一种皮炎诊断贴剂及其制备方法

一种皮炎诊断贴剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种皮炎诊断贴剂及其制备方法。所述皮炎诊断贴剂包括：一含有硫酸镍的凝胶层；一载体；和一粘性材料。
【专利说明】一种皮炎诊断贴剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生化【技术领域】，具体涉及一种皮炎诊断贴剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]接触性皮炎是指皮肤由于接触外界物质，如金属、化妆品和药物等而发生的炎性反应，其临床症状与接触物的抗原性强弱及个体体质的敏感程度有关。轻者仅表现血管扩张，充血性红斑和水肿，重者在红斑基础上发生丘疹、水疱、大疱，甚至出现烫伤样表皮坏死，皮损通常边界不清。可引起接触性皮炎的物质有很多，有些物质在低浓度时表现为致敏作用，在高浓度时则有刺激性和毒性，按其性质可分为三类:第一类、动物性来源:动物毒素、昆虫分泌物、毒毛等；第二类、植物性来源:花粉、植物叶、茎、花及果实等；第三类、化学物质:也是引发接触性皮炎的主要致敏原，主要包括金属及其制品、塑料、橡胶和香料等。
[0003]通常所讲的接触性皮炎是指过敏性接触性皮炎，是机体对透过皮肤进入体内的化学物质的一种适应性免疫反应，属于IV型变态反应。它分为两个阶段:初始致敏阶段和随后的激发阶段。在初始致敏阶段，进入体内的小分子半抗原物质(分子量一般小于500Da)，如油漆、燃料、农药、化妆品和某些药物(磺胺和青霉素)等与表皮细胞的膜蛋白结合形成完全抗原，经抗原递呈细胞(如朗格汉斯细胞)“摄取”并被提呈给T细胞，使其活化并分化为过敏原特异性的效应T细胞。激发阶段:已被致敏的机体若再次接触过敏原则表现出皮肤变态反应症状，即过敏性接触性皮炎症状。临床症状:局部皮肤出现红肿、皮疹、水疱，严重者可出现剥脱性皮炎。反应机理:这是一种抗原诱导的T细胞免疫应答反应，机体被致敏后再次接触相应致敏原，抗原特异性T细胞被激活并招募至致敏部位，皮肤细胞和效应T细胞释放细胞因子、趋化因子和细胞毒素，引起局部血管刺激，巨噬细胞和嗜酸性细胞的聚集及随后的级联放大反应。过敏性接触性皮炎患者即使接触很低剂量或日常使用剂量的化学物质即会发生明显的皮炎症状，这些低剂量的化学物质本身不会对人体构成威胁，反而是机体的过度反应损伤了人体自身组织，影响患者正常的工作和生活。
[0004]数据表明对特定致敏原的接触性过敏的发生率在不同国家间是不同的，而且随着周围环境和社会的发展变化，对特定致敏原的接触性过敏的发生率亦会随之而变化。周围环境中致敏原的种类主要取决于气候(例如，尼日利亚的铬过敏主要是由于气候温暖人们经常穿皮凉鞋所致)、职业(例如，印度的农场工人中接触性皮炎是由于对银胶菊过敏)、文化习惯(例如，佩带首饰易致镍过敏)和立法(例如，丹麦对镍的调控)等。因此，对接触性过敏的流行病学统计数据会受时间和地区的局限，而且会随着时间和地区这些决定性因素的变化而变化。
[0005]临床上使用斑贴试验诊断过敏性接触性皮炎已经有一百多年的历史，其诊断机理就是人为地诱发过敏患者的IV型变态反应，造成皮肤表面明显的皮损，从而判断患者对哪种物质过敏。传统斑贴试验是临床医生使用凡士林或者蒸馏水等做稀释基质自制斑贴产品进行检测。随着越来越多的化工产品被应用到各个领域，日常生活和工作环境中人们接触各种致敏物的几率在增大，因此变态反应性皮肤病的发病率在逐步上升。通过斑贴试验寻找致敏原，确定其与临床的相关性，指导患者避免接触该类物质，从而避免变态反应性皮肤病的复发和恶化，是预防过敏性接触性皮炎的重要措施。
[0006]各国根据本国的情况，通过对周围环境及日常生活中常见致敏原的调查分析，组合成一套斑贴试验标准变应原系列，其中以欧洲标准变应原系列和北美标准变应原系列应用最为广泛。欧洲标准变应原系列含有26种检测过敏原，北美标准变应原系列含有24种检测过敏原。这两个标准变应原系列中某些抗原是相同的，而某些抗原则因地区差异而不同，目前我国尚无标准变应原系列。因此，本领域迫切需要制定适合我国国情的接触性皮炎变应原检测系列，并制备相应变应原品种的皮炎诊断贴剂。
