专利名称：甲磺酸伊马替尼在制备治疗乙型肝炎药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及甲磺酸伊马替尼的一种新用途，具体涉及甲磺酸伊马替尼在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
背景技术：
乙型肝炎是严重威胁人类健康的世界性传染病之一。据世界卫生组织报道，世
界上已有20亿人被乙型肝炎病(HBV)毒感染，其中约3.5亿人是慢性感染患者，每年因HBV感染致死的人数有IOO万左右，而我国乙型肝炎表面抗原阳性患者人数也在1.2亿以上。
目前已经被美国FDA批准的治疗慢性乙型肝炎的药物有五种，即普通干扰素，聚乙二醇(PEG)干扰素、拉米夫定(lamivudine)、恩替卡韦(entecavir)和阿德福韦(adefovir)。干扰素它的免疫调节作用可导致感染的肝细胞破坏，从而达到清除病毒的目的。其有效率为30-60%，但对于重症肝炎等肝细胞很少的患者不推荐使用。核苷类似物如拉米夫定、恩替卡韦和阿德福韦，主要针对病毒逆转录酶，长期用药病毒易产生耐药变异， 一旦耐受后会导致病毒爆发。
甲磺酸伊马替尼胶囊商品名格列卫(Gleevec,Glivevc);药品名甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)或STI571;中文参考商品译名格列卫/甲磺酸伊马替尼胶囊；分子结构名甲磺酸伊马替尼；生产厂家Novartis (瑞士诺华制药)；甲磺酸伊马替尼的化学名称为4-[(4-甲基-l-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸盐，分子式为C29H31N70 CH4S03，分子量为589. 7。 Gleevec在体内外均可在细胞水平上抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶，能选择性抑制Bcr-Abl阳性细胞系细胞、Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病病人的新鲜细胞的增殖和诱导其凋亡。用于治疗慢性粒细胞白血病(CML)急变期、加速期或ct-干扰素治疗失败后的慢性期患者；不能手术切除或发生转移的恶性胃肠道间质肿瘤(GIST)患者。
发明内容
本发明的目的是提供甲磺酸伊马替尼在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。本发明提供了甲磺酸伊马替尼在制备抑制乙型肝炎病毒复制的药物中、在制备抑制乙型肝炎病毒增殖的药物中、在制备抑制乙型肝炎病毒的药物中或在制备治疗乙型肝炎的药物中的新用途。
具体来说，本发明提供了甲磺酸伊马替尼在制备抑制HL7702细胞或H印G22.2. 15细胞中乙型肝炎病毒复制的药物中的新用途。具体来说，本发明提供了甲磺酸伊马替尼在制备抑制HL7702细胞或H印G2 2. 2. 15细胞中乙型肝炎病毒增殖的药物中的新用途。具体来说，本发明提供了甲磺酸伊马替尼在制备抑制HL7702细胞或H印G2 2.2. 15细胞中乙型肝炎病毒的药物中的新用途。
本发明还保护一种抑制乙型肝炎病毒复制的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
本发明还保护一种抑制乙型肝炎病毒增殖的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
本发明还保护一种抑制乙型肝炎病毒的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
本发明还保护一种治疗乙型肝炎的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。给药时，以上任一所述的药物可为口服制剂或者静脉给药制剂。所述静脉给药制剂优选水针。
本发明的发明人发现用c-abl的抑制剂Gleevec (甲磺酸伊马替尼，STI-571)处理被乙肝病毒感染的细胞或H印G2 2.2. 15乙肝病毒复制细胞模型，可以显著的抑制乙肝病毒复制并可以抑制细胞分泌乙肝表面抗原和核心抗原。本发明的优点
(1)抗病毒效果更好从体外抗病毒模型H印G2 2.2. 15实验结果来看，对乙肝表面抗原和核心抗原的抑制率均可达到40%左右；(2)可以抑制变异后的乙肝病毒复
制现有的药物无法解决病毒变异的问题，而本药物由于针对的是宿主本身的蛋白，
所以应该能够解决耐药性的问题。
下面结合附图和具体实施方式
对本发明做进一步说明，并非对本发明的限制。凡依照本发明公开内容所做的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
图1为STI571对病毒复制的抑制作用。
图2为STI571对H印G2 2. 2. 15细胞e抗原分泌的抑制作用。图3为STI571对H印G2 2. 2. 15细胞乙肝表面抗原分泌的抑制作用。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中实验均设置三次重复，结果取平均值。
细胞培养板等耗材均购自康宁公司。HL7702细胞和H印G2 2.2. 15细胞均购自中科院上海细胞所细胞保存中心。乙肝病毒阳性血清由北京军区总医院肝胆内科提供，经荧光定量PCR检测血清的HBV DNA滴度为108。 Lipofectamine 2000购自invitrogen公司。Gleevec自瑞士诺华制药有限公司。乙肝病毒DNA检测试剂盒购自华美生物有限公司。
实施例1、 STI571对乙肝病毒的抑制作用
一、 STI571对乙肝病毒复制的抑制作用
