专利名称：以类固醇复合物为中间载体的多西紫杉烷亚微乳的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以类固醇复合物为中间载体的多西紫杉烷亚微乳剂及其制备方法，本发明还涉及该多西紫杉烷亚微乳剂的用途，属医药制剂技术领域。
背景技术：
多西紫杉烷类化合物，代表性药物为多西紫杉醇(多西他赛，Docetaxel，商品名泰素帝)具有重要的抗肿瘤活性，临床上广泛用于卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和胃癌等的治疗。由于其几乎不溶于水，目前用于临床的多西紫杉醇普通注射剂系采用吐温80和无水乙醇为溶剂制备无菌过滤的浓溶液。由于吐温易引发严重过敏反应，本品临床应用时，除有禁忌症外，所有人在接受泰索帝治疗前均必须预服口服糖皮质激素类，如地塞米松，在泰索帝滴注一天前服用，每天16mg (例如每日2次，每次8mg)，持续3天。针对多西紫杉醇注射剂存在的问题，自多西紫杉醇上市后的二十余年来，国内外药剂学工作者开展了广泛的新型释药系统研究，涉及的技术方案包括环糊精包合物、脂质体、聚合物胶束、纳米粒等，但至今未能取得突破，市售制剂仍为吐温80增溶的普通注射剂。水包油亚微乳是利用药物的亲脂性，将药物溶于油相，以天然磷脂为乳化剂，经高压均质乳化制备而得到的平均粒径在600nm以下的乳液。由于药物存在于内油相，避免与水及空气接触，能够克服难溶性药物因溶解度低和稳定性差而不利于制成液体制剂的缺陷。与脂质体、纳米粒或聚合物胶束等技术相比，亚微乳更具产业化发展优势，可采用终端灭菌，临床上可直接滴注，滴注过程中不会出现药物析抽，使用方便安全。以亚微乳作为载体发展多西紫杉醇新制剂具有良好的前景。多西紫杉醇在油中(尤其是中链油)溶解度较高，有利于水包油亚微乳剂的制备， 但进一步研究发现，多西紫杉醇的油溶液或多西紫杉醇的水包油亚微乳液均不能耐热压灭菌，灭菌后杂质明显升高，限制了亚微乳输液的终端灭菌处理。有人曾偿试采取无菌过滤方式制备亚微乳输液或冻干乳剂，但对于大容量输液，无菌过滤存在安全隐患，无法用于临床治疗。为提高药物在油相中溶解度和油溶液的灭菌稳定性、突破限制多西紫杉醇亚微乳剂研究的关键技术，本申请对多西紫杉醇/脂质复合物进行了研究，以期通过脂质复合物的制备，使药物与脂质材料通过分子间相互作用而形成复合体，提高药物在油中的溶解度或油溶液的灭菌稳定性，为亚微乳制剂的研究提供良好的中间载体。本申请的发明人开展了以下探索性研究以胆固醇、大豆卵磷酯(S75)、蛋黄卵磷脂(E80)、DMPC、DMPG、SPC-3、DSPG为脂质材料，采用旋转蒸发法制备多西紫杉醇脂质复合物，以复合物在混合油(大豆油与中链油按1 1等体积混合)中的溶解度为指标，考察脂质复合物的形成对多西紫杉醇油溶性及油溶液稳定性改善效果。探索性研究结果表明，不论是天然磷脂还是合成磷脂，制备的磷脂复合物均使药物在油中的溶解度发生了不同程度的降低，而且还使得药物油溶液的灭菌后的杂质水平明显长高，稳定性下降；而以胆固醇为脂质材料形成的复合物，对药物油溶性有一定的增加作用，更有意义的是，使多西紫杉醇在油溶液中的灭菌稳定性明显提高，灭菌后的杂质明显低于多西紫杉醇的油溶液。因此，以类固醇脂质复合物为中间载体制备可终端灭菌的多西紫杉醇亚微乳剂， 具有创新性和技术可行性。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种多西紫杉醇亚微乳剂，其包含多西紫杉烷/类固醇复合物、注射用油、注射用水、乳化剂、助乳化剂和等渗剂；所述的类固醇脂质材料为游离类固醇、类固醇衍生物或类固醇酯中的至少一种。所述的游离类固醇选自胆固醇、7-氢化胆固醇(又称7-脱氢胆固醇)、羊毛固醇、谷留醇、菜子固醇、真菌固醇、牡蛎固醇、豆留醇、麦固醇醇和麦角固醇，优选地为胆固醇、7-氢化胆固醇和麦角固醇，更优选的为胆固醇；所述的类固醇衍生物选自胆酸、脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸；所述的类固醇酯选自类固醇的中链脂肪酸酯(碳链中碳原子6 12个)和长链脂肪酸酯(碳链中碳原子12个以上)，优选中链不饱和脂肪酸酯和长链不饱和脂肪酸酯，更优选长链不饱和脂肪酸酯。优选的长链不饱和脂肪酸酯为胆固醇亚油酸脂、胆固醇亚麻酸脂、胆固醇棕榈酸脂、胆固醇油酸酯、胆固醇硬脂酸酯和胆固醇肉豆蔻酸酯，优选胆固醇油酸酯。