[0007]硫酸镍在我国是接触性皮炎常见过敏原之一，临床上常见因硫酸镍过敏引起的接触性皮炎患者，因此，制备含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂，开展早期诊断促使患者严格避免过敏原的再接触就显得尤为迫切。

【发明内容】

[0008]本发明旨在提供一种皮炎诊断贴剂。
[0009]在本发明的第一方面，提供了一种皮炎诊断贴剂，所述贴剂包括:
[0010]一含有硫酸镍的凝胶层；
[0011]—载体；和
[0012]一粘性材料。
[0013]在另一优选例中，所述皮炎是接触性皮炎。具体地说，所述皮炎是指由IV型变态反应引起的过敏性接触性皮炎。
[0014]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层包含硫酸镍、成膜基质和溶剂；更优选所述含有硫酸镍的凝胶层由硫酸镍、成膜基质和溶剂组成。
[0015]在另一优选例中，所述成膜基质为聚维酮，更优选聚维酮K90。
[0016]在另一优选例中，所述溶剂为纯化水与无水乙醇的组合。
[0017]在另一优选例中，在制备所述含有硫酸镍的凝胶层时，在配制成膜液中，所述聚维酮与所述溶剂的质量比较佳的为1:4-1:20，更佳的为1:5-1:15，最佳的为1:9 ;所述溶剂优选纯化水与无水乙醇的组合，所述纯化水与所述无水乙醇的质量比较佳的为1:1-5:1，更佳的为2:1-4:1，最佳的为3:1。
[0018]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层的厚度为1-50 Pm，更优选为2-30 u m,最优选为 3-10 u m。
[0019]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层的面积为0.5-14cm2，更优选为0.7_3cm2,最优选为 0.8_lcm2。
[0020]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层的形状为带棱角的形状；更优选为正方形或者矩形。
[0021]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层为0.9cmX0.9cm的正方形。
[0022]在另一优选例中，皮炎诊断贴剂至少一个载体固定于粘性材料上，至少一个载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层。
[0023]在另一优选例中，所述载体材料为聚氯乙烯。
[0024]在另一优选例中，所述粘性材料为医用胶带；更佳地，所述医用胶带主要由无纺布和医用压敏胶材料组成。
[0025]在另一优选例中，所述载体的面积为0.5_14cm2，更优选为0.7_3cm2，最优选为
0.8_lcm2。
[0026]在另一优选例中，所述载体的形状为带棱角的形状；更优选为正方形或者矩形。
[0027]在另一优选例中，所述载体为0.9cm X0.9cm的正方形。
[0028]在另一优选例中，所述载体的面积大于或等于所述含有硫酸镍的凝胶层的面积。
[0029]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层与所述载体的形状相同、面积相等，并且两者完全重合紧贴在一起。
[0030]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层上覆盖有可剥离纸，所述可剥离纸的部分与所述粘性材料相接触并固定；优选所述可剥离纸为离型纸。
[0031]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层中硫酸镍的浓度以镍计算为20-100 u g/cm2。
[0032] 在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层中硫酸镍的浓度以镍计算为40-50 V- g/cm2 ;更优选为 45 u g/cm2。
[0033]在另一优选例中，所述硫酸镍选自无水硫酸镍、六水合硫酸镍、七水合硫酸镍。
[0034]在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的皮炎诊断贴剂的制备方法，所述方法包括步骤:
[0035](I)将溶剂、硫酸镍和成膜基质混合、溶解，除气泡后获得成膜液；
