专利名称：：野生仙人掌多糖提取物的制备及高效降血清胆固醇的作用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种野生仙人掌多糖提取物的制备及高效降血清胆固醇的作用，特别涉及一种能显著降低高脂血症血清总胆固醇含量的野生仙人掌多糖提取物及其降血清胆固醇的作用机制。
背景技术：
：根据2002年中国居民健康和营养调査的结果，中国高血脂的人数己达1.6亿，其中高胆固醇的危害性最大。目前对于高胆固醇血症的治疗分为两个阶段生活方式的改变及药物治疗。生活方式的改变包括饮食治疗、增加体力活动、戒烟、消除过度精祌紧张、超重者减轻体重。经过饮食治疗等生活方式改善后，患者仍存在血脂异常现象，则应根据冠心病及与冠心病等同危险的疾病的有无进行药物治疗。目前临床应用的降胆固醇药物分为六大类(1)3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶抑制剂，即他汀类药物。常用药物有辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等。这类药物是目前临床应用最广泛、最重要的降胆固醇药物。此类药物降脂效果较好，能有效的降低体内的总胆固醇和低密度脂蛋白。但在治疗的同时，伴有一定的副作用，会出现胃肠道反应、皮疹，严重时可能出现肝功能异常、肌痛等，停药后会有好转。(2)苯氧芳酸类，也称贝特类。常用药物有氯贝特、苯扎贝特等，不良反应为消化道症状，可能会出现肝功能异常及肌肉损伤。他能增加脂蛋白酯酶的活性，加快代谢速度，有效降低血总甘油三脂及胆固醇水平，并可升高高密度脂蛋白水平。(3)烟酸及其衍生物，常用药物有烟酸、烟酸肌醇酯、阿西莫司(氧甲吡嗪)，可使血浆中游离脂肪酸浓度下降，并能有效治疗脂肪肝。此类药物是目前治疗高脂血症最有效的一种，但副作用最为明显，易出现面部潮红、皮肤瘙痒、胃部不适等不良反应。(4)胆酸螯合剂，常用药物有考来烯胺(消胆胺)、考来替泊(降胆宁)。它只能防止胆酸或胆固醇从肠道吸收，从而促进其排出，以降低胆固醇，降血脂效果较差，还容易出现无味觉、消化道症状等不良反应。(5)鱼油制剂，Omega-3脂肪酸，能轻度降低总甘油三脂(TG)，效果较差。(6)中药治疗，绞股蓝、人参茎叶皂苷、山楂提取物、姜黄素、葛根、回心草、枸杞、海藻、大黄、黄芪多糖、老山云芝多糖、槐耳多糖等都具有较好的降低血脂和改善脂代谢紊乱的作用，并且无明显的不良反应。临床研究表明，以经方硝矾石散为主组成的硝矾降脂颗粒(硝石、矾石、酒水蛭、川穹、益母草、山楂、泽泻、茯苓、首乌等药组成)具有明显降低总胆固醇、总甘油三脂、低密度脂蛋白及升高高密度脂蛋白的作用，与辛伐他汀比较，在提高血清高密度脂蛋白方面，优势明显。
发明内容为了克服现有的化学药物治疗副作用大、疗效较差等不足，本发明提供一种从天然植物野生仙人掌中提取的多糖，发现该多糖具有很好的降低血清总胆固醇含量和改善脂代谢紊乱的作用，无明显的不良反应。为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是一种野生仙人掌多糖提取物的制备方法，包括如下步骤(1)取新鲜仙人掌科植物野生仙人掌(OpimtiadilleniiHaw.),除刺去皮后用清水洗净，切碎、匀浆，用80%的乙醇室温浸泡5次，浸泡时间为12h，除去脂溶性物质，残渣于8(TC烘干、粉碎，过200目筛得仙人掌粉末；(2)按料液比1:30取仙人掌粉末加一定量的蒸馏水，加入0.5~1.0%果胶酶，温度为35~45°C，pH3.0~4.0，浸提时间为1.0~2.0h，合并水提取液，离心得水提液，减压浓縮；(3)加入35倍体积95%乙醇(4'C预冷)，静置12h，产生大量白色沉淀，离心收集沉淀，沉淀再用蒸馏水溶解，备用；(4)将蒸馏水溶解液离心去沉淀，浓縮到约原液体积1/2，-20^~室温反复5次冻融、离心，除去蛋白；(5)蒸馏水透析(截留分子量为3500Da)12h，收集透析袋内溶液，离心，弃去沉淀；(6)将离心出来的溶液浓缩，经冻干即得仙人掌多糖干粉。本发明还提供了根据上述方法制备的野生仙人掌多糖提取物的成份多糖和少量蛋白质，不含有淀粉、生物碱、甾体类物质(见附表1)。其中还原糖含量为3.018.0%;多糖的含量为55.080.0%;蛋白质含量为1.018.0%;核酸含量为5.018.0%。仙人掌多糖提取物降胆固醇作用体现在(1)明显改善高脂血症大鼠体重、摄食、饮水情况，见附图2-4;(2)明显改善血清中生化指标明显降低总胆固醇含量，与脂必妥组无显著性差异，低、中、高剂量组分别降低了32.37°/。、57.97°/。