专利名称：可注射雌三醇缓控释给药系统的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体涉及可注射雌三醇缓控释给药系统。
背景技术：
雌三醇(Estriol)为白色结晶性粉末，无臭，不溶于水，溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿 等有机溶剂。雌三醇是体内雌二醇的代谢物，为主要存在于尿中的一种天然雌激素。其口服 雌激素活性约为雌酮的6倍，但比雌二醇弱。雌三醇特点是对阴道和子宫颈管具有选择性 作用，而对子宫实体及子宫内膜并无影响，对阴道上皮角化作用比雌二醇强，能促进阴道粘 膜血管新生和阴道上皮损伤愈合；同时能增强子宫颈细胞功能，使子宫颈肌纤维增生，从而 增加宫颈弹性和柔软性。此外，雌三醇对下丘脑和垂体有反馈性抑制作用，但不抑制排卵， 仅对黄体能产生明显影响。雌三醇临床用于子宫颈炎，尤适用于绝经期综合征、老年性阴道 炎，亦可用作中期引产及人工流产的辅助药物，还用于前列腺肥大、前列腺癌等。雌三醇尚 具有迅速升高外周白细胞的作用，一般在用药后1 3天开始生效，但作用维持时间较短。 对化疗或放疗引起的白细胞减少有效。雌三醇还能降低血管的通透性和脆性，可用于多种 出血的治疗，对月经过多、扁桃体或子宫切除术后均有快速止血作用。雌三醇可提高受辐射 动物的存活率，减轻放射病的临床症状，促进造血组织的恢复。雌三醇用于治疗子宫颈炎、老年性阴道炎时，可用鱼肝油混悬剂或滑石粉剂，局部 涂搽或喷粉每日1次，10次为一疗程。如果用于治疗绝经期综合征，可每天口服1次lmg， 每月连用14 21天为一疗程，可连用2 3个疗程。如果用于早期人工流产和中期引产、 子宫颈水肿或软化不良、官口开全不良肌注1-2次，1次10mg。如果用于人工流产、装取节 育环、绝育术、口服避孕药后出血及其他月经过多症，可经前1周或经期中口服1次5mg，1 日1 2次，每月经周期总量彡30mg。如病情较急，需迅速止血或减少出血量时，每日肌注 1次10mg。如果用于前列腺肥大症，可口服1次2mg，1日3次，连用3周左右。目前市售的雌三醇制剂包括雌三醇栓、雌三醇乳膏、雌三醇软膏。缓控释给药系统是重要的一类给药系统。它能明显减少给药次数，减小血药浓度 峰谷差，提高生物利用度，适合用于心血管药物、抗微生物感染药物、解热镇痛药物、内分泌 调节药物等药物的缓控释。可注射缓释给药系统最近发展迅速，主要用于长时间给药需求， 特别是对给药次数频繁，在体内易降解的药物非常适合。可注射缓控释给药系统一般通过 高分子材料限制药物的溶出释放，从而减缓和控制药物吸收。可注射缓控释给药系统具体 剂型如微球、微囊、纳米粒、乳剂、原位凝胶。微球是基质型微小球状实体的固体骨架物，药物溶解和/或分散在高分子材料基 质中。微球制剂作为一种高度分散的药物制剂，拥有超越普通制剂的优点，如剂量均一、控 释性等。注射后微球通过在体内不断降解，释放出包裹的药物而具有缓释作用。将固体药 物或液体药物作囊心物包裹而成药库型微小胶囊称微囊。纳米粒一般指是纳米级分散的固体粒子，由于其高度分散性，它作为药物载体有 提高药物生物利用度、增强靶向性等特点。固体脂质纳米粒(SLN)采用人体相容的脂质材料作为主要辅料形成纳米粒，具有普通纳米粒的特点和生物相容性好的特点，近年来研究 较多。纳米囊特指药物包裹在成膜材料中形成的纳米粒子，同样具有纳米粒的体内外特点。乳剂常用作脂溶性药物的传递系统，在体内具有靶向性、缓释和控释效果。乳剂的 粒径分布范围很广，从数微米到纳米级。纳米乳是指粒径在200纳米以下的乳滴组成的体 系，可以将脂溶性药物包裹在乳滴中。