[0036](2)将成膜液在载体上涂膜、干燥，使载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层；和
[0037](3)切片，组装在粘性材料上，得到如上所述的本发明提供的皮炎诊断贴剂。
[0038]在另一优选例中，步骤(1)中，所述成膜基质与溶剂的质量比为1:4-1:20 ;更优选为1:5-1:15 ;最优选为1:9 ;所述硫酸镍的质量一般为所述溶剂与成膜基质质量之和的1%-10%，更优选为2%-5%，最优选为3%-4%。
[0039]在另一优选例中，所述硫酸镍选自无水硫酸镍、六水合硫酸镍、七水合硫酸镍。
[0040]在另一优选例中，所述成膜基质为聚维酮，更优选聚维酮K90。
[0041]在另一优选例中，所述溶剂为纯化水与无水乙醇的组合。更优选，所述纯化水与所述无水乙醇的质量比较佳的为1:1-5:1，更佳的为2:1-4:1，最佳的为3:1。
[0042]在另一优选例中，所述载体材料为聚氯乙烯。
[0043]在另一优选例中，所述粘性材料为医用胶带。
[0044]在另一优选例中，所述医用胶带主要由无纺布和医用压敏胶材料组成。
[0045]在另一优选例中，步骤(3 )中，所述切片是将覆有含有硫酸镍凝胶层的载体分割成面积为0.5-14cm2,更优选为0.7-3cm2,最优选为0.8-1 cm2的带棱角的形状；更优选是正方形或者矩形。
[0046]在另一优选例中，步骤(3 )中，所述切片是将覆有含有硫酸镍凝胶层的载体分割成
0.9cm X0.9cm的正方形。
[0047]在另一优选例中，步骤(2)中，所述涂膜厚度为50-500 ii m ;更优选为70-200 ii m，最优选为100 Ii m。
[0048]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层的厚度为1-50 Pm，更优选为2-30 u m,最优选为 3-10 u m。[0049]在另一优选例中，所述含有硫酸镍的凝胶层中硫酸镍的浓度以镍计算为20-100 V- g/cm2,更优选为 40-50 ii g/cm2 ;最优选为 45 y g/cm2。
[0050]据此，本发明提供了一种含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂，以利开展早期诊断促使患者严格避免过敏原的再接触。
【具体实施方式】
[0051]发明人经过广泛而深入的研究，发现了一种含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂，所述贴剂是由至少一个载体固定于粘性材料上，其中，至少一个所述载体上覆有含有硫酸镍的凝月父层。
[0052]本发明所述的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂应用于斑贴试验，但采用了“含有硫酸镍的凝胶层”，硫酸镍分布更加均匀，并且去除了传统斑试器给患者带来的异样感，同时载体也能达到同斑试器一样的局部封闭效果。
[0053]此处，“至少一个”指本发明的皮炎诊断贴剂可以有多个载体，其上可以分别覆有含变应原的凝胶层。所述变应原包括但不限于，硫酸镍、羊毛醇、硫酸新霉素、重铬酸钾、苯佐卡因、香料化合物(包括香叶醇、羟基香茅醛、桂皮醛、丁香酚、戊基桂皮醛、异丁香酚、桂皮醇或其组合)、松香、双酚A型环氧树脂、喹啉化合物(包括氯碘喹啉、氯喹那多或其组合)、秘鲁香脂、乙二胺、氯化钴、布地奈德、杆菌肽、硫酸镍、对叔丁基酚甲醛树脂、对羟基苯甲酸酯化合物(包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯或其组合)、卡巴化合物(包括1，3_ 二苯基胍(DPG)、二乙基二硫氨甲酸锌(ZDC)、二丁基二硫氨甲酸锌(ZBC)或其组合)、黑橡胶化合物(包括N-异丙基-N’ -苯基-对苯二胺(IPro )、N，N’ - 二苯基-对苯二胺(DPPD)、N-环己基-N’ -苯基-对苯二胺(CPPD)或其组合)、夸特15、巯基苯并噻唑、对苯二胺、甲醛、巯基化合物(包括环己基苯并噻唑亚磺酰胺(CBS )、二苯并噻唑二硫化物(MBTS )、吗啉塞巯基苯并噻唑(MOR )或其组合)、硫柳汞、秋兰姆化合物(包括一硫化四甲基秋 兰姆(TMTM)、二硫化四甲基秋兰姆(TMTD)、二硫化四乙基秋兰姆(TETD)、二硫化双亚戊基秋兰姆(PTD)或其组合)、咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲、丁酸氢化可的松、溴硝丙二醇等。
