专利名称：治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器的制作方法
技术领域：
本发明涉及保健领域，具体为治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器。
背景技术：
毛发非正常脱落后会形成秃发，给患者带来不便。利用患者自身正常毛发的毛囊， 在体外培养、繁殖、提纯后再注射到患者秃发区，从而生成新的正常的毛发。目前有采用脐带血分离干细胞，分离培养后注射在秃发区，但是，脐带血的来源直接限制其技术的应用。另外，采用脐带血分离干细胞的操作的过程中需采集与患者的组织相容性基因相同或相似的脐带血干细胞，必须考虑免疫排斥现象；操作过程复杂、使用仪器多、耗费大。
发明内容
本发明提供一种治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器，能够改善秃发情况下的毛发生长。本发明提供了一种治疗秃发的毛囊干细胞培养方法，包括A.利用分离酶对离体的毛囊进行消化；B.切取所述步骤A得到的毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶对B步骤得到的毛囊隆突部进行消化；D.对经过步骤C处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到细胞；E.将步骤D得到的所述细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基(DEME) 条件培养液中培养，初步分离；F.将步骤E初步分离的产物置于培养皿中培养；G.离心收集得到经过F步骤培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，并培养，得到毛囊干细胞。所述步骤A中，分离酶优选为O. 25%分离(dispase)酶，消化的温度优选为4°C， 消化的时间优选为25分钟-30分钟；和/ 或，所述步骤B中优选为采用在解剖显微镜下切取所述步骤A得到的毛囊的毛囊隆突部;和/ 或，所述步骤C的消化温度优选为37°C ；和/ 或，所述步骤D的分离速度优选为1000转/分钟；和/ 或，所述步骤E中的初步分离优选采用密度梯度离心；和/ 或，所述步骤F中培养的条件优选为培养皿中铺设有25平方厘米胶原蛋白，培养温度为 37。。，5% CO2 ；和/ 或，所述步骤G的培养液优选为20%血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基(DMEM) 条件培养液。所述G步骤培养过程中，优选为每2天换一次所述培养基；和/ 或，所述E步骤培养过程中，优选为每3天换一次所述培养基。本发明还提供了一种用于上述毛囊干细胞注射的注射器，包括毛囊干细胞抽取组件和针头，所述毛囊干细胞抽取组件用于定量抽取所述毛囊干细胞，所述毛囊干细胞抽取组件和针头相连接，所述针头呈弯曲状，且为钝头。所述毛囊干细胞抽取组件优选为包括推杆、刻度调节件、活塞调节件、活塞；其中，所述刻度调节件的上端中心处优选为设有通孔，所述通孔优选为延伸至所述刻度调节件的下端，所述通孔优选为用于所述推杆从中无摩擦穿过；所述刻度调节件与所述活塞调节件优选为通过可传动机构相连，所述可传动结构，优选为用于将刻度调节件的转动转变为所述活塞调节件在沿推杆轴向上的直线运动；所述活塞调节件优选为呈中空的圆柱状，所述活塞调节件的一侧优选为设有刻度指示线；所述刻度调节件、活塞调节件、活塞优选为位于壳体内，所述推杆的一端优选为处于所述壳体外，所述推杆的另一端优选为从所述壳体外穿入，穿过所述刻度调节件、活塞调节件，并与所述活塞固定连接；所述活塞调节件优选为与所述活塞相接触；所述壳体上，优选为位于所述刻度调节杆同一侧设有刻度盘。所述可传动机构优选为包括螺纹传动、或丝杠传动。所述活塞调节件优选为包括活塞调节圈和一个以上第一弹簧；所述活塞调节圈优选为中空圆柱体；所述活塞调节圈的上端优选为通过可传动机构与所述刻度调节件相连，所述刻度调节件的下端与一个以上第一弹簧的上端相连接，一个以上所述第一弹簧的下端优选为与所述活塞相连接。