、78.73%;明显升高高密度脂蛋白含量，降低低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和动脉硬化指数，低、中、高剂量组的高密度脂蛋白含量分别升高了3.70%、11.11%、35.18%,低密度脂蛋白含量分别降低了2.91%、18.52%、32.80°/。，有明显的剂量依赖性，见附表2、4;(3)对脂肪肝具有一定的疗效显著降低肝体比值；低、中、高三个剂量组大鼠肝脏中总胆固醇含量分别下降了8.51%、49.01%、64.90%;总甘油三脂含量分别下降了7.6%、33.84%、62.13%，见附表5-6，附图5-6。本发明具有的有益效果是本发明的取材方便，提取工艺简单，且在治疗高脂血症血脂异常方面具有高效、低毒、疗效明确的特点，同时能加强丰富的野生仙人掌资源的开发和利用。本发明的仙人掌多糖降胆固醇的作用，其机制是(1)卵磷脂胆固醇酰基转移酶酶是体内脂蛋白代谢的关键酶之一，它主要参与高密度脂蛋白的成熟过程和总胆固醇逆转运过程，所以此酶活性的下降可导致高脂血症及动脉粥样硬化。因此，仙人掌多糖通过提高卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性(户<0.01)来实现对脂代谢紊乱的调节。其中低、中、高剂量组对卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性分别增高了34.93%，39.08%，88.41°/。，并且优于阳性对照组(脂必妥治疗组)(见附表3)。(2)肝3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶是胆固醇合成的主要限速酶，此酶活性的升高，肝脏内胆固醇合成量也随之增高。给予仙人掌多糖后肝3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶活性明显降低(尸<0.05)，从而减少了肝脏中胆固醇的合成量，调节了脂代谢并对脂肪肝起到了很好的保护作用(见附表7)。仙人掌多糖提取物，其作用是(1)明显改善高脂血症大鼠体重、摄食、饮水情况(P<0.05)(见附图2-4)。(2)明显改善血清中生化指标明显降低总胆固醇含量，与脂必妥组无显著性差异。低、中、高剂量组分别降低了32.37%、57.97°/。、78.73%(P<0.01);明显升高高密度脂蛋白含量(P<0.01)，降低低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和AI(P<0.01)。低、中、高剂量组的高密度脂蛋白含量分别升高了3.70%、11.11%、35.18%，同时低密度脂蛋白含量分别降低了2.91%、18.52%、32.80%，有明显的剂量依赖性(见附表2、4)。(3)对脂肪肝具有一定的疗效显著降低肝体比值(PO.05);低、中、高三个剂量组大鼠肝脏中总胆固醇含量分别下降了8.51°/。，49.01%,64.90%(PO.01);总甘油三脂含量分别下降了7.6%,33.84°/。，62.13%(P<0.01)(见附表5-6，附图5-6)。本发明各个方面的细节将在后面进行详尽地描述，通过后面详尽地描述，本发明的特点、目的及优势会更加明显地表达出来。图1为仙人掌水溶性粗多糖提取流程图2为仙人掌多糖对高脂血症大鼠每周体重的影响；A:造模前；B:造模后；C:给药第一周；D:给药第二周；E:给药第三周；F:给药第四周(注与正常组比较*尸<0.05，与模型组比较VO.05);图3为仙人掌多糖对高脂血症大鼠每日饮水量的影响；A:给药第一周；B:给药第二周；C:给药第三周；D:给药第四周(注与模型组比较*尸<0.05，各组前后两周的比较&PO.05);图4为仙人掌多糖对高脂血症大鼠每日摄食量的影响；A:给药第一周；B:给药第二周；C:给药第三周；D:给药第四周(注与模型组比较*尸<0.05，各组前后两周的比较&尸<0.05);图5为实验大鼠肝脏大体情况；A、B正常对照组；C、D模型对照组；E仙人掌多糖中剂量组；F仙人掌多糖高剂量组；图6为实验大鼠肝组织形态检查；A正常组大鼠肝组织形态检査(HE染色xl00);B模型组大鼠肝组织形态检查(HE染色xl00);C模型组大鼠肝组织形态检査(HE染色x200);D模型组大鼠肝组织形态检査(HE染色x200);E仙人掌多糖中剂量组大鼠肝组织形态检查(HE染色X100);F仙人掌多糖高剂量组大鼠肝组织形态检査(HE染色X100)。