一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法

专利名称：一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
咳喘是当今世界上难以根治的病症之一，是呼吸系统的多发病，因为气管对刺激 物过度敏感的反应，严重的病人可延续数日或数周发作，此病具有对人体健康危害大、发病 率高、病程长等特点，给病人带来了极大的痛苦和麻烦。经典中医理论认为，哮喘的发生，为 宿痰内伏于肺，复加外感、饮食、体虚病后等因素，以致痰堵气道、废气上逆所致。近年来，许 多学者在辨证施治、标本兼治的基础上发展了脏腑论治、从肺论治、肺肾论治、肺脾论治、肺 肝论治、脾胃论治等不同的治疗方法及手段，但是如何能够快速治愈、根治此病仍是医学界 的难题。本申请人研制开发了一种治疗咳喘病的中药，对咳喘病有很好的疗效，主要用于西 医谓之急、慢性支气管炎、肺气肿、支气管哮喘诸病，在中医临床辩证中，凡具有哮、喘证候， 且属于实证、热证者均为该处方的适用范畴。如中医“哮证”中之“热哮证”和“喘证”中之 “痰热郁肺证”，以及“阻塞性肺气肿”中属于“热证”者。但药品如果没有严格的质量标准， 得到的产品不能确保其质量，结果必将影响该药物的临床疗效；所以为提高药物的治疗作 用，确保用药的安全、有效及产品质量的稳定，制定一个严格可靠的质量标准成为保证药品 质量的基本要求。随着现代仪器分析技术的发展，高效液相色谱法、薄层色谱鉴别法等分析 方法在药品的质量控制中得到了越来越广泛的应用。

发明内容
本发明的目的在于，提供一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法。本发明建立了系 统的、完整的、有效的成分鉴别和含量测定方法，可有效控制该药品的质量，从而确保其临 床疗效。本发明所述治疗咳喘病的胶囊剂是以吉祥草600 650份、黄芩350 400份、浙 贝母350 400份、蛤壳225 275份、毛大丁草400 450份、麻黄350 400份、炙桑白 皮475 525份、炙葶苈子350 400份、天竺黄400 450份、炙僵蚕400 450份和地 龙350 400份为原料药，加入适量辅料制成的。其制备方法为称取十一味药材，加水煎 煮3次，第一次加8倍量水，第二、三次各加6倍量水，每次煎煮1小时，滤过，合并滤液；滤 液浓缩至50°C相对密度为1. 1，加乙醇使含醇量为70%，静置24小时，吸取上清液，滤过，滤 液回收乙醇，减压浓缩，80°C以下减压干燥，得干膏，粉碎过80目筛，加入淀粉25份和微晶 纤维素50份，混勻，颗粒装入胶囊，即得胶囊剂。(以上份数均指重量份)本发明所述的检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定项目；其中鉴别是对制剂 中的黄芩、浙贝母、毛大丁草、麻黄的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中麻黄碱和黄芩苷 的含量测定。黄芩的鉴别方法是以黄芩对照药材和黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品为对照，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2为展开剂的薄层色谱法； 浙贝母的鉴别方法是以贝母素甲、贝母素乙对照品为对照，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液= 17 2 1为展开剂的薄层色谱法；毛大丁草的鉴别方法是以毛大丁草对照药材为对照， 以氯仿-甲醇=30 10为展开剂的薄层色谱法；麻黄的鉴别方法是以麻黄对照药材为对 照，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0. 5为展开剂的薄层色谱法。具体的鉴别方法为(1)黄芩的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混 合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，取上清液 作为供试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品、黄 芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液； 照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各
L，及对照品溶液2μ 1分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2为展开剂，饱和30分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对 照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同 的暗色斑点；(2)浙贝母的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液2mL与甲苯20mL，放 置过夜，滤过，取滤液8mL，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素 甲、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各20 μ L，分别 点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液= 17 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)毛大丁草的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声 40分钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2mL溶 解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材lg，同法处理，制成对照药材溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15ul、对照药材溶液5 μ L，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇=30 10为展 开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点；(4)麻黄的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷 IOmL,加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶 液；另取麻黄对照药材lg，同法处理，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录 VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10yL，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0.5为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液；在105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照 药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。麻黄碱的含量测定方法是以盐酸麻黄碱对照品为对照，以乙腈0. 磷酸= 5 95为流动相的高效液相色谱法；黄芩苷的含量测定方法是以黄芩苷对照品为对照，以 甲醇水磷酸=47 53 0.2为流动相的高效液相色谱法。