本发明的亚微乳剂的乳滴平均粒径在400nm以下，优选300nm以下；油相的用量比例为所述亚微乳剂总量的5% 35% (ml/ml)，优选10% 30% (ml/ml)；以多西紫杉醇计，载药量为 0. 25mg/ml 5mg/ml，优选 0. 25mg/ml 2mg/ml。在本发明中，所述多西紫杉烷/类固醇复合物可以是按照如下方法1或2制备的，方法1包括步骤a.将多西紫杉烷与类固醇按比例混合，加入适量有机溶剂溶解，任选地加入抗氧化稳定剂；b.在合适的温度条件下搅拌，通过旋转蒸发或喷雾干燥去除有机溶剂，真空干燥即得；方法2包括步骤a.取一定比例的多西紫杉烷与类固醇，分别加入适量的不同的有机溶剂溶解，将其混合，任选地加入抗氧化稳定剂；b.在合适的温度条件下搅拌，通过旋转蒸发或喷雾干燥去除有机溶剂，真空干燥即得。在上述多西紫杉烷/类固醇复合物或其制备方法中，多西紫杉烷与类固醇的摩尔比为1 0. 25 40，优选1 0. 5 20，更优选1 1 10。在上述多西紫杉烷/类固醇复合物的制备方法中，所述有机溶剂可选自二氯甲烷、乙醇、甲醇、苯甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、叔丁醇中的一种或多种；优选地，可选自乙醇、丙酮、乙酸乙酯和四氢呋喃中的一种或多种。“适量的有机溶剂”中的“适量”是指本领域技术人员按照常规技术可确定用于溶解多西紫杉醇与类固醇的混合物的量，具体地说， 多西紫杉醇与类固醇复合物在溶液中的浓度以多西紫杉醇计算，控制在0. 5 16mg/ml或更高，优选1. 0 8. Omg/ml ；“合适的温度条件”系指控制在10°C -70°C，优选35_55°C，例如 25°C、35°C、45°C、55°C或70°C。搅拌反应的时间和真空干燥的时间都可以由本领域技术人员按照常规技术确定，比如搅拌反应的时间可以是0. 5-3. 0小时，例如0. 5小时、1. 0小时、 1. 5小时或2. 0小时，真空干燥的时间可以是8小时-48小时，例如8小时、12小时、16小时
或M小时。所述抗氧化稳定剂可以选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C、EDTA及其盐、 维生素E及其衍生物中的至少一种，抗氧化稳定剂的用量是本领域在制备脂质复合物中通常采用的用量，一般不超过复合物总量的(重量)。在本发明中，所述的注射用油选自长链油和中链油中的一种或它们的混合物。所述的长链油选自长链脂肪酸、长链脂肪酸酯和长链脂肪醇中的一种，具体可以选自大豆油、 蓖麻油、亚油酸、玉米油、橄榄油、花生油、棉籽油、油酸、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、 十六醇；所述的中链油选自中链脂肪酸和中链脂肪酸酯中的一种。优选的长链油为长链脂肪酸酯，具体地为注射用大豆油；优选的中链油为中链脂肪酸甘油酯。在本发明中，所述的乳化剂为非离子表面活性剂或天然表面活性剂。非离子表面活性剂选自脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、维生素E衍生物类和聚氧烯烃共聚物中的至少一种；所述的天然表面活性剂选自蛋黄卵磷脂、豆磷脂、胆留醇和胆酸类、海藻酸钠和壳聚糖中的至少一种。优选的乳化剂为天然表面活性剂，最优选的乳化剂为天然的蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂。乳化剂在本发明的亚微乳剂中的含量为亚微乳剂组合物总量的
0.5% -5% (g/ml)，优选地为 1.0% -4.0% (g/ml)，最优选地为 1.0% -2.0% (g/ml)。在本发明中，所述的助乳化剂选自聚乙二醇(PEG)类和泊洛沙姆类。助乳化剂的含量为本发明亚微乳剂总量的0%-5% (g/ml)，优选地为0.5%-3% (g/ml)，最优选地为