附表1为仙人掌多糖成分鉴定表；附表2为仙人掌多糖对高脂血症大鼠血清总胆固醇、总甘油三脂含量的影响(n=10，X±S);附表3为仙人掌多糖对高脂血症大鼠血清中血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的影响(n=10，x±s);附表4为仙人掌多糖对高脂血症大鼠血脂蛋白含量的影响(n=10，x±s);附表5为仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝体比值的影响(n=10，x±s);附表6为仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝脂质的影响(n=10，x±s);附表7为仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性的影响0=10，x±s)。具体实施例方式以下结合附图及实施例对本发明作进一步地详述，可以理解的是，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。实施例A.仙人掌水溶性多糖的提取取新鲜仙人掌，除刺去皮后用清水洗净，切碎、匀浆，用80%的乙醇室温浸泡5次，浸泡时间为12h,除去脂溶性物质，残渣于80°C烘干、粉碎，过200目筛得仙人掌粉末。取一定量仙人掌粉末(料液比1:30)加入IOOOmL蒸馏水，匀浆，加入0.7%果胶酶，温度40'C，pH3.5，浸提1.5h后离心，合并上清，减压浓缩。加入4倍体积95%乙醇(4'C预冷)，静置12h，产生大量白色沉淀，离心收集沉淀，再用蒸馏水溶解。浓縮到约原液体积1/2，-2(TC室温反复5次冻融、离心，除蛋白。蒸馏水透析(截留分子量为3500Da)12h，收集透析袋内溶液，离心，弃沉淀，上清液经冷冻干燥即得仙人掌多糖。B.高脂血症模型的建立高脂血症大鼠模型的建立雄性SD大鼠，分笼，标记，称重，喂饲高脂乳剂10d后，禁食8h尾部采血测血脂(总胆固醇和总甘油三脂)，总胆固醇〉6mmol丄"，总甘油三脂〉3mmoH;1)即确定为高脂血症动物模型。C.给药与分组实验动物分为正常对照组，高脂模型对照组，药物对照组(脂必妥组)和仙人掌多糖低、中、高剂量组(剂量分别为100、200、400mg'kg".cT1)，每组10只。期间自由饮水和摄食，实验期为四周。每天记录大鼠的饮水量和进食量，每周记录大鼠体重，进行组间统计。D.仙人掌多糖低、中、高剂量灌胃高脂血症大鼠各指标检测四周后，通过与正常大鼠及经脂必妥治疗的高脂血症大鼠比较饮水量、进食量、体重；血清的总胆固醇含量、甘油三脂含量、卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性；血脂蛋白含量；肝脏的肝体比重、总胆固醇含量、甘油三脂含量、3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性进行比较，并对肝脏进行了肉眼观察及组织病理学检测。具体实验步骤如下一、材料与方法(一)仙人掌水溶性多糖的提取(附图1)1.取新鲜仙人掌科植物野生仙人掌，除刺去皮后用清水洗净，切碎、匀浆，用80%的乙醇室温浸泡5次，浸泡时间为12h，除去脂溶性物质，残渣于80"烘干、粉碎，过200目筛得仙人掌粉末。2.取33.33g的仙人掌粉末，按料加lOOOmL的蒸馏水(料液比1:30)，匀浆，加入0.7°/0果胶酶，温度40。C，pH3.5，浸提1.5h后离心，合并上清，减压浓缩至300~350mL。3.加入4倍体积95%乙醇(4'C预冷)，静置12h,产生大量白色沉淀，离心收集沉淀，再用蒸馏水溶解。4.离心去沉淀，浓縮到约原液体积1/2，-20卩~室温反复5次冻融、离心，除蛋白。5.蒸馏水透析(截留分子量为3500Da)12h，收集透析袋内溶液，离心，弃沉淀。6.上清液经冷冻干燥，得仙人掌多糖干粉3.49g。(二)动物分组及给药方法高脂血症大鼠模型的建立雄性SD大鼠，分笼，标记，称重，喂饲高脂乳剂10d后，禁食8h，尾部采血测血脂(总胆固醇和总甘油三脂)，总胆固醇>6mmol'I/1，总甘油三脂>Smmol*!/1)即确定为高脂血症动物模型。实验大鼠的分组情况<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>给药与分组实验动物分为正常对照组，高脂模型对照组，药物对照组(脂必妥组)和仙人掌多糖低、中、高剂量组(剂量分别为100、200、400mg'kg".d—1)，每组10只(附表l)。期间自由饮水和摄食，实验期为四周。每天记录大鼠的饮水量和进食量，每周记录大鼠体重，进行组间统计。(三)取样及样品制备第一周、第二周末，所有动物禁食8h，不禁水，尾部采血测定总胆固醇和总甘油三脂。第26d开始停止高脂乳剂的喂饲。第四周末(第29d)，中午两点左右所有动物禁食8h，不禁水。