专利名称：一种他克莫司注射制剂的制作方法
一种他克莫司注射制剂
技术领域：
本发明涉及一种注射制剂，特别涉及一种具有免疫抑制活性的他克莫司 (Tacrolimus)注射制剂。
背景技术：
一、他克莫司药物制剂背景本发明所述他克莫司，英文名为tacrolimus，其化学名称为[3S_[3R*[E(1S*， 3S*，4S*)]，4S*，5R*，8S*，9E，12R*，14R*，15S*，16R*，18S*，19S*，26aR*]]-5，6，8，11，12， 13，14，15，16，17，18，19，24，25，26a-六-癸氢-5，19- 二羟基-3-2_(4_ 羟 _3_ 甲氧环 已基)-1-甲基乙烯基-14，16- 二甲氧-4，10，12，18-四甲基_8-(2_丙烯基)_15，19-环 氧-3H-吡啶并2，1-c1，4氧杂氮杂环二十三碳烯-1，7，20，21 (4H，23H)-四酮，一水合 物。国外部分有关文献及专利将他克莫司称作Π(-506，现今我国食品药品监督管理局批准 的通用名为他克莫司。他克莫司是由日本藤泽制药公司于1982年提取的一种真菌代谢产物。其具有 免疫抑制活性，以他克莫司制成的注射液和胶囊剂是强效的免疫抑制剂，适用于防治器官 移植后的排斥反应。在分子水平，他克莫司的免疫抑制作用是由细胞质内与之结合的蛋白 FKBP12介导的。FKBP12使得他克莫司进入细胞内，并形成复合物，该复合物竞争性地与钙 调素特异性地结合并抑制钙调素，后者介导T细胞内-钙依赖性抑制性信号传递系统，从而 阻止一系列淋巴因子基因转录。其抑制细胞毒淋巴细胞的形成，移植排斥反应主要是由后 者引起。抑制T细胞活化及TH细胞依赖性的B细胞增殖，以及淋巴因子的生成如白细胞介 素2，白细胞介素3及β-干扰素，以及白细胞介素_2受体的表达。体内研究表明，他克莫 司注射液和胶囊剂对肝和肾移植均有效。目前市场上已有的以他克莫司为有效活性成份的药物制剂有注射液、胶囊和软膏 三种。他克莫司注射剂和他克莫司胶囊剂用于预防肝脏或肾脏移植术后的移植物排斥反应 及治疗肝脏或肾脏移植术后应用其他免疫抑制药物无法控制的移植物排斥反应。他克莫司 软膏用于因潜在危险而不宜使用传统疗法、或对传统疗法反应不充分、或无法耐受传统疗 法的中到重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗。二、他克莫司注射剂研发背景在临床上，他克莫司注射剂适用于不能接受口服给药或需要在短期内达到较高血 药浓度、迅速起效的患者。因此，他克莫司注射剂在临床治疗上仍然是口服制剂无法代替 的。但将他克莫司制成注射剂需要克服的问题是其不溶解性。由于他克莫司易溶于有机溶 剂(例如，甲醇、乙醇或丙酮)，而几乎不溶于水，因此目前已有的他克莫司注射液配制都是 采用非水溶剂(例如，无水乙醇)。但即使采用了溶解性较好的无水乙醇作为溶解他克莫司 的溶剂，仍然达不到临床治疗所需要的规格浓度(每1毫升溶剂含5mg他克莫司)，参考临 床上已采用的他克莫司注射液的给药方法，该注射液在使用前还需用5%的葡萄糖注射液 或0. 9%氯化钠注射液(亦称生理盐水)进行稀释，并且稀释液浓度控制在0. 004-0. Img/
3ml。因此，要使本发明达到上述临床使用要求，他克莫司注射剂配制的技术关键在于找到适 宜的表面活性剂以增加他克莫司在无水乙醇、5%葡萄糖注射液或生理盐水中的溶解性。所述的表面活性剂是指具有固定亲水、亲油基团的化合物，由于两亲性基团集中 在固体药物或液体药物的表面，能降低两种不相混合物的表面或界面张力的物质。表面活 性剂在18世纪初已开始应用于药学中，最初在医药方面应用很少，进展缓慢，在工业方面 应用较广。但在医药方面的应用近百年才有发展，特别近40年来随着化学合成工业的兴 起，有了较快的发展。表面活性剂的品种逐渐增多，19世纪80年代至90年代更有飞跃发展， 目前在药学中已作为增溶剂、乳化剂、助悬剂、抗氧化剂、渗透剂、清洁去污剂、消毒防腐剂、 减低表面张力剂等应用，在新剂型、药物分析、药物合成等药学各专业学科中已广泛应用。 然而，由于每种表面活性剂具有不同的物理值(physical value)，如亲水亲油平衡(HLB) 和临界胶束浓度(CMC)，在应用领域中具有不同特点，因此认为选择适当的表面活性剂以制 备他克莫司注射液十分困难。日本藤泽制药公司研制生产并在中国、日本、美国等国上市的他克莫司注射液，其 采用的表面活性剂是聚氧乙烯60氢化蓖麻油(Polyoxyl 60Hydrogenated Castor Oil，以 下简称HC0-60)，每毫升他克莫司注射液中含200mg HC0-60，该配方信息已公开但未申请专 利。中国专利(申请号200580038459. X)公开了一种他克莫司注射液，该注射制品含
