专利名称：：一种血红蛋白多肽氨基酸营养物及其制备方法
技术领域：
：本发明属于保健药品、功能性食品领域，具体地说涉及一种血红蛋白多肽氨基酸营养物及其制备方法。二十世纪30年代末至50年代初，Rose提出EAA的概念并证实以氨基酸混合物代替食物蛋白可以维持氮平衡(RoseWC.FedProc，1949，8:546552.Ko卯leJD等.JClinInvest,1975，55:881-891)，氨基酸制剂能为生物体所利用，并可显著改善病人的营养状况。蛋白质降解产生的某些肽也能被生物体所吸收，而且与游离氨基酸相比，这些肽的体内吸收具有速度快、耗能低及吸收率高等优势(DanielH等.In:SoufrantWB，Hage—meisterH(Ed.)6lhInternationalSymposiumonDigestivePHysiologiinPigs[C].Du匪emtorfPubl.1994(1):1-7)。在机体内肽的吸收机制同游离氨基酸的吸收机制相互独立，互不干扰，这有助于减轻由于游离氨基酸间相互竞争共同的吸收位点而产生的吸收抑制，并且有利于机体对蛋白质的利用。血液蛋白质含有人体所需的8种必需氨基酸，其组成平衡，具有极高的生物效价，为优质蛋白源。目前，动物血液大部分被以污水的形式排放或丢弃，不仅造成大量营养资源的流失，而且还会严重地污染环境。在动物血液中，血红蛋白占其总蛋白质含量的6070%。血红蛋白生物活性肽具有很多极为重要的功能活性，如阿片样活性(BrantlV等.EurJPharmacol.1986,125:309-10.PiotJM等.BiochemBiophysResCoramun1992，189:101-110.ZhaoQY等.BiochemBiophysActa.1996,1295:73-80.Zhao,Q等.Biopolymers，1997，43:75-98.NybergF等.JohnWiley&Sons,Inc.Biopoly，1997,43:147-156.LignotB等.BiotechnolApplBiochem1999，30:201-207)、ACE抑制活性(Hyun，C.-K等.ProcessBiochemistry,2000,36:65-71)、增强血管舒缓激肽活性(PiotJM等.FEBSLett1992,299:75-79)、剌激细菌生长活性(Zhao，Q等，AnalyticaChimicaActa1997,352:201-220)、镇痛活
背景技术：
：性(TakagiH等.Nature1979，5737:410-412.ZhaoQY等，JLiqChromRelTechnol1997,20:1717-1739)、抗菌活性(DaoudR等，P印tides2005，26:713-719.FroidevauxR等，FEBSLett2001，491:159-163.Li印keC等，JChromatogrB2003，791:345-356.ParishCA等，BioorgMedChem2001，9:377-382.)等。因此，如果能够将动物血红蛋白加工成多肽和氨基酸产品，不仅可以充分利用廉价的动物血液资源，而且有助于保护环境。经检索，未发现有关利用动物血液制备血红蛋白多肽氨基酸营养物的报道。
发明内容本发明目的在于提供--种血红蛋白多肽氨基酸营养物。本发明的另一目的是提供血上述红蛋白多肽氨基酸营养物的制备方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为本发明一种血红蛋白多肽氨基酸营养物，按照如下方法制备(1)按照28%的重量百分比取血红蛋白千粉并溶于水中，得血红蛋白溶液，然后在8590。C下保温510min;(2)调节步骤(1)的血红蛋白溶液的pH4.62.3，并按照胃蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为l:60100的比例向血红蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH为1.62.3条件下进行水解78.5h，再在8590。C下保温510min;接着在4。C、4200g条件下离心1015min，取上清液，得血红蛋白水解产物；(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。上述血红蛋白多肽氨基酸营养物步骤(3)中所述的脱盐可以采用离子交换树脂进行。上述血红蛋白多肽氨基酸营养物步骤(1)中所述的血红蛋白干粉来自于猪血、牛血或鹅血等。所述的血红蛋白干粉可于市场上购买，或者利用动物血液经离心喷雾千燥制得。上述血红蛋白多肽氨基酸营养物歩骤(2)中所述的胃蛋白酶可自市场上购买，如Amresco公司生产的胃蛋白酶。一种血红蛋白多肽氨基酸营养液，按照如下方法制备按照重量百分比向上述血红蛋白多肽氨基酸营养物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%柠檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均匀，然后装瓶密封；再在110°C12(TC下灭菌1015min，后冷却至45。