由于其高度分散性，它作为药物载体同样有提高药物 生物利用度、增强靶向性等特点。而微乳是指粒径在100纳米以下的乳滴组成的体系，同样 具有纳米乳的特点。原位凝胶(in-situ gel)，又称在体凝胶、在位凝胶，是指高分子材料以溶液或半 固体状态给药后，在给药部位对外界刺激(用药部位的温度、PH值、离子种类和浓度、光照 度等变化)发生响应，发生分散状态或构象的可逆转化，形成半固体或固体制剂。原位凝 胶系统在注射前呈溶液态，在注射后能够流入并填充于组织间隙，注射后能在体内发生溶 液_凝胶相变，特别适于注射缓控释系统。注射用缓释原位凝胶的原理是选用不溶于水的 可生物降解聚合物溶解在合适的生物相容的溶剂中，形成流动性好的溶液，再将药物溶解 或混悬于此溶液中，用注射器注射到皮下或其它部位。当含药溶液遇到体内组织时就会凝 结、固化、沉淀，形成凝胶骨架。药物随着聚合物的不断降解、溶蚀而缓慢释放，且遵循药物 从聚合物凝胶骨架中扩散、溶解的一般规律。原位凝胶主要包括四种类型，温度敏感型、pH敏感型、离子敏感型和溶剂去除型。 温度敏感型原位凝胶材料指的是在某一温度的之上或之下时，呈易流动溶液或分散液，当 材料温度达到此温度之下或之上后，呈难流动的凝胶态。PH敏感型原位凝胶材料指的是在 某一 PH(或酸度)值的之上或之下时，呈易流动溶液或分散液，当材料pH达到此pH值之下 或之上后，呈难流动的凝胶态。离子强度敏感型原位凝胶材料指的是材料的性质与环境中 离子强度有关，离子强度的变化直接影响材料在溶液中的粘度，即形成凝胶的程度。离子一 般为Na+、K+、Ca2\ Zn2\溶剂去除型原位凝胶的机理是利用某些生物相容性好的有机溶媒 溶解可生物降解聚合物，当注射到皮下或肌内时，有机溶媒很快逸散至周围组织中，体液中 的水(可生物降解材料的不良溶媒)可渗透至有机相中，使其中的聚合物因溶解度降低而 发生沉淀。
发明内容
本发明公开了一种可注射雌三醇缓控释给药系统。可注射雌三醇缓控释给药系统 能方便地注射到皮下或肌肉中，对雌三醇有缓控释效果，起到长效作用。可注射雌三醇缓控 释给药系统注射后能在人体内保持长时间释放药物，从而减少注射次数，患者顺应性好，治 疗成本下降。本发明中的可注射雌三醇缓控释给药系统，可在体内缓释时间延长至0. 5个月、1 个月、2个月、3个月、6个月或9个月，优选的是缓释时间延长至0. 5个月、1个月、2个月或 3个月，更优选的是缓释时间延长至0. 5个月或1个月。本发明中的可注射雌三醇缓控释给药系统，剂型选自微球、微囊、纳米粒、乳剂、原 位凝胶，也就是选自可注射雌三醇微球、可注射雌三醇微囊、可注射雌三醇纳米粒、可注射 雌三醇乳剂、可注射雌三醇原位凝胶，优选自可注射雌三醇微球、可注射雌三醇乳剂、可注 射雌三醇原位凝胶，更优选的是可注射雌三醇原位凝胶。
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当选择可注射雌三醇缓控释给药系统为可注射雌三醇微球时，制备方法选自单 乳_液中干燥法、复乳_液中干燥法、喷雾干燥法、低温喷雾提取法、相分离法、超临界流体 技术，优选自单乳-液中干燥法、复乳-液中干燥法、喷雾干燥法、相分离法，更优选的是复 乳_液中干燥法。这些制备方法可以参考相关专业书籍和文献，由专业技术人员设计和操 作完成。制备得到的微球混悬液，可进一步干燥可形成粉末。本发明中的可注射雌三醇微 球，其粒径为1 1000微米，优选的是5 200微米，更优选的是10 50微米。可注射雌 三醇微球中雌三醇的量、辅料的量没有限制，只要能产生相应缓释作用就可以，优选的缓释 微球中含有0. 