[0054]在本发明的一个优选的实施方案中，所述含有硫酸镍的凝胶层包含硫酸镍、成膜基质以及溶剂。在一个更优选的实施方案中，所述含有硫酸镍的凝胶层是由硫酸镍、成膜基质以及溶剂组成的。
[0055]如本发明所用，“硫酸镍”(英文名:Nickelous sulfate),有无水物、六水物和七水物三种。优选六水物。有a-型和P -型两种变体，前者为蓝色四方结晶，后者为绿色单斜结晶。加热至103° C时失去六个结晶水。溶于水，水溶液呈酸性；易溶于醇和氨水。
[0056]在一定面积范围内，面积不同，化学致命物质的总剂量即使相差数倍至十多倍，但只要单位面积内化学致敏物质的剂量(即本发明的所述硫酸镍浓度)一致，则对人体皮肤的致敏效果没有差异。因此，本发明在优选实施方案中，限定了凝胶层的面积范围、以及硫酸镍的浓度范围，即可以保证检测效果。
[0057]如本发明所用，“接触性皮炎”是机体对透过皮肤进入体内的化学物质的一种适应性免疫反应，属于IV型变态反应。其临床特点为在接触部位发生边缘鲜明的损害，轻者为水肿性红斑，较重者有丘疹、水疙甚至大疤，更严重者则可有表皮松解，甚至坏死。[0058]当本发明皮炎诊断贴剂上的载体有多个时，为了避免邻近的不同变应原对检测结果判读的干扰，相邻载体的间距宜大于等于0.2cm，较佳的大于等于0.5cm，更佳的大于等于 1cm。
[0059]在本发明中，将溶解后的硫酸镍均匀混合在聚维酮(例如聚维酮K90)中干燥成膜(凝胶层)，使凝胶层中的过敏原呈晶体化、微粒化状态，达到最高的均匀度及释放度。所述聚维酮是由乙烯基吡咯烷酮聚合而得，英文简称PVP，分子量5000-700000。聚维酮是一种非离子型高分子化合物，是一种合成水溶性高分子化合物，具有水溶性高分子化合物的一般性质，胶体保护作用、成膜性、粘结性、吸湿性、增溶或凝聚作用，优异的溶解性能及生理相容性。聚维酮为白色或乳白色、无臭或几乎无臭、易流动的无定形粉末，有吸湿性。具有优良的溶解性，可溶于水、含氯类溶剂、乙醇、胺及低分子脂肪酸，与多数无机盐和多种树脂相容，不溶于乙醚和丙酮。聚维酮具有优良的生理惰性和生物相容性，对皮肤、眼睛、黏膜无刺激或过敏，无毒(LD5tl > 13000mg/kg)。其不参与人体新陈代谢，又具有优良的生物相容性，对皮肤、粘膜、眼等不形成任何刺激，对皮肤无过敏反应，被广泛地用作药物制剂的辅料。
[0060]聚维酮按其平均分子量有K15、K25、K30、K60、K90等规格，K值越大，分子量越大，不同的K值分别代表相应的聚维酮平均分子量范围。K值实际上是与聚维酮水溶液的相对粘度有关的特征值，而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量，因此可以用K值来表征聚维酮的平均分子量。通常K值越大，其粘度越大，粘接性越强。在本发明的一个实施方案中，选用了聚维酮K90作为成膜基质。从本发明的实施例4可以看出，采用了聚维酮K90作为成膜基质，成膜(凝胶层)效果好，膜(凝胶层)表面均一，并且不易脱膜(凝胶层)。
[0061]在本发明所述含有硫酸镍的凝胶层中，所述硫酸镍的浓度以镍计算，较佳的为20-100 ii g/cm2，更佳的为40-50ii g/cm2，最佳的为45 ii g/cm2。在一个优选的实施方案中，在制备本发明所述含有硫酸镍的凝胶层时，在配制成膜液中，所述聚维酮(优选聚维酮K90)与所述溶剂(优选纯化水与无水乙醇的组合)的质量比较佳的为1:4-1:20，更佳的为1:5-1:15，最佳的为1:9 ;所述溶剂优选纯化水与无水乙醇的组合，所述纯化水与所述无水乙醇的质量比较佳的为1:1-5:1，更佳的为2:1-4:1，最佳的为3:1。所述硫酸镍(优选六水合硫酸镍)添加的质量一般为所述 溶剂(优选纯化水与无水乙醇的组合)与成膜基质(优选聚维酮K90)质量之和的1%_10%，更优选为2%-5%，最优选为3%-4%。
[0062]在本发明中，所述含有硫酸镍的凝胶层的厚度一般为1-50 ym，较佳的为2-30 u m,更佳的为3-10 u m。所述含有硫酸镍的凝胶层的面积一般为0.5-14cm2,较佳的为
