专利名称：一种治疗hbv-gn的中药有效部位及其制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于HBV-GN的中药有效部位及其制剂的制备方法，属于中药制 剂领域。
背景技术：
乙型肝炎病毒相关性肾炎(h印atitis B virus associated glomerulonephritis, HBV-GN)是由乙型肝炎病毒(HBV)诱发的肾小球肾炎。HBV-GN常见 的病理类型为膜性肾病(MN)、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)、IgA肾病(IgAN)及系膜增生性 肾小球肾炎(MsPGN)。GBV-GN的发病机制复杂多变，目前提出的可能的发病机制主要有免 疫复合物引起的损伤、细胞免疫、病毒对肾脏的直接作用、自身免疫及遗传因素等。国内外 学者认为HBV感染的多种病理类型中，最常见的是MN，其次为MPGN、IgAN、MsPGN、局灶阶段 性肾小球硬化(FSGS)和硬化性肾炎(SGN)。HBV-GN的临床表现与相同病理类型的原发性 肾小球肾炎相似，有镜下血尿、肉眼血尿、肾病综合征(NS)、高血压及肝功能异常，与原发性 肾小球肾炎不同的是，HBV-GN患者在诊断中血清HBV抗原呈阳性并且肾切片中有HBV抗原 或肾组织切片有HBV抗原而血清HBV抗原检测阴性。目前治疗HBV-GN的西药主要分为免疫抑制剂类药物和抗病毒类药物两大类，而 以糖皮质激素、吗替麦考酚酯(MMF)、来氟米特为代表的免疫抑制剂为主要的治疗方法，此 类药物虽然在原发性及与免疫相关的继发肾脏疾病的治疗中起着非常重要的作用，但却存 在诱导HBV复制而加重病情的副作用。中医将HBV-GN的主要病因归为湿热毒邪，“邪之所凑，其气必虚”，人体正气不足是 导致该病发生的根本原因，故本病多呈正虚邪实，气虚为本，湿热郁阻为标。研究发现本病 初起湿热蕴结于肝，下及于肾；中期湿热瘀毒互结；后期则渐至木乘脾土和肝病及肾，导致 肝、脾、肾三脏功能失调。HBV-GN的中医病理特点表现为毒侵、正虚、气郁、血阻。从中医的整体观念、辨证论治的原则出发，HBV-GN属于本虚标实之证，治疗的药物 如果能标本兼顾，驱除湿热之邪的同时又能扶助脏器之正气，则将在治疗HBV-GN上实现重 大的突破。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种安全、有效的治疗HBV-GN的中药制剂。本发明研究人员根据HBV-GN的病理病变特点，选用了具有清热解毒、凉血平肝功 效的筋骨草作为研究对象，通过药理药效试验从中筛选出了具有治疗HBV-GN作用的有效 部位，并进一步对该有效部位的制剂工艺进行了研究。本发明中，所用的原料药为筋骨草。筋骨草(Ajuga decumbens Thimb.)，又名金 疮小草、白毛夏枯草、苦草等，为唇形科植物。主要分布在秦岭以南各省，民间主要用于止咳 化痰、清热、凉血、消肿、解毒、腹泻、肝炎、疔毒疖肿、外伤出血等。筋骨草性味苦寒，按中医 药理论，苦能燥湿解毒、寒能清热泻火，其对多种细菌具有抑制功能。研究发现服用筋骨草
3后，临床检测到白细胞增加，血清谷丙转氨酶活力显著下降，表明筋骨草对病毒性疾病确有 疗效° (Jiangsu New Medical College. Dictionary of Chinese Materia Medica(中药大 辞典)[Μ]· Shanghai =Shanghai People's Publishing House, 1997)筋骨草中含有多种环 烯醚萜、黄酮、植物留酮、留酮、二萜等化合物(郭新东，等，筋骨草的化学成分研究[J]，中 草药，2005，36 (5) :646-648)。本发明中治疗HBV-GN的有效部位化学成分主要为筋骨草中的黄酮类和苷类化合 物。体内药效学研究发现，筋骨草经提取纯化获得的有效部位，具有明显的降低尿蛋白、保 护肾功能、保肝、抗炎、降脂活性，进一步研究发现该有效部位化学成分主要为黄酮类和苷类。本发明治疗HBV-GN的药物，所制成的单元制剂形式为口服给药制剂，优选为片 剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、酊剂或口服液中的任意一种，更优选为胶囊剂。本发明中，制剂过程中，除原料药活性成分外，还含有制药上可接受的赋形剂。其 中赋形剂为制成各种剂型所需要的赋形剂，填充剂如乳糖、糊精、微晶纤维、淀粉等；崩解 剂如交联聚维酮，交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠等，粘合剂如淀粉浆、淀粉浆钠、羟丙 甲纤维素、聚维酮等，表面活性剂如十 二烷基磺酸钠，润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇 等，还可以有助悬剂、助溶剂、矫味剂、防腐剂等，具体选用什么赋形剂搭配，根据制剂而定， 制成普通的制剂时，选用何种赋形剂是本领域技术人员根据现有技术就能知道的。