具体的含量测定方法为(1)麻黄碱含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈0. 磷酸=5 95为流动相；流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm ；理论 板数按盐酸麻黄碱峰计不低于6000 ；对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，即得 每ImL含盐酸麻黄碱4 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0.2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 勻，滤过；精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置 IOmL量瓶中，加盐酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测 定，即得；本制剂每粒含麻黄以盐酸麻黄碱CltlH15NO · HCl计，不得少于1. 29mg ；(2)黄芩苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2为流动相；流速为lmL/min ；柱温30°C;检测波长为207nm ；理论板数 按黄芩苷峰计不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黄芩苷50 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 3g，精密称定，加70%乙醇40mL，回流3小 时，放冷，滤过，滤液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同 一量瓶中，加70 %乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测 定，计算，即得；本制剂每粒含黄芩以黄芩苷C21H18O11计，不得少于13. Smg0本发明所述的检测方法包括性状其内容物为棕褐色粉末，气微，味微甜或微苦；鉴别(1)黄芩的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加乙酸乙酯_甲醇=3 1 的混合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，取上 清液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品、 黄芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液； 照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各
L，及对照品溶液2μ 1分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2为展开剂，饱和30分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对 照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同 的暗色斑点；
(2)浙贝母的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液2mL与甲苯20mL，放 置过夜，滤过，取滤液8mL，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素 甲、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各20 μ L，分别 点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液= 17 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)毛大丁草的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声 40分钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2mL溶 解，作为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材lg，同法处理，制成对照药材溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15ul、对照药材溶液5 μ L，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇=30 10为展 开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点；(4)麻黄的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷 IOmL,加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶 液；另取麻黄对照药材lg，同法处理，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录 VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10yL，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0.5为展开 齐U，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液；在105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照 药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合《中国药典》2005年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；含量测定(1)麻黄碱含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈0. 磷酸=5 95为流动相；流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm ；理论 板数按盐酸麻黄碱峰计不低于6000 ；对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，即得 每ImL含盐酸麻黄碱4 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0.2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 勻，滤过；精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置 IOmL量瓶中，加盐酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测 定，即得；本制剂每粒含麻黄以盐酸麻黄碱CltlH15NO · HCl计，不得少于1. 29mg ；(2)黄芩苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2为流动相；流速为lmL/min ；柱温30°C;检测波长为207nm ；理论板数按黄芩苷峰计不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黄芩苷50 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 3g，精密称定，加70%乙醇40mL，回流3小 时，放冷，滤过，滤液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同 一量瓶中，加70 %乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测 定，计算，即得；本制剂每粒含黄芩以黄芩苷C21H18O11计，不得少于13. Smg0为了确保本发明检测方法科学、合理、可行，申请人进行了一系列试验研究和考
察。 (一 )鉴别1、黄芩的薄层色谱鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取本制剂内容物2g， 按本发明所述方法制成供试品溶液。另取黄芩对照药材lg，缺黄芩的阴性制剂，同法制成对 照药材溶液、阴性对照溶液；再取黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制 成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液；吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、对照 药材溶液各5 μ L及对照品溶液2 μ L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲 醇-甲酸(10 3 1 2)为展开剂，饱和30分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与对照品色谱相应的位置 上，显三个相同的暗色斑点；阴性对照无干扰。故选择其列入本发明检测项目。2、浙贝母薄层色谱鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验。取本制剂内容物 2g，按本发明所述方法制成供试品溶液。另取贝母素甲、贝母素乙对照品，缺浙贝母的阴性 制剂，同法制成对照品溶液、阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶 液各20 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲 醇-浓氨试液(17 2 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色 谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果Rf值适中，斑点清晰，阴性 对照无干扰。故选择其列入本发明检测项目。3、毛大丁草的薄层色谱鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验。