专利名称：用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说它是 一种用于口服给药的蜂毒肽 复合物纳米粒及其制法。
背景技术：
随着生物医药技术的发展,越来越多的蛋白多肽药物得到研究开发并
应用于临床。蜜蜂毒(Bee Venom ,简称蜂毒)是由蜜蜂毒腺产生后贮存 于毒囊中，当蜜蜂受刺激时从其尾部蛰针排出的一种毒液，其中有蜂毒肽、 蜂毒明肽、MCD肽、组胺、磷脂酶A2及透明质酸酶等，是含有多种天然肽 和酶的生物活性物质，在我国已有悠久的临床应用历史。蜂毒的主要成分 一蜂毒肽是由26个氨基酸组成的多肽，占蜂毒干重的50 %左右，具抗 菌、消炎、抗辐射、抗关节炎等作用，现代研究表明蜂毒肽还有显著的抗 肿瘤作用。我国蜂毒资源丰富，现代关于蜂毒的基础和临床研究也相当活 跃，但到目前为止，临床应用仍非常有限。 一方面蜂毒纯度不够，易导致 过敏；另一方面由于它的分子量大(约2840 ),稳定性易受温度、pH值 等的影响，在体内易降解，半衰期短。蜂毒的主要临床应用剂型为蜂毒注射 液，主要包括蜂毒水针剂、油针剂和冻干粉针剂，治疗关节炎的临床用法 一般为每日一次注射，连续20到30天一个疗程，需反复应用几个疗程。 如此频繁给药，患者的依从性差，并且副作用也大。
国内外医药工作者一直致力于蛋白多肽类药物的非注射给药途径的研 究，其中口服给药一直是最易为病人所接受的给药途径。胃肠道对蛋白质
多肽类药物的低吸收及其中的酶对药物的降解是口服给药面临的两个最大 障碍。蛋白多肽类药物分子量较大，脂溶性小，难以通过胃肠道生物粘膜； 易被消化道中的各种蛋白水解酶降解而失去生物活性。因此，对药物的结构 进行化学修饰，使其脂溶性增加或保护其不易被消化道酶降解，或者釆用一 些新型载体如脂质体、微囊、微球、纳米粒、乳剂等微粒给药系统也可有 效地促进药物经胃肠道吸收入血液循环。其中以聚合物为基质的纳米载体 越来越引起人们的关注。纳米粒经口服后主要被小肠的Peyer' s结中的M 细胞摄取，携带生物大分子以完整形式透过生物粘膜而进入循环系统，从 而提高口服药物的生物利用度。
国内外药学工作者釆用各种方法将水溶性多肽大分子载入纳米材料以 提高口服生物利用度，但仍没有突破性进展。尤其对于水溶性蛋白类药物， 不仅制备过程需要高温、高剪切、超声等剧烈条件，且其疏水性使水溶性 蛋白类药物包裹率较低(<60°/。 ) (YanP, HY Zhao, Hui X, et al. Effect of experimental parameters on the encap sulation of insulin2loaded poly ( lactide2co2glyco1ide) nanoparticles p repared by a double emulsion method [ J ]. J Chin Pha函Sci， 2002, 11 (1) : 38241.) 因此开发一种适宜的剂型，提高水溶性蛋白多肽类药物的包裹率，进而提 高其生物利用度是当今药学工作者的有待于攻破的一大难题。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒及其制 备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的
首先将蜂毒肽与两亲性物质形成紧密的复合物，然后釆用液相中乳化 溶剂扩散法将蜂毒肽复合物包裹入聚合物材料中，挥发溶剂后形成粒径在 10 ~ IOOOim范围的微粒。两亲性物质与蜂毒多肽形成复合物，脂溶性增 加更有利于胃肠道粘膜的吸收，提高口服生物利用度；且所制得的纳米粒 对蜂毒肽具有较高的包封率(〉90 % )。
蜂毒肽复合物纳米粒的制备如下将一定量的蜂毒肽和两亲性物质共 溶于水溶剂A中，形成复合率达到80~100%,疏水性蜂毒肽复合物，其中