C，即得血红蛋白多肽氨基酸营养液。上述加入甘氨酸、柠檬酸、蔗糖的目的是减弱水解产物的苦味，能够起到较好的脱苦作用。血红蛋白多肽氨基酸千粉，按照如下方法制备将上述所得的血红蛋白多肽氨基酸营养物浓縮、冷冻千燥，得血红蛋白多肽氨基酸干粉。含有上述血红蛋白多肽氨基酸干粉的保健食品、保健药品或化妆品。上述血红蛋白多肽氨基酸营养物的制备方法，包括如下步骤(1)按照28%的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于水中，得血红蛋白溶液，然后在8590。C下保温510min;(2)调节步骤(1)的血红蛋白溶液的pH4.62.3，并按照蛋白酶与血红蛋白千粉的质量比为l:60100的比例向血红蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH为1.62.3条件下水解78.5h，再在8590。C下保温510min;接着在4。C、4200g条件下离心1015min，取上清液，得血红蛋白水解产物。(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐；即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。上述血红蛋白多肽氨基酸营养液的制备方法，方法如下按照重量百分比向血红蛋白多肽氨基酸营养物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%柠檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均匀，然后装瓶密封；再在110°C120。C下灭菌1015min，后冷却至45。C，即得血红蛋白多肽氨基酸营养液。上述血红蛋白多肽氨基酸干粉的制备方法，方法如下将上述所得的血红蛋白多肽氨基酸营养物浓縮、冷冻干燥，即得血红蛋白多肽氨基酸干粉。本发明具有的优点和有益效果(1)本发明是经食品级蛋白酶在温和条件下酶解获得的，其安全性高，无副作用，无不良风味；(2)本发明不仅能有效补充人体所需的必需氨基酸，而且具有抗氧化、免疫调节、降血压、降胆固醇等作用，为天然功能性生物制品；(3)本发明具有较好的口味；(4)本发明方法原料易得，方法简单、成本低，可降低生产成本30%以上；(5)本发明方法所用原料属于废物利用，减少了环境污染。图1为本发明血红蛋白多肽氨基酸营养液所含多肽的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱，A:标准蛋白；B:样品所含多肽具体实施例方式血红蛋白多肽氨基酸营养物的制备，按照如下步骤进行(1)取2g血红蛋白千粉(猪血经离心喷雾千燥制得)，溶于100ml水中，得重量百分比为2%的血红蛋白溶液，在9(TC下保温10min;(2)然后用1NNaOH和1NHCL血红蛋白溶液的pH至2.0，接着加入0.024g胃蛋白酶(购于Amresco公司)，然后在37。C、pH值为2.0下进行水解反应7h，再在90。C下保温10min，接着在4°C、4200g条件下离心10min，取上清液，得水解产物；(3)通过离子交换树脂步骤(2)所得水解产物进行脱盐，即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。水解产物灰分检测在钳埚中称取-一定量步骤(2)所得水解产物经脱盐、浓縮、冷冻干燥后的蛋白质多肽干粉—在电炉屮炭化至无烟—在500°C马福炉中灼烧到灰白色—冷却至200。C—移入干燥皿冷却到室温—称重灼烧1小时—冷却到恒重，测得其灰分为1.2%，说明产品灰分很低。实施例2血红蛋白多肽氨基酸营养液的制备按照重量百分比向实施例1所得的血红蛋白多肽氨基酸营养物中加入0.7%甘氨酸、0.4%柠檬酸和4.5%蔗糖，混合均匀，然后定量将其装瓶密封；再将其在12(TC下灭菌10min，后冷却至45。C，即得血红蛋白多肽氨基酸营养液。血红蛋白多肽氨基酸营养液的测定采用氨基酸自动分析仪进行检测。结果本发明中多肽氨基酸在血红蛋白多肽氨基酸营养液中的含量为1825%，而且氨基酸种类齐全(含18种氨基酸)，必需氨基酸含量占总氨基酸的43.8%(见表l)，说明本发明营养丰富，且营养均衡。表1各种氨基酸在本发明多肽氨基酸的总氨基酸中的含量百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例3:血红蛋白多肽氨基酸干粉的制备(1)取16g血红蛋白干粉(猪血经离心喷雾千燥制得)，溶于200ml水中，得重量百分比为8%的血红蛋白溶液，在9(TC下保温10min;(2)用1NNaOH或1NHCL调节血红蛋白溶液的pH至2.2，接着加入0.256g胃蛋白酶(购于Amresco公司)，然后在39"、pH值为2.2下水解8.5h，再在90。C下恒温10min，后在4。C、4200g条件下冷冻离心15min，取上清液，得血红蛋白水解产物；(3)接着通过离子交换树脂对步骤(2)所得血红蛋白水解产物进行脱盐，然后进行浓縮、冷冻干燥，得血红蛋白多肽氨基酸千粉。