专利名称：一种治疗肿瘤的小牛脾提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种提取物，特别涉及一种治疗肿瘤的小牛脾提取物。
背景技术：
癌症发病率和死亡率逐年上升，严重威胁人类健康，已成为人类死亡的主要原因之一。西医治疗多以手术、放疗、化疗为主，但是应用化疗或放疗，往往引起恶心，食欲不振， 血象变化，机体免疫功能损害等毒副作用，在癌细胞受到抑制或部分杀灭的同时，人体正常组织细胞也相应的受到极大地摧残和伤害，因此导致许多患者无法坚持完成放、化疗疗程， 失去有效治疗机会。本发明提供的小牛脾提取物注射液，是由健康乳牛(出生Mh以内)脾脏为原料提取而成的无菌水溶液。其既能抑制肿瘤细胞，同时可以拮抗化疗药的副作用，提高患者体质，使患者能坚持完成放、化疗疗程，延长生存期。
发明内容
本发明一个目的在于提供一种治疗肿瘤的小牛脾提取物；本发明的另一个目的在于提供小牛脾提取物在制备治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的应用。本发明目的在于提供一种治疗肿瘤的小牛脾提取物注射液，其中2 6体积份小牛脾提取物注射液中含5-15重量份多肽、0. 4-1重量份核糖；所述小牛脾提取物注射液是由如下方法制备领取乳牛的脾脏(出生M小时以内)，除去掉结缔组织和脂肪，用0. 9% 氯化钠溶液清洗，加入1-5倍量的生理盐水进行勻浆1 5次，胶体磨粒度为2 8 μ m ；将勻浆液-10°C -30°C深冻，达到完全冻结后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解冻，完全融化后继续-10°C -30°C条件下深冻，如此反复进行三次；将冻融后的药液60V 100°C 保温30-40分钟，速降温至10°C 20°C ；将上述溶液离心，离心速度为3000-4000转/分，温度0 10°C以下，离心15-30分钟，收集上清液；分别用100000 50000道尔顿、10000 9000道尔顿、8000 5000道尔顿的膜超滤；0. 20 μ m滤芯无菌过滤分装，即得注射液。所述重量份与体积份的关系为mg/ml的关系。上述治疗肿瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5体积份小牛脾提取物注射液中优选含6. 25重量份多肽、0. 475重量份核糖。上述治疗肿瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5体积份小牛脾提取物注射液中优选含10. 5重量份多肽、0. 95重量份核糖。上述治疗肿瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5体积份小牛脾提取物注射液中优选含9重量份多肽、0. 6重量份核糖。本发明目的在于提供一种治疗肿瘤的制剂，该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为5-15 0. 4-1。上述治疗肿瘤的制剂，该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为6.25 0.475。上述治疗肿瘤的制剂，该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为9 0.6。上述治疗肿瘤的制剂，该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为10.5 0.95。所述小牛脾提取物制剂优选注射制剂。小牛脾提取物及其注射制剂在制备治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的应用。小牛脾提取物及其注射制剂在制备拮抗环磷酰胺副作用中的应用。本发明提取一种抗肿瘤用药剂盒，由置于包装单位中的许多独立包装且各自可取出的7个日剂量单位组成，其中第一个日剂量单位包含4-12g环磷酰胺注射剂和4-12ml小牛脾提取物注射液，其余六个日剂量单位包含小牛脾提取物注射液4-12ml。