5 40%重量比的雌三醇、60 99. 5%重量比的聚合物、0 10%重量比的 其它在药学上可接受的辅料。其它在药学上可接受的辅料选自吸附剂、增溶剂、助溶剂、防 腐剂、稳定剂、冻干保护剂、表面活性剂中的一种或多种。本发明中的可注射雌三醇微球，其中微球基质选自各种能起到缓释作用的材料， 具体选自聚合物、水难溶无机材料，优选自聚合物。聚合物选自生物可降解聚合物和生物难 或不降解聚合物，优选自生物可降解聚合物。水难溶性无机材料选自碳酸钙、磷酸钙、硫酸 钙、乳酸钙、硅酸盐、二氧化硅。生物可降解聚合物选自天然聚合物、合成聚合物，优选的是 合成聚合物。天然聚合物选自多糖、多肽、蛋白质。多糖选自葡聚糖、壳聚糖、海藻酸盐、淀 粉、微晶纤维素。蛋白质选自明胶、牛血清白蛋白。合成聚合物选自聚酯、聚酐、聚磷腈、聚 酰胺，优选自聚酯、聚酐。聚酯选自聚乳酸(PLA)、聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚丙交酯乙交 酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁 酸酯羟基戊酸酯共聚物、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸羟基乙酸聚乙二醇(PLGA-PEG)、 聚乳酸聚乙二醇(PLA-PEG)、聚羟乙酸聚乙二醇；优选自聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸、聚丙交 酯乙交酯、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸、聚羟基丁酸酯羟基戊酸酯共聚物、聚乳酸羟基乙酸聚乙 二醇；更优选自聚乳酸羟基乙酸、聚乳酸羟基乙酸聚乙二醇；最优选的是聚乳酸羟基乙酸。 聚乳酸羟基乙酸优选的是分子量在3000 50000道尔顿之间，乳酸和羟基乙酸聚合比例在 10 90 90 10之间的聚合物。本发明中的可注射雌三醇缓释微球的形态可以是混悬液或注射用粉末。混悬液状 态是可注射雌三醇微球直接在分散介质中分散的状态，一般放置后会有沉降现象，振摇后 能混悬均勻。分散介质选自水、水溶液、丙二醇，水一般采用注射用水。水溶液中溶解电解 质、渗透压调节剂、PH调节剂、混悬剂等一种或多种成分，选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、磷酸 盐缓冲剂、醋酸盐缓冲剂、羧甲基纤维素钠。混悬液状态的可注射雌三醇微球用于注射时称 为微球注射液。注射用微球是可注射雌三醇微球的干燥状态，一般经过适当处理，经过喷雾 干燥或冷冻干燥得到。当选择可注射雌三醇缓控释给药系统为可注射雌三醇微囊时，可注射雌三醇微囊 的制备方法包括相分离法、液中干燥法、喷雾干燥法等，选择合适的处方和工艺就可以得到 较理想的可注射雌三醇微囊。当选择可注射雌三醇缓控释给药系统剂型为可注射雌三醇纳米粒时，制备方法有 很多种，根据纳米粒的材料和要求不同，可参考相关文献和专业技术书籍。一般地，可注射 雌三醇聚合物纳米粒的制备方法包括聚合法、沉淀法、溶剂挥发法、盐析法；可注射雌三醇 固体脂质纳米粒(SLN)的制备方法包括高压乳勻法、微乳法、溶剂挥发法；可注射雌三醇无 机纳米粒的制备方法包括沉淀法。可注射雌三醇纳米囊的方法一般地包括单体界面聚合法和聚合物界面纳米沉积法。可注射雌三醇纳米粒混悬液可以选择适当处方并在适当条件下 进行冷冻干燥或喷雾干燥，形成固体粉末状，这样可以保证制剂的稳定性，临用前加入水溶 液振摇即可得到可注射雌三醇纳米粒混悬液。