晚上10点左右，腹腔注射1%戊巴比妥钠(40mg/kg)，麻醉后从腹主动脉取血，一部分为抗凝血(乙二胺四乙酸抗凝)，4。C保存；一部分为非抗凝血，室温放置数小时后，3000rpm离心5min，然后分离上层血清为测试样品。同时，立即剖腹取肝脏及主动脉，用4'C预冷的生理盐水冲尽表面浮血，滤纸拭干，剪取3~5cm主动脉直接放入10%的福尔马林中浸泡，肝脏称重，计算肝脏指数(肝重/体重x100%)。取大鼠肝脏小叶，切取组织块5x5x2mm3，置10%福尔马林中固定24h;另称取0.5g肝组织，剪碎，放于玻璃匀浆器中，加预冷的9倍体积的0.86%生理盐水匀浆，2500~3000rpm离心10min，取上清，得到10%的肝匀浆液置4'C保存备用；再称取两份100mg肝组织，—70。C保存备用。(四)肝脏蛋白质含量的测定蛋白质含量采用Bradford法测定。将牛血清蛋白配制成1mg'mL—M容液，即贮备液。吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1,4、1.6mLjC备液，分别稀释至2mL，吸取各稀释液O.lmL(含蛋白质2(K80pg)，然后加入蛋白质染色剂5mL，充分振荡，在5~20min内，以双蒸水为空白对照于595nm波长处测定OD值，计算回归方程。肝脏蛋白含量测定时吸取1%肝匀浆液(10%肝匀浆液稀释得到)0.1mL。按上述步骤操作，测定ODw5，以标准曲线计算蛋白质含量。(五)血清中生化指标的测定1.血清中血脂的测定血清总胆固醇的含量用CHOD-PAP法测定，甘油三酯的含量用GPO-PAP法测定，高密度脂蛋白胆固醇的含量用PTA-Mg2+沉淀法测定，低密度脂蛋白胆固醇的含量用PVS沉淀法。具体操作参见南京建成试剂盒说明书。同时根据Friendwald公式计算极低密度脂蛋白含量和动脉硬化指数。Friendwald公式①高密度脂蛋白含量(mmol-L.1)=0.2x总甘油三脂②动脉硬化指数-总胆固醇/高密度脂蛋白2.血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的测定采用改良的Spen:y法(自身底物法)，取两份新鲜血清O.lmL，其中一份置56°C水浴，另一份置37。C水浴，各lh，立即分别测定游离胆固醇的含量(参见南京建成试剂盒说明书)。(六)肝组织中各指标的测定1.肝脂质的测定取100mg肝组织置于匀浆器中，加入2mL氯仿-甲醇(1:1体积)匀浆，离心(3500rpm,20min)取上清液，测定总胆固醇和总甘油三脂的含量(参见南京建成试剂盒说明书)。2.肝脏3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性的测定(1)肝脏微粒体的制备(采用钙离子沉淀法)取2g肝脏在冰上剪成细小块，将剪好的组织悬浮于冰匀浆缓冲液中(4mL/g肝脏)，匀浆20min左右，9000xg离心20min(4°C，下同)；吸取上清液，l卯00xg离心20min;吸上清液，力卩88mmol/L的氯化钙溶液(1:10，体积比)，冰置5min，偶尔振摇；27000xg离心20min;取沉淀物，加缓冲液5mL，混匀，27000xg离心30min;取沉淀物，加10mmol/L的二硫苏糖醇溶液，制成浓度为80mg/mL的悬浮微粒溶液。此溶液再匀浆约lmin后，置于-20'C储存。(2)肝微粒体3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的增溶37'C下解冻样品，加入等体积含50%甘油和1Ommol/L二硫苏糖醇的溶液，37。C匀浆IO次后，37°C水浴lh，再匀浆10次；25'C以下'500xg离心lh，吸上清液，一部分用于蛋白含量的测定，另一部分用于光谱测定还原酶活力。(3)可溶性还原酶的测定取两份混合溶液(600pL磷酸缓冲液，100^L2mmol/L还原型辅酶n溶液，IO(VL蒸馏水)，一份加IO(VL制备好的酶溶液，一份加lmmol/L(R，S)-3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A溶液，充分混匀，同时于37。C水浴3min，再立即在350nm处测定吸光度值，求出两者的差值AA。(4)蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法。(5)计算方法3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶一个酶活力单位相当于每分钟每毫克蛋白氧化还原型辅酶II的毫克数。