上述小牛脾提取物可以通过现有技术制备，小牛脾提取物注射制剂优选如下方法制备领取乳牛的脾脏(出生M小时以内)，除去掉结缔组织和脂肪，用0. 9%氯化钠溶液清洗，加入1-5倍量的生理盐水进行勻浆1 5次，胶体磨粒度为2 8 μ m ；将勻浆液-10°C -30°C深冻，达到完全冻结后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解冻，完全融化后继续-10°C -30°C条件下深冻，如此反复进行三次；将冻融后的药液60°C 100°C保温 30-40分钟，速降温至10°C 20°C ；将上述溶液离心，离心速度为3000-4000转/分，温度 0 10°C以下，离心15-30分钟，收集上清液；分别用100000 50000道尔顿、10000 9000 道尔顿、8000 5000道尔顿的膜超滤；0. 20 μ m滤芯无菌过滤分装，即得注射液。小牛脾提取物制剂可显著拮抗化疗药环磷酰胺(CTX)所致小鼠白细胞减少；可逆转环磷酰胺对骨髓细胞的抑制，刺激骨髓细胞的增殖，使骨髓细胞的数量增加；小牛脾提取物均可以显著抑制HL60细胞的增殖，用于治疗急性早幼粒细胞白血病。 下述实验用于进一步说明本发明，但是对本发明范围的限制。实验例1拮抗环磷酰胺副作用研究1.小牛脾提取物注射液对化疗药环磷酰胺(CTX)所致小鼠白细胞减少的作用1. 1 摘要ICR小鼠腹腔注射小牛脾提取物注射液9天。第7天开始给予CTX，连续3天以建立白细胞减少症动物模型，末次给CTX后24h眼眶取血，通过血常规分析评价小牛脾提取物注射液对白细胞数量的影响。结果表明低剂量0.5ml/kg)和中剂量(5ml/kg)的小牛脾提取物注射液有升高白细胞的趋势，但与模型相比无显著性差异，高剂量(10ml/kg)小牛脾提取物注射液可以显著升高白细胞数量。1. 2实验材料(1)实验动物18_22g的ICR小鼠60只，雌雄各半。动物生产合格证号SCxk京 2006-0008(2)实验药物
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a.小牛脾提取物注射液(实施例1方法制备)吉林敖东洮南药业股份有限公司提供，产品批号20090505135，为淡黄色澄明液体。有效成分含量2. 5mg多肽/ml，190 μ g 核糖/ml。临用时用灭菌生理盐水稀释。b.环磷酰胺(CTX)江苏恒瑞医药股份有限公司生产，产品批号09081521，为白色粉末。临用前用灭菌生理盐水配制，需现用现配。c.重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF)华北制药金坦生物技术股份有限公司生产，产品批号200909Y22，为无色透明液体。临用时用用灭菌生理盐水稀释。(3)实验仪器血液分析仪，型号ΜΕΚ-6318Κ，日本光电工业株式会社生产。1. 3实验方法与步骤ICR小鼠(18_22g)60只，雌雄各半，动物生产合格证号scxk京2006-0008。购自北京大学医学部动物科学部，随机分成6组正常对照组、模型组、阳性药rhG-CSF(40 μ g/ kg)组、小牛脾提取物低(2. 5ml/kg，相当于6. 25mg多肽/kg，475 μ g核糖/kg)、中(5. Oml/ kg，相当于12. 5mg多肽/kg，950 μ g核糖/kg)、高剂量组(10. 0ml/kg，相当于25mg多肽/ kg, 1900 μ g 核糖 /kg)。小鼠给连续予小牛脾提取物注射液9天，2次/天。第7天开始小牛脾提取物注射液减为1次/天，同时给予CTX 80mg/kg,连续3天以制备模型，末次给CTX后24h眼眶取血，测定白细胞数量。1. 4实验结果结果显示模型组动物的白细胞数明显低于正常对照组，表明模型成功。小牛脾提取物注射液高剂量组的白细胞数量明显高于模型组，说明该剂量下小牛脾提取物注射液可以抑制白细胞数下降，与阳性对照GM-CSF组药效相当。中剂量有升高白细胞数量的趋势， 但模型组相比无显著性差异，低剂量无效(见表1)。同时分析白细胞分类计数结果后，发现小牛脾提取物高剂量组和GM-CSF组的淋巴细胞数量均较模型组有显著性升高(见表2)。 说明小牛脾提取物注射液高剂量和GM-CSF主要升高白细胞中的淋巴细胞数量。提示小牛脾提取物注射液可以提高小鼠机体免疫力。表1小牛脾提取物对环磷酰胺诱导的白细胞减少症的影响( 士s，η = 10)
