子、当归、九节菖蒲、甘草、羚羊角等中药原料制成)。但该专利中未公开临床疗效资料及动物实验资料。中国专利CN101439131A的专利中报道了一种治疗感音神经性耳聋的中药组合物及其应用，该中药组合物的配方和重量比为：熟地黄22-48份，泽泻8-18份。该专利中的药物组合物具有滋阴补肾，利水泄热的功效，对于感音神经性耳聋有一定的防治功效。由于中药的特殊性，其作用于身体不同部位会导致药效出现较大差异，前人研究的治耳聋药物对此报道甚少。有鉴于此，提出本发明。技术实现要素：：本发明的主要目的是提供一种用于治疗耳聋的药物组合物的使用方法，具体的，本发明提供一种可以恢复和再生听神经和耳蜗中受损伤或死亡的感音毛细胞的中药制剂或组合物的使用方法，彻底治愈聋哑病。本发明的技术方案为：一种用于制备治疗耳聋的药物组合物，其特征在于：该药物组合物包括组合物1和组合物3，其中，组合物1和组合物3组合使用。所述药物组合物1由红花5-40重量份、黄芪10-60重量份、穿山甲5-40重量份、桃仁10-60重量份、川芎4-40重量份、莱菔子5-40重量份、木香5-40重量份、乌药6-40重量份、熟地15-70重量份，山萸肉15-70重量份、丹皮6-40重量份、云苓6-40重量份、泽泻5-50重量份、磁石15-80、皂刺5-50重量份、水蛭5-40重量份、知母5-40重量份、黄柏5-40重量份制成；组合物3由银花15-60重量份、瓜蒌15-60重量份、当归5-30重量份、元胡15-60重量份、川芎20-90重量份、人参3-30重量份、五灵脂5-40重量份、冰片10-60重量份，麝香(或人工麝香)1-10重量份、磁石15-60重量份、杞果7-60重量份、公英15-60重量份、山萸肉15-60重量份制成。优选的，所述组合物1由红花12重量份、黄芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、莱菔子15重量份、木香10重量份、乌药15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、泽泻10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黄柏10重量份制成；所述组合物3由银花30重量份、瓜蒌30重量份、当归10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人参6重量份、五灵脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份制成。所述组合物1的制备方法为：(1)清洗：将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为15-60ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的红花、黄芪、穿山甲、桃仁、川芎、莱菔子、木香、乌药、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、泽泻、皂刺、知母、黄柏浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黄柏这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入100-130℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流10-30min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装。所述组合物3的制备方法为：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为15-60ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的银花、瓜蒌、当归、元胡、川芎、人参、五灵脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对银花，当归，元胡，公英，山萸肉这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入100-130℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，制成汤剂。优选的，上述药材从原产地采购，并在水洗浸泡后，根据《中国药典》的标准，对药材进行筛选，粉碎和切片。优选的，所述组合物1、组合物3可以制成汤剂，丸剂，颗粒剂，耳浴剂。优选的，将所述组合物1制成汤剂，组合物3制成耳浴剂。优选的，组合物中还包括组合物2，所述组合物2由黄芪30-90重量份、当归5-50重量份、川芎3-20重量份、赤芍7-40重量份、桃仁3-30重量份、红花3-30重量份、肉桂1-10重量份、苏木5-50重量份、水蛭3-30重量份、王不留10-60重量份、磁石10-60重量份制成。优选的，所述组合物2由黄芪60重量份、当归10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、红花6重量份、肉桂5重量份、苏木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份制成。所述组合物2的制备方法为：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为15-60ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的黄芪、当归、桃仁、川芎、赤芍、红花、肉桂、苏木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，当归，桃仁，苏木这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入100-130℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装。