1.0% -2. 0% (g/ml)。在本发明中，多西紫杉烷亚微乳的渗透压调节剂(等渗剂)选自甘油、木糖醇、山梨醇(糖)醇和甘露醇中的一种或多种，优选甘油和葡萄糖，更优选甘油。甘油含量为本发明的多西紫杉醇亚微乳剂总量的1. 0-3. 0% (g/ml)，优选地为1. 5-2. 5% (g/ml)。在本发明中，所述的多西紫杉烷亚微乳剂还可加入稳定剂，选自油酸、油酸钠和 PEG类中的一种，优选的稳定剂为油酸和PEG，更优选地为油酸。油酸的含量为本发明的多西紫杉醇亚微乳剂总量的0. 05-0. 5% (g/ml)，优选地为0. 1-0. 2% (g/ml)。本发明的多西紫杉烷亚微乳剂，还可包含抗氧剂，可以选自维生素E或维生素E酯衍生物，优选维生素E。在本发明中，所述的“一种或其混合物”或“至少一种”是指可以为所选物质中的一种，或者两种的混合物，或者更多种的混合物。本发明的另一个目的在于提供本发明所述的多西紫杉烷亚微乳剂的一种制备方法，其包括如下步骤 取注射用水，加入乳化剂、助乳化剂和等渗剂，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻水相，加热至40-80°C，保温； 另取多西紫杉烷/类固醇复合物，任选地和稳定剂一起溶于预热至40-80°C的注射用油中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻油相； 在搅拌条件下，将水相缓缓加入至油相中，10000-20000转/min剪切5-lOmin， 使形成均勻初乳，迅速转移至高压均质机中均质乳化至粒径控制在400nm以下，优选300nm 以下，收集全部乳液，用盐酸节PH至3. 5-6. 0，优选4. 0-5. 0，并加水适量(至全量)，即得。
本发明还提供多西紫杉烷亚微乳剂的另一种制备方法，其包括如下步骤 取注射用水，加入助乳化剂和等渗剂，搅拌制成水相，加热至40-80°C，保温； 另取多西紫杉烷/类固醇复合物、乳化剂和/或稳定剂，溶于预热至40-80°C的注射用油中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻油相； 在搅拌条件下，将水相缓缓加入至油相中，10000-20000转/min剪切5-lOmin， 使形成均勻初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在400nm以下，优选100-300nm， 收集全部乳液，用盐酸调节PH至3. 5-6. 0，优选4. 0-5. 0，并加水适量(至全量)，即得。在本发明的制备方法中，在高压均质机中乳化也可以采用其它乳化方法来实现， 只要能够乳化均勻，并且达到所述的粒径即可；温度40-80°C可以为比如40°C、50°C、6(TC、 70°C或 80°C等。在本发明的制备方法中，调节pH的盐酸的浓度可以本领域常规采用调节pH的盐酸浓度，比如可以为0. lmol/L，或0. 01mol/L ；其中注射用水、注射用油的用量，本领域技术人员根据本发明所给出的油相的比例完全可以确定；“加水适量(至全量)”是指除了在制备水相时所采用的水的用量之外，本领域技术人员根据常规技术加入水以达到符合本发明所给出的载药量的水的用量。本发明还提供一种制剂，其包含本发明所述的多西紫杉烷亚微乳剂，该制剂可以为临床上任何可以使用的剂型，包括输液剂或干乳剂的形式。其中的输液剂是通过如下方法制备的将本发明所述的多西紫杉醇亚微乳剂灌装后，经流通蒸汽灭菌或热压灭菌无菌工艺处理，即得；其中的干乳剂是通过如下方法制备的向本发明所述的多西紫杉烷亚微乳剂中加入适量支撑剂，经无菌过滤处理后，采用冷冻干燥工艺制成干乳剂。优选的支撑剂为甘露醇，比如5% (w/v)的甘露醇。本发明还提供本发明的多西紫杉烷亚微乳剂在制备抗癌药物中的应用，所述的癌为实体瘤，包括卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌、头癌或颈癌、食道癌、肾癌、肝癌和胃癌。在本发明中，如果没有特别地指出，本文所用的科学和技术术语以及名称都具有与本发明所属领域普通技术人员常规理解相同的意思；并且，如果没有特别地指出，其中所采用的物质及其含量或比例、装置、仪器、制备条件等都是本领域技术人员所熟知的或者其根据本发明的描述可得知的。下面将参照
和实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，但本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行对其进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。
