专利名称：超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及超氧化物歧化酶的一种在妇科医学领域的用途。
背景技术：
宫颈糜烂(cervical erosion)也叫宫颈柱状上皮异位，是慢性宫颈炎的局部特征之一，长期以来临床医生将慢性宫颈炎和宫颈糜烂视为同义词。宫颈糜烂的发生是由于分娩、流产、产褥期感染或手术操作或机械刺激如性生活损伤宫颈，病原体侵入而引起感染导致的，是妇女的多发病和常见病。尤其是已婚、已生育过的妇女，几乎60% 80%有不同程度的宫颈糜烂。宫颈糜烂的病因及病原体1、性传播疾病病原体淋病奈瑟菌及沙眼衣原体，主要见于性传播经的高危人群；2、内源性病原体部分宫颈炎的病原体与细菌性阴道病和生殖支原体感染有关。3、沙眼衣原体，及淋病奈瑟菌均感染宫颈管上皮，沿粘膜面扩散引起浅层感染，病变以宫颈管明显。除宫颈管柱状上皮外，淋病奈瑟菌还经常侵袭尿道移行上皮、尿道旁腺，及前庭大腺。宫颈糜烂可引起白带增多、白带带血或性交后出血，常有腰酸背痛、月经失调、不孕不育等。严重的宫颈糜烂如不予治疗，少数可发生子宫颈癌前病变或子宫颈癌，严重危害广大妇女的身体健康。目前治疗此病的方法很多，但有的药物疗效欠佳，物理治疗副作用较大，有可能会造成宫颈局部组织挛缩，瘢痕形成，并使阴道内壁神经灵敏度降低，且容易复发。也可能导致宫颈分泌腺闭锁，使宫颈黏液发生改变而不孕，或造成分娩时宫颈扩张障碍，分娩困难，因此未生育的患者不宜采用物理治疗。医学专家研究发现宫颈糜烂与人类乳头瘤病毒(HPV)感染密切有关，所以积极治疗宫颈糜烂可以减少宫颈癌的发病率。大量文献资料和临床实验证实自由基与炎症有着密切的关系。炎症反应本是机体自我保护的正常防御反应，但过度的炎症反应所产生的大量自由基会伤害机体自身的组织。自由基会诱导促炎症细胞因子基因的表达，当人体产生的自由基超出其自身清除能力时，就会加剧炎症反应。自由基的累积还会攻击生命大分子(RSH)，使得皮肤粘膜组织损伤， 而且自由基的反应是连锁式的，使得组织损伤越来越严重。超氧化物歧化酶(英文名superoxide dismutase简称SOD)是自由基的专业性高效率清除剂，其清除速率达到IO9M-1S.1,通过O2" + O2" + 2H+ SOD · O2 + H2O2超氧化物歧化酶的歧化反应
来清除自由基，并清除吞噬细胞在吞噬细菌过程中所产生的自由基一炎症的动因一而达到消炎的作用。含铜与锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和含铁超氧化物歧化酶0^-SOD)因其内均含S0D，因此，三者在学术上统称为超氧化物歧化酶 (SOD)。超氧化物歧化酶的来源可以是动物，也可以是植物。近些年，为弥补与完善超氧化物歧化酶(SOD)在一些方面的不足，人们对其进行了各种修饰、重组等方法的尝试和实验。 但无论是超氧化物歧化酶〔含铜与锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含锰超氧化物歧化酶
3(Mn-SOD)和含铁超氧化物歧化酶( ^-SOD)〕，以及经修饰或重组的S0D，它们共同的作用底物为超氧自由基(O2)，其催化的反应为Of + O2" + 2H+__SOD ·02 + H2O2。根据一般酶活力测定的常规，多以一定时间内产物的生成量或底物的消耗量作为酶活性单位，因此，无论是采用连苯三酚、肾上腺素等自氧化反应方法进行检测，只有能体现出一定的酶活性单位，才能作为确定与判断该类物质的重要依据。众多研究表明，超氧化物歧化酶在预防和治疗放射性粘膜损伤，人体自由基氧化引发的皮肤受损的各种表现症状，人体免疫失衡所致病症引起的各类皮肤损伤，以及关节炎等无菌性炎症的治疗方面有作用，有些研究已进入不同的临床研究阶段。迄今国内未见有关通过对患者经阴道局部给药的方式，使用一定剂量的超氧化物歧化酶，能够迅速修复妇女宫颈及阴道糜烂的研究报告，也未见到国外该方面的文献报道。