两亲性物质是可用于口服制剂的离子型表面活性剂，包括去氧胆酸钠、油 酸钠、十二烷基硫酸钠等，蜂毒肽和两亲性物质的摩尔比为l: 5~7,水溶 剂A可以为蒸馏水、双蒸水、去离子水、生理盐水、pH值为l ll的磷酸盐 缓冲液或醋酸盐缓冲液或Tris缓冲液，水溶剂中复合物是白色沉淀，将其 冷冻干燥12小时，得到干燥的粉末，即蜂毒肽复合物。将蜂毒肽复合物与 适宜聚合物材料共溶于非水溶剂B中，其中聚合物材料为生物可降解型 聚乳酸、聚已内醋、乳酸和羟基乙酸、已内醋的二元或三元共聚物、聚乳 酸和聚乙二醇的嵌段共聚物、聚已内醋和聚乙二醇的嵌段共聚物、乳酸和 己内酯及羟基乙酸的二元或三元共聚物与聚乙二醇的嵌段共聚物、乳酸和 已内醋及羟基乙酸的二聚富马酸酐、聚原酸醋、聚氨基酸类；也可为非生 物可降解型丙烯酸树脂、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羟 丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙烯酸胺、聚苯乙烯；也可为前两者的 混合材料。蜂毒肽和聚合物材料的重量比为l: 15~30。非水溶剂B为乙醇、 丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基亚砜的单独或混合溶剂。搅拌 至澄清后，倾入含有适量亲水性乳化剂的水溶液中，其中，乳化剂可以是 阿拉伯胶、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油、海藻酸钠、明胶、泊洛沙姆、 聚乙烯醇、吐温80 、蔗糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠，乳化剂的质量浓度 为O. 5%~2%。随着非水溶剂B不断扩散到水中，聚合物析出并包裹或吸附 蜂毒肽复合物形成纳米级的颗粒。室温下搅拌至溶剂挥发完全后，得到蓝 色乳光的纳米混悬液。该混悬液可以进一步通过冷冻或喷雾千燥制成粉末， 以供压片或添入胶囊。
蜂毒肽复合物纳米粒中所包含的药物为经纯化后的蜂毒肽(90%以上) 混合物，其中蜂毒明肽以及其他天然过敏物质磷脂酶等含量很少，有效降 低过敏反应。 '
本发明的优点是蜂毒肽复合物纳米粒可以很好地克服蜂毒应用的瓶 颈，有助于推广蜂毒肽的临床使用。蜂毒肽复合物可以增强水溶性药物蜂 毒肽的亲脂性，并且在疏水性复合物的介导下可以将蜂毒肽包裹于髙分子 材料纳米载体中，包封率大于90 % ,载药量可达到3 % 10 %。载体 粒径在IO ~ 1000nm之间，有利于大分子的透粘膜吸收。制备过程温和，不需要高温、高速剪切力等剧烈条件，可保证多肽类药物的生物活性。
图1为蜂毒肽复合物纳米粒在模拟胃液中的释放
图2为蜂毒肽复合物纳米粒在模拟肠液中的释放
具体实施例方式
实施例1 :蜂毒肽-十二垸基硫酸钠复合物的制备 取袖g蜂毒肽和2.紐g十二烷基硫酸钠分别溶于lml蒸锢水，混合，收集 生成的白色沉淀，冷冻干燥12小时得到干燥的粉末。 实施例2:蜂毒肽-去氧胆酸钠复合物的制备
取2. 5mg蜂毒肽和2mg去氧胆酸钠分别溶于lml蒸馏水，混合，收集生成 的白色沉淀，冷冻干燥12小时得到干燥的粉末。
实施例3 :蜂毒肽复合物乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备
将分子量为10500的乳酸-羟基乙酸(75: 25 ) 140mg溶于4ml二甲 基亚砜溶剂中，搅拌均匀。取实施例1中制得的12mg蜂毒肽-十二烷基硫 酸钠复合物加入聚合物溶液中，搅拌至澄清。将上述溶液倾入到含有1 % 聚乙烯醇的水溶液中，500r/min室温搅拌4h,得到蓝色乳光的纳米混 悬液。电镜图片见图l。测得包封率为96 % 。
实施例4 :蜂毒肽复合物乳酸-羟基乙酸/羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸 酯纳米粒的制备
将分子量为15000的乳酸-羟基乙酸(75: 25 ) 108mg和羟丙甲基纤 维素邻苯二甲酸酯(HP-55) 15mg共溶于4ml乙醇一丙酮混合溶剂(两者比 例为1 : 9 )，搅拌均匀。取实施例2中制得的8mg蜂毒肽复合物冻干 粉末加入聚合物溶液中，搅拌至澄清。将上述溶液倾入到含有0. 5%泊洛沙 姆407的水溶液中，1000r / min室温搅拌4h ,得到蓝色乳光的纳米 混悬液。电镜图片见图2.测得包封率为92 % 。
实施例5 :蜂毒肽复合物纳米粒的释放
将实施例3和4中制备的纳米粒分别于模拟胃液(SGF )和模拟肠液(SIF) 中考察释放情况。分别精密称取实施例3 (处方a)和实施例4 (处方b)中 制备的纳米粒5mg，置于2ml释放介质中，分别于O、 0.25、 0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12和24小时离心，取上清液测定释放量。计算累积释放量，释 放情况见下图l，图2。