3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶比活力(mol.min"'mgProtein")=AAxif)-3+(6.22x10.3)x(l十0.1)+蛋白质含量(g.L")注AA是每分钟吸光度的变化值，6.22xl(^是还原型辅酶II在350nm处的摩尔吸光系数，O.l是酶液体积，l是总反应体积。3.肝脏组织病理学观察取用10%的福尔马林固定的肝脏按常规石蜡包埋，切片，HE(苏木精伊红)染色，镜下观察肝组织病理学变化。二、仙人掌水溶性多糖的成分分析(一)仙人掌多糖的成分鉴定仙人掌粗多糖由多糖和少量蛋白质组成，不含有淀粉、生物碱、甾体类物质(附表O。(二)仙人掌多糖的组分分析仙人掌粗多糖还原糖含量为3.38%;多糖的含量为56.82%;蛋白质含量为1.93%;核酸含量为7.35%。四、仙人掌多糖对高血脂模型大鼠的治疗作用(一)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠体重的影响(附图2)灌食高脂乳剂一个星期后，各实验组大鼠与正常组比较有显著性差异(P<0.05)，建模成功；给药第四周，脂必妥组和中、高剂量组的大鼠的体重有明显的上升，与模型组有明显的差异性(户<0.05)。(二)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠饮水量(附图3)及摄食量(附图4)的影响10实验期间，从给药第二周开始，脂必妥组与模型组比较，饮水量明显增加；从给药第三周开始，中、高剂量组和脂必妥组，与模型组比较有显著性差异(户<0.05)。在第二周后，仙人掌多糖治疗各组前后两周比较有显著性差异(i3〈0.05)。对摄食量的影响与饮水量结果相似。(三)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠肝脏形态和组织结构的影响1.对肝脏形态的影响(附图5)正常组大鼠肝脏无异常变化，颜色红润，质软；模型组大鼠肝脏肿大，呈灰白色脂肪变性，切面油腻，属于典型的脂肪肝；而仙人掌多糖高剂量组肝脏呈淡红色，脂肪肝程度较高脂组轻，只有少许脂肪沉积的油状感。2.对肝脏组织结构的影响(附图6)正常组肝结构正常，肝索以中央静脉为中心成放射状向四周排列，肝小叶轮廓清晰，肝细胞呈现多边形，细胞边界清晰，核圆而清楚，位于细胞中央，胞质丰富。模型组肝索紊乱，大量肝细胞肿胀、水样变性；胞质内见大小不等的圆形脂滴，即肝细胞脂肪变性，核被挤、向边缘；伴小叶内、汇管区炎细胞浸润及肝细胞点状或片状坏死。上述改变均以肝腺泡3区(小叶中央静脉周围)变化最为明显，提示脂肪肝及脂肪性肝炎造模成功，病理模型稳定。仙人掌多糖各治疗组肝细胞结构仙人掌多糖中剂量稍有好转，水样变性减少，可见少量脂滴；仙人掌多糖高剂量组肝细胞结构完整，细胞水样变性消失，胞质内圆形脂滴明显减少，汇管区少量炎细胞浸润。(四)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠血清总胆固醇、总甘油三脂含量的影响(附表2)血清中总胆固醇、总甘油三脂含量增多，表明脂质代谢失调。造模后，大鼠血清中的总胆固醇和甘油三酯含量都有明显的升高(/><0.01)，但各组间血脂水平差异无显著性，显示造模成功。第一周末，脂必妥组大鼠血清总胆固醇含量有明显的下降，与模型组比较有明显的差异(PO.01);仙人掌多糖高剂量组大鼠血清总胆固醇含量稍有下降，但与模型组比较无差异性。第二周末，高剂量组大鼠血清中的总胆固醇含量有降低，降低了34.9%，与模型组相比有显著性差异(PO.Ol)，但对大鼠血清中的总甘油三脂含量未有明显影响。第四周末，仙人掌多糖各剂量组对大鼠血清中总胆固醇含量有明显降低，尤其是高剂量组对大鼠血清中的总胆固醇含量有明显的降低，并且与脂必妥组无显著性差异，降低率达到78.73%(户<0.01);低、中、高剂量组对大鼠血清中的总甘油三脂含量都有降低，分别降低了10.6%，25.1%，26.3%(户<0.01)。(五)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的影响(附表3)血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶是体内脂蛋白代谢的关键酶之一，它主要参与高密度脂蛋白的成熟过程和总胆固醇逆转运过程，所以此酶活性的下降可导致高脂血症及动脉粥样硬化。与正常组相比，高脂模型组血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性显著降低(尸O.Ol)。