有他克莫司、聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯和无水乙醇。。韩国专利No. 0177158公开了一种溶液制剂，该溶液制剂含有他克莫司或其药学 上可接受的盐、包括氢化蓖麻油聚氧乙烯醚的药学上可接受的表面活性剂和药学上可接受 的非水溶剂。韩国专利No. 0206722公开了一种溶液组合物，该组合物含有他克莫司或其药学 上可接受的盐；选自由蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化蓖麻油聚氧乙烯醚所组成的药学上 可接受的乳化剂；和选自由大豆油和芝麻油所组成的液体炭氢化合物的药学上可接受的 油。韩国特开No. 2001-0006070公开了一种药用组合物，该药用组合物含有水不溶性 药物和两种以上的表面活性剂，其特征在于，至少一种表面活性剂能够溶解其它水不溶性 表面活性剂和水不溶性药物。以上公开的资料中，采用的表面活性剂为氢化蓖麻油聚氧乙烯醚，包括HC0-60，亦 或采用氢化蓖麻油聚氧乙烯醚与蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂等天然表面活性剂的组合物，或 采用聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，暂无资料表明其它表面活性剂可用于他克莫司注射液的 制备。药剂学上，主张制剂配方中尽量减少与治疗作用无关的组分或其含量，而达到相 似或更好的药物质量和临床疗效。任何与治疗作用无关的组分的增加或其加入量的增大都 会给临床使用带来安全性问题。从药剂学角度分析，以上公开资料中采用多种表面活性剂 组合的发明均不是最佳的发明，其临床应用的疗效和安全性尚未有相关研究数据，其安全 性值得商榷。而日本藤泽制药公司的他克莫司注射液和中国专利(申请号200580038459. X)公开的他克莫司注射液均采用一种表面活性剂，从药学质量研究的角度，二者均能达到 较好的药物质量。
中国专利(申请号200580038459. X)公开说明书中提供对比数据显示，采用Iml 无水乙醇含300mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的他克莫司注射液与采用Iml无水乙醇含 200mg HC0-60的他克莫司注射液相比，二者在室温下放置超过7天，以及用生理盐水溶液 稀释100倍后在室温下放置超过7天，均未观察到沉淀，表明采用上述两种表面活性剂均能 使制成的他克莫司注射液具有较好的稳定性。上述日本藤泽制药公司和中国专利(申请号200580038459. X)公开的数据显示， 他克莫司注射液的最佳溶液配比为，Iml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司，表面活性剂采用 200mg的HC0-60或300mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯。为了发现更优异的表面活性剂， 使得以加入更少量的表面活性剂达到相似或更优的他克莫司注射液质量，本发明的发明人 进行了大量的研究。本发明提供了一种以他克莫司为有效活性成份的注射制剂，通过使用 蓖麻油聚烃氧酯(35)来解决该技术难题。
发明内容本发明要解决的技术问题在于提供一种他克莫司注射制剂，该制剂使用了蓖麻油 聚烃氧酯(35)作为表面活性剂，使得水不溶性的他克莫司能够充分溶解于非水溶剂中并 达到上述使用要求，并且表面活性剂的加入量显著减少，从而减小非有效活性组分带来的 临床使用安全问题。本发明是这样实现的一种他克莫司注射制剂，其中，该注射制剂含有他克莫司、 蓖麻油聚烃氧酯(35)和非水溶剂。上述技术方案可进一步具体为所述非水溶剂是无水乙醇。所述注射制剂中所述 的蓖麻油聚烃氧酯(35)与他克莫司的重量比为10 20 1。本发明所述的蓖麻油聚烃氧酯(35)，英文名为Polyoxylethylene CastorOil Ether (35)，为蓖麻油和环氧乙烷按摩尔比1 35反应制成的物质，主要成份为甘油聚乙烯 二醇蓖麻油醇酸酯，该物质在26°C以上为淡黄色油状液体，在二氯甲烷中极易溶解，在水或 乙醇中易溶，在乙酸乙酯中溶解。亦有相关资料将其称为聚氧乙烯蓖麻油酸酯(35)、聚氧乙 烯35蓖麻油(Polyoxyl35 Castor Oil)或聚氧乙烯醚蓖麻油(35)或简称EL-35。