优选的，所述组合物2可以制成汤剂，丸剂，颗粒剂，耳浴剂。优选的，将所述组合物1和2制成汤剂，组合物3制成耳浴剂。优选的，将所述组合物1和2制成丸剂，组合物3制成耳浴剂。优选的，将所述组合物1和2制成颗粒剂，组合物3制成耳浴剂。优选的，在给药时并配合使用促神经生长素。优选的，促神经生长素为成纤维生长因子。优选的，成纤维生长因子的用量为每日2000IU。优选的，将组合物1、组合物2制备成汤剂，组合物3组合制成耳浴剂组合使用，对耳周围进行按摩、揉耳部，前后左右旋转耳廓。本发明的有益效果：1.采用本发明所提出的药物，可以对损伤和死亡的感音母细胞和传导神经的再生修复，进而达到听力提高和恢复，根除病灶，起到治本的效果。附图说明：图1是本发明中对照组致聋90天后毛细胞的电镜观察图(20KV×1000)；图2是本发明中对照组致聋90天后毛细胞的电镜观察图(20KV×1500)；图3是本发明实施例4组致聋实验后治疗90天毛细胞再生的电镜观察图(20KV×1000)；图4是本发明实施例4组致聋实验后治疗90天毛细胞再生的电镜观察(20KV×1500)。具体实施方式：制备例1制备组合物1。按照组合物1的组方：红花12重量份、黄芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、莱菔子15重量份、木香10重量份、乌药15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、泽泻10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黄柏10重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗：将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的红花、黄芪、穿山甲、桃仁、川芎、莱菔子、木香、乌药、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、泽泻、皂刺、知母、黄柏浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黄柏这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，制成汤剂。制备例2制备组合物1。按照组合物1的组方：红花12重量份、黄芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、莱菔子15重量份、木香10重量份、乌药15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、泽泻10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黄柏10重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗：将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的红花、黄芪、穿山甲、桃仁、川芎、莱菔子、木香、乌药、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、泽泻、皂刺、知母、黄柏浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黄柏这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制成丸剂。制备例3制备组合物1。按照组合物1的组方：红花12重量份、黄芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、莱菔子15重量份、木香10重量份、乌药15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、泽泻10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黄柏10重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗：将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的红花、黄芪、穿山甲、桃仁、川芎、莱菔子、木香、乌药、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、泽泻、皂刺、知母、黄柏浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黄柏这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制成颗粒剂。制备例4制备组合物1。