实验中曾参照文献 “毛大丁草化学成分研究”，结果阴性有干扰，后参照“薄层扫描法测定毛大丁草中熊果苷的 含量”，加入甲醇溶液40mL，超声30分钟，过滤，回收甲醇至干，残渣加甲醇2mL溶解，取上清 液作为供试品溶液。另取毛大丁草对照药材，同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶 液、对照药材溶液各3 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 1 1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸 乙醇溶液，在105°C加热至斑点清晰。结果重现性差，样品斑点不清晰。因此，采用取本制剂 内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声40分钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，过滤，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取毛大丁草对照药材lg，缺 毛大丁草的阴性制剂，同法处理，制成对照药材溶液、阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液 15ul、对照药材溶液、阴性对照溶液各5μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅 胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(30 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无 干扰。故选择其列入本发明检测项目。4、麻黄薄层色谱鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，取本制剂内容物2g， 按本发明所述方法制成供试品溶液。另取麻黄对照药材，缺麻黄的阴性制剂，同法制成对照 药材溶液、阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液各9 μ L，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (20 5 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液。在105°C加热至斑点清晰。 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。故 选择其列入本发明检测项目。5、桑白皮的薄层色谱鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验。实验中曾参照2005 年版《中国药典》桑白皮TLC的鉴别，结果阴性有干扰，效果不好。经过分析，认为黄芩中的 黄酮成分对试验造成干扰，故改变前处理办法，加95%乙醇90mL回流1小时，过滤，滤液蒸 干，残渣加乙酸乙酯2mL溶解，取上清液作为供试品溶液。对照药材同法处理，结果对照药 材斑点不清晰，后又采用加水20ml回流30分钟，过滤，滤液加乙醇使其含醇量为80%，放置 过夜，取上清液挥干，加Iml乙酸乙酯溶解，制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液、对照 药材溶液、阴性对照溶液各9μ 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，但色谱条件不稳定，样品Rf 变化较大，斑点模糊。故不列入本发明检测项目。6、地龙的薄层色谱鉴别实验中分别参考了《中国药典》2005年版地龙项下的鉴别方法，薄层扫描法测定地 龙类药材中琥珀酸的含量，丹黄胶囊的薄层鉴别研究，舒心丸的质量标准研究，双波长薄层 扫描法测定地龙注射液中缬氨酸的含量，小活络丸的薄层分析，均因干扰太大而未列入本 发明检测项目。7、吉祥草的薄层色谱鉴别实验中分别参考了《贵州省中药材、民族药质量标准》以及复方吉祥草含片质量标 准研究等文献，均因干扰太大未列入本发明检测项目。(二)含量测定本制剂以麻黄为君药，故选择麻黄中的有效成分盐酸麻黄碱作为质量标准的含测 指标，以很好地控制成品质量；另外黄芩具有清热燥湿，泻火解毒功效，所以配合黄芩中的 有效成分黄芩苷作为本发明含量测定指标成分，可以更好地控制成品质量。1、麻黄碱照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。(1)仪器与试药仪器=AngilentllOO高效液相色谱仪；ΗΒ-10250型超声清洗器(250W，40kHz)，江 苏汉邦科技有限公司；梅特勒_托利多AE电子分析天平(METTLER TOLEDO十万分之一)。
试剂甲醇为色谱纯，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，磷酸、中性氧化铝均为分析纯。盐酸麻黄碱对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)，批号为 241-200102。样品本发明制剂(吉贝咳喘胶囊，批号20041001、20041002、20041003)。(2)对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品13. 5mg,置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻 度，摇勻，精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，即得(每ImL含盐酸麻 黄碱 5. 4 μ g)。(3)色谱条件的选择在进行盐酸麻黄碱色谱条件选择时，参考了《中国药典》2005年版一部麻黄项下盐 酸麻黄碱的含量测定色谱条件，进行了色谱波长的筛选。根据实验确定盐酸麻黄碱的色谱 条件为=DiamonsilTM(钻石)C18 5 μ m(250X4. 6mm)；流动相为乙腈_0. 1 %磷酸(5 95)； 流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm。选择条件见表6。表6盐酸麻黄碱色谱条件选择 (4)系统适用性试验阴性溶液的制备取缺麻黄的阴性样品约0. 5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精 密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理(功率16W，频率50kHz) 45分钟，放冷，再称定重量， 用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱(100 200目， 1.5g，内径1cm)上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置IOmL量瓶中，加磷酸1滴，用 50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。空白溶液的制备取具塞锥形瓶，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理45分 钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇勻，滤过。精密量取续滤液lmL，置中性氧化 铝柱(100 200目，1.5g，内径Icm)上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置IOmL量瓶 中，加磷酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本制剂内容物约0. 5g，精密称定，置于具 塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理(功率16W，频率50kHz) 45分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱 (100 200目，1. 5g，内径1cm)上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置IOmL量瓶中，加 磷酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。从图谱可知，在此色谱条件下，盐酸麻黄碱峰与其他组分峰完全分离，在与盐酸麻 黄碱峰相同的保留时间内，阴性对照无干扰。样品理论板数以盐酸麻黄碱峰计为6502，故确定理论板数以盐酸麻黄碱计，应不得低于6000。(5)供试品溶液的制备方法选择A.提取溶剂的选择取同一批号本制剂的内容物约0. 5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入 75%甲醇、甲醇和乙醇各25mL，称定重量，超声处理(功率16W，频率50kHz) 45分钟，放冷， 再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇勻，滤过。分别精密量取续滤液lmL，置中性 氧化铝柱(100 200目，1.5g，内径lcm)上，分别用50%甲醇、50%甲醇和50%乙醇洗脱， 收集洗脱液约9mL，置10mL量瓶中，加磷酸1滴，分别用50%甲醇、50%甲醇和50%乙醇稀 释至刻度，摇勻，即得，测定样品中盐酸麻黄碱的含量。结果见表7。表7提取溶剂选择
