专利名称：红芪总黄酮及总皂苷的提取分离方法
技术领域：
本发明属于中药提取领域，具体涉及红芪总黄酮及总皂苷的提取分离方法。
背景技术：
红苗为豆科植物多序岩黄苗(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)的干燥根。是一味重要的中药药材，其具有补气升阳，固表止汗，利水消肿。生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌功能，用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，血虚萎黄，久溃不敛。由于中药药材中所含成分十分复杂，对中药药材中有效成分的有效提取和分离成为现代中药研究的关键与如提。
发明内容
本发明的目的是提供从红芪中提取分离出总黄酮和总皂苷的方法。本发明实现上述目的的技术方案如下，
红芪总黄酮及总皂苷的提取分离方法，具体步骤依次如下
(1)将红芪和体积浓度为10% 95%的乙醇置于回流装置中，进行加热回流，得到提取
液；
(2)提取液经过滤除渣后，再减压蒸馏回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；
(3 )将浓缩液用水稀释，稀释液过聚酰胺柱后，再依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱聚酰胺柱，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用乙酸乙酯萃取，再减压蒸馏回收萃取液中的乙酸乙酯后，得到总黄酮；
(4)收集步骤(3)中稀释液过聚酰胺柱时的流出液，流出液再用D-101大孔树脂进行吸附处理，然后依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱D-101大孔树脂，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用正丁醇萃取，再减压蒸馏回收萃取液中的正丁醇后，得到总皂苷。有益效果本发明采用醇提法及柱分离法从红芪中成功提取分离出总黄酮和总皂苷，每公斤药材可提取出20. 3克的红芪总黄酮和17. I克的红芪总皂苷，该方法简单易行、 污染少，所用试剂可回收再利用。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步说明。实施例I红芪总黄酮提取分离
取红芪药材，润湿后切制成厚度为2 3mm的饮片，晾干，称取6. 5 kg，加入70%乙醇， 加热回流提取3次，每次lh，第一次加8倍量的乙醇，后两次加6倍量乙醇，合并三次提取液，滤过，滤液静置24 h，滤去沉淀，滤液减压蒸馏回收乙醇至无醇味，放冷，用蒸馏水稀释至1:1，然后上聚酰胺(购自河北沧州宝恩化工有限公司)柱，上柱液浓度lg/ml，上柱速度 2BV/h，然后水洗，接着用70%乙醇洗，洗脱液减压蒸馏回收乙醇后，用等体积的乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸馏回收乙酸乙酯，残留物干燥，得131.95g产物I。产物I的鉴别称取O. Ig的产物I,置于圆底烧瓶中，加入甲醇10 mL，超声处理 30min,滤过,滤液浓缩至I mL,作为供试品溶液。另取红苗对照药材Ig,加入甲醇10 mL, 超声处理30min，滤过，滤液浓缩至I mL，作为对照药材溶液。吸取对照药材溶液、供试品溶液各5 L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-丙酮(15:1 v/v)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，确定产物I为红芪总黄酮。产物I中红芪总黄酮含量测定
芦丁对照品溶液的制备精密称取105°c下干燥至恒重的芦丁对照品50 mg，置于干燥的25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置于IOOml容量瓶中， 加水至刻度，摇勻，即得(每Iml含无水芦丁 O. 2mg)备用。实配浓度为O. 2198mg/ml。芦丁标准曲线的绘制精密量取上述芦丁对照品溶液0、1、2、3、4、6、8mL，分别至25mL容量瓶中，各加水至8ml，分别加人5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀放置6分钟，加人 10%硝酸铝溶液lmL，放置6分钟，加人IN (4%)氢氧化钠溶液10mL，再加水至刻度，放置15分钟，置比色皿中，在波长500nm处测定吸光度。数据经回归处理得回归方程为 A=Il. 66035C+0. 0062，r2=0. 99839。精密度试验精密吸取红芪总黄酮样品溶液，测定吸光度，以吸光度计算，红芪总黄酮RSD为2. 52%。稳定性试验取红芪总黄酮样品溶液，每15分钟测一次吸光度，连续2h考察其稳定性，结果表明2h内显色均稳定，可进行含量测定。回收率测定精密称取红芪总黄酮40mg，加入一定量的芦丁对照品，用甲醇定容于25mL容量瓶中，摇匀，按含量测定的方法，测定，计算回收率。芦丁平均回收率为95.8%， RSD 为 2. 96% (n=5)。产物I中红芪总黄酮的含量测定精密吸取红芪总黄酮样品溶液，按标准曲线法操作，根据回归方程测其含量，得产物I中红芪总黄酮的含量O. 526g/g。实施例2红芪总皂苷的提取分离
