专利名称：一种Safenour环肽在治疗糖尿病的口服胰岛素药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于糖尿病药物治疗的领域,更具体涉及一种环肽Safenour在治疗或预防糖尿病的口服胰岛素制剂(药物)中的应用。
背景技术：
随着生物技术和遗传工程的发展，多肽和蛋白质类药物日益增多，用途越来越广。这类药物的共同特点是药效高、生物半衰期短、分子量大，同时大多有较好水溶性，因而不易通过生物膜。又由于易被胃肠道酶类破坏，目前多为注射给药，因其易受体内酶类的降解，生物半衰期均较短，仅为数分钟到十几分钟，需反复注射，为了克服频繁注射给药的不便与限制，非注射途径给药引起了国内外学者的极大兴趣。为增加肽类和蛋白质类药物的非注射途径给药的生物利用度，各国学者做了不懈的努力，除了采用吸收促进剂、酶抑制剂等给药系统以外，还进行了一系列非注射途径的研究。增加多肽和蛋白质药物吸收的途径:影响肽类和蛋白质药物非注射途径给药的生物利用度的主要因素有:(I)膜屏障:身体各部分的生物膜对大分子低通透性，这些肽类和蛋白质类药物分子量大，脂溶性差，对脂溶性的生物膜通透性差；(2)酶屏障:在给药部位与靶组织之间各个阶段有多种酶使肽类及蛋白质类药物降解。为提高其生物利用度，曾试用`以下方法:(I)应用吸收促进剂，以促进这类药物的吸收。吸收促进剂是能够促进药物尤其是大分子或吸收差的药物通过生物屏障而被吸收的低分子量的化合物。吸收促进剂可以分为四种类型:①鳌合剂，如EDTA、构椽酸、水杨酸、胶原的N-乙酞衍生物、烯胺；②合成的表面活性剂，如十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯十六烷基醚；③天然的和半合成的表面活性剂，如胆酸盐、去氧胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠；④脂肪酸及其衍生物，如辛酸钠、癸酸钠、月桂酸钠、油酸等。(2)应用酶抑制剂，保护它们不被酶类破坏。酶抑制剂的应用在服用多肽和蛋白质类药物时，同时或预先服用水解酶抑制剂，可增加药物的生物利用度。(3)设计合理的给药系统，如脂质体、微粒和毫微粒等，以借助于这些载体或保护药物免于酶类降解，或增加药物的吸收。非注射给药的途径有鼻腔给药、直肠给药、肺部给药、眼部给药、口服给药，其中口服给药是最方便最常用的给药途径，肽类和蛋白质类口服给药需解决两个问题:(1)胃肠道各种酶对肽和蛋白质类分解作用，在胃有胃蛋白酶，在PH值2-3的环境中该酶活性最强。在小肠有糜蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。(2)胃肠粘膜的低透过性，有粘液屏障、小肠绒毛刷状缘肤酶，有限制细胞通透性的上皮及内皮细胞膜紧密连接。许多研究致力于使肽及蛋白质类经口服进入循环系统。糖尿病是一种慢性代谢障碍性疾病，胰岛素一直是胰岛素依赖型和非胰岛素依赖型糖尿病患者的首选药物。糖尿病患者需要长期注射胰岛素，通常每天4次，带来了诸多的不便和巨大的痛苦。因此人们一直致力于研制非注射型的胰岛素制剂。从非注射型制剂的特点看，口服途径传统、方便和易于被患者接受，给药方式在药动学上模仿生理性胰岛素的分泌，有可能成为注射剂的替代剂型。尽管口服是胰岛素理想的给药方式，但自从人类发现胰岛素，这种给药途径一直未获成功，主要问题在于:(I)胰岛素为多肽链，直接口服将被胃肠道消化酶降解失活，口服生物利用度一般小于0.5% ; (2)胰岛素与一般化学药物分子相比，分子量较大，难以通过肠道吸收屏障；(3)胰岛素具有复杂的决定其生物活性的内在结构，制备过程中破坏胰岛素构象稳定性都将导致胰岛素失活。因而口服胰岛素的研发焦点集中在分子修饰、使用酶抑制剂和吸收促进微粒等方面。蛋白酶抑制剂可缓解胃肠道消化酶降解胰岛素，胰岛素药物的口服剂型还需要克服肠黏膜上皮存在的对多肽蛋白质类药物的吸收屏障，使胰岛素避免被上消化道的各种蛋白酶分解、消化。胰岛素口服剂型的研究主要集中在脂质体、纳米粒、乳剂、油相溶液及分子修饰、使用酶抑制剂等方面。口服剂型的研制成功，将是胰岛素非注射剂型研究的革命性突破，并会产生进一步探讨的理论价值和良好的商业价值。随着现代基因工程和组织工程等高技术的发展，基因工程人胰岛素将逐步取代动物胰岛素，胰岛素的研究会越来越深入，使用方法将越来越先进、越来越方便。今后胰岛素的新剂型、新方法还将陆续出现，为糖尿病治疗带来更大的方便，糖尿病治疗的前景广阔而光明。尽管如此，在临床中胰岛素治疗糖尿病尚有若干缺点有待改善，如何研制出疗效好、服用方便、价格低廉的胰岛素及其类似物，特别是口服胰岛素等新的给药方式的研究，仍是广大医药工作者面临的迫切而又艰巨的任务。
发明内容