附图1 (1-A，1-B)试验例1项下的参比多西紫杉醇亚微乳稳定性考察的HPLC图谱(1-A 初始，I-B :4°C贮存3个月；其中，2. 5分钟以前为空白亚微乳溶剂峰，8. 3 8. 4分钟的峰为多西紫杉醇，2. 9,3. 3,6. 4,7. 3,9. 8、11. 6、15. 8和17. 3分钟的色谱峰均为杂质)附图2 (2-A, 2-B)试验例1项下的多西紫杉醇/胆固醇复合物亚微乳稳定性考察的HPLC图谱Q-A:初始，2-B:4°C贮存3个月；其中，2. 5分钟以前为空白亚微乳溶剂峰，8. 3 8. 4分钟的峰为多西紫杉醇，2. 9,3. 3,6. 4,7. 3,9. 8、11. 6、15. 8和17. 3分钟的色谱峰均为杂质)
具体实施例方式实施例1多西紫杉烷/类固醇复合物根据本专利技术要求范围，按下表复合物投料比例制备2组多西紫杉醇/胆固醇复合物(摩尔比为1 2和1 5)，2组多西紫杉醇/7-氢化胆固醇复合物(摩尔比为 1 2和1 5)，2组多西紫杉醇/胆固醇油酸酯复合物(摩尔比为1 2和1 5)，为后续亚微乳的制备提供中间载体。表1 多西紫杉烷/类固醇复合物的组成及制备结果 [004权利要求
1.一种多西紫杉烷亚微乳剂，其特征在于，其包含多西紫杉烷/类固醇复合物、注射用油、注射用水、乳化剂、助乳化剂和等渗剂，在所述多西紫杉烷/类固醇复合物中多西紫杉烷与类固醇的摩尔比为1 0. 25 40，优选1 0. 5 20，更优选1 1 10。
2.根据权利要求1所述的多西紫杉烷/类固醇复合物，其特征在于，所述的多西紫杉烷为多西紫杉醇或多西紫杉醇衍生物中的任何一种，优选多西紫杉醇；所述的类固醇脂质材料为游离类固醇、类固醇衍生物或类固醇酯中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的多西紫杉烷/类固醇复合物，其特征在于，所述的游离类固醇选自胆固醇、7-氢化胆固醇、羊毛固醇、谷留醇、菜籽固醇、真菌固醇、牡蛎固醇、豆留醇、麦固醇和麦角固醇，优选胆固醇、7-氢化胆固醇和麦角固醇，更优选胆固醇；所述的类固醇衍生物选自胆酸、脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸；所述的类固醇酯选自类固醇的中链饱和或不饱和脂肪酸酯或类固醇的长链饱和或不饱和脂肪酯，其中所述的中链脂肪酸中碳链中的碳原子为6-12个，所述的长链脂肪酸中碳链中的碳原子为12个以上，优选中链不饱和脂肪酸酯和长链不饱和脂肪酸酯。
4.根据权利要求3所述的多西紫杉烷/类固醇复合物，其特征在于，所述的类固醇酯为胆固醇亚油酸脂、胆固醇亚麻酸脂、胆固醇棕榈酸酯、胆固醇硬脂酸酯、胆固醇肉豆蔻酸酯和胆固醇油酸酯，优选胆固醇油酸酯。
5.根据权利要求1至4所述的亚微乳剂，其特征在于，所述亚微乳剂的乳滴平均粒径在400nm以下，所述油相的用量比例为所述亚微乳剂总量的5% 35% (ml/ml)，以多西紫杉醇计，载药量为0. 25mg/ml 5mg/ml ；优选地，乳滴平均粒径在300nm以下，油相的用量比例为10% 30% (ml/ml)，以多西紫杉醇计，载药量为0. 25mg/ml ang/ml。
6.根据权利要求1至5的亚微乳剂，其特征在于，所述的注射用油选自长链油和中链油中的一种或其混合物；所述的长链油选自长链脂肪酸、长链脂肪酸酯和长链脂肪醇；所述的中链油选自中链脂肪酸、中链脂肪酸酯和中链脂肪醇。
7.根据权利要求6的亚微乳剂，其特征在于，所述的注射用油为长链脂肪酸酯，所述的中链油为中链脂肪酸甘油酯。
8.根据权利要求1至5的亚微乳剂，其特征在于，所述的乳化剂为非离子表面活性剂或天然表面活性剂；所述的非离子表面活性剂选自脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、维生素E 衍生物类和聚氧烯烃共聚物中的至少一种；所述的天然表面活性剂选自蛋黄卵磷脂、豆磷月旨、胆留醇和胆酸类、海藻酸钠和壳聚糖中的至少一种，优选蛋黄卵磷脂和大豆磷脂。
9.根据权利要求8所述的亚微乳剂，其特征在于，所述的乳化剂的含量为所述亚微乳剂总量的 0.5%-5% (g/ml)，优选 1.0%-4.0% (g/ml)，更优选 1. 0%-2. 0% (g/ml)
10.根据权利要求1至5的亚微乳剂，其特征在于，所述的助乳化剂选自聚乙二醇 (PEG)类和泊洛沙姆188中的至少一种，优选泊洛沙姆188。
