专利名称：一种育珠免疫增强剂的制备方法
技术领域：
本发明属于一种免疫增强剂的制备方法。
背景技术：
自古至今，珍珠一直被认为是一种最珍贵和最有价值的物品，是富贵 和权利的象 征。她可以作为装饰品，让人佩带起来显得高贵、纯洁和典雅；她具有神奇的药用功效，据药 典记载珍珠性寒无毒，有镇心润颜、止渴坠痰、点目去膜、催下死胎，可治小儿惊风、腹泻、 创伤、抽搐和心悸等，在中药上的应用比较广泛；此外，珍珠也是美容保健佳品，她含有十多 种人体必需氨基酸和二十多种微量元素，还含有特殊的抗衰老因子_卟啉类化合物，其美 容功效十分显著。目前用于培育海水珍珠的珍珠母贝，主要是马氏珠母贝(又名合浦珠母贝、马氏 珍珠贝)、大珠母贝(又称白蝶贝)、珠母贝(又称黑蝶贝)以及企鹅珍珠贝)，我国海水珍 珠业经过40多年的发展，已形成产业化、规模化生产，年产量已达30t，产量占据了世界的 95%以上，已超过日本的产量，在国际市场上占有重要地位，但在发展的过程中也暴露出一 些问题[3]。比如海水珍珠养殖缺乏全面科学规划，造成休养贝死亡率高、吐核率高，育珠贝 存活率低、留核率低、商品珠比率低的现象，造成了母贝资源和入力资源的浪费。目前，药物处理细胞小片是一种比较常见的提高母贝留核率的方法，从传统的紫 药水、红药水处理小片；发展到采用金霉素、链霉素、四环素、呋喃类药物处理；近几年研究 的热点集中在细胞小片的保养液，其中包括ATP、PVP、促珠泌素、细胞色素C、卵磷脂等保养 液。使用保养液的目的大致有五个方面一是维持细胞小片内外环境渗透压的平衡，保证细 胞小片离体后不被干死；二是杀菌灭毒，避免病菌感染；三是加速伤口愈合，促进珍珠质分 泌；四是维持细胞呼吸所需的中性环境；五是提高手术受体贝的成活率。上述的药物处理 细胞小片的方法，在一定程度上提高了母贝的留核率和成活率，但是相对来说，作用时间不 是很持久，长时间采用容易造成母贝的抗逆性反应。珍珠的形成过程，通常是由软体部(通常是外套膜)的上皮细胞分泌一种与珍珠 的化学组成很相近的粘液，经酶的作用和自然脱水等过程，形成层覆一层的珍珠结构，贝类 的外套膜与贝壳和珍珠的形成有非常直接的关系。研究表明细胞小片的外表皮细胞有强的 碱性磷酸酶活性，表明该酶与珍珠的形成有密切的关系，它不仅涉及蛋白质的分泌，还参与 蛋白质的合成以及贝壳与珍珠质前身物质的形成与矿化过程。此外，碱性磷酸酶是一种金 属酶，其活性中心主要是Mg2+、Zn2+。而具有该金属的螯合物，在一定程度上可以提高碱性磷 酸酶的活性，从而促进珍珠的形成。生物组织液即母贝自身组织勻浆液，可以降低母贝对异 己的识别能力，从而降低母贝对珠核的排斥力。
发明内容
本发明的目的是提供一种育珠免疫增强剂的制备方法，研究一种新的细胞小片保 养液，来提高母贝的留核率和成活率。通过合成的Zn2+金属螯合物作为主体物质，添加适量的生物组织液作为调节剂，最后添加其他辅料，制备成为一种新型的珠母贝细胞小片保养液一免疫增强剂。其作用机理主要是通过化学和生物调控作用，降低母贝的分子识别能 力，减少排斥反应，提高珠母贝的留核率，从而可以提高珍珠的产量和品质，进一步将带动 南珠产业的发展，从而将繁荣我国海水珍珠产业。本发明的育珠免疫增强剂制备包括三个步骤(I)Zn2+金属螯合物的诱导合成采用溶剂挥发法合成本发明化合物，其步骤为a.各取20mmol有机配体化合物(邻啡罗啉和水杨酸)，充分搅拌，过滤；b.称量20mmOlZnCl2，用5ml蒸馏水溶解，搅拌使完全溶解，过滤；c.将上述两种溶液混合，水浴加热，搅拌下滴加0. lmol/L的NaOH调节混合溶液 PH值；d.混合溶液冷却至室温，过滤，静置；e.滤液放置一星期后得到本发明化合物。Zn2+金属螯合物结构式如下(见说明书附图)本发明合成的螯合物是由一分子邻啡罗啉和水杨酸与一分子Cu2+配位合成。邻啡 罗啉和水杨酸可以从试剂公司购买纯品。(2)生物组织液的制备在育珠过程中吐核的珠母贝或者是不能在插核的珠母贝为原材料，将这些贝的外 套边缘组织取出，勻浆，制备成10%的生物组织液，于-4°c保存。