0.7_3cm2,更佳的为 0.8-1 cm2 o
[0063]本发明所述载体不应该包含任何可能对皮肤产生刺激的物质，并且载体能达到与传统斑试器相同的局部封闭效果。在本发明的一个优选实施方案中，所述载体的材料为聚氯乙烯。此外，对于载体的形状没有太多的限制，一般与含有硫酸镍的凝胶层的形状一致(两者紧贴在一起)。然而，刺激性皮肤反应病灶呈现的形状多与接触到的载体形状相同，而真正由过敏原引起的接触性过敏反应皮疹部位一般都呈现圆形，如果选用圆形载体，则容易混淆，影响结果判读。因此，载体与其之上的含有硫酸镍的凝胶层的形状优选正方形或者矩形等带棱角的形状。在本发明的一个实施方案中，选择了 0.9cmX0.9cm的正方形。
[0064]在一个较佳的实施方案中，所述含有硫酸镍的凝胶层上还覆盖有可剥离纸，所述可剥离纸的部分与所述粘性材料相接触并固定。对于可剥离纸的选择主要考虑其密封性、不与硫酸镍反应、在撕离时不吸附硫酸镍而影响其含量。在一个更佳的实施方案中，所述可剥离纸为离型纸。所述可剥离纸(优选离型纸)是在贴剂施用于患者皮肤前去除。
[0065]为了便于保存与运输，本发明皮炎诊断贴剂可以密封保存，优选地可以密封保存于医用复合铝箔袋中。为了防止空气、水分与光对所述皮炎诊断贴剂的影响，可以适当抽真空，加入惰性气体，或者加入干燥剂(片)等，这些也是本领域技术人员所熟知的。
[0066]本发明还提供了一种制备所述皮炎诊断贴剂的方法，包括如下步骤:
[0067](I)将溶剂、硫酸镍和成膜基质混合、溶解，除气泡后获得成膜液；
[0068](2)将成膜液在载体上涂膜、干燥，使载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层；
[0069](3)切片，组装在粘性材料上，得到所述皮炎诊断贴剂。
[0070]在一个较佳的实施方案中，所述制备方法，包括如下步骤:
[0071]I)制备成膜液
[0072]将溶剂、硫酸镍和成膜基质混合、溶解，除气泡后获得成膜液。其中，所述硫酸镍选自无水硫酸镍、六水合硫酸镍、七水合硫酸镍。所述溶剂优选纯化水与无水乙醇的组合，所述纯化水与所述无水乙醇的质量比较佳的为1:1-5:1，更佳的为2:1-4:1，最佳的为3:1。所述聚维酮(优选聚维酮K90)与所述溶剂(优选纯化水与无水乙醇的组合)的质量比较佳的为1:4-1:20，更佳的为1:5-1:15，最佳的为1:9。所述硫酸镍(优选六水合硫酸镍)添加的质量一般为所述溶剂(优选纯化水与无水乙醇的组合)与所述聚维酮(优选聚维酮K90)质量之和的1%-10% (较佳的为2%-5%，更佳的为3%-4%)。此外，搅拌时间优选至少I小时以上，更优选2小时以上，最优选3小时以上。对于除气泡的方法，可以采用静置(一般为5-10分钟)除气泡，离心(一般为5，000-10, OOOrpm, 5-10分钟)除气泡，或者抽真空除气泡方法等。
[0073]2)涂膜与干燥
[0074]将成膜液在载 体上涂膜、干燥，使载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层。对于本领域技术人员而言，可以使用自动涂膜机运行涂膜器涂膜，也可以使用手动涂膜器涂膜。其中，所述涂膜厚度优选为50-500 u m,更优选为70-200 u m,最优选为100 u m。干燥的温度优选(TC -600C，更优选 20°C -40°C，还要优选 25°C -37°C ;湿度优选 40%_70%，更优选 45%_65% ；时间优选10-60分钟，更优选20-60分钟，还要优选30-60分钟，最优选45分钟。干燥成膜(即含有硫酸镍的凝胶层)后，所述含有硫酸镍的凝胶层的厚度一般为1-50 ym，较佳的为
2-30 u m,更佳的为 3-10 u m。
[0075]3)切片与组装
[0076]切片，组装在粘性材料上，得到所述皮炎诊断贴剂。所述切片是将覆有含有硫酸镍凝胶层的载体分割成面积为0.5-14cm2,更优选为0.7-3cm2,最优选为0.8-1 cm2的带棱角的形状；更优选是正方形或者矩形。在本发明的一个实施方案中，选择了 0.9cmX0.9cm的正方形。最后，将覆有含有硫酸镍凝胶层的载体固定于粘性材料(例如医用胶带)上。优选地，所述含有硫酸镍的凝胶层上还覆盖有可剥离纸(例如离型纸)，所述可剥离纸(例如离型纸)的部分与所述粘性材料相接触并固定。更优选地，可以密封保存于医用复合铝箔袋中。