溶剂75%甲醇 甲醇 乙醇- 结果显示用甲醇提取本制剂(吉贝咳喘胶囊)中的盐酸麻黄碱的量最大。B.提取方法的选择取同一批号本制剂的内容物约0.5g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，配 制三份，一份超声处理45分钟；另一份回流提取60分钟；第三份索氏提取60分钟。三份提 取后放冷，再称定重量。用甲醇补足减失重量，摇勻，滤过，分别精密量取续滤液lmL，置中性 氧化铝柱(100 200目，1.5g，内径lcm)上，分别用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置 10mL量瓶中，加磷酸1滴，分别用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得，测定样品中盐酸麻黄碱 的含量。结果见表8。表8提取方法选择
溶剂索氏提取热回流提取超声提取盐酸麻黄碱的含量(mg/g)1. 933. 243. 23结果显示索氏提取效果较差，热回流提取和超声提取两种方法无显著性差异，故 选用操作简单方便的超声提取法。C.提取时间的选择取同一批号本制剂的内容物约0. 5g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量；超 声处理15分钟、25分钟、35分钟，45分钟，60分钟，放冷，称定重量。用甲醇补足减失重量， 摇勻，滤过，取续滤液，测定样品中丹参酮IIA的含量。结果见表9。表9提取时间选择 结果显示45分钟与60分钟盐酸麻黄碱测定结果无显著性差异，故将提取时间定为45分钟。根据上述实验确定供试品溶液制备方法为取装量差异项下的本制剂内容物约 0. 5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，超声处理(功率16W，频 率50kHz) 45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，精密量取续滤液 ImL,置中性氧化铝柱(100 200目，1. 5g，内径1cm)上，分别用50%甲醇洗脱，收集洗脱液 约9mL，移置IOmL量瓶中，加磷酸1滴，分别用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。(6)线性关系的考察标准曲线的绘制精密称取盐酸麻黄碱对照品13. 5mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取30mL置150mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻， 作为盐酸麻黄碱储备液一。分别精密吸取盐酸麻黄碱储备液一各10mL、17mL、24mL、31mL、 38mL置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，制成每ImL含盐酸麻黄碱5. 4 μ g/ mL，9. 18 μ g/mL, 12. 96 μ g/mL, 16. 74 μ g/mL, 20. 52 μ g/mL 的系列对照品溶液，精密吸取上 述溶液20 μ L，分别注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积 为横坐标，对照品的进样量为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线。结果见表10。表10线性关系考察实验结果 盐酸麻黄碱回归方程为:y= 7X10-4X-3. 8X10-4 (r = 0. 9996)。经拟合过原点的方程为:y = 7X10-4x(r = 0. 9994)。将同一样品的盐酸麻黄碱峰面积分别代入上述两方程中，结果相对偏差为 0. 96%,可认为截距为零，用外标一点法计算含量，盐酸麻黄碱在0. 108 μ g 0. 4104 μ g范 围内呈良好的线性关系。(7)精密度试验A.取对照品溶液20 μ L，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积， 重复进样6次，以盐酸麻黄碱峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD(% )，结果见表11。表11精密度考察实验结果 结果相对标准偏差RSD(% )为1. 40% (η = 6)，表明重复性良好。B.取同一批号本制剂的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试 品溶液20 μ L，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，重复进样6次，以盐 酸麻黄碱峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD (%)，结果见表12。
表12精密度考察实验结果 结果相对标准偏差RSD(% )为1. 6% (n = 6)，表明重复性良好(8)中间精密度试验取同一批号本制剂的内容物，不同实验人员按供试品溶液制备方法操作制备供试 品溶液，吸取供试品溶液20 y L，注入不同高效液相色谱仪仪器一AngilentllOO 高效液相色谱仪；Diamosile_C18 (250mmX4. 6mm, 5 u m)仪器二岛津 LC-20A 高效液相色谱仪；Diamosile-C18(250mmX4. 6mm，5iim)按(3)项下色谱条件测定峰面积，两台仪器分别重复进样6次，以测得峰面积计算 盐酸麻黄碱的含量，求出相对标准偏差RSD(% )，结果见表13。表13中间精密度考察实验结果 结果表明相对标准偏差RSD(% )为2. 7% (n = 12)，表明中间精密度良好。(9)稳定性试验取同一批号样品的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试品溶 液2(^1^，分别在0，1，2，4，8，1211注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，以 盐酸麻黄碱峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD(% )，结果见表14。表14稳定性实验结果 结果取供试品溶液，在设定的时间内注入色谱仪，平均峰面积为293.54， RSD(% )为0. 74% (n = 6)，表明本供试品溶液在12h内稳定。
(10)重复性试验取同一批号本制剂的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试品 溶液20 yL，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按下式计算出各样品 中盐酸麻黄碱含量，计算式如下 C 盐酸麻黄碱对照品浓度(mg/mL)W:样品称样量(g)A样样品峰面积Am 盐酸麻黄碱对照品峰面积B样样品进样量(iiL)盐酸麻黄碱对照品进样量(PL)根据上式计算出样品中盐酸麻黄碱含量，结果见表15。表15重复性试验结果
编号123456
含量 mg/g3.31 3.33 3.35 3.34 3.36 3.34
平均含量mg/g3. 34
RSD (%)0. 47结果表明该样品的平均含量为3. 34mg/g, RSD为0. 47% (n = 6)，表明重现性良好。(11)加样回收率试验取同一批号本制剂内容物，混勻，取约0.25g，9份，精密称定，置于具塞锥形瓶中， 每三份分别加入盐酸麻黄碱储备液一(浓度为0. 169mg/mL)4mL，5mL和6mL。按(5)项下供 试品溶液制备方法操作，吸取对照品溶液和供试品溶液各15iU和20 yl，注入高效液相色 谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按下式计算出回收率，计算式如下回收率=(C-A) /BX100%A 样品盐酸麻黄碱的量(mg)B 盐酸麻黄碱对照品加入量(mg)C:测得量(mg)结果见表16。表16加样回收实验结果