与高脂模型组相比，仙人掌多糖各剂量组可显著提高血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性(尸<0.01)，低、中、高剂量组对血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性分别增高了34.93%，39.08°/。，88.41%。仙人掌多糖对高脂血症大鼠血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的影响优于阳性对照组。(六)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠血浆脂蛋白含量的影响(附表4)第四周末，模型组与正常组相比，高密度脂蛋白含量显著降低(P<0.01)，低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和动脉硬化指数显著升高(户<0.01);OPS各剂量组与模型组相比，仙人掌多糖高剂量组高密度脂蛋白含量明显高于模型对照组，低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和动脉硬化指数明显低于模型对照组(P<0.01)。低、中、高三个剂量组大鼠的高密度脂蛋白含量分别升高了3.70%、11.11%、35.18%，同时低密度脂蛋白含量分别降低了2.91%、18.52%、32.80%。因此，高密度脂蛋白含量随着样品剂量的加大而增大，低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和动脉樱花指数随着样品剂量的加大而减小，都有明显的剂量依赖性。(七)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠肝体比值的影响(附表5)高脂血症大鼠的体重明显下降，在喂词仙人掌多糖后稍有好转；肝重无显著变化，只是药物组比模型组的肝脏略小，无统计学意义。但高剂量治疗组的肝体比值明显低于模型组，有显著性差异CP<0.05)。(八)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠肝脏脂质含量的影响(附表6)脂肪乳剂能促进肝脏胆固醇增加，肝脏甘油三酯蓄积，与正常组比较呈极显著性差异(尸<0.01)。灌食仙人掌多糖后，高脂血症大鼠中肝脏胆固醇和甘油三酯含量明显降低，低、中、高三个剂量组大鼠肝脏中总胆固醇含量分别下降了8.51%，49.01%，64.90%(/><0.01);总甘油三脂含量分别下降了7.6%,33.84%，62.13%(尸<0.01)。此结果说明仙人掌多糖对脂肪肝具有一定的疗效。(九)仙人掌多糖对高血脂模型大鼠肝脏3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性的影响(附表7)肝脏3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶是胆固醇合成的主要限速酶，此酶活性的升高，肝脏内胆固醇合成量也随之增高。模型组肝3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活力明显高于正常组(P<0.05)，给予仙人掌多糖后治疗组较模型组明显降低，有统计学意义(P<0.05)，但无量效关系。附表附件<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>'尸O.Ol，与正常组比较；e尸O.Ol，与模型组比较；*<0.01，与脂必妥组比较。附表4仙人掌多糖对高脂血症大鼠血脂蛋白含量的影响(n=10，x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>'尸O.Ol，与正常组比较；？<0.01，与模型组比较;1尸<0.01，与脂必妥组比较。附表5仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝体比值的影响(n=10，x±s)组别剂量/mg.kg-'.cT1体重/g肝重/g肝体比/%正常组377.70±15.8311.43±1.470細±0扁*模型组228.50±10.238.95±0.410.039±0.002脂必妥组187.5253.00±21.327.68±0.770.032±0.002*仙人掌多糖组100233.75±14.228.57±U90.037±0.003200238.83±26.528.59±0.790.036±0.003400244.58±14.917.99±0.670.033±0.002'*尸<0.05，与模型组比较。