[0077]需要说明的是，当本发明皮炎诊断贴剂上的载体(其上可以分别覆有含不同变应原的凝胶层)有多个时，在制备本发明皮炎诊断贴剂时，包括如下步骤:①分别制备含有不同变应原的成膜液；②将成膜液分别在载体上涂膜、干燥，使载体上覆有含有变应原的凝胶层；③切片，将多个覆有含有变应原凝胶层的载体组装在粘性材料上。为了避免邻近的不同变应原对检测结果判读的干扰，相邻载体的间距宜大于等于0.2cm，较佳的大于等于
0.5cm,更佳的大于等于1cm。
[0078]本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
[0079]本发明的主要优点在于:
[0080]1、首次提供了含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂。
[0081]2、首次提供了灵敏度高、特异性强的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂。
[0082]3、首次提供了膜(凝胶层)表面均一，并且不易脱膜(凝胶层)的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂。
[0083]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按
重量计。
[0084]本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。
[0085]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相 似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0086]实施例1含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂的制备
[0087](I)制备成膜液
[0088]
规格36 |ug/片(以镍计)
NiS04‘6H203.5 g
聚维酮K90IOg
纯化水67.5 g
无水乙醇_22.5 g
[0089]①根据上述比例，称取纯化水，加入六水合硫酸镍，搅拌至完全溶解；
[0090]②再加入无水乙醇，边搅拌边缓慢加入聚维酮K90，封口后搅拌约3小时；
[0091]③完全溶解后，静置除气泡，即成硫酸镍成膜溶液。
[0092](2)涂膜与干燥
[0093]将聚氯乙烯硬片贴于水平玻璃板上，确认平整无气泡。将玻璃板固定于涂膜机上，将100 u m涂膜器放置在聚氯乙烯硬片上，倒入成膜液，运行涂膜机。
[0094]将上述涂好的膜置于室温、湿度45%_65%的环境中干燥至膜表面不粘离型膜即可(约45分钟)。
[0095](3)切片与组装
[0096]制备好的膜(含有硫酸镍的凝胶层)紧贴于聚氯乙烯硬片上，将其一起裁剪成0.9cmX0.9cm的正方形膜片(覆有含有硫酸镍凝胶层的载体)。
[0097]将上述0.9cmX0.9cm正方形膜片固定于医用胶带(主要由无纺布和医用压敏胶材料组成)的粘性面上，用防水不透气的离型纸覆盖其上，并用医用复合铝箔袋密闭封装。
[0098]实施例2镍离子(Ni2+)浓度(含量)的检测
[0099]原理:在碱性溶液中，氧化剂(过硫酸铵)存在的条件下，镍与显色剂(丁二酮肟)形成酒红色的可溶性络合物，在波长465nm处有特征吸收峰，利用这一性质用分光光度检测镍离子(Ni2+)的浓度(含量)。
[0100](I)试剂配制
[0101]a) 20%酒石酸钾钠溶液:称取20g酒石酸钾钠,加少量纯化水溶解后定容至100ml,混匀。
[0102]b) 3%过硫酸铵溶液:称取1.5g过硫酸铵，加入少量纯化水溶解后定容至50ml，混
匀。避光保存，需当天配制。
[0103]c)5%Na0H溶液:称取5g NaOH，加入少量纯化水溶解后定容至100ml，混匀。
[0104]d) 1% 丁二酮肟溶液:称取0.5g 丁二酮肟，加入少量5%Na0H溶液溶解后定容至50ml,混匀。需当天配制。
[0105](2)标准品系列浓度的配制
