专利名称：：蛇葡萄素前药及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物领域，尤其涉及新颖的蛇葡萄素前药化合物，其制备方法和以该化合物为活性成份的制剂。
背景技术：
：蛇葡萄素又名二氢杨梅素，该化合物首次由Kotake和Kubota于1940从葡萄科蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄A.Meliaefolia的叶中分离得到，命名为蛇葡萄素。蛇葡萄素被证明有抗肿瘤、抗氧化、降血脂、消炎、抑菌等功效，但由于其溶解度小，且在肠道内可能经细菌作用而被代谢，因此口服给药生物利用度低。另由于其水中溶解度小，不利于制成注射给药形式。这些都是影响其在临床上应用的障碍，目前还未见蛇葡萄素单体的相关产品应用于临床。虽然有文献报道(RuanLP,YuBY,et.al.Improvingthesolubilityofampelopsinbysoliddispersionsandinclusioncomplexes.JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis.2005,38(3):457-64)采用固体分散体技术、环糊精包合技术等制剂技术来提高蛇葡萄素的溶解度，但这些方法存在制备工艺复杂、成本高、不易工业化生产等缺点。而采用表面活性剂、乙醇、二甲基亚砜等试剂来增加溶解度，又存在毒性或刺激性大的缺点。因此，本领域迫切需要开发有效而又低毒的增加蛇葡萄素水溶性的方法。兰州大学秦红岩等人，提出了用钠离子不饱和替代蛇葡萄素中的氢原子，形成一种新的蛇葡萄素不饱和钠盐，(公开CN101045721A，公开日2007年10月3日的中国发明专利申请)，其目的是为了显著减低蛇葡萄素的毒性，且未公开溶解度数据，与本发明的方法与目的均存在根本的不同。
发明内容本发明的目的是提供一类新的、水溶性高的蛇葡萄素前药化合物，该化合物适用于制造粉针剂。本发明的另一目的是提供该蛇葡萄素前药化合物的制备方法。本发明提供的蛇葡萄素前药化合物具有如下结构(I):BOH(I)式中B表示碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质，优选葡萄糖胺类物质，优选葡甲胺。本发明也涉及上述化合物(I)在药学上的剂型，如有效量的蛇葡萄素前药及可药用载体和/或赋形剂，它包括片剂，胶囊剂，颗粒剂，特别是用于制造注射用的粉针剂。本发明提供的化合物(I)的制备方法，包括以下步骤-1)先将碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质加入适量的无水乙醇中，357(TC加热回流，搅拌至全部溶解；另取蛇葡萄素溶解于无水乙醇中，保持相同温度；将碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质溶液缓缓加入蛇葡萄素溶液中，继续搅拌反应，减压蒸去部分溶剂，置低温处析晶，过滤得粗品；2)粗品加入少量无水乙醇或乙酸乙酯中搅拌洗涤，除去过量的蛇葡萄素，过滤，减压干燥或五氧化二磷干燥或冷冻干燥，得化合物(I)。上述制备方法中蛇葡萄素与碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质的投料量按摩尔比为l1.1:1，优选1.05:1。上述制备方法特点之一选用不含水的试剂为反应溶剂，优选无水乙醇。由于所用的碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质在无水乙醇中溶解度小，通过加热回流溶解，以减少溶剂用量。将碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质溶液缓缓加入反应体系中，避免过量的碱基接触蛇葡萄素，以保持与构效相关的基团的稳定性。上述制备方法特点之二获得的产品是橙黄色的粉末，具有引湿性，在制备注射剂时能够快速溶解在冷水中，制成冷冻干燥的原液，避免加热等操作对稳定性的不良影响。一般来说，含氮有机碱化合物与蛇葡萄素复合成盐，能增加其在水中的溶解度，但不同的含氮有机碱化合物，其复合后效果改善的程度也不同。发明人通过大量的实验发现某些含氮有机碱化合物与蛇葡萄素复合后并不能显著提高溶解度，且存在较大的刺激性，如苯甲胺、乙二胺等。因而本发明的B表示选取碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质，优选葡萄糖胺类物质，优选葡甲胺。本发明提供的化合物具有很好的水溶性，以下部分为部分实验对象在25。C下的溶解度实验数据统计对比表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>显然，蛇葡萄素与葡萄糖胺类化合物经复合形成的前药化合物在水中溶解度有非常明显的提高。而且，化合物(I)水溶液在即使在浓度为1%(g/100ml)时，溶液的pH值为8.74，符合人用注射液要求pH值不超过9的一般要求，这样在常用静脉滴注体积100500ml情况下，一次可以滴注15g化合物(I)，这个剂量已经完全能达到人用有效剂量的要求。这些性质使得化合物(I)可以采用冷冻干燥法等常用方法制造粉针剂，临用前加灭菌注射用水或生理盐水注射液溶解后静脉滴注，实现直接加工成注射剂，可提高生物利用度，实现了临床应用。本发明的有益效果本发明所提供的化合物(I)及其制备方法不使用有毒的有机溶剂，所用低毒或无毒溶剂均可回收利用，也不使用其他对环境不友好的试剂。该化合物得率高，水溶性好，可制成药学上的各种剂型，包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂，特别适用于制造注射用粉针剂。具体实施例方式下面结合具体实施例子，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例l化合物(I)的制备(1)蛇葡萄素葡甲胺复合物的制备按蛇葡萄素与葡甲胺摩尔比1.05:1投料。称取葡甲胺1.95g加入100ml无水乙醇中，6(TC加热回流，搅拌至全部溶解；另称取蛇葡萄素3.36g溶解于10ml无水乙醇中，加热保持相同温度；将上述葡甲胺无水乙醇溶液缓缓加至蛇葡萄素溶液中，边加边搅拌，保持6(TC反应30min，减压蒸去部分溶剂至溶液开始变浑浊，置-15C保存12h，过滤得粗品。(2)精制粗品加入10ml无水乙醇中搅拌洗涤，过滤，重复三次，减压干燥，得化合物(I)。得率为74.2%。实施例2化合物(I)的制备(1)蛇葡萄素葡甲胺复合物的制备按蛇葡萄素与葡甲胺摩尔比l:l投料。称取葡甲胺195mg加入20ml无水乙醇中，5(TC加热回流，搅拌至全部溶解；另称取蛇葡萄素320mg溶解于5ml无水乙醇中，加热保持相同温度；将葡甲胺无水乙醇溶液缓缓加入至蛇葡萄素溶液中，边加边搅拌，保持5(TC反应20mim减压蒸去部分溶剂至溶液开始变浑浊，置-4t保存12h，过滤得粗品。(2)精制粗品加入5ml无水乙醇中搅拌洗涤，过滤，重复三次，置于五氧化二磷干燥器中干燥，得化合物(I)。得率为69.5%。实施例3化合物(I)的制备(1)蛇葡萄素葡甲胺复合物的制备按蛇葡萄素与葡甲胺摩尔比1.03:1投料。