发明内容
本发明的目的就是提供一种超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用。超氧化物歧化酶在阴道局部给药的条件下，能够迅速修复妇女宫颈及阴道的糜烂部位，加速愈合。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物片剂，一片含有效成份超氧化物歧化酶 (Cu-Zn-SOD) 10000国际单位，由超氧化物歧化酶20mg(原料为500国际单位/mg)、药用淀粉479mg，防腐剂lmg，混合均勻，压片后获得500mg/片的片剂。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物硬胶囊，一粒含有效成份超氧化物歧化酶 (Mn-SOD) 10000国际单位，由超氧化物歧化酶1. 67mg(原料为6000国际单位/mg)、药用淀粉497mg，防腐剂1. 23mg,混合均勻，混合均勻后装入空心胶囊，制成500mg/粒的硬胶囊。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物软胶囊，一粒含有效成份超氧化物歧化酶 (Fe-SOD) 10000国际单位，由超氧化物歧化酶lmg(原料为10000国际单位/mg)、聚乙二醇 200 M9mg，置入以明胶、甘油(1 0.4)制成的软胶囊皮，制成250mg/粒软胶囊。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物软膏，即20g的软膏制剂中含超氧化物歧化酶30000国际单位(原料为100国际单位/mg)，它由如下比例构成超氧化物歧化酶 0. 015%,0. 2%卡波姆、5% 10%甘油、94. 885% 87. 985%纯化水。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物栓剂，即2g/枚的栓剂中含超氧化物歧化酶 10000国际单位(原料为20000国际单位/mg)，它由如下比例构成超氧化物歧化酶0. 5mg、 1799. 5mg聚乙二醇4000、200mg聚乙二醇400，经混合溶解，倒入栓模，制成栓剂。一种治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物水剂，即IOOmL/瓶的水剂中含超氧化物歧化酶3000000国际单位(原料为30000国际单位/mg)，它由如下比例构成超氧化物歧化酶lOOmg、纯化水IOOmL,经混合溶解，装瓶制成水剂。稳定性实验1、依照本发明内容制备成的含超氧化物歧化酶30000国际单位/ml水剂(原料为 30000国际单位/mg)在室温下放置一年后，以连苯三酚法进行活力检测，结果为含超氧化物歧化酶四580国际单位/mL，pH值为，6. 0 ；2、依照本发明内容制备成的含超氧化物歧化酶30000国际单位/ml水剂(原料为
430000国际单位/mg)在40°C 士0. 5°C恒温保持180天，以肾上腺素法进行活力检测，结果为含超氧化物歧化酶53880国际单位/mL，pH值为5. 9 ；此结果说明本发明制备成的水剂在不同保存条件下，活力均无较大变化，pH值稳定且呈中性，能够符合与满足作为药物及制剂的稳定性实验要求。阴道刺激、致敏检验按照生物评价学规定的要求，对本发明片剂分别进行阴道刺激、致敏项目的检验。 检验结果表明，阴道刺激指数为0，无致敏反应。急性毒性、局部刺激性及过敏性的实验观察本发明栓剂的急性毒性、黏膜刺激性以及皮肤过敏反应。方法参照中药新药研究指导原则，采用最大给药量试验观察阴道给药后动物短期内出现的急性毒性反应及其程度，结合一般情况观察与组织病理学检查综合判断阴道黏膜发生的局部刺激性反应，对豚鼠皮肤多次局部涂抹致敏，观察其过敏反应。