所述第一弹簧的个数优选为3个，优选为在垂直于所述推杆轴向的圆周上均匀分布。所述注射器还包括换针组件，所述换针组件优选为包括按压抦、第二弹簧、连接杆、换针件；其中，所述按压抦的一端优选为处于所述壳体的外部，另一端优选为穿入所述壳体并向壳体内延伸；所述按压抦位于所述壳体内部的一端与所述连接杆的上端优选为相连接，所述连接杆的上部优选为套有所述第二弹簧，并将第二弹簧的位置进行固定；按压所述按压抦，所述按压抦优选为与所述第二弹簧接触，并被所述第二弹簧弹起；所述连接杆的另一端优选为与所述换针件相连接，所述换针件优选为环状，套在所述针头上；
所述针头的末端分裂成两个以上的分针头，分针头在所述换针件上移时，自动张开。所述分针头的长度优选为针头长度的三分之一，所述分针头优选为向内弯曲，弯曲的度数优选为10° -20°。通过本发明提供的治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器，能够达到如下的有益效果通过本发明提供的治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器，能够达到如下的有益效果I.本发明对离体的毛囊干细胞进行各种处理，毛囊干细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，经过培养即得毛囊干细胞，该毛囊干细胞较适合在人的头皮种植，且毛囊干细胞生长较快，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥；且针对该毛囊干细胞，本发明还提供了一种注射器，可以定量抽取毛囊干细胞，且针头呈弯曲状、针头为钝头，更适合毛囊干细胞在人的头皮上种植且对人的头皮伤害较小。2.本发明采用的分离器、培养液、及注射器均为小型设备，操作方便、快捷，降低治疗秃发的整体成本。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，以下描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图所示实施例得到其它的实施例及其附图。图I为本发明治疗秃发的毛囊干细胞培养方法的基本流程图。图2为本发明一个具体实施例中治疗秃发的毛囊干细胞培养方法的基本流程图。图3为注射治疗秃发的毛囊干细胞的注射器的基本结构示意图。
具体实施例方式以下将结合附图对本发明各实施例的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施例，都属于本发明所保护的范围。本发明提供了一种治疗秃发的毛囊干细胞培养方法，如图1，所示，包括见图1，A，利用分离酶对离体的毛囊进行消化；见图1，B，切取所述步骤A得到的毛囊的毛囊隆突部；见图1，C，利用胰酶对B步骤得到的毛囊隆突部进行消化；见图1，D，对经过步骤C处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到细胞；见图1，E，将步骤D得到的所述细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基 (DEME)条件培养液中培养，初步分离；
见图1，F，将步骤E初步分离的产物置于培养皿中培养；见图1，G，离心收集得到经过F步骤培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，并培养，得到毛囊干细胞。本发明对离体的毛囊干细胞进行各种处理，毛囊干细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，经过培养即得毛囊干细胞，该毛囊干细胞较适合在人的头皮种植，且毛囊干细胞生长较快，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥。接下来，本发明将对治疗秃发的毛囊干细胞培养方法进行详细阐述，见图2，所示步骤201，利用分离酶对离体的毛囊进行消化；本发明处理的毛囊通常采用离体的毛囊，其中分离酶为O. 25%分离(dispase) 酶，分离的温度为4°C，分解消化的时间为25-30分钟，优选30分钟，通过这次分离可以将毛囊连同结缔组织一起分离出来。步骤202，切取上步骤得到的毛囊的毛囊隆突部；切取方式可以采用解剖显微镜下常规的分离方法进行分离切取，得到毛囊隆突部。步骤203，利用胰酶对得到的毛囊隆突部进行消化；消化的温度为37°C，这种胰酶为一种胰蛋白酶。步骤204，对经过胰酶消化后的产物进行离心收集；离心收集的方法优选为采用离心收集，离心的速度优选为1000转/分钟，离心收集其中的细胞。步骤205，将离心收集的细胞放入无血清的DMEM条件培养液培养；DMEM条件培养液为一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基的培养液。在培养过程中每3天换一次培养液。步骤206，对经过培养后的细胞进行初次分离；分离通常采用离心分离，离心的速度为1500转/分钟，离心时间为5分钟。采用密度梯度离心。步骤207，将初次分离得到的细胞再放入培养皿中培养；将初次分离得到的细胞接种于铺有胶原蛋白的培养瓶中，培养瓶的地可以在25 平方厘米左右，培养的温度为37°C，培养的氛围为CO2的浓度为5%。步骤208，离心收集步骤207培养皿中的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞；经过步骤207培养，会生成各种细胞，其中包括上层未贴附角质形成细胞、毛囊真皮成纤维细胞，其中这两种是本发明要收集的。步骤209，将步骤208分离出的细胞放入培养皿中培养得到治疗秃发的毛囊干细胞；培养皿中的培养液为含有20%血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基的培养液 (DMEM)，在培养过程中，每两天换一次培养液。
本发明还提供了一种用于上述毛囊干细胞注射的注射器，包括毛囊干细胞抽取组件和针头，所述毛囊干细胞抽取组件用于定量抽取所述毛囊干细胞，所述毛囊干细胞抽取组件和针头相连接，所述针头呈弯曲状，且为钝头。针对该毛囊干细胞，本发明提供的注射器，可以定量抽取毛囊干细胞，且针头呈弯曲状、针头为钝头，更适合毛囊干细胞在人的头皮上种植且对人的头皮伤害较小。如图3，所示，所述毛囊干细胞抽取组件优选为包括推杆I、刻度调节件、活塞7 ； 刻度调节件、活塞调节件5放置于所述注射器的壳体内。以注射器针头端所在方向为下，则推杆I位于所述注射器的另一端，为上。推杆I 的样子可以多样化，通常采用与手的接触面积较大的推片和与该推片的下表面中心位置相连接的推杆1，该推杆I的长度可以很长，因为起到推送毛囊干细胞的作用，推杆I要与需要与毛囊干细胞直接接触的活塞相连，因此，推杆I的长度主要由推片到活塞的距离而定。刻度调节件位于推片的下方，推杆I从其中心位置穿过，为了使推杆I从中穿过， 刻度调节件的中心位置要开设通孔，用于推杆I从中无摩擦穿过。刻度调节件的形状也是不固定的，通常可以分为上下两个部分，上部分为一个具有一定厚度的轮子2，轮子2的侧表面设有若干耐摩擦刻线，刻线的走向可以为横向、纵向、 斜向或其他的曲线或花纹，下部分为一个圆柱体4，圆柱体4可以为中空的也可以为实体的，为了方便推杆I从中穿过，其上端在开设细孔，细孔的直径优选与通孔的直径相等，细孔能从圆柱体4的上表面穿过并从下表面穿出，从而推杆I能顺利从中穿过；需要说明的是，通孔和细孔的横截面直径尺寸可以相等或略大于推杆I的横截面直径。刻度调节件的下端通过可传动连接件连接活塞调节件5，可传动连接件通常用于当刻度调节件以推杆I为旋转轴在垂直于所述推杆I的平面上转动时，可传动连接件可以将转动转变为活塞调节件沿推杆I轴向的上下运动。可传动连接件优选为螺纹传动或丝杆传动，鉴于注射器的尺寸和形状，优选为螺纹传动。