由于水 不溶性的他克莫司需用非水溶剂进行溶解，故本发明中可以使用临床上及药学上可接受剂 量的任何种类的非水溶剂来溶解他克莫司和蓖麻油聚烃氧酯(35)，所述非水溶剂经生理盐 水或葡萄糖溶液稀释后适用于人体静脉注射。所述非水溶剂优选为无水乙醇。如认为必要， 本发明所述的他克莫司注射溶液还可根据需要，在本发明所述成份的基础上添加其他药学 上可接受的添加剂，包括已公开的其他可用的表面活性剂。本发明具有以下优点与现有技术相比，本发明的他克莫司注射制剂，只需使用一 种表面活性剂，且表面活性剂加入的量比已经公开的其他他克莫司注射溶液使用的表面活 性剂的加入量显著减少。因此本发明提供的是一种添加剂最少的他克莫司注射溶液，能够 显著降低使用大量添加剂带来的临床安全风险。另外，所述注射制剂中所述的蓖麻油聚烃 氧酯(35)与他克莫司的重量比为10 20 1，以此比例制得的他克莫司注射溶液经葡萄 糖注射液和生理盐水稀释时不产生沉淀，具有良好的稳定性。
具体实施方式
现通过结合以下实施例对本发明进行描述。但是并不应理解为实施例用于限制本 发明权利要求所详细定义的范围。对比例1使用聚氧乙烯60氢化蓖麻油的他克莫司注射液在Iml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司和200mg的聚氧乙烯60氢化蓖麻油，随后 用0. 22 μ m的过滤器进行过滤，制成可用于注射的形式。实施例1使用蓖麻油聚烃氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司和50mg的蓖麻油聚烃氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，随后用0. 22 μ m的过滤器进行过滤，制成可 用于注射的形式。实施例2使用蓖麻油聚烃氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司和75mg的蓖麻油聚烃氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，随后用0. 22 μ m的过滤器进行过滤，制成可 用于注射的形式。实施例3使用蓖麻油聚烃氧酯(35)的他克莫司注射液在Iml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司和IOOmg的蓖麻油聚烃氧酯(35) (Cremophor EL Castor Oil, BASF公司)，随后用0. 22 μ m的过滤器进行过滤，制成可 用于注射的形式。实验一及其结果将对比例1和实施例1-3制备得到的他克莫司溶液制剂分别用5%葡萄糖注射液 和0. 9%氯化钠注射液进行配伍实验，用葡萄糖注射液和氯化钠注射液稀释后的溶液在室 温下放置24小时，观察配伍溶液的稳定性及含量变化，结果如表1所示。表1他克莫司溶液的标示含量变化
6 从表1可以看出对比例1和实施例1-3制备得到的他克莫司溶液制剂分别用葡萄 糖注射液和生理盐水稀释50倍后在室温下放置超过24小时，他克莫司药物含量均较稳定， 且没有观察到结晶。此外，用5%葡萄糖注射液和生理盐水溶液将对比例1制备的他克莫司溶液制剂 50倍稀释的测试中，可以看出稀释后的溶液在室温下放置15小时，含量略有下降，相比之 下，实施例1-3均未见下降。故本发明提供的他克莫司注射溶液具有更好的稳定性。实验二及其结果实施例3制备得到的他克莫司溶液用0. 9%氯化钠注射液稀释成浓度为0. lmg/ml 的受试液后进行动物刺激性、过敏性和溶血性实验，观察该溶液用于静脉注射给药的血管 刺激性、过敏性以及溶血性。1、动物血管刺激性实验
取体重2. 5-3. Okg健康大耳白家兔8只，随机分两组，每组4只。给药组分别耳缘 缓慢静脉注射实施例3制备得到的他克莫司溶液的稀释液lmL/kg，浓度为0. lmg/mL。保持 药液在给药血管内流经或滞留约3分钟。对照组等速等量注射0.9%氯化钠注射液。每天 给药一次，连续5天。给药期间每天肉眼观察给药局部血管有无血栓形成，周围组织有无红 肿瘀血等炎症反应。于末次给药24小时后处死动物，迅速取其耳组织(从给药局部向心方 向3cm取下)，10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片，HE染色，光镜下观察血管及周围组 织形态学改变。结果给药期间肉眼观察，各组兔耳缘静脉注射局部未见明显红、肿、瘀血等症状。 给药组与对照组比较未见明显差别。结果见表1。