将实施例I过完聚酰胺柱的流出液继续上D-IOl大孔树脂(购自河北沧州宝恩化工有限公司)柱，上柱液浓度lg/ml，上柱速度2BV/h，然后水洗，接着用70%乙醇洗，洗脱液减压蒸馏回收乙醇后，用等体积的正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，减压蒸馏回收正丁醇，残留物干燥，得111. 15g产物2。产物2的鉴别称O. Ig产物2，置于圆底烧瓶中，加入甲醇40 mL，加热回流提取I h，滤过，滤液置于装有5 g中性氧化铝(100-120目)的玻璃柱中，用40% (v/v)甲醇100 mL 洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用30 mL水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次 20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇O. 5 mL溶解，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品1.5 mg，精密加入I mL甲醇，制成每I mL含1.5 mg的对照品溶液，作为对照品溶液。用移液管精密量取三氯甲烷、甲醇和水， 按照三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的体积比例混合，分取下层液，到入层析缸中，层析盖涂抹凡士林，密闭，饱和60 min，作为展开剂。精密吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液各2 L,分别点于同一硅胶G薄层板上。将点好样的薄层板放入层析缸中，展开剂没过层析板5 mm,展开至距薄层板前沿4 cm处时,将薄层板取出，晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加热至斑点显色清晰，确认产物2为红芪总皂苷。产物2中红芪总皂苷的含量测定
黄芪甲苷对照品溶液的制备精密称取105°C下干燥至恒重的黄芪甲苷对照品12.5 mg,置于干燥的25 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。实配浓度为 O. 532mg/ml。黄芪甲苷标准曲线的绘制精密吸取上述黄芪甲苷对照品溶液O. 15、0. 30、0.45、 O. 60,0. 75 mL，分别置于具塞试管中，分别加入无水乙醇O. 75 mL，再分别加入O. 75 mL8%香草醒一浓硫酸试剂，置于冰浴中加入7. 5ml体积分数为72%的硫酸摇匀，放入62°C的恒温水浴中保温20分钟，取出，流水冷却5 min，摇匀。在30分钟内，于波长544 nm处测定吸光度，随行空白。数据经回归处理得回归方程为A=21. 102C+0. 0298，r=0. 9993。精密度试验精密吸取红芪总皂苷样品溶液，测定吸光度，以吸光度计算，红芪总皂苷 RSD 为 3. 08%ο稳定性试验取总皂苷样品溶液，每10分钟测一次吸光度，连续Ih考察其稳定性， 结果表明Ih内显色均稳定，可进行含量测定。回收率测定精密称取红芪总皂苷25mg，加入一定量的黄芪甲苷对照品，用无水乙醇定容于25mL容量瓶中，摇匀。按含量测定的方法，测定，计算回收率。黄芪甲苷平均回收率为 92. 5%, RSD 为 3. 21% (n=5)。产物2中总皂苷含量的测定精密吸取红芪总皂苷样品溶液，按标准曲线法操作， 根据回归方程测其含量，得产物2中总皂苷含量为O. 517g/g。无特别说明时，实施例中所用乙醇的浓度为体积百分数。
权利要求
1.红芪总黄酮及总皂苷的提取分离方法，其特征在于，所述提取分离方法具体步骤依次如下(1)将红芪和体积浓度为10% 95%的乙醇置于回流装置中，进行加热回流，得到提取液；(2)提取液经过滤除渣后，再减压蒸馏回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；(3 )将浓缩液用水稀释，稀释液过聚酰胺柱后，再依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱聚酰胺柱，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用乙酸乙酯萃取，再减压蒸馏回收萃取液中的乙酸乙酯后，得到总黄酮；(4)收集步骤(3)中稀释液过聚酰胺柱时的流出液，流出液再用D-101大孔树脂进行吸附处理，然后依次用水、体积浓度为10% 95%的乙醇洗脱D-101大孔树脂，洗脱液先减压蒸馏回收乙醇，接着用正丁醇萃取，再减压蒸馏回收萃取液中的正丁醇后，得到总皂苷。
全文摘要
本发明提供一种从红芪药材中提取分离出总黄酮和总皂苷的方法，具体步骤为将红芪和10%～95%(v/v)的乙醇置于回流装置中，进行加热回流，得到提取液；提取液经过滤除渣后，再减压蒸馏回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；将浓缩液用水稀释，稀释液过聚酰胺柱后，再依次用水、10%～95%(v/v)的乙醇洗脱聚酰胺柱，洗脱液先减压回收乙醇，接着用乙酸乙酯萃取，再减压回收萃取液中的乙酸乙酯后，得到总黄酮；收集稀释液过聚酰胺柱时的流出液，流出液再用D-101大孔树脂进行吸附处理，然后依次用水、10%～95%(v/v)的乙醇洗脱D-101大孔树脂，洗脱液先减压回收乙醇，接着用正丁醇萃取，再减压回收萃取液中的正丁醇后，得到总皂苷。该方法简单易行、污染少，所用试剂可回收利用。
文档编号A61K36/48GK102579557SQ20121007029
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月16日 优先权日2012年3月16日
发明者刘光炜, 刘永琦, 张毅, 景明, 李娟 , 李金田, 李雪燕, 苏韫, 蔺兴遥 申请人:甘肃中医学院