专利名称：大米草总生物碱的超声微波提取法及其抑菌性能应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及大米草提取物的制备方法及应用，特别是涉及大米草总生物碱的提取方法及以所述方法制备的大米草总生物碱在抑菌方面的应用。
背景技术：
大米草属禾本科米草属，为多年生湿生草本宿根植物。大米草含有多种生物活性物质，如生物碱、氨基酸、维生素等，粗蛋白的含量较高，是一种营养成分比较齐全的植物。生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮有机化合物，一些生物碱因其具有抗肿瘤、抗炎、抑菌、抗血小板凝集、抗心律失常以及抗高血压等心血管疾病的作用，使它在卫生、医药等方面有着巨大的应用潜力，近年来成为人们研究的热点。大米草生物碱可作为研制多糖类药物、保健饮品、食品添加剂等多种物质的原料。文献检索中尚未见有大米草中总生物碱的提取以及其生物碱的应用报道。刘树兴等(刘树兴，郭瑞霞，赵芳，食品科学，2009，30 (16):52-55)采用超声波法提取荷叶中的生物碱，优化条件后生物碱的得率为0.17%。近年来，超声波提取以其特有的渗透细胞能力，可缩短提取时间，提高有效成分和药材的利用率，并且可以避免高温对提取成分的影响，成为提取中药领域的 一种优良方法。申请号为201010289195.8的中国发明专利采用乙醇浸提的方法，在超声辅助作用下提取昆明山海棠总生物碱，该方法特征在于提取过程包含以下步骤:(1)昆明山海棠去皮根粉碎后过5-15目筛；(2)加昆明山海棠去皮根10-40倍量61-69%乙醇在超声条件下多次提取；(3)合并提取液，浓缩后加入30-45%的浓盐酸调节PH值至酸性，充分混合后过滤；(4)滤液用氯仿萃取3-5次，所得萃余相用Na2CO3调节pH值至9-11，再用氯仿萃取3-5次，合并萃取相；(5)40-50°C条件下，旋转蒸发萃取相回收氯仿后得总生物碱；或将上述所说的步骤(4)、(5)改为将滤液用氯仿萃取3-5次，所得萃余相用Na2CO3调节pH值至9-11,将该萃余相通过含C18的固相萃取(Solid-Phase-Extraction,SPE)装置，先用蒸馏水冲洗30分钟，再用30-45%乙醇冲洗，收集该冲洗液经旋转蒸发回收乙醇后得总生物碱。但由于不同植物在地理生长环境、科属种类间的差异，导致不同植物活性成份组成及含量方面存在差异，实际进行超声波操作条件不同，按照上述文献和发明专利对大米草总生物碱进行提取很难有效实施并获得满意效果。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种高效提取大米草总生物碱的方法，利用该方法提取的大米草总生物碱产率高，适合工业化生产。该方法包括以下步骤:(I)新鲜大米草植株洗净，烘干，粉碎，得到大米草粉末；(2)收集步骤(I)的粉末，加入到高浓度乙醇中，在超声波中浸提，抽滤；(3)收集步骤(2)的滤液，将滤液转移到旋转蒸发仪中，旋转蒸发至浸膏；(4)用柠檬酸溶解步骤(3)的浸膏，调节pH至酸性，再用无水碳酸钠调节pH至碱性，析出所需的大米草总生物碱沉淀物。
根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(1)所述的大米草粉末为20-80目。根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(2)所述的大米草粉末和乙醇的料液比(w/v)为 1: 10-1: 30。根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(2)所述的高浓度乙醇为60-80%的乙醇。根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(2)所述的超声浸提的时间为40_60min。根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(3)所述的旋转蒸发的温度为30-40℃根据本发明方法的一个优选实施方案，其中步骤(4)所述的酸性条件是pHl-3，碱性条件是pH 9-11。与现有技术相比，本发明的优点在于，采用超声波法提取，无污染，无毒害，操作条件温和，提取的总生物碱产率高。根据本发明的一个优选实施方案，其中大米草总生物碱产率为1.32%。本发明的另一个目的是提供按上述方法提取的大米草生物碱在抑菌性方面的应用。在固体培养基上培养，用滤纸片法测定总生物碱提取液对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、淀粉液化芽孢杆菌的抑菌性能。同时，用阿莫西林溶液做阳性对照，无水乙醇做阴性对照。