HL7702细胞转至6CM平板24小时后进行HBV感染实验，感染HBV的细胞分成两组， 一组加入STI571，另一组为阴性对照，每组设3个复孔。
STI571组每孔加入2ml含有30。/。乙肝病毒阳性血清(体积百分含量)的培养基，再加入20iJl STI571水溶液，使每孔中STI571的终浓度为IO"M;
阴性对照足每孔加入2ml含有30。/。乙肝病毒阳性血清的培养基，再加入20ijI无菌水。
感染后不同时间用PBS清洗，然后收集细胞，进行荧光定量PCR检测。结果见图1。结果显示STI571可以抑制乙肝病毒的复制。病毒感染后若不加任何处理，病毒随时间的增加而增加，当加入STI571后，病毒复制速度明显减慢。
二、 STI571对H印G2 2. 2. 15细胞e抗原分泌和乙肝表面抗原分泌的抑制作用将H印G2 2.2. 15细胞接种于6孔培养板，设置四个处理，其中三个为不同浓
度的STI571处理，剩余的一个为阴性对照，每个处理设3个复孔。
处理一 (STI571低浓度组)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述
培养基，每孔加入含10% FBS的DMEM培养基2ml，再加入5|jl STI571水溶液，STI571
的终浓度为mol/L。
处理二 (STI571中浓度组)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述
培养基，每孔加入含10% FBS的DMEM培养基2ml，再加入10|jl STI571水溶液，STI571
的终浓度为10|J mol/L。处理三(STI571高浓度组)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述 培养基，每孔加入含10% FBS的DMEM培养基2ml，再加入20|j| STI571水溶液，STI571 的终浓度为20|J mol/L。
处理四(阴性对照组)每孔加入含10。/oFBS的DMEM lml;次日移除上述培养 基，每孔加入含10% FBS的DMEM培养基2ml，再加入10|jl无菌水。
每2d收集培养上清100|J|，细胞放入孵箱继续培养，ELISA检测表面抗原和e 抗原含量。
用乙肝病毒表面抗原试剂盒(购自华美公司)检测乙肝病毒表面抗原。用乙肝 病毒e抗原试剂盒(购自华美公司)检测乙肝病毒e抗原。具体方法如下各取50 ul以上获得的上清液加入96孔板中，再加入50ul相应的酶标结合物，37。C孵 育lh。相应洗液洗板5次，再依次加入50ul显色液A及50ul显色液B ， 37 。C避光显色15min，最后加入50 y 1终止液。在多标记酶联免疫检测仪上测定450nm 处ls吸光值A。抑制率=(对照组的吸光值A-药物处理组的吸光值A)/对照组的吸 光值A。
STI571对H印G2 2. 2. 15细胞e抗原分泌的抑制作用见图2。 STI571对H印G2 2.2. 15细胞乙肝表面抗原(S抗原)分泌的抑制作用见图3。结果显示，STI571可 以抑制H印G2 2. 2. 15细胞分泌乙肝表面抗原和e抗原，随着药物浓度增加和作用 时间的延长，这种抑制作用逐渐增强。
结论STI571在实验浓度下，可抑制感染的HL7702细胞病毒复制；也可抑制 H印G2 2.2. 15细胞表面抗原和e抗原的表达。
权利要求
1、甲磺酸伊马替尼在制备抑制乙型肝炎病毒复制的药物中的应用。
2、 如权利要求l所述的应用，其特征在于所述应用为甲磺酸伊马替尼在制备抑制HL7702细胞或H印G2 2. 2. 15细胞中乙型肝炎病毒复制的药物中的应用。
3、 甲磺酸伊马替尼在制备抑制乙型肝炎病毒增殖的药物中的应用。
4、 如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为甲磺酸伊马替尼在制备抑制HL7702细胞或H印G2 2. 2. 15细胞中乙型肝炎病毒增殖的药物中的应用。
5、 甲磺酸伊马替尼在制备抑制乙型肝炎病毒的药物中的应用。
6、 甲磺酸伊马替尼在制备治疗乙型肝炎的药物中的应用。
7、 一种抑制乙型肝炎病毒复制的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
8、 一种抑制乙型肝炎病毒增殖的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
9、 一种抑制乙型肝炎病毒的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
10、 一种治疗乙型肝炎的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。
全文摘要
本发明公开了甲磺酸伊马替尼在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。本发明提供本了甲磺酸伊马替尼在制备抑制乙型肝炎病毒复制的药物中、在制备抑制乙型肝炎病毒增殖的药物中、在制备抑制乙型肝炎病毒的药物中或在制备治疗乙型肝炎的药物中的新用途。本发明所提供的药物，它的活性成分为甲磺酸伊马替尼。本发明的优点(1)抗病毒效果更好从体外抗病毒模型HepG2 2.2.15实验结果来看，对乙肝表面抗原和核心抗原的抑制率均可达到40％左右；(2)可以抑制变异后的乙肝病毒复制现有的药物无法解决病毒变异的问题，而本药物由于针对的是宿主本身的蛋白，所以应该能够解决耐药性的问题。
文档编号A61K31/506GK101632674SQ200910091699
公开日2010年1月27日 申请日期2009年8月28日 优先权日2009年8月28日
发明者湘 何, 刘京梅, 铮 姜, 睿 张, 静 袁, 郑子瑞, 辉 钟, 陈宣南, 魏从文, 黄留玉 申请人:中国人民解放军疾病预防控制所