称取葡甲胺390mg加入40ml无水乙醇中，4(TC加热回流，搅拌至全部溶解；另称取蛇葡萄素660mg溶解于lOml无水乙醇中，加热保持相同温度；将葡甲胺无水乙醇溶液缓缓加入至蛇葡萄素溶液中，边加边搅拌，保持4(TC反应20mim减压蒸去部分溶剂至溶液开始变浑浊，置-4"C保存12h，过滤得粗品。(2)精制粗品加入少量乙酸乙酯中搅拌洗涤，过滤，重复三次，经冷冻干燥，得化合物(I)。得率为71.5%。实施例4蛇葡萄素前药化合物的化学结构分析对实施例1中制备的蛇葡萄素葡甲胺复合物进行了化学结构分析。通过比较化合物(I)与蛇葡萄素分别在乙醇中的紫外吸收光谱，结果显示，两者在E带都存在同样的吸收峰，即存在同样的苯环精细结构；在B带，两者在292ran处都有最大吸收峰，但化合物(I)的吸收强度与蛇葡萄素相比明显减弱；此外，化合物(I)在R带，即325nm处还出现新的最大吸收峰，而蛇葡萄素在此处没有最大吸收峰，即相对红移了533nm。说明所合成的化合物(I)与蛇葡萄素相比，没有发生大的结构变化，只是多了个助色团，使吸收峰向长波方向移动。此外，实验还发现，往化合物(I)的溶液体系中加入0.1N盐酸溶液调pH至酸性后，其紫外光谱又转变与蛇葡萄素的紫外光谱一致，说明化合物(I)在酸性条件下会转变为蛇葡萄素，因此化合物(I)是蛇葡萄素的前药化合物。反应物对应的分子量分别为MpC7H17N05=195;M2=C15H1208=320;则化合物(I)M=M,+M2-H=195+320-1=514。由质谱分析，其中两个重要的质谱峰归属解析为正离子检测模式对应为196(Mt+H)+，515(M+H)+，说明化合物(I)是由蛇葡萄素与葡甲胺按1:1的摩尔比复合而成。本发明的化合物(I)的化学分子式C22H28N013，元素分析结果如下C%H%N%分析值51.425.442.76计算值51.365.452.72分析与计算值相差在0.5%内，说明结构正确。实施例5不同浓度的化合物(I)水溶液pH值的测定取化合物(I)0.5g溶于50ml水中配成1%浓度的溶液，测得pH值为8.74;将该溶液稀释10倍，即浓度约为O.1%，测得稀释后溶液pH为值8.05，均符合注射要求。实施例6化合物(I)的质量控制方法以实施例1中制备的蛇葡萄素葡甲胺复合物为例，进行了质量控制方法的研究。[紫外测定]精密称取化合物(I)20mg于25ml容量瓶中，加入50%乙醇溶液，超声波振荡溶解后，取O.2ml于10ml容量瓶中，加入0.IN盐酸溶液稀释定容，摇匀后，按紫外分光光度法，在292nm处测定吸光度值。另取经105'C干燥恒重的蛇葡萄素对照品适量，同前述方法处理，配成一定浓度的溶液，同法测定，计算，结果乘以1.606，即得。色谱条件与系统适应性试验色谱柱为U不锈钢柱；流动相为甲醇水磷酸(65:35:0.2);流速0.7ml/min;检测波长为292nm;进样量为20ul;柱温为室温。理论塔板数按蛇葡萄素计算应不低于3000。测定法精密称取化合物(I)20mg于25ml容量瓶中，加入50%乙醇溶液，超声波振荡溶解后，取0.2ml于10ml容量瓶中，加入0.1N盐酸溶液稀释定容，摇匀后，超声处理10min脱气，0.45微米的微孔滤膜过滤，量取20ul进样，记录峰面积。另取经105'C干燥恒重的蛇葡萄素对照品适量，同前述方法处理，配成一定浓度的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，结果乘以1.606，即得。实施例7化合物(I)安全性考察以实施例1中制备的蛇葡萄素葡甲胺复合物为例，进行了安全性考察。[血管刺激性试验]取健康雄性家兔4只，体重22.3Kg，分成两组，每只家兔右耳为给药组，给予本发6明的蛇葡萄素葡甲胺复合物的生理盐水溶液，左耳为生理盐水对照组，每只家兔右耳静脉注射等容量的生理盐水。每日一次，连续三日，然后观察动物耳部血管刺激反应症状，并取标本进行病理组织学检査。