一种含当归挥发油的冻干粉针及其制备方法

专利名称：一种含当归挥发油的冻干粉针及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂及其制备方法。具体的说是一种含有当归水溶性成分提 取物和当归挥发油的羟丙基-β -环糊精包合物的冻干粉针及其制备方法。
背景技术：
心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正 常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心脏的供血不是一成不变的，而是始终存在着 波动，但这种波动经过机体自身调节，促使血液供需相对恒定，保证心脏正常工作。如果任 何一种原因引起心肌缺血，经机体调节不能满足心脏工作需要，这就构成了真正意义上的 心肌缺血。血压降低、主动脉供血减少、冠状动脉阻塞，可直接导致心脏供血减少；心瓣膜 病、血粘度变化、心肌本身病变也会使心脏供血减少。还有一种情况，心脏供血没有减少，但 心脏氧需求量增加了，这是一种相对心肌缺血。给心脏供血的血管叫冠状动脉，开口在升主 动脉内。临床显示，引起心肌缺血最主要、最常见的病因，是冠状动脉(偶见肺动脉)狭窄。 而冠状动脉狭窄的主要原因是动脉粥样硬化。因冠状动脉粥样硬化引起的心脏病就是大家 常说的冠心病。所以，冠心病是心肌缺血的“罪魁祸首”。心肌缺血对心脏和全身都可能带 来许多不利影响。氧是心肌细胞活动必不可少的物质，而氧是通过血液输送给细胞的。心 脏没有“氧仓库”，完全依赖心肌血供，所以一旦缺血，立刻会引起缺氧。缺氧的直接后果是 心肌细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律 失常、心功能下降。同时，代谢的废物也不能被有效及时地清除，易产生不利影响。缺血、缺 氧、缺能量，最终会影响心脏的收缩功能。若有20% 25%的心肌停止收缩，通常会出现左 室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收缩，就会有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突 然发生，就会出现非常危险的心源性休克。急性心肌梗死就常与这种情况相关。蓝大鹤等报道，离体蟾蜍心脏灌流实验表明，当归煎剂或根及叶中所含挥发油可 使心肌收缩频率明显受到抑制。张淑芳等以腹壁iv给药，表明在体蟾蜍心脏多数出现完全 性房室传导阻滞，心房收缩力明显减弱，以后逐渐恢复，频率减慢，但心室收缩力反而增强。 魏连玑报道，当归流浸膏可以使兔离体心房不应期延长，对乙酰胆碱或电流引起的麻醉猫 及犬心房纤颤有治疗作用，上述奎尼丁样作用的有效成分，主要存在于醚提取物中。另据江 苏省中医研究所报道，当归流浸膏及醚提取物能降低心肌兴奋性，使不应期显著延长。1981 年彭仁诱等用同位素示踪法显示，甘肃当归流浸膏(30g/kg)能增加小鼠心肌摄取86Rb的 能力，对垂体后叶素所致心肌缺血有一定缓解作用。周远鹏等的研究表明，当归注射液iv 可使部分麻醉狗因反复短暂阻断冠脉血流造成实验性心肌缺血程度减轻、心率减慢；但对 清醒狗则使心肌缺血程度加重，心率加快。另据报道，当归煎剂、水提物及其有效成分阿魏 酸钠均能增加小鼠心肌摄取86Rb的能力，使心肌营养性血流量分别增加36. 3%,40. 6%和 46%，说明当归能使心肌毛细血管开放增多。Iv当归注射液能减少麻醉犬冠脉闭塞时心肌 梗塞范围(P<0.001)。许静亚等的实验表明，给家兔iv25%当归注射液Qml/kg/次) 有与心得安(0. 75mg/kg/次)相似的缩小实验性心肌梗塞范围的作用，与对照组相比较，当归组和心得安组分别缩小心肌梗塞范围达37. 5%和47. 9%，两者之间差异无显著性(P < 0. 05)。且无心得安那样明显减慢心率。Iv200%当归注射液lg/kg对麻醉犬的左心室 收缩性能及舒张功能没有明显影响。