固体脂质纳米粒在本发明中作为可注射雌三醇纳米粒剂型的优选。一般地，将雌 三醇与常温下为固态的脂质，如磷脂、脂肪酸、甘油酯，共同加热熔融，然后加入水或适当缓 冲液，在加热情况下在高压乳勻机上循环乳化多次，形成纳米分散的乳滴，迅速冷却，使之 固化，即得到可注射雌三醇固体脂质纳米粒。用微乳法也可制得可注射雌三醇固体脂质纳 米粒。当选择可注射雌三醇缓控释给药系统为可注射雌三醇乳剂时，制备方法可参考相 关文献和专业技术数据。一般地，需要添加乳化剂、油相，采用各种乳化设备(如电动搅拌 器、胶体磨、超声波乳化器、高速搅拌器、高压乳勻机)进行分散制得。选择适当处方后，乳 剂还可以干燥形成干乳，临用前配置重新形成可注射雌三醇乳剂。设计适当处方后，还可以 制备得到可注射雌三醇自乳化系统。纳米乳和微乳是较特殊的乳剂。纳米乳的粒径主要分 布在200nm以下；而微乳的粒径主要分布在lOOnm以下。可注射雌三醇纳米乳和可注射雌 三醇微乳的制备可参考相应文献。一般地，在可注射雌三醇微乳中包括乳化剂、助乳化剂、 助溶剂、油相、水相、药物。一般在选择合适的处方后，即可容易地形成可注射雌三醇微乳。 如果选择合适的处方，一般包括乳化剂、助乳化剂、助溶剂、油相，还可以组成可注射雌三醇 自微乳化系统，在加入适量水溶液后，系统可以自行分散成可注射雌三醇微乳。原位凝胶在本发明中作为可注射雌三醇缓控释给药系统剂型的优选。可注射雌三 醇原位凝胶，含有雌三醇和原位凝胶材料。原位凝胶材料选自用于溶剂去除型原位凝胶的 可生物降解聚合物、温度敏感型原位凝胶材料、PH敏感型原位凝胶材料、离子强度敏感型原 位凝胶材料中的一种或多种；也就是说，这些原位凝胶材料在可注射雌三醇原位凝胶中可 以单用，也可以合用。本发明中的用于溶剂去除型原位凝胶的可生物降解聚合物选自聚乳酸(PLA)、聚 乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸_聚乙二醇嵌段共聚物、聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共 聚物、聚N-异丙基丙烯酰胺、乙酸异丁酸蔗糖酯，优选的是聚乳酸(PLA)、聚乳酸羟基乙酸 (PLGA)、乙酸异丁酸蔗糖酯。本发明中的温度敏感型原位凝胶材料选自泊洛沙姆407 (Poloxamer 407，P407)、 泊洛沙姆188、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、壳聚糖衍生物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物、 聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物、乙羟基乙基纤维素、聚己内酯聚乙二醇嵌段共聚 物、聚N-异丙基丙烯酰胺，优选自泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、甲基纤维素、聚乳酸-聚乙 二醇嵌段共聚物、聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物、聚己内酯-聚乙二醇嵌段共聚 物、聚N-异丙基丙烯酰胺，更优选自泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、甲基纤维素。本发明中的pH敏感型原位凝胶材料选自醋酸纤维素酞酸酯(CAP)、羟丙甲纤维素 酞酸酯(HPMCP)、卡波姆、壳聚糖，优选自醋酸纤维素酞酸酯、卡波姆。本发明中的离子强度 敏感型原位凝胶材料选自海藻酸盐、结冷胶。本发明中的可注射雌三醇原位凝胶中单用一种原位凝胶材料时，优选的是用于溶 剂去除型原位凝胶的可生物降解聚合物。可注射雌三醇原位凝胶中合用多种原位凝胶材料 时，优选的是将温度敏感型原位凝胶材料、PH敏感型原位凝胶材料、离子强度敏感型原位凝