权利要求
1.一种治疗肿瘤的小牛脾提取物，其特征在于小牛脾提取物中多肽与核糖的重量比为:5-15 0. 4-1。
2.如权利要求1所述的小牛脾提取物，其特征在于小牛脾提取物中多肽与核糖的重量比为6. 2 0. 475。
3.一种治疗肿瘤的药物组合物制剂，其特征在于该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为5-15 0. 4-1。
4.如权利要求3所述的药物组合物制剂，其特征在于该制剂由临床日用剂量的小牛脾提取物制剂和临床日用剂量的环磷酰胺制剂组成，其中小牛脾提取物制剂中多肽与核糖的重量比为6. 2 0. 475。
5.如权利要求1或2所述的小牛脾提取物的制备方法，其特征在于取乳牛的脾脏， 用0. 9%氯化钠溶液清洗，加入1-5倍量的生理盐水进行勻浆1 5次，胶体磨粒度为 2 8μ m ；将勻浆液-10°C -30°C深冻，达到完全冻结后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解冻，完全融化后继续-10°C -30°C条件下深冻，如此反复进行三次；将冻融后的药液60°C 100°C保温30-40分钟，速降温至10°C 20°C ；将上述溶液离心，离心速度为 3000-4000转/分，温度0 10°C以下，离心15-30分钟，收集上清液；分别用100000 50000道尔顿、10000 9000道尔顿、8000 5000道尔顿的膜超滤。
6.如权利要求3或4所述的药物组合物制剂，其特征在于该制剂中小牛脾提取物由如下方法制备取乳牛的脾脏，用0. 9%氯化钠溶液清洗，加入1-5倍量的生理盐水进行勻浆 1 5次，胶体磨粒度为2 8μπι ；将勻浆液-10°C _30°C深冻，达到完全冻结后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解冻，完全融化后继续-10°C -30°C条件下深冻，如此反复进行三次；将冻融后的药液60°C 100°C保温30-40分钟，速降温至10°C 20°C ；将上述溶液离心，离心速度为3000-4000转/分，温度0 IO0C以下，离心15-30分钟，收集上清液；分别用100000 50000道尔顿、10000 9000道尔顿、8000 5000道尔顿的膜超滤。
7.如权利要求1或2所述的小牛脾提取物在制备治疗急性早幼粒细胞白血病药物中的应用。
8.如权利要求1或2所述的小牛脾提取物在制备拮抗环磷酰胺副作用药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于拮抗环磷酰胺所致白细胞减少、骨髓抑制的副作用。
10.一种抗肿瘤用药剂盒，其特征在于由置于包装单位中的许多独立包装且各自可取出的7个日剂量单位组成，其中第一个日剂量单位包含4-12g环磷酰胺注射剂和4-12ml小牛脾提取物注射液，其余六个日剂量单位仅包含小牛脾提取物注射液4-12ml。
全文摘要
本发明公开了一种治疗肿瘤的小牛脾提取物，其中小牛脾提取物中含5-15重量份多肽、0.4-1重量份核糖。该提取物制剂可明显抑制肿瘤，显著拮抗化疗药环磷酰胺所致小鼠白细胞减少、逆转环磷酰胺对骨髓细胞的抑制，并且该提取物能够治疗急性早幼粒细胞白血病。
文档编号A61P7/00GK102210702SQ20111013405
公开日2011年10月12日 申请日期2010年8月19日 优先权日2010年8月19日
发明者杨振军, 王国栋, 王银叶, 邹兆鹏 申请人:吉林敖东洮南药业股份有限公司