为了能够准确量取毛囊干细胞，用于在秃发部位注射，通常处于刻度调节件处的壳体的外侧设有刻度线，刻度线可以刻在一个刻度盘3上，活塞调节件上设有刻度指示线， 活塞调节件上下移动的过程中刻度指示线可以指向或显示壳体的刻度线。活塞调节件5优选为中空的圆柱体，以方便推杆I从中穿过。为了缓解推力不同或推力不稳在注射过程中产生的影响，在活塞调节件和活塞中间安装有弹簧6，使活塞调节件的下表面与活塞的上表面接触，在压力过大时，弹簧6对压力施以缓冲。弹簧6的数目可以为两个或多个，为了保持力量平衡，弹簧6的分布优选为在垂直于推杆I轴向的圆周上均匀分布。推杆I穿过活塞调节件5后，推杆I与活塞7固定连接，从而使施予推片上的压力传到活塞上，推动活塞7向下运动将毛囊干细胞推出注射器。其中关于针头部分，注射器还设置了专门的换针组件，换针组件优选为包括按压抦8、弹簧10、连接杆9、换针件11 ；其中，所述按压抦8的一端优选为处于所述壳体的外部，另一端优选为穿入所述壳体并向壳体内延伸；所述按压抦8位于所述壳体内部的一端与所述连接杆9的上端优选为相连接，所述连接杆9的上部优选为套有所述弹簧10，并将弹簧10的位置进行固定；连接杆9的轴向与所述推杆I的轴向相平行，按压所述按压抦8，所述按压抦8优选为与所述弹簧10接触， 并被所述弹簧10弹起；所述连接杆的另一端优选为与所述换针件11相连接，所述换针件优选为环状，套在所述针头上；连接杆可以选择玻璃杆也可以选择金属杆或长条金属条；所述针头的末端分裂成两个以上的分针头，分针头在所述换针件上移时，自动张开，优选为三个所述分针头的长度优选为针头长度的三分之一，所述分针头优选为向内弯曲，弯曲的度数优选为10° -20°。通过本发明提供的治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器，能够达到如下的有益效果I.本发明对离体的毛囊干细胞进行各种处理，毛囊干细胞来源丰富，首先通过分离酶对其进行消化，然后切取毛囊隆突部，再通过胰蛋白酶对隆突部进行消化，并对其进行分离、培养、再分离、再培养，再次收集培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，经过培养即得毛囊干细胞，该毛囊干细胞较适合在人的头皮种植，且毛囊干细胞生长较快，对秃发治疗效果明显，且较少产生免疫排斥；且针对该毛囊干细胞，本发明还提供了一种注射器，可以定量抽取毛囊干细胞，且针头呈弯曲状、针头为钝头，更适合毛囊干细胞在人的头皮上种植且对人的头皮伤害较小。2.本发明采用的分离器、培养液、及注射器均为小型设备，操作方便、快捷，降低治疗秃发的整体成本。本发明提供的各种实施例可根据需要以任意方式相互组合，通过这种组合得到的技术方案，也在本发明的范围内。显然，本领域技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也包含这些改动和变型在内。
权利要求
1.一种治疗秃发的毛囊干细胞培养方法，其特征在于，包括A.利用分离酶对离体的毛囊进行消化；B.切取所述步骤A得到的毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶对B步骤得到的毛囊隆突部进行消化；D.对经过步骤C处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到细胞；E.将步骤D得到的所述细胞在无血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基DEME条件培养液中培养，初步分离；F.将步骤E初步分离的产物置于培养皿中培养；G.离心收集得到经过F步骤培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，并培养，得到毛囊干细胞。