按照组合物1的组方：红花12重量份、黄芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、莱菔子15重量份、木香10重量份、乌药15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、泽泻10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黄柏10重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗：将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的红花、黄芪、穿山甲、桃仁、川芎、莱菔子、木香、乌药、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、泽泻、皂刺、知母、黄柏浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黄柏这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，调节pH为6，加入0.1％的维生素B，制成耳浴剂。制备例5制备组合物2。组合物2的组方：黄芪60重量份、当归10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、红花6重量份、肉桂5重量份、苏木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的黄芪、当归、桃仁、川芎、赤芍、红花、肉桂、苏木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，当归，桃仁，苏木这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，制成汤剂。制备例6制备组合物2。组合物2的组方：黄芪60重量份、当归10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、红花6重量份、肉桂5重量份、苏木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的黄芪、当归、桃仁、川芎、赤芍、红花、肉桂、苏木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，当归，桃仁，苏木这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制成丸剂。制备例7制备组合物2。组合物2的组方：黄芪60重量份、当归10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、红花6重量份、肉桂5重量份、苏木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的黄芪、当归、桃仁、川芎、赤芍、红花、肉桂、苏木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，当归，桃仁，苏木这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制成颗粒剂。制备例8制备组合物2。组合物2的组方：黄芪60重量份、当归10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、红花6重量份、肉桂5重量份、苏木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的黄芪、当归、桃仁、川芎、赤芍、红花、肉桂、苏木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对黄芪，当归，桃仁，苏木这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，调节pH为6，加入0.1％的维生素B，制成耳浴剂。制备例9制备组合物3。组合物3的组方：银花30重量份、瓜蒌30重量份、当归10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人参6重量份、五灵脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的银花、瓜蒌、当归、元胡、川芎、人参、五灵脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对银花，当归，元胡，公英，山萸肉这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，制成汤剂。制备例10制备组合物3。组合物3的组方：银花30重量份、瓜蒌30重量份、当归10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人参6重量份、五灵脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的银花、瓜蒌、当归、元胡、川芎、人参、五灵脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对银花，当归，元胡，公英，山萸肉这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制备丸剂。制备例11制备组合物3。组合物3的组方：银花30重量份、瓜蒌30重量份、当归10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人参6重量份、五灵脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的银花、瓜蒌、当归、元胡、川芎、人参、五灵脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对银花，当归，元胡，公英，山萸肉这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)真空干燥，制备颗粒剂。