试验结果给药组、生理盐水对照组家兔耳部血管均无充血，结节、水肿及组织变性或坏死等反应症状，病理学检査也无异常改变，表明供试品无明显血管刺激性，符合注射给药的规定要求。取健康豚鼠12只，雌雄兼用，雌无孕，健康，体重220250g。按无菌操作，给药组每只动物均隔日腹腔注射供试品溶液0.5ml(W蛇葡萄素葡甲胺复合物的生理盐水溶液，以蛇葡萄素葡甲胺计)，共3次，阳性对照组每只动物隔日腹腔注射W卵白蛋白0.5ml共3次；其中给药组的第一组于首次给药后14日静脉注射供试品2ml进行攻击，第二组于首次给药后21日同法攻击阳性对照组的第一组于首次给药后14日静脉注射1%白蛋白2ml进行攻击，第二组于首次给药后21日同法攻击，观察攻击后动物的过敏反应症状。试验结果给药给动物在注射后均无竖毛、呼吸困难、痉挛、休克及死亡等过敏反应症状，而阳性对照组动物在注射后均有不同程度的竖毛、抓鼻、痉挛等过敏症状，表明供试药品无明显过敏性，符合规定要求。安全性试验结果表明化合物(I)能达到注射给药的要求。实施例8粉针剂制备取化合物(I)lg，甘露醇lg，用50ml注射用水溶解，经0.22微米的微孔滤膜过滤，分装于7ml容量的玻璃小瓶，2ml/瓶，置冷冻干燥机千燥24小时，加胶塞和铝盖密封，即得。干燥后的橙红色块装物加灭菌注射用水5ml，振摇5秒钟全部溶解。该溶液用100ml注射用水稀释，稀释后溶液pH值为8.34，适合静脉滴注。权利要求1.下述通式(I)的蛇葡萄素前药式中B表示碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质。2.根据权利要求1的蛇葡萄素前药，其特征在于所述的B为葡甲胺。3.根据权利要求1或2所述的蛇葡萄素前药，其特征在于其剂型为粉针剂。4.权利要求1或2所述的蛇葡萄素前药的制备方法，包括以下步骤-1)先将碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质加入无水乙醇中，357(TC加热回流，搅拌至全部溶解；另取蛇葡萄素溶解于无水乙醇中，保持相同温度；将碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质溶液缓缓加入蛇葡萄素溶液中，继续搅拌反应，减压蒸去部分溶剂，置低温处析晶，过滤得粗品；2)粗品加入少量无水乙醇或乙酸乙酯中搅拌洗涤，除去过量的蛇葡萄素，过滤，减压干燥或五氧化二磷干燥或冷冻干燥，得化合物(I)。5.根据权利要求4所述的蛇葡萄素前药的制备方法，其特征在于蛇葡萄素与碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质的投料量按摩尔比为11.1:1。6.根据权利要求5所述的蛇葡萄素前药的制备方法，其特征在于蛇葡萄素与碱性氨基酸或葡萄糖胺类物质的投料量按摩尔比为1.05:1。7.根据权利要求4或5或6所述的蛇葡萄素前药的制备方法，其特征在于葡萄糖胺类物质为葡甲胺。8.—种包含权利要求1或2或3所述的有效量的蛇葡萄素前药及可药用载体和/或赋形剂。全文摘要本发明公开了一种蛇葡萄素前药及其制备方法与应用，所述的蛇葡萄素前药的通式(I)如右所示，该化合物与蛇葡萄素相比，显著提高了水溶性。其制备方法不使用有毒的有机溶剂，所用溶剂均可回收利用，也不使用其他对环境不友好的试剂。本发明公开的蛇葡萄素前药化合物可制成药学上的各种剂型，包括注射剂、片剂、胶囊、颗粒剂，特别是用于制造注射用粉针剂。文档编号A61P31/04GK101555241SQ20091011180公开日2009年10月14日申请日期2009年5月20日优先权日2009年5月20日发明者黄仁杰申请人:福建卫生职业技术学院