为解决现有胰岛素容易被降解，不易吸收口服等方面的缺陷，本发明的目的是在于提供了一种环肽Safenour在制备治疗或预防糖尿病的口服胰岛素的药物(制剂)中的应用，具有高效性、良好的安全性、低成本、性质稳定、使用方便，能起到较好的降血糖作用的胰岛素口服给药技术及相关制剂。本发明解决胰岛素易被酶降解，不能口服和不便于携带的问题。用于治疗糖尿病，具有较好的降血糖效果。为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施:本发明提及的环肽Safenour，具有很强的热稳定性，对酸碱环境不敏感，可长期储存而且毒性低，且具有非常显著的抗蛋白酶降解的作用。Safenour可用作口服胰岛素的保护制剂，与胰岛素结合后，抵抗胃酸和胃蛋白酶等消化道蛋白酶的降解，促进小肠吸收。Safenour可以减少胰岛素的口服给药剂量，并能有效的降低高血糖状态，维持2_8h的正常血糖水平。一种解淀粉芽胞杆菌WH3菌株的制备方法，其步骤是:1.细菌的分离筛选与鉴定:从中国湖北省武汉市湖北农科院油菜田(任一油菜田)中选取3叶期的油菜苗分离具有抗油菜菌核病的细菌。对检测到具有显著抗真菌活性的细菌进行16S rDNA、生理生化和形态鉴定，确定分离得到的WH3菌株是一株解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。2.抗真菌活性物质Safenour的分离纯化及鉴定:对上述获得的解淀粉芽胞杆菌WH3培养2天后的发酵液用“两步萃取法”(见实施例2)提取抗菌活性物质，将萃取后液体经真空旋转蒸发浓缩，并溶于IOml蒸馏水中。用葡聚糖G-25柱进一步分离纯化，绘制洗脱曲线。利用洗脱曲线各峰值的组分进行抗菌活性检测。在抗真菌活性分析后，对有活性的抗菌物质进行真空冷冻干燥进行浓缩，并经MALD1-TOF质谱分析，得到抗菌物质的结构，发现为一种特殊的环状多肽(表面活性素)，含碱性氨基酸Arg，命名为赛弗诺(Safenour)。实施结果:从油菜苗中共分离得到细菌菌株86株，其中命名为WH3的菌株具有显著的抗油菜菌核病的抗性。WH3菌株经形态观察和16S rDNA分析，发现该菌株为革兰氏阳性，菌体杆状，菌体大小1-1.4 μ mX 2.3-3.5 μ m，在PDA平板上能快速扩散，不形成特定的菌落形态，边缘不规则，呈灰白色，粘稠有荚膜，培养48h后表面有小皱褶。在LB平板上形成米白色的菌落，菌落直径3-5_，表面干燥有皱褶，中间塌陷，边缘波状。37°C生长明显快于28°C。芽胞近端生，鞭毛周生。WH3菌株的接触酶、酪朊水解、厌氧生长、明胶水解、淀粉水解、V-P反应和硝酸盐还原均为阳性；酪氨酸水解、苯丙氨酸脱氨酶、吲哚产生、柠檬酸盐利用均为阴性；可利用D-葡萄糖、D-甘露醇、麦芽糖、蔗糖。结合，上述形态特征及染色结果，判断WH3为芽孢杆菌属。再结合16S rDNA序列分析(与解淀粉芽胞杆菌的同源性为99.4% )表明为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WH3,保存于中国典型物保藏中心,保藏号为 CCTCC:M2011266oWH3产生的抗真菌物质经“两步萃取法”萃取后，再经凝胶柱分离，获得的具有抗真菌活性的物质进一步经MALD1-T0F-MS分析，发现其分子量为106 a，为含精氨酸的环状多肽表面活性素，命名为赛弗诺(Safenour)，其特征为含有一个碱性氨基酸精氨酸，具有很强的热稳定性，对酸碱环境不敏感，可长期储存，结构式如下:
权利要求
1.一种环肽Safe nour在制备治疗或预防糖尿病的口服胰岛素药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种环肽在治疗糖尿病的口服胰岛素药物中的应用，其步骤1.Safenour环肽与胰岛素结合，起到保护作用；2.Safenour结合胰岛素后，可帮助胰岛素口服后抗胃肠道酸性环境及消化酶如胃蛋白酶和胰蛋白酶的降解；3.Safenour和胰岛素结合后口服，还可促进肠道对胰岛素的吸收；4.Safenour和胰岛素结合后口服，具有显著的治疗糖尿病降血糖的作用。安全性高，Safenour制备简单，本发明解决胰岛素口服后易被降解，不能口服和不便于携带的问题。以Safenour为辅料的口服胰岛素制剂易于携带，使用方便，解决了现有天然胰岛素和速效胰岛素类似物在酸性环境下不稳定、每日需早、晚注射两次的问题，用于治疗糖尿病，具有较好的降血糖效果。口服胰岛素抗消化道降解效果好，易于规模化生产。
文档编号A61K38/28GK103169946SQ201110430788
公开日2013年6月26日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者祁高富, 高振秋, 苏纪宇 申请人:武汉光谷世傲生物科技有限公司