表1血管刺激性实验肉眼观察记录 注无血栓(-)小血栓l-4mm(+)中血栓5_14mm(++)大血栓15mm以上(+++)无炎 症变化(_)轻度炎症3cm范围(+)中度炎症范围1/3耳壳(++)强度炎症范围1/2耳壳-全 耳(+++)组织学观察给药组兔耳缘静脉血管壁完整，光滑。未见内皮损伤，无血栓形成及 周围组织水肿、炎细胞浸润、炎症、坏死等病理变化。给药组与对照组比较无明显差别。2、动物过敏性试验取体重250_350g健康豚鼠18只，随机分为3组(供试品组、阴性对照组、阳性对 照组)每组6只。连续3次，隔日腹腔注射浓度为0. lmg/mL的实施例3制备得到的他克莫 司溶液稀释液(供试品组)0. 5mL/只、0. 9%氯化钠注射液(阴性对照)0. 5mL/只和10% 卵白蛋白溶液(阳性对照)0. 5mL/只进行致敏。然后将供试品组、阴性对照组和阳性对照 组分别分成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日及21日静脉注射供试品ImL/只、 0. 9%氯化钠注射液ImL/只和10%卵白蛋白溶液ImL/只进行激发，在注射后15分钟内，观察注射药液的豚鼠是否出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难或咳嗽3声等现象中的两种或 两种以上者，或有抽搐、虚脱或死亡等现象之一者，则判为阳性。阴性对照组不得出现过敏 反应。而注射10%卵白蛋白溶液的豚鼠应全部出现过敏反应，而且6只豚鼠中应有4只以 上出现死亡。结果，阴性对照液及实施例3制备得到的他克莫司溶液的稀释液两次静脉给药后 15分钟内每组各6只豚鼠均未出现过敏反应，阳性对照液两次静脉给药后1分钟内6只豚 鼠全部出现咳嗽、呼吸抑制、抽搐直至死亡。见表3。表3过敏试验结果(η = 6) 结果表明在本试验条件下实施例3制备得到的他克莫司溶液的稀释液过敏试验 未出现全身过敏反应。3、动物溶血性试验2%红血球混悬液的制备取兔血数毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原、使成 脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇勻、离心，除去上清液，沉淀的红血球再用生理盐水 如法洗涤2-3次，至上清液不呈红色为止。将所得红血球用生理盐水稀释成2%的混悬液， 实验当天使用，用时摇勻。试验操作取试管7只，按表4配比量依次加入2%红血球混悬液和生理盐水，混勻后，于 37°C恒温箱放置半小时，然后分别加入不同体积浓度为0. lmg/mL的稀释液(第6管为阴性 对照管)，摇勻后，置37士0.5°C恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小 时观察一次，连续观察4小时，如溶液呈透明红色，即表示溶血。如溶液中有棕红色或红棕 色絮状沉淀，表示有红细胞凝集作用。表4他克莫司注射液溶血试验配比量 试验结果7号管在加入了蒸馏水后不久溶液即出现溶血现象，而加入药液的各实验管(1-5 管)和6号生理盐水管溶液在规定的时间内均未呈透明红色，也未有棕红色或红棕色絮状 沉淀出现，表明实施例3制备得到的他克莫司溶液的稀释液未出现溶血与凝集作用。结果 见表5。表5溶血试验结果 注+++完全溶血；++部分溶血；+凝集；-不溶血，也不发生凝集从表5中可见实施例3制备得到的他克莫司溶液的稀释液在4小时内未引起溶 血或凝集反应。
权利要求
一种他克莫司注射制剂，其特征在于该注射制剂含有他克莫司、蓖麻油聚烃氧酯(35)和非水溶剂。
2.根据权利要求1所述的一种他克莫司注射制剂，其特征在于所述非水溶剂是无水乙醇。
3.根据权利要求1或2所述的一种他克莫司注射制剂，其特征在于该注射制剂中所 述的蓖麻油聚烃氧酯(35)与他克莫司的重量比为10 20 1。
全文摘要
本发明提供了一种他克莫司注射制剂，含有他克莫司、蓖麻油聚烃氧酯(35)和非水溶剂。该注射制剂中所述的蓖麻油聚烃氧酯(35)与他克莫司的重量比为10～20∶1时效果较佳。本发明提供的是一种添加剂种类及加入量均为最少的他克莫司注射溶液，能够显著降低使用大量添加剂带来的临床安全风险。另外，所述注射制剂中所述的蓖麻油聚烃氧酯(35)与他克莫司的重量比为10～20∶1，以此比例制得的他克莫司注射溶液经葡萄糖注射液和生理盐水稀释时不产生沉淀，具有良好的稳定性。
文档编号A61P37/06GK101869547SQ20091011155
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者张娜 申请人:张娜;福州华为医药技术开发有限公司