16 结果平均回收率为102. 82%，RSD为0.11% (n = 9)，表明盐酸麻黄碱的回收率良好。(12)样品测定取10个批号的本制剂内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试品 溶液20 yL，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按(9)项下计算公式， 计算出各样品中盐酸麻黄碱含量(mg/g)。每粒含量(mg/粒)=含量(mg/g) X每粒粒重(g)注每粒粒重为0. 48g。结果见表17。表17十批样品含量测定结果 上述10批样品测得盐酸麻黄碱平均含量为3. 35mg/g。从大批量规模生产考虑， 本制剂每克盐酸麻黄碱的最低含量限度以平均含量的80%计算，即3. 35X0. 48X0.8 = 1. 29mg/粒，即每粒含麻黄以盐酸麻黄碱(CltlH15NO · HCl)计，不得少于1. 29mg。2、黄芩苷照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。(1)仪器与试药仪器=AngilentllOO高效液相色谱仪；HB-10250型超声清洗器(250W，40kHz)，江 苏汉邦科技有限公司；梅特勒_托利多AE电子分析天平(METTLER TOLEDO十万分之一)。试剂甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，重蒸水。黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)，批号为 110715-200212。样品本发明制剂(吉贝咳喘胶囊，批号:20041001、20041002、20041003)。(2)对照品溶液制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每ImL含 60 μ g的溶液，即得。(3)色谱条件的选择在进行黄芩苷色谱条件选择时，参考了《中国药典》2005年版一部黄芩项下黄 芩苷的含量测定色谱条件，进行了色谱波长的筛选。根据实验确定黄芩苷的色谱条件为 DiamonsilTM(钻石)C18 5 μ m(250X4. 6mm)；以甲醇-水-磷酸(47 53 0.2)为流动 相；流速为lmL/min ；柱温30°C ；检测波长为280nm。选择条件见表18。表18黄芩苷色谱条件选择
18 (4)系统适应性试验阴性对照试验及理论板数的确定阴性对照品溶液的制备取缺黄芩的阴性样品内容物约0. 3g，精密称定，加70% 乙醇40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置于100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤 容器和残渣，洗液滤入同一容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇勻。精密量取lmL，置10mL量 瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。空白溶液的制备加70%乙醇40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100mL量 瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇勻。精 密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。供试品溶液的制备取本制剂内容物约0. 3g，精密称定，置于烧瓶中，加70%乙醇 40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和 残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70 %乙醇至刻度，摇勻。精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲 醇至刻度，摇勻，即得。测定方法精密吸取对照品溶液5 yL，阴性溶液、空白溶液及供试品溶液各 10 u L，按上述色谱条件注入色谱仪。根据图谱可知，在此色谱条件下，黄芩苷峰与其他组分峰完全分离，在与黄芩苷峰 相同的保留时间内，阴性对照无干扰。样品理论板数以黄芩苷峰计为5331，故确定理论板数 以黄芩苷计，应不得低于5000。(5)供试品溶液的制备方法的选择A.提取溶剂的选择取同一批号本制剂的内容物约0.3g，精密称定，置于烧瓶中，分别精密加入50% 乙醇、60%乙醇和70%乙醇各40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，分 别用少量50 %乙醇、60%乙醇和70 %乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，分 别加50%乙醇、60%乙醇和70%乙醇至刻度，摇勻。精密量取lmL，移置10mL量瓶中，加甲 醇至刻度，摇勻，即得。测定样品中黄芩苷的含量。结果见表19。表19提取溶剂选择 试验结果表明，用70%乙醇提取本制剂(吉贝咳喘胶囊)中的黄芩苷的量最大。B.提取方法的选择
19
取同一批号本制剂的内容物约0. 3g，精密称定3份，1份置于烧瓶中，精密加入 70%乙醇各40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次 洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇勻。精密量取lmL，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；一份置于具塞锥形瓶中，精密加入100mL70%乙醇，称 定重量，超声处理120分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过。精 密量取续滤液lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定样品中黄芩苷的量。结 果见表20。表20提取方法选择 结果显示热回流提取较超声提取的黄芩苷含量高，故选用热回流提取3小时作 为供试品的提取方法。C.提取时间的选择取同一批号样品的内容物约0.3g，精密称定5份，分别精密加入70%乙醇各40mL， 分别加热回流1小时、2小时、3小时、4小时和5小时，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，分 别用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇勻。 精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定样品中黄芩苷的含量。结果 见表21。表21 提取时间选择 结果表明热回流提取3小时前黄芩苷含量较低，热回流提取4小时和5小时黄芩 苷的含量与热回流3小时的含量无显著差异，因此热回流提取3小时为最佳提取时间。根据实验确定供试品溶液制备方法为取装量差异项下的本制剂内容物约0. 3g， 精密称定，置烧瓶中，精密加入70%乙醇各40mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100mL 量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度， 摇勻。精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。(6)线性关系的考察标准曲线的绘制精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品15.5mg，置 100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻。精密吸取2、4、6、8、10mL置于25mL容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，制成黄芩苷浓度别为12. 4 u g/mL, 24. 8 u g/mL, 37. 2 u g/mL, 49. 6 u g/mL, 62 u g/mL的系列对照品溶液，精密吸取上述溶液10 u L，分别注入高效液相色 谱仪，按(3)项下色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积为横坐标，对照品的进样量为纵坐 标进行线性回归，绘制标准曲线。结果见表22。表22线性关系考察结果进样量(μβ) 0. 124 0. 248 0. 372 0.496 0.620
-
峰面积值383 764.1 1133.3 1527.3 1878.6黄芩苷回归方程为:y= 3027. 7x+10. 94 (r = 0. 9998)经拟合过原点的方程为:y = 3051. 8x(r = 0. 9997)。将同一样品的黄芩苷峰面积分别代入上述两方程中，结果相对偏差为0. 8%，可认 为截距为零，用外标一点法计算含量，黄芩苷在0. 124 μ g 0. 620 μ g范围内呈良好的线性关系。(7)精密度试验A.取对照品溶液5 μ L，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，重 复进样6次，以黄芩苷的峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD )，结果见表23。表23精密度考察实验结果 结果表明相对标准偏差RSD)为0. 26% (η = 6)，表明重复性良好。B.取同一批号本制剂的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试 品溶液10 μ L，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，重复进样6次，以黄 芩苷峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD )，结果见表24。表24精密度考察实验结果
编号123456
峰面积 344 345. 5 339. 7 346.8 343. 3 348.6
平均峰面积344. 65