本发明的再一目的在于提供一种制备本发明所述治疗HBV-GN药物的制备方法， 包括如下步骤取一定量的筋骨草粉碎成粗粉，取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加 原料药重量6-12倍的水浸泡30min，再煎煮提取2_4次，每次l_3h，过滤，合并所有滤液，滤 液减压浓缩成浸膏；浸膏处理后上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗脱液，再用6-12 倍量的20% -60%的乙醇冲柱，收集洗脱液，减压浓缩即得有效部位。本发明中，获取原料药有效部位的方法还可以为取一定量的筋骨草，粉碎成粗 粉，待用；加原料药重量6-12倍的20% -60%乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，过滤，合并 所有滤液，滤液减压浓缩成浸膏；浸膏处理后上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗 脱液，再用6-12倍量的20%-60%的乙醇冲柱，收集洗脱液，减压浓缩即得有效部位。加入 所需的辅料适量，按照常规的制剂工艺制成所需的剂型。
具体实施例方式以下从制备实施例来进一步说明本发明的制备方法，以下所列举的实施例，并不 是为了限制本发明的具体实施方式
，本领域的普通技术人员，可以很容易根据本发明的所 允许的范围，做出合理的改变替换。实施例1称取一定量的筋骨草全草，粉碎成粗粉，待用；加原料药重量6-12倍的20%-60% 乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，过滤，合并所有滤液，滤液减压浓缩成浸膏；浸膏处理后 上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗脱液，再用6-12倍量的20% -60%的乙醇冲柱， 收集洗脱液，减压浓缩即得有效部位，干燥，以1 0.5-2的比例加入淀粉，混合均勻，用乙 醇作为润湿剂制成软材，过筛制粒，置烘箱干燥得干燥颗粒，然后灌装入0. 4g规格的硬胶 囊中，密封，包装即得胶囊剂。
实施例2称取一定量的筋骨草全草，粉碎成粗粉，待用；加原料药重量6-12倍的20%-60% 乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，过滤，合并所有滤液，滤液减压浓缩成浸膏；浸膏处理后 上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗脱液，再用6-12倍量的20% -60%的乙醇冲柱， 收集洗脱液，减压浓缩即得有效部位，干燥，加入蔗糖粉、淀粉，混合均勻，用乙醇作为润湿 剂制成软材，过筛制粒，置烘箱干燥，加入硬脂酸镁，混勻，整粒，压成，分装，即得片剂。以下从药理实施例来进一步说明本发明的有益效果，在下列实施例中，所用的制 剂为实施例1处方制备得到的胶囊剂，在药品名称上我们称取为JGC。1. JGC对HBV-GN形态的影响 实验动物BALB/c小鼠，体重80 20g，质量合格，购于北京军事医学科学院动物 中心。合格证号SCXK-(军)2007-004。动物模型的制备动物自由饮食分笼饲养。观察1周查尿常规无异常后，经腹腔注 射加佐剂的含HBV-DNA复制的人血清0. 2ml/次，每周2次，连续4周。动物随机分为3组，每组10只。实验期间大鼠均自由摄食和饮水。(1).空白对照组不予处理；(2).模型组灌胃等体积的生理盐水；(3) ·筋骨草剂量组灌胃0. 02g/kg · d ；实验方法于注射血清前1周及注射后2、4、6、8周各查尿常规和4、6、8周查血清 乙肝病毒标志物各1次。以反射排尿法取尿.用尿纸条进行尿蛋白半定量(+ ^ 0. lg/L， ++彡0. 39g/L，+++彡0. 9/L，++++彡1. Og/L)检测。酶标法测定乙肝病毒标志物。于第6、 8周末，两组各处死5只动物取肾组织以10%福尔马林固定，常规脱水，透明包埋，制2mm厚 切片，染色，光镜下观察肾小球和肾小管的改变，用HMIAS图文分析系统，每片选10个小球， 计算总增殖面积(ECM)与肾小球总面积之比。实验结果注射加佐剂的含HBV-DNA复制的人血清后的第1周，模型组部分小鼠 即出现蛋白尿，定性(彡++)；第4周时10只小鼠均出现尿蛋白，定性在(++ +++)，一直 持续至笫8周实验结束。