当归水提取物和乙醇提取物，对肾上腺素、强心甙和氯 化钡等诱发的多种动物心律失常都具有明显的对抗作用离体豚鼠心室肌实验表明，当归醇 提取物及阿魏酸钠注射液能对抗羊角拗甙及哇巴因中毒所致的心律失常，使之转为正常节 律；当归还可减慢洋金花引起的大鼠心律加快作用。Iv醇提取液时，对乌头碱诱发的麻醉 大鼠心律失常亦有明显的预防作用(P <0.001)。另有报道，im当归流浸膏不能预防及治 疗乌头碱所致各种心律失常，且不能对抗氯仿所致的心律失常，也不能提高家兔左心室致 颤阈值。1985年尉中民等用电生理学研究证实，当归醇提取物除具有非常类似奎尼丁样作 用外，还显著延长平台期，推测当归醇提取物的抗心律失常作用可能是减慢传导，延长有效 不应期，消除折返，延长平台期，抑制异位节律点与提高颤阈等多方面作用的结果。1989年 朱玉真等对当归的水溶成分中的当归总酸进行了抗心律失常作用的研究，结果表明当归总 酸对氯仿一肾上腺素、乌头碱、氯化钡等诱发的动物药物型心律失常有明显的保护作用，其 抗心律失常作用可能与降低心脏兴奋性、延长心肌不应期有关。当归浸膏有显著扩张离体 豚鼠冠脉作用，增加冠脉血流量。复方当归注射液可扩张冠脉，增加冠脉流量对抗实验家兔 心肌缺血。当归注射液对部分麻醉犬因阻断冠脉前降支血流造成的急性心肌缺血有减轻作 用，而对部分清醒犬则仅有增加心肌缺血作用。另据张培梭报道，当归中性油对实验心肌缺 血亦有明显保护作用。25%当归煎剂蟾蜍血管灌流时，有收缩血管的作用，25%当归煎剂蟾 蜍血管灌流时，有收缩血管的作用，而兔耳血管灌流时却使血管舒张。除去K+的2%当归 浸膏洛氏液灌流，使离体兔耳血管明显收缩，流量显著减少；也不能对抗氯化钾引起的离体 家兔主动脉血管平滑肌的收缩。水提醇沉液l-4g(生药)/kgiv时，麻醉犬动脉血压明显 降低。此时冠脉、脑动脉和股动脉阻力减小，血流量则明显增加，且增加外周血流量和减少 血管阻力作用随药物剂量加大而增强，麻醉犬股动脉i天当归水提醇沉注射液10-40mg (生 药)/kg时，股动脉血流量显著增加，血压变化不明显。研究报道还表明，本品对去甲肾上腺 素动脉注射引起的麻醉犬血管痉挛和血流量减少有温和的缓解作用。当归对外周血管扩张 作用不受心得安或酚妥拉明的影响，但阿托品以苯海拉明可减弱其扩血管增加股动脉血流 量的作用。提示本品扩血管作用与a或B受体无关，而与M受体及组胺hi受体兴奋有关。 犬iv阿魏酸钠不是当归扩血管的有效成分。据认为也不是无机盐。另据资料报道，当归所 含挥发成分主要引起血压上升，而非挥发性成分则引起血压下降，其上升或下降程度与剂 量大小成正比，但血压总的趋势是下降。故iv药给时，可使犬及家兔血压均下降。周远鹏 等1979年报道，用本品水煎醇沉注射液2g (生药)/kg给麻醉犬及青醒肾型高血压犬iv，对 血压出现双相作用，先升后降，清醒犬表现明显，此作用不是通过交感神经兴奋和儿茶酚胺 所致，因利血平化清醒高血压犬iv后升压作用仍然存在，清醒高血压iv当归挥发油饱和水 溶液2g (生药)/kg后，血压明显下降，未见升压作用，心率亦无明显改变，故认为挥发油可 能是当归降压有效部位之一。降压原因早期的研究认为可能与直接抑制心脏有关。新近的 研究证明，当归并不影响心泵功能，不降低心输出量也不引起心搏指数的明显变化。日本学 者的实验亦证明，当归在降压的同时亦可使眼压降低，房水生成量减少，并证实降压作用和 血管扩张不受神经阻断剂的前处理影响，故认为这种作用是末梢性的，同时也有中枢因素。 国内学者证实当归扩血管作用可能与胆碱能受体和组胺受体兴奋有关。综上所述，当归对血管作用的机理较为复杂，尚待进一步研究。

发明内容