RSD (%)0. 82结果表明相对标准偏差RSD(% )为0. 82% (η = 6)，表明重复性良好。(8)中间精密度试验取同一批号本制剂的内容物，不同实验人员按(5)项下供试品溶液制备方法操 作，吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μ L、10y L，注入不同高效液相色谱仪仪器一AngilentllOO 高效液相色谱仪；Diamosile_C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m)仪器二岛津 LC-20A 高效液相色谱仪；Diamosile_C18 (250mmX 4. 6mm，5 μ m)按(3)项下色谱条件测定峰面积，两台仪器分别重复进样6次，以测得峰面积计算黄芩苷的含量，求出相对标准偏差RSD(% )，结果见表25。表25中间精密度考察实验结果 结果表明相对标准偏差RSD(% )为2. 9% (n = 12)，表明中间精密度较好。(9)稳定性试验取同一批号本制剂的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试品 溶液5yL，分别在0，l，2，4，8，12h注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积， 以黄芩苷的峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD(% )，结果见表26。表26稳定性实验结果 结果取供试品溶液，在设定的时间内注入色谱仪，测得平均峰面积为349.65， RSD(% )为1. 62% (n = 6)，表明本供试品溶液在12h内稳定。(10)重复性试验取同一批号本制剂的内容物，按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取供试品 溶液10 yL，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按下式计算出各样品 中黄芩苷含量，计算式如下 根据上式计算出样品中黄芩苷含量，结果见表27。表27重复性实验结果 结果该样品的平均含量为37. 13mg/g, RSD为0. 39% (n = 6)，表明重现性良好。(11)加样回收率试验储备液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品58. 13mg，置 50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，即得。取同一批号本制剂内容物约0. 15g，9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，3份精确 加入黄芩苷储备液(浓度为1. 1626mg/mL)各4mL ；3份精确加入黄芩苷储备液(浓度为 1. 1626mg/mL)各5mL ；另3份精确加入黄芩苷储备液(浓度为1. 1626mg/mL)各6mL ；按(5) 项下供试品溶液制备方法操作，吸取对照品溶液和供试品溶液各5 y L、10 y L，注入高效液 相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按下式计算出回收率，计算式如下结果见表 28。回收率=(C-A) /BX100%A 样品中黄芩苷的量(mg)B 黄芩苷对照品加入量(mg)C 测得量(mg)表28加样回收实验结果 结果平均回收率为104. 92%，RSD)为2. 22% (η = 9)，表明黄芩苷的回收率良好。(12)样品测定取10个批号的本制剂按(5)项下供试品溶液制备方法操作，吸取对照品溶液和供 试品溶液各5 μ L、10y L，注入高效液相色谱仪，按(3)项下色谱条件测定峰面积，按(9)项 下计算公式计算出各样品中黄芩苷含量(mg/g)；结果见表29。表29十批样品含量测定结果 上述10批样品测得黄芩苷平均含量为36. 03mg/g。从大批量规模生产考虑，本制 剂每克黄芩苷的含量限度以80%计算，黄芩苷的含量为36. 03X0.8X0. 48 = 13. 8mg/粒， 故本制剂的限度定为每粒含黄芩以黄芩苷(C21H180n)计，不得少于13.8mg。与现有技术相比，本发明针对新开发的治疗咳喘病的中药制剂建立了系统的、完 整的、有效的质量检测方法，且所述方法的专属性强，精密度高，重现性好，回收率高，测量 结果准确，达到了有效控制药物质量的目的，从而确保了产品质量的稳定以及临床用药的 安全、有效。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明实施例1 治疗咳喘病的胶囊剂的制备(份数均指重量份)称取吉祥草600 650 份、黄芩350 400份、浙贝母350 400份、蛤壳225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黄350 400份、炙桑白皮475 525份、炙葶苈子350 400份、天竺黄400 450份、 炙僵蚕400 450份和地龙350 400份，加水煎煮3次，第一次加8倍量水，第二、三次各 加6倍量水，每次煎煮1小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩至50°C相对密度为1. 1，加乙醇使 含醇量为70%，静置24小时，吸取上清液，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩，80°C以下减压干 燥，得干膏，粉碎过80目筛，加入淀粉25份和微晶纤维素50份，混勻，颗粒装入胶囊，即得。该治疗咳喘病的胶囊剂的完整检测方法为性状其内容物为棕褐色粉末，气微，味微甜或微苦；鉴别(1)黄芩的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加乙酸乙酯-甲醇(3 1)的混 合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品、黄芩 素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每lmL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液。照薄 层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液 各5 y L及对照品溶液2 u 1分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (10 3 1 2)为展开剂，饱和30分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个 相同的暗色斑点。(2)浙贝母的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液2mL与甲苯20mL，放 置过夜，滤过，取滤液8mL，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素 甲、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每lmL各含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各20 u L， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试 液(17 2 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(3)毛大丁草的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声40 分钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解， 作为供试品溶液。另取毛大丁草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中 国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液15ul、对照药材溶液5yL，分别点 于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(30 10)为展开剂， 展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点。(4)麻黄的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷 10mL,加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶 液。另取麻黄对照药材lg，同法处理，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各10 yL，分别点于同一以羧 甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20 5 0.5) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液。在105°C加热至斑点清晰。供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。