(3)育珠免疫增强剂的制备育珠免疫增强剂成分及配比如下Zn2+金属螯合物0.1-1. Og生物组织液10_30mL卵磷脂0. 1-1. OgATPI-IOmL抗生素0. Ol-IgCaCl20. 1-1. OgKCl0. Olg-O. Ig0.4% 生理盐水IOOOmL将上述各种固体成分按照适当比例混合，用0.4%生理盐水充分溶解，再加入 ATP、抗生素溶液及生物组织液，最后用0. 4%生理盐水定容即可。本发明是通过化学和生物调控作用，降低母贝的分子识别能力，减少排斥反应，提 高珠母贝的留核率，从而可以提高珍珠的产量和品质，进一步将带动南珠产业的发展，从而 将繁荣我国海水珍珠产业。
图1是本发明Zn2+金属螯合物单晶分子结构图；图2是本发明Zn2+金属螯合物的空间螺旋链结构图。
具体实施例方式实施例1育珠免疫增强剂育珠免疫增强剂成分及配比如下Zn2+金属螯合物0. 4g生物组织液15mL卵磷脂0. 3gATP6mL青霉素0. IgCaCl20. IgKCl0. 02g0· 4% 生理盐水 IOOOmL将上述各种固体成分按照适当比例混合，用0.4%生理盐水充分溶解，再加入 ATP、抗生素溶液及生物组织液，最后用0. 4%生理盐水定容即可。实施例2育珠免疫增强剂育珠免疫增强剂成分及配比如下Zn2+金属螯合物0. 8g生物组织液30mL卵磷脂6gATP7mL硫酸链霉素0. 6gCaCl20. 4gKCl0. 08g0· 4% 生理盐水IOOOmL实施例3在湛江徐闻珍珠育珠场，对马氏珠母贝进行人工插核，每个育珠贝插两个核，插核过程中使用育珠免疫增强剂。从养殖了 2个月的育珠贝中取出珍珠，贝的留核率达到 72.6%，留核数为1.45个/贝，珠核表面已长出约0. Imm左右的珍珠层。
权利要求
一种育珠免疫增强剂的制备方法，其特征是包括三个步骤(1)Zn2+金属螯合物的诱导合成步骤为a.各取20mmol有机配体化合物(邻啡罗啉和水杨酸)，充分搅拌，过滤；b.称量20mmolZnCl2，用5ml蒸馏水溶解，搅拌使完全溶解，过滤；c.将上述两种溶液混合，水浴加热，搅拌下滴加0.1mol/L的NaOH调节混合溶液pH值；d.混合溶液冷却至室温，过滤，静置；e.滤液放置一星期后得到本发明化合物。(2)生物组织液的制备在育珠过程中吐核的珠母贝或者是不能在插核的珠母贝为原材料，将这些贝的外套边缘组织取出，匀浆，制备成10％的生物组织液，于-4℃保存。(3)育珠免疫增强剂的制备育珠免疫增强剂成分及配比如下Zn2+金属螯合物0.1-1.0g生物组织液10-30mL卵磷脂0.1-1.0gATP 1-10mL抗生素0.01-1.0gCaCl2 0.1-1.0gKCl 0.01g-0.1g0.4％生理盐水 1000mL将上述各种固体成分按照适当比例混合，用0.4％生理盐水充分溶解，再加入ATP、青霉素溶液及生物组织液，最后用0.4％生理盐水定容即可。
2.据权利要求1所述的一种育珠免疫增强剂的制备方法，其特征是有机配体化合物是 邻啡罗啉和水杨酸。
3.据权利要求1所述的一种育珠免疫增强剂的制备方法，其特征是抗生素是青霉素、 盐酸左氧氟沙星、乳酸环丙沙星、硫酸链霉素。
全文摘要
一种育珠免疫增强剂的制备方法，通过合成的Zn2+金属螯合物作为主体物质，添加适量的生物组织液作为调节剂，最后添加其他辅料，制备成为一种新型的珠母贝细胞小片保养液——免疫增强剂。其作用机理主要是通过化学和生物调控作用，降低母贝的分子识别能力，减少排斥反应，提高珠母贝的留核率，从而可以提高珍珠的产量和品质，进一步将带动南珠产业的发展，从而将繁荣我国海水珍珠产业。
文档编号A61K31/7076GK101804073SQ20091004118
公开日2010年8月18日 申请日期2009年7月17日 优先权日2009年7月17日
发明者宋文东, 李世杰, 梁飞龙, 王浩, 秦培文, 符绍, 纪丽丽, 胡世伟, 范润珍, 陶震, 黄翔鹄 申请人:广东海洋大学