6胶材料中的一种与用于溶剂去除型原位凝胶的可生物降解聚合物结合使用。用于溶剂去除型原位凝胶在制备是需要采用溶剂将雌三醇和凝胶材料溶解。溶剂选自N-甲基吡咯烷酮(NMP)、甘油三醋酸酯、乳酸乙酯、甘油缩甲醛、苯甲酸苄酯、二甲亚 砜、丙酮、乙醇、2-吡咯烷酮、碳酸丙烯酯，优选的是N-甲基吡咯烷酮。可注射雌三醇原位凝胶的制备方法可参考相关文献和专业技术。一般地，将原位 凝胶基质和雌三醇置于适宜溶剂中，充分分散或溶解，皮下或肌内注射。如果采用不同机制 的环境敏感性原位凝胶材料，可使其快速胶凝。
图1.可注射雌三醇微球电镜照片图2.可注射雌三醇原位凝胶图3.可注射雌三醇原位凝胶体外释放曲线
具体实施例方式实施例1.可注射雌三醇微球取雌三醇(IOOmg)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA，漏=10000, LA GA = 50 50，0.5g)溶于5ml 二氯甲烷中，加入3%的聚乙烯醇(PVA)水溶液(20ml)，高速搅拌， 形成乳液，转移至30ml的3% PVA水溶液中，在室温下，搅拌4小时，挥发二氯甲烷，微球固 化。离心微球混悬液，所得微球以蒸馏水洗涤3次，加入适量甘露醇，冷冻干燥，即得到白色 粉末。用少量水分散后，可在电镜下观察到约10微米以下的圆整微球，即为可注射雌三醇 微球(图1)。实施例2.可注射雌三醇固体脂质纳米粒取雌三醇(50mg)、单硬脂酸甘油酯(0. 7g)、吐温80(0. 03g)于烧杯中加热至80°C， 逐渐加入含十二烷基硫酸钠(IOmg)的80°C水(10ml)，保持温度不变，呈透明液体。再将其 用注射器注入到高速搅拌的0°C水中，呈透明液体。在原子力显微镜下观察，多为100纳米 以下的粒子。该可注射雌三醇固体脂质纳米粒混悬液可常温放置10天未见沉淀析出。该 固体脂质纳米粒混悬液添加适当保护剂后冻干成固体粉末，临用前加入水，即成可注射雌 三醇固体脂质纳米粒混悬液实施例3.可注射雌三醇乳剂取雌三醇、泊洛沙姆P188、玉米油、丙二醇加热，全溶，溶液缓慢滴入搅拌着的 PH7. 4磷酸缓冲液中，得到乳剂。该乳剂经过高压乳勻机循环乳化3次，得到乳滴粒径小于 1微米的乳剂。该乳剂灌封于安瓿内，经过100°C加热30分钟加热。取样观察，绝大部分乳 滴粒径小于5微米。该可注射雌三醇乳剂在室温放置可保持较长时间稳定。该乳剂可用于 肌肉注射。实施例4.可注射雌三醇纳米乳取雌三醇(50mg)溶于5ml油酸乙酯/四氢呋喃混合溶剂中，加入适量聚氧乙烯蓖 麻油和单甘酯，加热搅拌成溶液，在高速搅拌条件下，加入约4ml水，持续搅拌，得到半透明 状分散液体。粒度测定结果表明大部分粒子在120nm以下，即为可注射雌三醇纳米乳。实施例5.可注射雌三醇原位凝胶