实施例4血红蛋白多肽氨基酸营养物的电泳检测试验将实施例1步骤(2)获得的水解产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(15%1\6%C)分析。采用Tris-glycin-Hcl系统进行电泳。其分离胶浓度为15%，浓縮胶浓度为2.67%，样品浓度为lmg/ml，上样量10y1，采用考马斯亮蓝R250进行染色，乙醇-冰醋酸进行脱色。结果(如图l)所示，血红蛋白已被酶解为许多低于14.4KD以下的低分子量多肽片段，这些低分子量多肽有利于人体吸收，说明本发明血红蛋白多肽氨基酸营养物的营养价值高。权利要求1.一种血红蛋白多肽氨基酸营养物，其特征在于按照如下方法制备(1)按照2～8％的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于水中，得血红蛋白溶液，然后在85～90℃下保温5～10min；(2)调节步骤(1)的血红蛋白溶液的pH＝1.6～2.3，接着按照胃蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为160～100的比例向血红蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在32～41℃、pH为1.6～2.3条件下进行水解7～8.5h，再在85～90℃下保温5～10min；接着在4℃、4200g条件下离心10～15min，取上清液，得血红蛋白水解产物；(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。2、按照权利要求1所述的营养物，其特征在于其步骤(1)中所述的血红蛋白干粉来自于猪血、牛血或鹅血。3、按照权利要求1或2所述的营养物，其特征在于其步骤(3)中所述的脱盐采用离子交换树脂进行。4、一种血红蛋白多肽氨基酸营养液，其特征在于按照如下方法制备按照重量百分比向权利要求1中所述的血红蛋白多肽氨基酸营养物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%柠檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均匀，然后装瓶密封；再在110。C120。C下灭菌1015min，后冷却至45。C，即得血红蛋白多肽氨基酸营养液。5、血红蛋白多肽氨基酸干粉，其特征在于按照如下方法制备-将权利要求1所述的血红蛋白多肽氨基酸营养物浓縮、冷冻干燥，即得血红蛋白多肽氨基酸干粉。6、含有权利要求5所述的血红蛋白多肽氨基酸干粉的食品、保健药品或化妆品。7、权利要求1所述的血红蛋白多肽氨基酸营养物的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)按照28%的重量百分比取血红蛋白干粉并溶于水中，得血红蛋白溶液，然后在8590。C下保温510min;(2)调节步骤(1)的血红蛋白溶液的pH二1.62.3，接着按照胃蛋白酶与血红蛋白干粉的质量比为1:60100的比例向血红蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH为1.62.3条件下水解78.5h，再在859(TC下保温510min;接着在4。C、4200g条件下离心1015min，取上清液，得血红蛋白水解产物。(3)对步骤(2)所得水解产物进行脱盐，即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。8、权利要求4所述的血红蛋白多肽氨基酸营养液的制备方法，其特征在于所述的制备方法如下按照重量百分比向血红蛋白多肽氨基酸营养物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%柠檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均匀，然后装瓶密封；再在110°C120。C下灭菌1015min，后冷却至45。C，即得血红蛋白多肽氨基酸营养液。9、权利要求5所述的血红蛋白多肽氨基酸千粉的制备方法，其特征在于所述的制备方法如下将权利要求1所述的血红蛋白多肽氨基酸营养物浓縮、冷冻干燥，即得血红蛋白多肽氨基酸干粉。全文摘要本发明公开了一种血红蛋白多肽氨基酸营养物及其制备方法。本发明主要是将血红蛋白干粉溶于水中，然后调节pH值为1.6～2.3，再加入胃蛋白酶，并在32～41℃、pH为1.6～2.3条件下水解7～8.5h；然后进行离心，取上清液，脱盐，即得血红蛋白多肽氨基酸营养物。经过添加调味剂，可制成血红蛋白多肽氨基酸营养液，或经浓缩、冷冻干燥制备成血红蛋白多肽氨基酸干粉。本发明安全性高，无副作用，无不良风味；其次，本发明产品含有人体所需的必需氨基酸，并具有抗氧化、免疫调节、降血压、降胆固醇等作用；此外，本发明方法原料易得，方法简单、成本低；本发明还减少了环境污染。文档编号A61K38/01GK101366943SQ200810222240公开日2009年2月18日申请日期2008年9月12日优先权日2008年9月12日发明者骞孙,沈慧星,罗永康申请人:中国农业大学