经过检验，第4与笫2周、笫6与第4周相比较，均有统计学意义 (P <0.05)；而正常对照组小鼠尿蛋白始终呈(一)。酶标法检测乙肝病毒标志物，血清 HBsAg、HBcAg等呈阳性。光镜可见，模型组可见肾小球明显增大，球内细胞数增多，系膜区面积增宽，部分 肾小球毛细血管腔受压变狭，肾间质有炎性细胞浸润。筋骨草组肾小球肿胀较轻，肾小球大 小变化较模型组减轻，系膜细胞轻度增生，部分系膜区增宽，血管腔有轻度挤压现象，但毛 细血管基底膜无明显变化，肾小管及肾间质无明显变化。说明筋骨草组肾脏病理损伤明显 比模型组轻。2. JGC对系膜增生性肾炎大鼠肝肾功能的影响实验动物SD大鼠，体重180 200g，质量合格，购于北京军事医学科学院动物中 心。合格证号SCXK-(军)2007-004。动物模型的制备除正常对照组外，其余各组均腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg) 麻醉，常规消毒后，通过背侧切除左侧肾脏，休养1周。预免疫实验组大鼠足垫皮下注射弗 氏完全佐剂0. Img加3mg小牛血清白蛋白(BSA)，在1周末、2周末时分别加强1次；3周末
5时腹腔注射BSA 4次，剂量分别为每只0. 5,1. 0,1. 5,3. Omg，每次间隔Ih ；注射次日晨再加 强1次(2. Omg/只)。免疫预免疫后每日腹腔注射BSA，从每只Img剂量开始，以每日Img 量增加至5mg为止，继续每周加量lmg，至IOmg为止。存活大鼠于造模第5周末进行尿蛋白 检测，出现明显蛋白尿者进入实验，于造模第6周开始给药，每日1次，连续6周。动物随机分为4组，每组10只。实验期间大鼠均自由摄食和饮水。(1).空白对照组不予处理；(2).模型组灌胃等体积的生理盐水；(3) ·雷公藤组灌胃0. 018g/kg · d，作阳性对照；(4) ·筋骨草剂量组灌胃1. 08g/kg · d ；实验方法于末次给药后将大鼠置清洁代谢笼中，留取24h尿液，用考马斯亮蓝法 进行24h蛋白尿定量检测，于次日从心脏取血测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、谷氨酸氨基 转移酶(ALT)含量。数据处理各组测定的实验数据以表示，组间差异用t检验进行显著性分析。表IJGC对大鼠24h蛋白尿的影响G 土s)
组别剂量(g/kg)尿蛋白正常对照组-9. 85 ±4. 26模型组-35. 42±9. 63''雷公藤组0. 01816. 21±7. 64·δδ筋骨草剂量组1. 0817. 53±6. 57·δδ与正常对照组相比*P < 0. 05，< 0. 01 ；与模型组比较，Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 01。表2JGC对大鼠肝肾功能的影响G±s)
组别剂量ALTBUNScr(g/kg)(U/L)(mmol/L)(umol/L)正常对照组--53. 61 ±10. 329. 56 士 2. 0142. 05 ±12. 36模型组-60. 05 ±13. 0518. 76±3. 25"’65.21±15.81·雷公藤组0. 01885. 64±15. 3Γ'δδ12. 65±2. 83'aa46. 29±10. 23.Δ筋骨草剂量组1.0859. 10±9. 2514. 32±2. 67'δ51.69±8. 02*a 与正常对照组相比*P < 0. 05，< 0. 01 ；与模型组比较，Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 01。 由表1可知，与正常对照组相比，模型组尿蛋白显著增高(P < 0. 01)，表明造模成 功。筋骨草组和雷公藤组尿蛋白明显低于模型组(P < 0.01)。虽然筋骨草组尿蛋白略高于
6雷公藤组，但无显著差异(P > 0. 05)。而由表2可知，与正常对照组相比，模型组BUN、Scr 明显升高(P <0.05)，而ALT两者之间无明显差异(P >0.05)。与模型组相比，筋骨草组 显著降低BUN、Scr (P < 0. 05)，与雷公藤组相比无明显差异(P > 0. 05)，而ALT明显低于 雷公藤组(P < 0. 01)。因此，实验表明，经筋骨草治疗后的模型大鼠，可显著降低尿蛋白、血 BUN、Scr，且与雷公藤组相比，均无显著差异，说明筋骨草有降尿蛋白、保护肾功能方面的作 用；而筋骨草组较雷公藤组的ALT显著降低，说明筋骨草在治疗过程中无明显肝损害作用。3. JGC对免疫复合物性肾炎大鼠血脂的影响实验动物SD大鼠，体重180 200g，质量合格，购于北京军事医学科学院动物中 心。合格证号SCXK-(军)2007-004。