具体实施例方式以下实施例旨在进一步举例说明，但不限制本发明。实施例1:大米草总生物碱的提取将采来的新鲜大米草经过预处理:自来水清洗，真空干燥，粉碎，过筛。取40目粉末40g，按料液比(w/v)l: 10溶于70%乙醇400mL，超声波浸提50min。抽滤得提取液，35°C旋转蒸发提取液至浸膏，用柠檬酸溶解浸膏调pH值至2.5，无水似20)3调pH值至10.5，产生粗生物碱沉淀。离心分离，弃上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，称量得到0.5286g粗生物碱。计算可得，提取率为1.32%。实施例2:大米草总生物碱的提取将采来的新鲜大米草经过预处理:自来水清洗，真空干燥，粉碎，过筛。取80目粉末40g，按料液比(w/v)l: 30溶于80%乙醇400mL，超声波浸提60min。抽滤得提取液，40°C旋转蒸发提取液至浸膏，用柠檬酸溶解浸膏调pH值至3，无水Na2CO3调pH值至10，产生粗生物碱沉淀。离心分离，弃上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，称量得到0.4729g粗生物碱。计算可得，提取率为1.18%。实施例3:大米草总生物碱的提取将采来的新鲜大米草经过预处理:自来水清洗，真空干燥，粉碎，过筛。取20目粉末40g，按料液比(w/v)l: 20溶于60%乙醇400mL，超声波浸提40min。抽滤得提取液，30°C旋转蒸发提取液至浸膏，用柠檬酸溶解浸膏调pH值至1，无水Na2CCUf pH值至11，产生粗生物碱沉淀。离心分离，弃上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，称量得到0.4963g粗生物碱。计算可得，提取率为1.24%。
实施例4:大米草总生物碱的抑菌作用将实施例1提取到的总生物碱溶于IOmL乙醇即得到52.86mg.ml/1生物碱提取液原液。将6_灭菌并烘干的纸片分别放入大米草生物碱提取液、阿莫西提取液原液。将6mm灭菌并烘干的纸片分别放入大米草生物碱提取液、阿莫西林、无水乙醇中浸泡2h，取出自然晾干，除去多余滤液，无菌保存。移取大肠杆菌、铜绿假单胞菌和淀粉液化芽孢杆菌菌悬液各200 μ L至LB平板，用灭菌的涂布棒分别均匀涂布于平板上，制成含菌平板，待平板稍干，用无菌镊子将制备好的药敏纸片均匀间隔贴于含菌平板表面，同时以阿莫西林为阳性对照，以无水乙醇为阴性对照，用提取液浸泡的药敏纸片放三个，阳性阴性对照各一个。静置Ih后将贴好的平板倒置于37°C恒温培养箱中培养18-24h，取出，观察抑菌圈大小，用游标卡尺测定并记录结果，试验重复三次，取其平均值。抑菌率(％)=(试验组抑菌圈平均直径-空白滤纸片直径)/空白滤纸片直径X 100 %表I总生物碱提取液对大肠杆菌的抑菌圈大小
权利要求
1.一种超声波提取大米草总生物碱方法及其抑菌性应用，其特征在于:所述提取方法包括以下步骤: (1)新鲜大米草植株洗净，烘干，粉碎，得到大米草粉末。
(2)收集步骤(I)的粉末，加入到高浓度乙醇中，在超声波中浸提，抽滤。
(3)收集步骤(2)的滤液，将滤液转移到旋转蒸发仪中，旋转蒸发至浸膏。
(4)用柠檬酸溶解步骤(3)的浸膏，调节pH至酸性，再用无水碳酸钠调节pH至碱性，析出所需的大米草总生物碱沉淀物。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(I)所述的大米草粉末为20-80目。
3.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)所述的大米草粉末和乙醇的料液比(w/v)为I: 10-1: 30。
4.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)所述的高浓度乙醇为60-80%的乙醇。
5.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)所述的超声浸提的时间为40-60min。
6.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)所述的旋转蒸发的温度为30-40°C。
7.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)所述的酸性条件是pH1-3，碱性条件是pH9-11。
8.按照权利要求1至7中任何一项的方法提取的大米草总生物碱在抑菌性方面的应 用。
全文摘要
本发明涉及大米草总生物碱的超声微波提取方法及其抑菌性应用，特别是涉及提取大米草总生物碱的方法及按所述方法提取的大米草总生物碱的抑菌性应用。提取方法包括大米草干燥，粉碎过筛；将粉末加入到乙醇中，超声浸提；抽滤得提取液，旋转蒸发至浸膏；用柠檬酸溶解浸膏调pH值至酸性，无水Na2CO3调pH值至碱性，总生物碱沉淀；离心，弃上清液得沉淀，收集沉淀并烘干，得大米草总生物碱。此生物碱对大肠杆菌、铜绿假单胞菌和淀粉液化芽孢杆菌的生长具有一定的抑制性。
文档编号A61K36/899GK103191316SQ20121055231
公开日2013年7月10日 申请日期2012年12月19日 优先权日2012年12月19日
发明者许伟, 邵荣, 丁建飞, 颜秀花 申请人:盐城工学院