[0106]移取镍离子标准品`溶液(lmg/ml)lml于25ml容量瓶中，用纯化水稀释至刻度。混匀后分别取4ml、3ml、2ml、lml、0.5ml至IOml离心管中，用纯化水补至4ml。则标准品(Ni2+)系列浓度依次为 40 u g/ml>30 u g/ml、20 u g/ml> 10 u g/ml>5 u g/ml。
[0107](3)供试品溶液的制备
[0108]随机抽取10片取自实施例1制备的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂上的硫酸镍膜片(覆有含有硫酸镍凝胶层的载体)，分别置于5ml离心管中，每片各加2ml纯化水，浸泡I小时，间歇振荡2次，每次10-15秒，使之完全溶解，即供试液。
[0109](4)测定方法
[0110]a)取标准品系列浓度溶液和供试液各1.0ml于15ml具塞刻度试管中。以纯化水为空白对照，作同样处理。
[0111]b)分别加入20%酒石酸钾钠溶液1.0ml，5%NaOH溶液0.4ml, 3%过硫酸铵溶液
0.5ml,混匀。
[0112]c)再加入1% 丁二酮肟溶液0.3ml，然后加入纯化水6.8ml，混匀，室温反应15-20分钟。
[0113]d)用石英比色皿于465nm波长处测定其吸光度。以空白对照校零。
[0114](5)试验结果
[0115]a)绘制标准曲线
[0116]以标准品系列浓度溶液检测的吸光度为横坐标(X)，对应的标准品浓度为纵坐标(y )，绘制标准曲线y=ax+b。
[0117]b)计算镍离子(Ni2+)的浓度(含量)
[0118]根据供试液的吸光度与标准曲线y=ax+b，计算供试液中镍离子(Ni2+)的浓度，并换算成单个硫酸镍膜片中的镍离子(Ni2+)含量。
[0119]c )检测结果[0120]计算结果单个硫酸镍膜片中镍离子(Ni2+)的含量为36.75iig (10次检测的平均值)，即实施例1制备的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂中，含有硫酸镍的凝胶层中镍离子(Ni2+)的浓度为45.37 ii g/cm2。(单个膜片的面积为0.9cmX0.9cm=0.81cm2，因此，含有硫酸镍的凝胶层中镍离子(Ni2+)的浓度为36.75 ug^0.81cm2=45.37 u g/cm20)
[0121]实施例3斑贴试验
[0122]共44例受试者，平均年龄(40.5±9.6)岁，男性25例，女性19例，其中在临床上确诊为硫酸镍过敏的接触性皮炎患者22例(阳性组)，非硫酸镍过敏的接触性皮炎患者22例(阴性组)。使用实施例1制备的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂对上述患者进行斑贴试验，患`者必须持续粘贴至少48小时，注意保持试验区干爽。结果判读应在72-96小时期间进行，如果在揭下贴剂时即进行评估，则应在30分钟后进行判读，并在72-96小时期间进行补充
判读。判读标准如下表所示:
[0123]
_BM_逃_判定标准_
可疑反应？仅出现微弱的斑疹性红斑
弱(非水泡性)阳性反 +红斑、浸润，可能有丘疹
强(水泡性)阳性反应 ++红斑、浸润、丘疹、水疱
极强阳性反应+++大疱反应
阴性反应-无反应
不同类型的刺激性反M/
IR 脓疱不伴有浸润的斑片状滤泡或均匀红斑
(非讨敏反M/i)
_未检测_NT_
[0124]结果显示:在22例阳性组中，有2例出现“极强阳性反应”(+++)，9例出现“强阳性反应”(++)，9例出现“弱阳性反应”(+ )，1例出现“可疑反应”(？)，1例出现“阴性反应”(_)。在22例阴性组中，有2例出现“弱阳性反应”(+ )，3例出现“可疑反应”(？)，19例出现“阴性反应”(_)。如以临床诊断为硫酸镍过敏的接触性皮炎的诊断标准及排除标准，计算灵敏度与特异度的结果如下:
[0125]灵敏度(％)=斑贴试验结果为阳性的人数/阳性组总人数=(2+9+9) + 22=90.91%
[0126]特异度(％) =斑贴试验结果为阴性的人数/阴性组总人数=19 + 22=86.36%
[0127]因此，使用本发明的含有硫酸镍的皮炎诊断贴剂进行斑贴试验灵敏度高、特异性强。根据临床确诊为硫酸镍过敏的接触性皮炎组和非硫酸镍过敏的接触性皮炎组的检测结果，本试验灵敏度90.91%和特异度86.36%，与临床诊断有很好的符合率，且不良反应少，可良好耐受。