检查应符合《中国药典》2005年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；含量测定(1)麻黄碱含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈0. 磷酸=5 95为流动相；流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm ；理论 板数按盐酸麻黄碱峰计不低于6000 ；对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg，置于100mL量瓶中，用甲醇 溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取lmL，移置25mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻， 即得每lmL含盐酸麻黄碱4 y g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0.2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过；精密量取续滤液lmL，移置中性氧化铝柱上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL， 置IOmL量瓶中，加盐酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测 定，即得；本制剂每粒含麻黄以盐酸麻黄碱CltlH15NO · HCl计，不得少于1. 29mg。(2)黄芩苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2为流动相；流速为lmL/min ；柱温30°C;检测波长为207nm ；理论板数 按黄芩苷峰计不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黄芩苷50 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 3g，精密称定，加70%乙醇40mL，回流3小 时，放冷，滤过，滤液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同 一量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取lmL，移置IOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测 定，计算，即得；本制剂每粒含黄芩以黄芩苷C21H18O11计，不得少于13. Smgo
2权利要求
一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于所述的检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定项目；其中鉴别是对制剂中的黄芩、浙贝母、毛大丁草、麻黄的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中麻黄碱和黄芩苷的含量测定。
2.根据权利要求1所述的治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于黄芩的鉴 别方法是以黄芩对照药材和黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品为对照，以甲 苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2为展开剂的薄层色谱法；浙贝母的鉴别方 法是以贝母素甲、贝母素乙对照品为对照，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液=17 2 1为 展开剂的薄层色谱法；毛大丁草的鉴别方法是以毛大丁草对照药材为对照，以氯仿-甲醇 =30 10为展开剂的薄层色谱法；麻黄的鉴别方法是以麻黄对照药材为对照，以三氯甲 烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0. 5为展开剂的薄层色谱法。
3.根据权利要求1或2所述的治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于具体鉴 别方法为(1)黄芩的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混合溶 液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，取上清液作为供 试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品、黄芩素对照 品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液；照中国药典 2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μ L及对照品 溶液2μ1分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2 为展开剂，饱和30分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同的暗色斑点；(2)浙贝母的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液2mL与甲苯20mL，放置 过夜，滤过，取滤液8mL，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素 甲、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各20 μ L，分别 点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液= 17 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)毛大丁草的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声40分 钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作 为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材lg，同法处理，制成对照药材溶液；照中国药典2005 年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15ul、对照药材溶液5yL，分别点于 同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇=30 10为展开剂， 展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；(4)麻黄的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10mL， 加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另 取麻黄对照药材lg，同法处理，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄 层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠 为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液；在105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于麻黄碱的含量测定方法是以盐酸麻黄碱对照品为对照，以乙腈0.1%磷酸=5 95为流动相的 高效液相色谱法；黄芩苷的含量测定方法是以黄芩苷对照品为对照，以甲醇水磷酸= 47 53 0.2为流动相的高效液相色谱法。