局部刺激性实验中动物一般状况良好，未发生全身反应甚至死亡情况，给药局部阴黏膜未见红斑、水肿等刺激反应，组织病理学检查发现阴道黏膜未见损伤性变化及大量炎细胞浸润；对豚鼠皮肤的多次刺激致敏试验显示药物无致敏性。全身急性毒性试验证明小鼠静脉注射LD50为4. 16g/Kg。结论本发明的栓剂经阴道局部用药无明显毒性及刺激性，其临床使用安全可靠。细胞毒性试验本实验采用GB/T16886第5部分细胞毒性测试-体外法，对本发明片剂进行细胞毒性试验，样品浸提液与生长旺盛的细胞继续培养(37°C 5% C02)24h后，分别观察细胞形态，细胞裂解情况，采用MTT法测定供试品的潜在细胞毒性。结果显示24h时，100% 样品提取液的细胞活力为79. 8%，分级为1级，50%的提取液的相对细胞活力为85. 8%，分级为1级，而阴性对照的细胞活力为98. 3%，分级为1级，阳性对照的细胞活力为1. 5%，分级为4级。提示供试样品对L-9^细胞无毒性影响。临床应用试验1、资料和方法1. 1 一般资料在妇科门诊确诊为宫颈糜烂的已婚妇女90例，年龄22至45岁，平均年龄30岁。白带多呈乳白粘稠样，黄色脓性或血性，容易出现接触性出血，轻症患者仅感觉腰酸或下腹坠张感。重者患者则出现较严重的腰痛及下腹痛，月经前和性交尤为严重。其中白带异常48例腰骶痛18例，下腹痛18例，接触性出血6例。轻度糜烂50例，中度糜烂 20例，重度糜烂20例。患者月经周期正常，经期正常，治疗前均做宫颈刮片及阴道镜活检检查，以排除癌变可能。1. 2诊断标准根据宫颈糜烂深浅程度分为3型为单纯性糜烂、颗粒性糜烂、乳突型糜烂。根据糜烂面积大小将糜烂分为3度轻度指糜烂面积小于整个宫颈面积的1/3，中度指糜烂面积小于整个宫颈面积1/3-2/3，重度指糜烂面积占整个宫颈面积的2/3以上。1. 3给药材料本发明的片剂、一次性指套及阴道给药推进器组成。1. 4治疗方法患者均与月经干净后1-2天开始使用。排空小便，用苏打水清洗外阴，取平卧位，用指套或将装有上述片剂的阴道推进器，缓慢插入阴道深部，把上述放入阴道深部。一日2-3次，重度30天一个疗程，中度20天一个疗程，轻度15天一个疗程。治疗期间禁止性生活和盆浴，避免剧烈运动，月经期停药。
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1. 5观察内容详细记录治疗前后症状改变，宫颈糜烂面积和深度的变化，以及不良反应。1. 6疗效判定标准痊愈子宫颈光滑，糜烂面消失。显效糜烂面积缩小大于50% 或2度好转为1度，3度好转为2度。有效2度、3度糜烂面积缩小，但好转不足1度；1度糜烂面积缩小小于50% ；糜烂面无缩小，但颗粒型变为单纯性，乳头状变为颗粒型。无效 糜烂面无变化或有发展。1. 7统计学处理采用卡方检验X2。2、临床统计结果治疗前后临床症状改善情况，见表1。表1治疗前后临床症状改善情况(例)
类别白带异常腰骶痛下腹痛接触性出血治疗前4818180治疗后4320消失率(％)928389100注P < 0. 01，表1数据显示，宫颈糜烂用本发明片剂治疗后临床症状消失率均在 83%以上，临床效果显著。治疗前后宫颈糜烂局部改善情况，见表2表2治疗前后宫颈糜烂局部改善情况
分度N治愈显效有效无效总有效率1度5050 0 001002度2016 2 201003度2012 3 3290注表2数据显示宫颈糜烂用用本发明片剂治疗后总有效率> 97%，临床效果显