为突破目前当归、当归方制成注射用粉针存在的瓶颈，本发明提供一种质量稳定、 有效成分含量高的含当归挥发油的冻干粉针及其制备方法。本发明所采用的技术方案是一种含当归挥发油的冻干粉针，它是由当归的水溶 性成分提取物与当归挥发油的羟丙基-环糊精包合物组成。其中当归水溶性成分提取 物2 6份；当归挥发油的羟丙基- β -环糊精包合物4 8份，其中当归挥发油与羟丙 基-β-环糊精的体积重量比为1 1 150。较好为1 5 70，最佳为1 10 45。本发明所述的当归的水溶性成分提取物，是采用水或任意比例的乙醇，优选 30-95%乙醇提取，经大孔吸附树脂分离纯化制成。具体步骤包括取当归药材粉碎成粗粒； 分别用水或任意比例的乙醇提取，提取方法包括反复煎煮、热回流、渗漉、超声、微波；提取 液经减压(60 70°C )浓缩或不经浓缩；提取液除尽乙醇后用2M盐酸调pH值至1 4，优 选调至2 3，静置，滤过，滤液经HPD-100、DlOl、AB-8或者LSA-30大孔树脂柱吸附，水洗 脱杂质，用30% 70%的乙醇洗脱；收集洗脱液，除尽乙醇，制得含当归素、丹酚酸B含量 为20 95%的当归水溶性成分提取物。优选制得的提取物中含当归素、丹酚酸B、为60 95%。本发明所述的羟丙基- β -环糊精包合当归挥发油，制备方法为包括下列步骤表1含当归挥发油的冻干粉针对红细胞的影响(肉眼观察法)
管号1 2 34 5 67
2%红细胞混悬液(ml)2.52.52.52.52.52.52.5
生理盐水(ml)2.42.32.22.12.02.5
蒸馏水(ml)2.5
供试品(ml)0.10.20.30.40.5——
0.5 小时一—一一_一+
1小时—一—_—一+
2小时——__一_+
3小时一 —— __ 一_+注“ + ”表示溶血“-”表示不溶血表1结果显示，肉眼观察，在3小时内含当归挥发油的冻干粉针各试验管均不产生 溶血和红细胞凝集。观察完毕，将各管溶液2500转/分离心10分钟，取上清液在紫外分光光度计 545nm处，以蒸馏水作为空白对照读取各管OD值，结果见表2。
结果判断用下式计算各试验管的溶血率(％ )。溶血率(%) = (ODt-ODnc)/(ODpc-ODnc)) X100%式中ODt 试验管吸光度0Dn。阴性对照管吸光度0Dp。阳性对照管吸光度溶血率> 5%表明出现溶血，不宜注射使用。表2含当归挥发油的冻干粉针对溶血的影响(分光光度法)
管号12 3456 7OD值0. 0620. 065 0. 0680. 0690. 0770.068 1.748溶血百分率(%)-0. 36-1.79 00. 600. 54表2结果显示，含当归挥发油的冻干粉针各试验管溶血百分率均小于5%。表明含 当归挥发油的冻干粉针符合注射剂使用规定。试验结论含当归挥发油的冻干粉针溶血性试验符合注射剂使用规定，可供注射用。(2)血管和股四头肌刺激试验试验目的观察含当归挥发油的冻干粉针连续3次静脉注射给药，对血管及其周 围组织所产生的刺激反应；观察含当归挥发油的冻干粉针一次股四头肌注射给药，对股四 头肌及其周围组织所产生的刺激反应。药物含当归挥发油的冻干粉针动物家兔大耳白种，体重2 2. ^g，雌雄兼用。试验方法与结果①含当归挥发油的冻干粉针静脉注射给药对家兔血管刺激的影响选用上述健康成年家兔12只，体重2 23kg，雌雄兼用(雌者无孕)。按性别、体 重分为3组，含当归挥发油的冻干粉针两个给药浓度组(0. 22,0. 44g生药/ml)及一个5% 葡萄糖注射液对照组，每组均为4只，按无菌操作的方法进行耳静脉注射给药，给药体积均 为5ml/kg，对照组给予等容量葡萄糖注射液，每天1次，连续3天，每次给药后肉眼观察注射 部位有无红肿、充血等刺激反应，3天后处死动物，剪下兔耳做病理组织学检查。结果显示，含当归挥发油的冻干粉针给兔耳静脉连续注射给药3天，肉眼观察，血 管清晰可见，未见红肿、充血等刺激反应。病理组织学检查显示，家兔血管内皮光滑完整，内 皮细胞未见水肿、变性、脱落，血管腔内未见血栓形成，管壁及其周围未见明显炎症反应。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它 以任何方式限制本发明的范围.实施例1取当归药材适量，粉碎，过10目筛。称取100g，混合后加入浓度60%乙醇浸泡 24小时，移至渗漉筒中，以0. 6mL/min的速度渗漉，收集900ml渗漉液，减压浓缩至无醇 味(0. IMP, 600C )。