2.如权利要求I所述的治疗秃发的毛囊干细胞培养方法，其特征在于，所述步骤A中，分离酶为O. 25%分离dispase酶，消化的温度为4°C，消化的时间为25 分钟-30分钟；和/或，所述步骤B中采用在解剖显微镜下切取所述步骤A得到的毛囊的毛囊隆突部；和/或，所述步骤C的消化温度为37°C ；和/或，所述步骤D的分离速度为1000转/分钟；和/或，所述步骤E中的初步分离采用密度梯度离心；和/或，所述步骤F中培养的条件为培养皿中铺设有25平方厘米胶原蛋白，培养温度为37°C， 5% CO2 ；和/或，所述步骤G的培养液为20%血清的含各种氨基酸和葡萄糖的培养基DMEM条件培养液。
3.如权利要求2所述的治疗秃发的毛囊干细胞培养方法，其特征在于，所述G步骤培养过程中，每2天换一次所述培养基；和/或，所述E步骤培养过程中，每3天换一次所述培养基。
4.一种用于权利要求1-3任一项所述毛囊干细胞注射的注射器，其特征在于，包括毛囊干细胞抽取组件和针头，所述毛囊干细胞抽取组件用于定量抽取所述毛囊干细胞，所述毛囊干细胞抽取组件和针头相连接，所述针头呈弯曲状，且为钝头。
5.如权利要求4所述的注射器，其特征在于，所述毛囊干细胞抽取组件包括推杆、刻度调节件、活塞调节件、活塞；其中，所述刻度调节件的上端中心处设有通孔，所述通孔延伸至所述刻度调节件的下端，所述通孔用于所述推杆从中无摩擦穿过；所述刻度调节件与所述活塞调节件通过可传动机构相连，所述可传动结构，用于将刻度调节件的转动转变为所述活塞调节件在沿推杆轴向上的直线运动；所述活塞调节件呈中空的圆柱状，所述活塞调节件的一侧设有刻度指示线；所述刻度调节件、活塞调节件、活塞位于壳体内，所述推杆的一端处于所述壳体外，所述推杆的另一端从所述壳体外穿入，穿过所述刻度调节件、活塞调节件，并与所述活塞固定连接；所述活塞调节件与所述活塞相接触；所述壳体上，位于所述刻度调节杆同一侧设有刻度盘。
6.如权利要求5所述的注射器，其特征在于，所述可传动机构包括螺纹传动、或丝杠传动。
7.如权利要求5所述的注射器，其特征在于，所述活塞调节件包括活塞调节圈和一个以上第一弹簧；所述活塞调节圈为中空圆柱体；所述活塞调节圈的上端通过可传动机构与所述刻度调节件相连，所述刻度调节件的下端与一个以上第一弹簧的上端相连接，一个以上所述第一弹簧的下端与所述活塞相连接。
8.如权利要求7所述的注射器，其特征在于，所述第一弹簧的个数为3个，在垂直于所述推杆轴向的圆周上均匀分布。
9.如权利要求7所述的注射器，其特征在于，所述注射器还包括换针组件，所述换针组件包括按压抦、第二弹簧、连接杆、换针件；其中，所述按压抦的一端处于所述壳体的外部，另一端穿入所述壳体并向壳体内延伸；所述按压抦位于所述壳体内部的一端与所述连接杆的上端相连接，所述连接杆的上部套有所述第二弹簧，并将第二弹簧的位置进行固定；按压所述按压抦，所述按压抦与所述第二弹簧接触，并被所述第二弹簧弹起；所述连接杆的另一端与所述换针件相连接，所述换针件为环状，套在所述针头上； 所述针头的末端分裂成两个以上的分针头，分针头在所述换针件上移时，自动张开。
10.如权利要求9所述的注射器，其特征在于，所述分针头的长度为针头长度的三分之一，所述分针头向内弯曲，弯曲的度数为10° -20°。
全文摘要
本发明涉及保健领域，具体为治疗秃发的毛囊干细胞培养方法及注射器，培养方法包括A.利用分离酶对离体的毛囊进行消化；B.切取所述毛囊的毛囊隆突部；C.利用胰酶对毛囊隆突部进行消化；D.对步骤C处理得到的毛囊隆突部进行离心收集得到细胞；E将所述细胞在DEME条件培养液中培养，初步分离；F.将步骤E初步分离的产物置于培养皿中培养；G.离心收集得到经过F步骤培养后的上层未贴附角质形成细胞和毛囊真皮成纤维细胞，并培养，得到毛囊干细胞。其注射器包括毛囊干细胞抽取组件和针头，所述毛囊干细胞抽取组件用于定量抽取所述毛囊干细胞，所述毛囊干细胞抽取组件和针头相连接，所述针头呈弯曲状，且为钝头。本发明能够改善秃发情况下的毛发生长。
文档编号A61P17/14GK102586177SQ20121003440
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月15日 优先权日2012年2月15日
发明者严其高 申请人:北京雍禾植发技术研究院