专利名称：一种具有抗菌、抗病毒的密花香薷挥发油的制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及密花香薷挥发油抗菌、抗病毒及胆碱酯酶抑制活性及其制备方法和在食品、药品方面的用途。
背景技术：
目前由于滥用抗生素导致耐药性不断的上升已成为全世界共同关注的难题之一。 尤其是金黄色葡萄球菌的耐药率已达90%，同时抗菌素造成的肠道菌群紊乱，亦加重原发性感染，从天然产物中寻找抗感染药物，有着现实意义。密花香薷Elsholtzia densa Benth.是唇形科香薷属植物，分布于我国云南、河北、山西、陕西、甘肃、青海、四川、西藏、新疆等省区。在西藏代香薷用，兼可外用于皮肤病。 目前对密花香薷的挥发油的成分已有报道，例如张继等用水蒸气蒸馏法提取密花香薷挥发油并通过气相色谱/质谱技术对其进行分析，鉴定出确认了其中的84种化合物，其含量占全油的88. 34%.主要化学成分为大根香叶烯(18. 83%)、D-柠檬烯(11. 17% ),2,5, 5-三四基-1，3，6-庚三烯(6. 30% )、6_亚甲基-双环[3，1，0]、己烷(5.90% )、氧化石竹烯(3. 94% )、石竹烯(3. 36% )、4_碳-3，5-二甲基环己-1-烯(2. 88% )、α-3-环己烯-1-醇(2. 06% )0对密花香薷挥发油的药理研究未见报道。本发明涉及了具有抑菌、抗病毒和胆碱酯酶抑制作用的密花香薷挥发油及其在制备具有抗菌、抗病毒及治疗老年性痴呆产品中的应用，填补了密花香薷在这一领域应用的空白。
发明内容
1.本发明密花香薷的制备方法(1)水蒸气蒸馏法称取密花香薷药材500g，粉碎，加入到蒸馏瓶中，加入水8-12 倍量，安装挥发油提取器，水蒸气蒸馏3-5小时，从挥发油提取器重中将含水的挥发油分液漏斗中，分出回复一部分，放入-10 _15°C冰箱中冷冻过夜，取水除冰得到浅黄色挥发油， 得率 0. 8-2%。(2)称取密花香薷1kg，粉碎，置于5L超临界萃取釜中。开启萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵，使萃取釜压力保持为20. OMPa，温度为50°C，以40kg/ h的C02流速循环萃取。分离釜压力和温度分别为10. OMI^a和30°C，循环萃取3小时，得到黄色油状物，有特殊香味，提取率为1.5-4%。2.本发明的密花香薷挥发油化学成分所得密花香薷挥发油经GC-MS分析，气相色谱-质谱联用技术所得质谱图经计算机质谱数据库检索确定了密花香薷挥发油中部分化学成分。气相色谱条件石英毛细管柱 VarianVF-5MS CP8944，30mX 0. 25mm，膜厚 0. 25 μ m。升温程序从 60°C开始，以 5°C/min 升到250°C，再以15°C /min升到280°C，载气为He，柱流量1. OmL/min，进样口温度2700C0质谱条件EI电源；电离电压70eV ；离子源温度230°C ；扫描范围30 550aum ；进样量1 μ 1， 分流比22 1。分析鉴定结构表明，密花香薷挥发油主要化学成分为广藿香醇(13. 82%)， 2，4-二乙丙烯基-1-甲基-1-乙烯环己烷(9. 04% )，十氢-4a-甲基-1-亚甲基-7-(1-甲乙基)_萘烯(8.97% )，1，2，3，3a，4，5，6，7-八氢-1，4-二甲基-7-(1-甲乙基)-天蓝烃 (6. 37% )，1，2，3，4，5，6，7，8_ 八氢 1，4_ 二甲基-7(1-甲乙基)_ 天蓝烃(5. 92% )，5_ 环氧异丙烯戊酸(5. 21% )，绿叶烯(3. 96% )，α-衣兰烯(3. 90% )，1，2，3，3a，4，5，6，7-八氢-.α，α，3，8-四甲基-5-天蓝烃甲醇(3. 27%)，石竹烯(2. 15% )，2，6，6_三甲基环氧己烯-1-乙醛(2. 12% )，l，2，3，5，6，7，8，8a-八氢-l，8a-二甲基-7-(1-甲乙基)_ 萘烯 (2. 02% )等，总含量占全油的84. 59%。经实验证明，新疆密花香薷挥发油，具有广谱抑菌、抗病毒作用，密花香薷挥发油对葡萄球菌属、大肠埃希菌属、假单胞菌属等细菌；念珠菌属真菌均有一定的抑制生长作用。尤其对常见菌病原菌金黄色葡萄球菌具有很强的的抑制生长的作用，对白色念珠菌具有较强的抑制生长的作用。因此，新疆密花香薷挥发油可应用于食品、药品、保健品、化妆品等行业，制备出具有抑菌作用的各种形式的产品。
具体实施例方式实施实例1新疆密花香薷挥发油抗细菌作用菌种和培养基实验菌种由中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所药理实验室提供。列表如下属菌种葡萄球菌属金黄色葡萄球菌ATC(^5923 Staphylococcus aureus)大肠埃希菌属大肠杆菌 ATCC25922 (Escherichia coli)假单胞菌属等细菌绿脓杆菌ATCC10104 (Pseudomonas aeruginosa)实验用培养基营养琼脂培养基，营养肉汤培养基均购自中国药品生物制品检定所。2实验方法2. 1最小抑菌浓度MIC的测定采用微量稀释板法试验菌液浓度为105cfu/ml。吸取稀释好的菌液加于96孔细胞培养板中，每孔 IOOyl0将密花香薷挥发油先溶解在DMSO中，再用营养肉汤培养基将密花香薷挥发油稀释到一定的浓度(起始浓度100mg/ml用于革兰氏阴性菌，起始浓度80 μ g/ml用于革兰氏阳性菌)。