附表6仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝脂质的影响(ri=10，x±s)组别剂量/mg-kg-'.d-1总胆固醇含量/nmol'g-1总甘油三脂含量/rnnol'g-1正常组3.14±0.26c2.83±0.26c模型组11.51±2.26ad10.43±1.77ad脂必妥组187.53.16±0.29c3.54±0.15e仙人掌多糖组10010.53±1.03ad9.64±3.81ad2005.87±0.34acd6.90±0.28acd4004.04±0.31c3.95±0.17ca尸〈0.01，与正常组比较；e尸O.Ol，与模型组比较；d户0.01，与脂必妥组比较。附表7仙人掌多糖对高脂血症大鼠肝3-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶活性的影响(n-lO，x±s)组别剂量/mg'kg"-cT13-羟基，3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶/nmol.min".mgProtein-1正常组1.55±0.19ef模型组2.20±0.27f脂必妥组1.81±0.09e<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>:尸<0.05，与模型组比较；"><0.05，与脂必妥组比较。权利要求1.一种野生仙人掌多糖提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)取新鲜仙人掌科植物野生仙人掌(OpuntiadilleniiHaw.)，除刺去皮后用清水洗净，切碎、匀浆，用80％的乙醇室温浸泡5次，浸泡时间为12h，除去脂溶性物质，残渣于80℃烘干、粉碎，过200目筛得仙人掌粉末；(2)按料液比1∶30取仙人掌粉末加一定量的蒸馏水，加入0.5～1.0％果胶酶，温度为35～45℃，pH3.0～4.0，浸提时间为1.0～2.0h，合并水提取液，离心得水提液，减压浓缩；(3)加入3～5倍体积95％乙醇(4℃预冷)，静置12h，产生大量白色沉淀，离心收集沉淀，沉淀再用蒸馏水溶解，备用；(4)将蒸馏水溶解液离心去沉淀，浓缩到约原液体积1/2，-20℃～室温反复5次冻融、离心，除去蛋白；(5)蒸馏水透析(截留分子量为3500Da)12h，收集透析袋内溶液，离心，弃去沉淀；(6)将离心出来的溶液浓缩，经冻干即得仙人掌多糖干粉。2.—种根据权利要求1所述方法制备的野生仙人掌多糖提取物，其特征在于它含有如下重量比成份还原糖含量为3.018.0%;多糖的含量为55.080.0%;蛋白质含量为1.018.0%;核酸含量为5.018.0°/0。3.根据权利要求1所述获得的仙人掌多糖提取物，其降胆固醇作用体现在所述的仙人掌多糖提取物明显改善高脂血症大鼠体重、摄食、饮水情况见附图2-4;明显改善血清中生化指标；明显降低总胆固醇含量，与脂必妥组无显著性差异，低、中、高剂量组分别降低了32.37%、57.97%、78.73°/。；明显升高高密度脂蛋白含量，降低低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白含量和动脉硬化指数，低、中、高剂量组的高密度脂蛋白含量分别升高了3.70%、11.11%、35.18%,低密度脂蛋白含量分别降低了2.91%、18.52%、32.80%，有明显的剂量依赖性见附表2、4;对脂肪肝具有一定的疗效显著降低肝体比值；低、中、高三个剂量组大鼠肝脏中总胆固醇含量分别下降了8.51%、49.01%、64.90%;总甘油三脂含量分别下降了7.6%、33.84%、62.13%见附表5-6。全文摘要本发明涉及一种野生仙人掌多糖提取物的制备及高效降血清胆固醇的作用，该提取物是从天然植物野生仙人掌中提取的一种多糖，可通过提高体内脂代谢关键酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性、降低肝脏胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶活性，实现降低高胆固醇血症中总胆固醇含量，明显改善脂代谢紊乱的作用，并且无明显的不良反应，可用于降低胆固醇的药品的制备。文档编号A61K36/33GK101474235SQ20091003673公开日2009年7月8日申请日期2009年1月19日优先权日2009年1月19日发明者兰琦杰,张松莲,曾富华,杨小舟,陶美华,卫黄申请人:湛江师范学院