动物模型的制备预免疫取离子化的牛血清白蛋白(C-BSA) 1!^，加入0. 5ml PBS 中，与等量的弗氏不完全佐剂混勻成乳白色悬液，在大鼠双侧腋下，腹股沟作多点皮下注 射。免疫预免疫1周后，每只大鼠尾静脉注射C-BSA 2. 5mg (溶于Iml pH 7. 4PBS)，3次/ 周，共3周。动物随机分为4组，每组10只。实验期间大鼠均自由摄食和饮水。(1).空白对照组不予处理；(2).模型组灌胃等体积的生理盐水；(3) ·雷公藤组灌胃0. 018g/kg · d，作阳性对照；(4) ·筋骨草剂量组灌胃1. 08g/kg · d ；实验方法在实验第3，4，8周末将大鼠放人代谢笼中收集24h尿液，以双缩脲法测 定尿蛋白含量。于实验8周末处死大鼠前采血测定白蛋白、甘油三酯及胆固醇。数据处理各组测定的实验数据以i ±s表示，组间差异用t检验进行显著性分析。表3大鼠尿蛋白的检测结果G 士s)
权利要求
一种治疗HBV GN的中药制剂，其特征是由筋骨草为原料药制成。
2.根据权利要求1所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是由筋骨草原料药经水回流 提取的浸膏制成。
3.根据权利要求1所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是由筋骨草原料药经乙醇回 流提取的浸膏制成。
4.根据权利要求2、3所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是由2、3提取的浸膏过大 孔树脂柱纯化富集的活性成分制成。
5.根据权利要求1-4中任意一权利要求所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是所述 的制剂的单元给药形式为口服制剂。
6.根据权利要求5所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是所述的口服制剂为口服片 剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的治疗HBV-GN的中药制剂，其特征是所述的口服制剂为胶囊剂。
8.一种制备权利要求1-4中任意一权利要求所述的治疗HBV-GN的中药制剂活性成 分的方法，其特征是包括如下步骤取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加原料药重量 6-12倍的水浸泡30min，再煎煮提取2_4次，每次l_3h，过滤，合并所有滤液，滤液减压浓 缩成浸膏；浸膏处理后上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗脱液，再用6-12倍量的 20% -60%的乙醇冲柱，收集洗脱液，减压浓缩即得活性提取物。
9.一种制备权利要求1-4中任意一权利要求所述的治疗HBV-GN的中药制剂活性成 分的方法，其特征是包括如下步骤取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加原料药重量 6-12倍的20 % -60 %乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，过滤，合并所有滤液，滤液减压浓 缩成浸膏；浸膏处理后上大孔树脂柱，6-12倍量的水冲柱，弃去洗脱液，再用6-12倍量的 20%-60%的乙醇冲柱，收集洗脱液，减压浓缩即得活性提取物。
10.一种用途权利要求根据1-9任一权利要求所述中药制剂，是用于治疗HBV-GN常见 的病理类型膜性肾病(MN)、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)、IgA肾病(IgAN)及系膜增生性肾 小球肾炎(MsPGN)中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种治疗HBV-GN的中药有效部位及其制剂的制备方法，具体由原料药筋骨草制成，本发明处方通过乙醇回流提取，再通过大孔树脂柱纯化富集有效部位获得活性成分，加入制药上可接受的常规赋形剂，以常规的制剂工艺制成所需的口服制剂。本发明中药制剂具有降低尿蛋白、保护肾功能、保肝、抗炎、降脂之功效，对HBV-GN具有较好的调理治疗作用。
文档编号A61K36/53GK101972298SQ20101052118
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月27日 优先权日2010年10月27日
发明者方鉴, 秦睿, 韩亚南 申请人:大格国际医药科技(北京)有限公司;方鉴