11.根据权利要求9所述的亚微乳剂，其特征在于，所述的助乳化剂的含量为所述亚微乳剂总量的 0% -5% (g/ml)，优选 0. 5% -3% (g/ml)，更优选 1. 0% -2. 0% (g/ml)。
12.根据权利要求1至5的亚微乳剂，其特征在于，所述的等渗剂为甘油、木糖醇、山梨醇(糖)醇和甘露醇中的一种或多种，优选甘油。
13.根据权利要求1至12中任一项的亚微乳剂，其特征在于，其还可包含稳定剂，选自油酸、油酸钠和PEG中的一种，优选油酸。
14.根据权利要求1至13中任一项的亚微乳剂，其特征在于，其还可包含抗氧剂，选自维生素E或维生素E酯衍生物，优选维生素E。
15.根据权利要求1至14中任一项的亚微乳剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 取注射用水，加入乳化剂、助乳化剂和等渗剂，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻水相，加热至40-80°C，保温； 另将多西紫杉烷与类固醇，按所述比例混合，加入适量有机溶剂溶解，在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥制得复合物。取多西紫杉烷/类固醇复合物，任选地和稳定剂一起溶于预热至40-80°C的注射用油中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻油相； 在搅拌条件下，将水相缓缓加入至油相中，以10000-20000转/分剪切5-lOmin，使形成均勻初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在400nm以下，优选300nm以下，收集全部乳液，用盐酸调节PH至3. 5-6. 0，并加水适量，即得。
16.根据权利要求1至14中任一项的亚微乳剂的制备方法，其特征在于，可采用如下步骤 取注射用水，加入助乳化剂和等渗剂，搅拌制成水相，加热至40-80°C，保温； 另将多西紫杉烷与类固醇，按所述比例混合，加入适量有机溶剂溶解，在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥制得复合物。取多西紫杉醇胆固醇复合物和乳化剂， 溶于预热至40-80°C的注射用油中，置组织捣碎机或剪切机中分散制成均勻油相； 在搅拌条件下，将水相缓缓加入至油相中，高速搅拌剪切使形成均勻初乳，迅速转移至高压均质机中乳化，粒径控制在400nm以下，优选100-300nm，收集全部乳液，用盐酸调节 pH至3. 5-6. 0，并加水至适量，即得。
17.一种制剂，其包含权利要求1至14中任一项的多西紫杉烷亚微乳剂，该制剂为输液剂或干乳剂的形式。
18.根据权利要求17所述的制剂的制备方法，其特征在于，其中的输液剂是通过如下方法制备的将权利要求1至14中任一项的多西紫杉烷亚微乳剂经通蒸汽灭菌或热压灭菌无菌工艺处理，灌装，即得；其中的干乳剂是通过如下方法制备的向权利要求1至14中任一项的多西紫杉烷亚微乳剂中加入适量支撑剂，经无菌过滤处理后，采用冷冻干燥工艺制成干乳剂。
19.根据权利要求1-14中任一项所述的多西紫杉烷亚微乳剂或权利要求17的制剂在用于制备治疗卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、头癌症或颈癌、肝癌和胃癌的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种多西紫杉烷亚微乳剂。本发明的亚微乳剂包含多西紫杉烷/类固醇复合物、注射用油、注射用水、乳化剂、助乳化剂和等渗剂，所述多西紫杉烷/类固醇复合物中多西紫杉烷与类固醇摩尔比为1∶0.25～40。本发明还公开了多西紫杉烷亚微乳剂的制备方法和用途。利用复合物对药物油溶性及灭菌稳定性的改善，将多西紫杉烷/类固醇复合物溶于油相，制备平均粒径400nm以下、pH为3.5-6的水包油亚微乳，稳定性提高，用于恶性肿瘤治疗更加安全。
文档编号A61P35/00GK102451157SQ20101052934
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月28日 优先权日2010年10月28日
发明者刘玉玲, 周翠萍, 夏学军, 张鹏霄, 汪仁芸, 郭瑞芳, 金笃嘉 申请人:中国医学科学院药物研究所