对于革兰氏阴性菌大肠杆菌和绿脓杆菌，依次对比稀释7孔，使得各孔中药物浓度分别为 100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12. 5mg/ml、6. 25mg/ml、3. 125mg/ml、l. 56mg/ml。对于革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌，依次对比稀释7孔，使得各孔中药物浓度分别为80 μ g/ml、 40g/ml、20y g/ml、10y g/ml、5y g/ml、2. 5μ g/ml、l. 25 μ g/ml。最后一孔不加药(仅加培养基和细菌)加入稀释菌液100 μ 1，为细菌生长对照孔。留一列孔不加细菌(仅加培养基和药物)作药物对照孔，阳性对照为青霉素。置于振荡器上振荡lmin，使孔内溶液充分混勻后，微孔板加盖并放在铺有湿纱布的方形搪瓷盘中，于37°C温箱中孵育M小时，眼观无细菌生长孔所含最低药物浓度即为最小抑菌浓度。
3试验结果表2密花香薷挥发油最小抑菌浓度(MIC)(单位mg/ml)病原菌MIC金黄色葡萄球菌0. 005绿脓杆菌25大肠杆菌50实施实例2密花香薷挥发油体外抗真菌作用菌种和培养基实验菌种由中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所药理实验室提供。列表如下属菌种念珠菌属白色念珠菌(Candida albicans)实验用培养基沙堡琼脂培养基，沙堡液体培养基均购自中国药品生物制品检定所。2实验方法2. 1最小抑菌浓度MIC的测定采用微量稀释板法实验方法同实施实例1，实验结果如下表3 密花香薷挥发油最小抑菌浓度(MIC)(单位mg/ml)病原菌MIC白色念珠菌 2. 5实验结果表明密花香薷挥发油具有广谱抗菌作用。细菌、真菌对密花香薷挥发油较敏感，对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌；革兰氏阴性菌大肠杆菌、绿脓杆菌；真菌白色念珠菌都有抑制生长的作用。具有重要的实践意义和应用价值。最小抑菌浓度MIC范围为 0. 005-50mg/mlo实施实例3密花香薷挥发油抗流感甲型病毒活性测试原理以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度 (CPE)。测试材料和方法1.病毒株流感甲型病毒(15/90)，流感乙型病毒(13/97)，在鸡胚尿囊腔内培养传代(2008. 11)，-80°C保存。2.样品处理样品溶于DMS0，再用培养液配成适宜初始浓度，用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。3.阳性对照药病毒唑(RBV)，新乡药业有限公司(批号20080301)。4.测试方法MDCK细胞接种96孔培养板，置5% C02, 37C培养M小时。MDCK细胞分别加入流感甲型病毒(15/90) 10-5、流感乙型病毒(13/97) 1/210-2，37°C吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度药物。设病毒对照和细胞对照，37C培养40小时，观察结果，记录CPE，计算各样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC50)。测试结果
权利要求
1.密花香薷挥发油提取物，其特征在于该挥发油具有抗菌、抗病毒及胆碱酯酶抑制作用。
2.根据权利要求1所述的密花香薷挥发油提取物，其特征在于该提取物是从密花香薷全草提取。
3.根据权利要求1和2所述的密花香薷提取物，其特征在于可以是水蒸气蒸馏，也可以是CO2超临界萃取获得。
4.根据权利要求1所述的密花香薷挥发油抑菌作用，其特征在于抑制的菌为金色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌。
5.根据权利要求1所述的密花香薷挥发油抗病毒作用，其特征在于抗流感甲型病毒。
6.根据权利要求1所述的密花香薷挥发油抑制胆碱酯酶作用，其特征在于抑制的胆碱酯酶活性，可用于老年性痴呆的治疗。
7.根据权利要求1至6所述的密花香薷挥发油提取物，其特征在于该提取物可以在制备有抗菌、抗病毒、治疗老年性痴呆作用的食品、保健品和药品中应用。
全文摘要
本发明涉及了具有抗菌、抗病毒及胆碱酯酶抑制作用的密花香薷挥发油及其在制备抗菌、抗病毒及胆碱酯酶抑制作用的产品中的应用。采用水蒸气蒸馏法或超临界技术提取密花香薷挥发油并通过气相一质谱联用技术对其进行分析，鉴定出41种成分，总含量占挥发油的84％。密花香薷挥发油对金色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌、甲型流感病毒以及胆碱酯酶有抑制作用。密花香薷挥发油可应用于食品、保健品、药品化妆品等行业，制备出有抗菌、抗病毒以及胆碱酯酶抑制作用的各种产品。
文档编号A61P31/04GK102451228SQ201010519568
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者刘艺, 斯建勇, 曹丽, 潘瑞乐, 贾晓光 申请人:中国医学科学院药用植物研究所