[0128]实施例4不同成膜基质涂膜(凝胶层)比较
[0129]按照实施例1(1)、(2)的方法分别制备4种膜片(覆有含有硫酸镍凝胶层的载体)，不切片，4种成膜液的配方如下:
[0130]膜片一:NiS04-6H,03.6 g
[0131]
聚维酮K905 g
纯化水75 g
[0132]
无水乙醇_20 R
[0133]膜片二:
NiS04-6H203.3 g
聚维酮K9015 g
[0134]
纯化水 60 g
无水乙醇_25 g
[0135]膜片三:
[0136]NiSO4 ? 6H203.1g
[0137]羟丙纤维素(HPC-HF )5g
[0138]纯化水95g
[0139]_
[0140]膜片四:
[0141]NiSO4 ? 6H203.8g
[0142]甲基纤维素IOg
[0143]纯化水90g
[0144]_
[0145]注:将甲基纤维素加入到预加热至高温(80°C左右)的纯化水中高速搅拌分散均匀后,再迅速加入用纯化水溶解好的NiSO4 ? 6H20并搅拌均匀。
[0146]观察成膜效果，结果如下:
[0147]膜片一:成膜效果好，膜(凝胶层)表面均一，不易脱膜(凝胶层);
[0148]膜片二:成膜效果好，膜(凝胶层)表面均一，不易脱膜(凝胶层);
[0149]膜片三:成膜效果较差，膜(凝胶层)表面有花纹，易脱膜(凝胶层)；
[0150]膜片四:成膜效果较差，膜(凝胶层)表面有花纹，易脱膜(凝胶层)。
[0151]从上述成膜(凝胶层)效果看，采用聚维酮K90的成膜液成膜(凝胶层)效果好，膜(凝胶层)表面均一，并且不易脱膜(凝胶层)。
[0152]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
【权利要求】
1.一种皮炎诊断贴剂，其特征在于，所述贴剂包括: 一含有硫酸镍的凝胶层； 一载体；和 一粘性材料。
2.如权利要求1所述的皮炎诊断贴剂，其特征在于，所述含有硫酸镍的凝胶层包含硫酸镍、成膜基质和溶剂；优选所述含有硫酸镍的凝胶层由硫酸镍、成膜基质和溶剂组成。
3.如权利要求1所述的皮炎诊断贴剂，其特征在于，至少一个载体固定于粘性材料上，至少一个载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层。
4.根据权利要求3所述的贴剂，其特征在于，所述含有硫酸镍的凝胶层上覆盖有可剥离纸，所述可剥离纸的部分与所述粘性材料相接触并固定；优选所述可剥离纸为离型纸。
5.如权利要求1-4任一所述的皮炎诊断贴剂，其特征在于，所述含有硫酸镍的凝胶层中硫酸镍的浓度以镍计算为20-100ii g/cm2。
6.如权利要求5所述的皮炎诊断贴剂，其特征在于，所述含有硫酸镍的凝胶层中硫酸镍的浓度以镍计算为40-50 u g/cm2 ;优选为45 u g/cm2。
7.如权利要求5所述的皮炎诊断贴剂，其特征在于，所述硫酸镍选自无水硫酸镍、六水合硫酸镍、七水合硫酸镍。
8.—种如权利要求1-7任一所述的皮炎诊断贴剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤: (1)将溶剂、硫酸镍和成膜基质混合、溶解，除气泡后获得成膜液； (2)将成膜液在载体上涂膜、干燥，使载体上覆有含有硫酸镍的凝胶层； (3)切片，组装在粘性材料上，得到如权利要求1-7任一所述的皮炎诊断贴剂。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述成膜基质与溶剂的质量比为1:4-1:20 ;优选为1:5-1:15 ;更优选为1:9 ;所述硫酸镍的质量一般为所述溶剂与成膜基质质量之和的1%_10%，更优选为2%-5%，最优选为3%-4%。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述涂膜厚度为50-500u m ；优选为70-200 u m,更优选为100 u m。
【文档编号】A61K49/00GK103480005SQ201210190082
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2012年6月11日 优先权日:2012年6月11日
【发明者】马荣水, 许伟钦 申请人:浙江我武生物科技股份有限公司