权利要求
1、用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒，其特征在于包括蜂毒肽、两亲性物质、聚合物材料、乳化剂，其中蜂毒肽和两亲性物质的摩尔比为1∶5～7；蜂毒肽和聚合物材料的重量比为1∶15～30；乳化剂的质量浓度为0.5％～2％。
2、 根据权利要求1所述的用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒，其 特征在于所述的两亲性物质为可用于口服制剂的离子型表面活性剂， 包括去氧胆酸钠、油酸钠、十二烷基硫酸钠。
3、 根据权利要求l所述的用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒，其特 征在于所述的聚合物材料聚乳酸、聚已内醋、乳酸和羟基乙酸、已内醋 的二元或三元共聚物、聚乳酸和聚乙二醇的嵌段共聚物、聚已内醋和聚乙 二醇的嵌段共聚物、乳酸和己内酯及羟基乙酸的二元或三元共聚物与聚乙 二醇的嵌段共聚物、乳酸和已内醋及羟基乙酸的二聚富马酸酐、聚原酸醋、 聚氨基酸类生物可降解型；也可为丙烯酸树脂、乙基纤维素、羟丙基甲基 纤维素琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙烯酸胺、聚苯乙 烯类非生物可降解型；也可为前两者的混合材料。
4、 根据权利要求l所述的用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒，其特 征在于所述的乳化剂为阿拉伯胶、聚维酮、聚氧乙烯氢化蓖麻油、海藻 酸钠、明胶、泊洛沙姆、聚乙烯醇、吐温80 、蔗糖脂肪酸酯、十二烷基 硫酸钠。
5、 一种如权利要求l所述的用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒的制 备方法，其特征在于用水溶剂A分别溶解蜂毒肽和两亲性物质，将蜂毒 肽药物溶液和两亲性物质溶液混合，将生成的疏水性离子配对沉淀物冷冻 干燥12小时，得到干燥的粉末，形成蜂毒肽复合物；将蜂毒肽复合物与聚 合物材料共溶于非水溶剂B中，搅拌至澄清后，倾入含有亲水性乳化剂的 水溶液中，室温搅拌，随着非水溶剂B不断扩散到水中，聚合物析出并包 裹或吸附蜂毒肽复合物形成纳米级的颗粒。
6、 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的水溶剂A为 蒸馏水、双蒸水、去离子水、生理盐水、pH值为l ll的磷酸盐缓冲液或醋 酸盐缓冲液或Tris缓冲液；非水溶剂B为乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲 烷、氯仿、二甲基亚砜的单独或混合溶剂。
7、 根据权利要求l所述的用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒，其特 征在于所述的蜂毒肽复合物的复合率达到80%~100%,蜂毒肽复合物纳米 粒粒径在10 1000nm范围内。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种用于口服给药的蜂毒肽复合物纳米粒及其制备方法。将水溶性蜂毒肽与两亲性物质共溶于水溶剂A中，形成疏水性蛋白离子配对复合物，然后将复合物与适宜聚合物材料共溶于非水溶剂B中，采用液相中乳化溶剂扩散法将该复合物包裹入聚合物材料中，挥发溶剂后形成粒径在10～1000nm范围的微粒。水溶剂A为蒸馏水、双蒸水、去离子水、生理盐水、pH值为1～11的磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液或Tris缓冲液；非水溶剂B为乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基亚砜的单独或混合溶剂。复合物的脂溶性高，纳米粒包封率大于90％。制备过程温和，可保证药物的生物活性。本发明适合制备成口服给药制剂。
文档编号A61K47/36GK101406691SQ200810228848
公开日2009年4月15日 申请日期2008年11月17日 优先权日2008年11月17日
发明者寸冬梅, 崔福德, 杨琳琳, 凯 石 申请人:沈阳药科大学