5.根据权利要求1或4所述的治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于具体含 量测定方法为(1)麻黄碱含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈0. 磷 酸=5 95为流动相；流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm ；理论板数按盐酸麻 黄碱峰计不低于6000 ；对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解 并稀释至刻度，摇勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，即得每ImL 含盐酸麻黄碱4 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲 醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤 过；精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置IOmL 量瓶中，加盐酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得；本制剂每粒含麻黄以盐酸麻黄碱CltlH15NO · HCl计，不得少于1. 29mg ；(2)黄芩苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水磷酸 =47 53 0.2为流动相；流速为lmL/min ；柱温30°C;检测波长为207nm ；理论板数按黄 芩苷峰计不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，加甲醇制 成每ImL含黄芩苷50 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 3g，精密称定，加70%乙醇40mL，回流3小时， 放冷，滤过，滤液移至IOOmL量瓶中，用少量70 %乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一 量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，计 算，即得；本制剂每粒含黄芩以黄芩苷C21H18O11计，不得少于13. Smg0
6.根据权利要求1、2或4所述的治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，其特征在于所述 的检测方法包括性状其内容物为棕褐色粉末，气微，味微甜或微苦；鉴别(1)黄芩的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混合溶液30mL，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品、黄 芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的对照品溶液； 照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各 5 μ L及对照品溶液2 μ 1分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2为展开剂，饱和30分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对 照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同 的暗色斑点；(2)浙贝母的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液2mL与甲苯20mL，放置 过夜，滤过，取滤液8mL，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素 甲、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药 典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各20 μ L，分别 点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液= 17 2 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)毛大丁草的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加入石油醚溶液30mL，超声40分 钟，倾去石油醚液，残渣加50%乙醇40ml超声40分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作 为供试品溶液；另取毛大丁草对照药材lg，同法处理，制成对照药材溶液；照中国药典2005 年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15ul、对照药材溶液5 μ L，分别点于 同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇=30 10为展开剂， 展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；(4)麻黄的薄层色谱鉴别取本制剂内容物2g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10mL， 加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL充分振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另 取麻黄对照药材lg，同法处理，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄 层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠 为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液=20 5 0.5为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以茚三酮试液；在105°C加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合《中国药典》2005年版一部附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；含量测定(1)麻黄碱含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈0. 磷 酸=5 95为流动相；流速为lmL/min ；柱温25°C ；检测波长为207nm ；理论板数按盐酸麻 黄碱峰计不低于6000 ；对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解 并稀释至刻度，摇勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，即得每ImL 含盐酸麻黄碱4 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲 醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过；精密量取续滤液lmL，置中性氧化铝柱上，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9mL，置IOmL 量瓶中，加盐酸1滴，用50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得； 本制剂每粒含麻黄以盐酸麻黄碱CltlH15NO · HCl计，不得少于1. 29mg ； (2)黄芩苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水磷酸 =47 53 0.2为流动相；流速为lmL/min ；柱温30°C;检测波长为207nm ；理论板数按黄 芩苷峰计不低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩苷对照品10mg，加甲醇制 成每ImL含黄芩苷50 μ g的对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂内容物0. 3g，精密称定，加70%乙醇40mL，回流3小时， 放冷，滤过，滤液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一 量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇勻，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，计 算，即得；本制剂每粒含黄芩以黄芩苷C21H18O11计，不得少于13. Smg0
全文摘要
本发明提供了一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法，所述检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定项目；其中鉴别是对制剂中的黄芩、浙贝母、毛大丁草、麻黄的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中麻黄碱和黄芩苷的含量测定。与现有技术相比，本发明针对新开发的治疗咳喘病的中药制剂建立了系统的、完整的、有效的质量检测方法，且所述方法的专属性强，精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，达到了有效控制药物质量的目的，从而确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。
文档编号A61K35/56GK101884746SQ20101023153
公开日2010年11月17日 申请日期2010年7月20日 优先权日2010年7月20日
发明者李德鑫, 王祥培, 钱海兵, 靳凤云 申请人:贵阳中医学院