制备例12制备组合物3。组合物3的组方：银花30重量份、瓜蒌30重量份、当归10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人参6重量份、五灵脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共称取药材60g。制备方法：(1)清洗，将600ml去离水照常规方法制备氘丰度为55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，搅拌均匀后，进行增氧处理，至水中氧含量为30ul/L时，停止增氧；将已经粉碎或切片的银花、瓜蒌、当归、元胡、川芎、人参、五灵脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；将已经粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超声处理20min，超声功率280w；(2)炒制：中火对银花，当归，元胡，公英，山萸肉这几味药材进行炒制20min(本发明中提到的炒制意为将药材炒焦，具体操作方法为，将药材置于锅内，用中火炒制外呈焦黄，内呈黄色的状态)；(3)水煎，将上述步骤获得的药材，按照先加入根茎类药物，后加入叶片类药物的顺序加入120℃的低氘水中，恒温恒压下封闭回流20min；回流完毕后，收集煎液，并于相同温度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：将煎液中加入乙醇，使得乙醇浓度为50％；(5)过滤：静置12h，过滤沉淀获得药液；(6)浓缩包装，将步骤(5)中所得药液蒸馏浓缩，直到药液密度达到1.2g/ml，调节pH为6，加入0.1％的维生素B，制成耳浴剂。实施例1服用制备例1、同时将制备例12中的耳浴剂外用。实施例2服用制备例1、同时将制备例12中的耳浴剂外用。同时注射成纤维生长因子的用量为每日2000IU。实施例3制备例1、制备例5的药物共同服用，同时将制备例12中的耳浴剂外用。实施例4制备例1、制备例5的药物共同服用，同时将制备例12中的耳浴剂外用。同时注射成纤维生长因子的用量为每日2000IU。实施例5制备例1、制备例9的药物共同服用。实施例6制备例1、制备例5、制备例9的药物共同服用。对比例1按照CN1775254A中的制备方法，制备治疗耳聋药剂。称取龙胆125g，黄芩125g，地黄125g，泽泻125g，川木通125g，栀子125g，当归125g，九节菖蒲125g，甘草125g，羚羊角6.25g。当归、羚羊角分别粉碎成细粉；其余龙胆等八味加乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并乙醇提取液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至稠膏状；药渣加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的清膏，与上述稠膏合并，搅匀，真空干燥，粉碎成细粉，加入当归、羚羊角细粉，混匀，加入适量淀粉及2％微粉硅胶，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。对比例2按照CN101439131A中的制备方法，制备治疗耳聋药剂。称取熟地黄24g、泽泻9g，加入10倍量双蒸水浸泡2h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取药液。再次加入8倍量的双蒸水，浸泡1h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取药液。将两次药液合并，90℃水浴浓缩。按体积比2∶3加入无水乙醇，充分混匀，4℃静置24h，1500rpm离心15min，取上清，弃沉淀。90℃水浴挥发乙醇，三蒸水定容至270ml液体。0.22μm小滤器过滤除菌，制得药剂。效果例1动物实验1.造模选用健康青年杂色豚鼠，耳廓反射正常，体重250-300g，雌雄各半。随机分为庆大霉素致聋组(Gentamyci,GM组)，正常对照组。动物用戊巴比妥钠80mg/Kg剂量麻醉，进行脑干诱发电位(ABR)和畸变耳声发射(DPOAE)测定。测定后的GM组每天肌注庆大霉素(山东鲁抗辰欣药业有限公司，批准文号：国药准字H37021973)按80mg/Kg。连续肌肉注射14-20天，测定庆大霉素注射动物的ABR阈值在50dBSPL以上，DPOAE幅值明显下降后，再分为致聋后对照组、致聋后中药治疗组和对比例治疗组。注射后的所有动物进行ABR和DPOAE测定。2听功能测定方法美国InteligentHearingSmart听觉诱发电位-耳声发射仪(脑干诱发电位、耳蜗电图、多频稳态)。动物麻醉后，用针电极插入颅顶为记录电极，同侧为参考电极，对侧接地。刺激率19.1/ms,高通300，低通3000，平均叠加256-512次。DPOAE记录是将大小合适的探头塞入外耳道，使外耳道密封，当刺激信号平稳后进行测试，重复两次。每个受试者均接受两个初始音强度分别为为L1＝70dBSPL，L2＝70dBSPL的纯音信号刺激，初始音的频率比为f1/f2＝1.22，f1、f2的几何均数的范围位于0.5～8.0kHz。分别选择f2为0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16，32kHz各点进行测试，测量不同刺激强度时DPOAE的幅值，以引出反应幅值高出本底噪声3dB时的最小刺激强度作为DPOAE有无的指标，确定检出率。上述测试均叠加100次。3治疗方法及药物用量3.1将GM致聋豚鼠随机分组各20只。