以2M盐酸调pH2. 0，静置，滤过，滤液通过HPD-100型大孔吸附树脂柱(400ml)纯化，先用4BV蒸馏水洗脱，再用60%乙醇6BV洗脱，收集60%乙醇洗脱液，并减 压浓缩(0. 1MP，60°C )至100ml，(丹酚酸B45mg/ml)，测定含量为85 %。再向浓缩液中加 入8g羟丙基-β -环糊精，待羟丙基-β -环糊精溶解后，置于40°C水浴中，将0. 17ml当归 挥发油缓慢滴加于上述溶液中，同时剧烈磁力搅拌60分钟。静置M小时后，以2M NaOH调 节pH5. 0，0. 22 μ m微孔滤膜过滤，每只西林瓶2ml灌装，冷冻干燥，得含当归挥发油的冻干 粉针。实施例2取当归药材适量，粉碎，称取粗粉lOOOg，以30%乙醇30L渗漉，渗漉液减压浓缩至 0. 5g/ml (按药材量计)，以2M盐酸调节PH 2. 5，静置，滤过，滤液过HPD400树脂，水洗部分 弃去，收集40 %乙醇洗脱部分，减压浓缩至无醇味，加注射用水至450ml，(丹酚酸B90mg/ ml)，测定含量为90%。另称取羟丙基-β -环糊精75g，溶解于约450ml注射用水中，在30°C 水浴中，剧烈电力搅拌的条件下逐滴缓慢的加入当归挥发油1.7ml，密闭容器，继续搅拌2 小时，室温静置过夜。得当归挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物水溶液，将上述两种溶液 混合均勻，加入2Μ NaOH调节ρΗ5. 5，加注射用水至1000ml，0. 22 μ m微孔滤膜微滤，无菌条 件下分装(每瓶2ml)，冷冻干燥，压盖，即得含当归挥发油的冻干粉针。实施例3取当归药材适量，粉碎，过10目筛，称取粗粉800g，加入浓度50%乙醇加热回流 1小时，滤出药液，药渣同上再提取一次，合并药液，减压浓缩至无醇味(0. 1MP，60°C )。以 2M盐酸调pH2. 8，静置，滤过，滤液通过DlOl型大孔吸附树脂柱QOOml)纯化，先用4BV蒸 馏水洗脱，再用30%乙醇6BV洗脱，收集30%乙醇洗脱液，并减压浓缩(0. IMP, 600C )至 800ml (丹酚酸B31mg/ml)，测定含量为55 %。将150g羟丙基-β -环糊精溶于1200ml注 射用水中，置于50°C水浴，电力剧烈搅拌下，缓慢滴加3. 5ml当归挥发油，继续搅拌180分 钟，静置12小时，得当归挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物水溶液，将上述两种溶液混合 均勻，以2Μ NaOH调节ρΗ6. 0，超滤膜滤过(6000分子量)，每只西林瓶2ml灌装，冷冻干燥， 得含当归挥发油的冻干粉针。
权利要求
1.一种含当归挥发油的冻干粉针，其特征在于它是由下述重量份数的原料组成当归 水溶性成分提取物2 6份；当归挥发油的羟丙基-β -环糊精包合物4 8份；其中当归 挥发油与羟丙基-β-环糊精的体积重量比为1 1 150。
2.如权利要求1所述的冻干粉针，其特征在于所述的羟丙基环糊精包合物，是将 当归挥发油缓慢滴加到羟丙基- β -环糊精水溶液中，剧烈搅拌、超声振荡或研磨制成；其 中剧烈搅拌包括电力搅拌器搅拌、胶体磨研磨、高压/低压均浆机均浆。
全文摘要
本发明提供了一种含有2-6份当归水溶性成分提取物和4-8份当归挥发油的羟丙基-β-环糊精包合物的冻干粉针及其制备方法；其中羟丙基-β-环糊精与当归挥发油的比例为10-45∶1。本发明含当归挥发油的冻干粉针以当归素、丹酚酸B和反式-橙花叔醇为主要有效成分，有效成分明确，便于质量控制；对急性心肌缺血具有较好的保护作用，起效快，作用强，生物利用度高，更适合用于治疗心血管系统疾病。
文档编号A61K36/232GK102058639SQ20101055222
公开日2011年5月18日 申请日期2010年11月19日 优先权日2010年11月19日
发明者宁德科, 宋德成, 王磊, 郎琳, 高永清 申请人:天津太平洋制药有限公司