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者O不良反应有3例患者在使用的头2-3天稍有灼热感或阴道分泌物增多，未加处理，症状自然消失，属正常反应。大量文献资料和临床实验证实自由基与妇科炎症有着密切的关系，妇科炎症是困扰现代女性的一大顽疾。据世界卫生组织对中国妇女的调查我国育龄女性约为1. 5 2亿，其中约41%的女性患有不同程度的妇科炎症。炎症反应本是机体自我保护的正常防御反应，但过度的炎症反应所产生的大量自由基会伤害机体自身的组织。自由基会诱导促炎症细胞因子基因的表达，当人体产生的自由基超出其自身清除能力时，就会加剧炎症反应。自由基对人体的损害主要有三个方面一、使细胞膜被破坏；二、使血清抗蛋白酶失去活性；三、损伤基因导致细胞变异的出现和蓄积。宫颈由于炎症的刺激程度不同，临床症状有不同的表现形式。宫颈处粘膜柱状上皮生长较慢，上皮平坦，外表光滑即为单纯性糜烂；
6柱状上皮生长速度快，形成腺体增生时为腺样糜烂。如果腺体扩张则可为滤泡型糜烂同时伴间质增生，形成小的突起，被覆柱状上皮不均则形成乳头状糜烂，上述类型常可混合发生，一般分轻度、中度、重度三个等级。宫颈黏膜皱襞丰富，感染不易彻底消除，又因宫颈结缔组织多，口服等全身用药效果欠佳，诸多因素造成炎症迁延。其次，重度宫颈糜烂也是导致宫颈癌的关键因素。目前，针对育龄期妇女的宫颈轻度糜烂，包括一些生理性因素导致的糜烂，缺乏有效的治疗方法和手段，需等发展到了中至重度糜烂，经确诊系宫颈癌病变除外，则可做一些物理治疗，现在用得比较多的是微波、激光、冷冻、射频消融。疗效是肯定的， 但术后阴道分泌物增多和出血，患者比较痛苦，难以接受，尤其是夏季，给生活带来不便。因此对慢性宫颈炎的治疗也受到妇科工作者的关注。超氧化物歧化酶是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢中，特别是炎性反应过程中产生的有害物质，是使超氧阴离子自由基((V)转变为H2A和&的歧化反应O02-+2H+— H》2+02)的生物催化剂，对细胞和生物起保护作用。本发明从炎症产生的根本动因出发，通过外源性地补充自由基高效清除剂，切断炎症产生的根本动因，加速创口的愈合，促进人体主动修复，且愈合面无疤痕形成。避免了过量西药造成的毒副作用和抗菌素滥用后的药物失效，也避免了物理治疗给患者身体带来的痛苦和粘连产生的严重后遗症。本发明在临床观察中疗效显著，能够迅速减轻或消除妇女宫颈，修复糜烂部位，加速愈合。在临床观察中还发现，宫颈糜烂伴阴道炎或伴阴道炎性糜烂的患者，经局部给药使用后，阴道炎或伴阴道炎性糜烂均全部好转，部分患者痊愈，且患者无损伤无痛苦，无明显的不良反应，安全性好，不影响生活工作，治疗操作简单。
权利要求
1.超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用。
2.如权利要求1所述的超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用，其特征在于所述的超氧化物歧化酶包括含铜与锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和含铁超氧化物歧化酶(i^e-SOD)。
3.如权利要求1所述的超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用，其特征在于所述的超氧化物歧化酶包括重组的超氧化物歧化酶、修饰的超氧化物歧化酶以及呈现超氧化物歧化酶活性的衍生物。
4.如权利要求1所述的超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用，其特征在于超氧化物歧化酶由一种或多种载体或者赋形剂组成，活性单位为100 30000U/mg。
全文摘要
本发明公开了超氧化物歧化酶在制备治疗宫颈糜烂及阴道炎疾病药物中的应用，通过实验证明了超氧化物歧化酶能切断炎症产生的根本动因，加速创口的愈合，促进人体主动修复，应用在治疗宫颈糜烂药物中临床症状消失率均在97％以上，效果非常显著。
文档编号A61P15/00GK102225196SQ20111016184
公开日2011年10月26日 申请日期2011年6月4日 优先权日2011年6月4日
发明者张若冰, 曾赣闽 申请人:江西美康高科有限公司