按陈奇主编的《中药药理研究方法学》方法，按成人量(mg/kg)换算成动物剂量的倍数简表，换算豚鼠为4.5倍的剂量(mg/kg)，计算出豚鼠的口服用药剂量为9ml。如本发明表1所述，致聋后对照组、致聋后中药治疗组和对比例治疗组的小鼠每天服用中药组合物1、3，组合物1、2、3的组合物，对比例的中药组合物，连续治疗3个月。庆大霉素致聋后对照组同样为20只，给予口服同剂量的生理盐水，时间同治疗组。3.2统计学处理：采用MicrosoftOfficeExcel录入数据，计算平均值，制作数据表格。分析数据均以平均值±标准差(mean±SD)表示。所有数据用SPSS10.0forWindow软件进行显著性检验。3.3DPOAE实验结果：根据实验数据可知(见表2-4)，在高频区(2844Hz-8040Hz)，当组合物1、3联合使用时，如实施例1、2、5，复聪作用较为明显(P＜0.05)，其中又以实施例2的效果最佳。进一步的，当联用组合物1、2、3时，如实施例3、4、6，尤其是采用如实施例4的联用方法，药效最佳(见表3)(P＜0.01)。此外，如表4所示，本发明实施例1-6的治疗效果都要好于对比例，可使实验动物听力的高频区基本恢复到正常水平。3.4ABR实验结果：根据表5、表6可知，正常豚鼠的ABR平均阈值应当在20-30dBSPL，GM致聋后ABR阈值上升到44-58dBSPL，与正常豚鼠相比，数据有显著性差异(P＜0.01)。组合物治疗90天后，ABR的平均阈值均有不同程度的下降，其中，采用如实施例1-6的治疗方案，ABR阈值基本恢复到正常程度，与正常组相比没有显著性差异(P＞0.05)，其中，实施例2的效果优于实施例1，实施例1的效果优于实施例5，实施例4的效果优于实施例3，实施例3的效果优于实施例6。同时又以实施例4的治疗效果最佳。通过上述实验可知，将组合物3制备成耳浴剂，如制备例12，再与组合物1或组合物1、2联合使用，能发挥药物的最大活性。表1：对大庆素致聋豚鼠给药分组和给药情况表2：致聋实验0日时正常组与庆大霉素致聋组致聋后DPOAE各频率幅值(dBSPL,x±s)表3：致聋实验90日后正常组与庆大霉素致聋普通组DPOAE各频率幅值(dBSPL,x±s)表4：致聋实验90日后对比例组DPOAE各频率幅值(dBSPL,x±s)表5：致聋实验0日时各组ABR反应域(dBSPL,x±s)组别耳数ABR反应域14025.31±4.6324051.46±6.61表6：致聋实验90日后各组ABR反应域(dBSPL,x±s)组别耳数ABR反应域14023.25±4.8224050.21±7.5734030.04±4.2244029.46±4.4754025.29±5.1764024.20±5.1174032.20±4.3984030.11±5.0294043.44±7.80104037.29±6.93效果例2扫描电镜观察方法。对实验中，对照组和实施例4组进行扫描电镜的观察。步骤如下。将取材的左侧耳蜗样品用缓冲液把组织表面洗净，在解剖显微镜下(OLYMPUS，TOKYO，297261)，用纤细钢针在耳蜗顶部打一小孔，一定要挑破前庭膜，再挑破圆窗膜和卵圆窗膜，并去除镫骨及足板，用细滴管将2.5％戊二醛固定液从蜗尖小孔和圆窗卵圆窗反复滴灌3-5次，明显看到液体从两窗流出。将样品浸泡在固定液中，置于4℃冰箱中4小时。置于0.1MPB缓冲液中，在解剖显微镜下在耳蜗各回骨壁钻孔，使耳蜗各回与固定液相通，再浸泡于固定液中4小时。用0.1MPB漂洗三次后，用1％OsO4后固定2小时。用0.1MPB漂洗20-30分钟。用乙醇梯度脱水，乙醇的浓度依次为30％-50％-70％-90％-100％(3次)，乙醇与乙酸异戊酯1:1的混合液10-20分钟；纯乙酸异戊酯10-20分钟。临界点干燥：装样：将样品从乙酸异戊酯中放入滤纸6中，移入临界点干燥仪的样品杯(高压容器)内，盖上盖并拧紧以防漏气。注入液态二氧化碳，依次打开二氧化碳钢瓶的排气阀和仪器的进气阀在0-10℃下，向样品杯注入液态二氧化碳。当液态二氧化碳充至样品杯容积的50％时，关闭仪器进气阀，静置15-20分钟，让乙酸异戊酯向液态二氧化碳中充分扩散，然后打开仪器打开仪器排气阀门和进气阀门，让其边排气边充气10分钟，再关闭排气阀，继续冲入液态二氧化碳至样品杯的80％左右关闭进气阀。加温置换：将温度调节设定在20℃处经15-20分钟后，由于温度升高，样品杯内液态二氧化碳逐渐气化，因此，压力也随之上升至7000Pa左右，样品中的乙酸异戊酯将二氧化碳充分置换。气化：将温度旋钮调至临界温度以上(35-40℃)，此时随着温度升高，样品杯内的压力也逐渐增加达到二氧化碳的临界点，界面也随之消失。当压力达到7134Pa时经5分钟后，即可排气。排气：在保持温度不变的情况下(即不关电源)打开流量计的排气阀门，以1.0L/分钟的速度排气，经2小时左右排气完毕，样品杯的压力下降到零将温度调节至室温约5分钟后，即可取出样品。离子溅射镀膜：将样品用双面胶带样品台上(注意样品观察的方向性)。将样品放入离子溅射仪的真空罩内，当真空罩内的真空度抽到10-1Pa时在阴极与阳极中间加上1000-3000V的直流电压，两极之间产生弧光放电的电场。在电场的作用下罩内残余的气体分子被电离为正离子和电子，正离子被阴极吸引轰击金属靶，激发出金属离子和电子，并被阳极吸引附着在样品表面而形成金属导电膜。扫描电镜观察在S-2700ScanningElectionMicroscopeHITACHI下进行。实验结果如图1-4所示。图1，图2为庆大霉素致聋90天后的毛细胞形态，可见毛细胞表面的纤毛破损严重。图3，图4为致聋后，采用实施例4方法进行治疗90天后的情况，由图可见，纤毛数量有了显著的提升，排列也较为均匀，规则。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3