称取 25g PLGA(Mn = 10000, LA GA = 50 50)溶于 IOOmLN-甲基吡咯烧酮 (NMP)中，混勻，配制成聚合物溶液，然后加入IOg雌三醇，搅拌溶解，即得可注射雌三醇原 位凝胶(图2)。取约含IOmg雌三醇的可注射雌三醇原位凝胶缓慢注入到IOOOmL含1 %聚乙二醇 400的磷酸盐缓冲液(药典标准，pH7.4)的玻璃瓶中，加盖密封，放入恒温空气摇床(37°C， 转速50rpm)中，分别于2h、8h、ld、3d、7d、IOcU 14d、21d、28d，取IOmL释放介质，并补加相同 温度的释放介质10mL。不同点取的释放介质用HPLC法在281nm处测定雌三醇浓度，计算累 计释放百分率(图3)，发现药物可缓释30天以上。将此原位凝胶注射到大鼠皮下，2小时后处死，观察皮下凝胶形成情况，发现形成 白色凝聚态固体。实施例6.可注射雌三醇原位凝胶称取35g乙酸异丁酸蔗糖酯溶于IOOmL N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，混勻，配制成 聚合物溶液，然后加入IOg雌三醇，搅拌溶解，即得可注射雌三醇原位凝胶。
权利要求
一种可注射雌三醇缓控释给药系统。
2.如权利要求1所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，选自可注射雌三醇微球、可注 射雌三醇微囊、可注射雌三醇纳米粒、可注射雌三醇乳剂、可注射雌三醇原位凝胶。
3.如权利要求1所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，是可注射雌三醇原位凝胶，含 有雌三醇和原位凝胶材料。
4.如权利要求3所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，原位凝胶材料选自用于溶剂去 除型原位凝胶的可生物降解聚合物、温度敏感型原位凝胶材料、PH敏感型原位凝胶材料、离 子强度敏感型原位凝胶材料中的一种或多种。
5.如权利要求3所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，原位凝胶材料是用于溶剂去除 型原位凝胶的可生物降解聚合物。
6.如权利要求5所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，用于溶剂去除型原位凝胶的可 生物降解聚合物选自聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物、聚乳酸羟基 乙酸_聚乙二醇嵌段共聚物、聚N-异丙基丙烯酰胺、乙酸异丁酸蔗糖酯。
7.如权利要求5所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，用于溶剂去除型原位凝胶的可 生物降解聚合物选自聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸、乙酸异丁酸蔗糖酯。
8.如权利要求3所述的可注射雌三醇缓控释给药系统，原位凝胶材料是将温度敏感型 原位凝胶材料、PH敏感型原位凝胶材料、离子强度敏感型原位凝胶材料中的一种与用于溶 剂去除型原位凝胶的可生物降解聚合物结合使用。
全文摘要
本发明公开了一种可注射雌三醇缓控释给药系统。可注射雌三醇缓控释给药系统能方便地注射到皮下或肌肉中，对雌三醇有缓控释效果，起到长效作用。可注射雌三醇缓控释给药系统注射后能在人体内保持长时间释放药物，从而减少注射次数，患者顺应性好，治疗成本下降。本发明中的可注射雌三醇缓控释给药系统，选自可注射雌三醇微球、可注射雌三醇微囊、可注射雌三醇纳米粒、可注射雌三醇乳剂、可注射雌三醇原位凝胶。
文档编号A61P15/12GK101822636SQ20101018012
公开日2010年9月8日 申请日期2010年5月24日 优先权日2010年5月24日
发明者刘士军, 李淼, 杜丽娜, 苏畅, 董俊兴, 金义光 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所