人类髓源抑制性细胞癌症标记的制作方法
【专利摘要】本发明提供了通过检测用于转录因子激活的CD33+HLA-DRlow、CD14+HLA-DRlow、CD66b+HLA-DRlow或CD1lb+HLA-DRlowMDSC，从而确定癌症存在（恶性与良性），监控癌症进程，监控癌症复发，监控主体对于癌症治疗的反应或确定癌症分期的方法。转录因子包括但不限于STAT3、pSTAT3、HIF1α、STAT3或C/EBPβ。MDSC的表型可以是CD33+HLA-RlowHIFlα+/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD66b+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD33+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+,CD11b+HLA-DRlowHIFlα+/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+或CD11b+HLA-DRlowC/EBPβ+。通过使PBMC和人类实体瘤细胞共培养，随后检测它们的抑制能力，本发明还提供了从健康供体的外周血单核细胞（PBMC）诱导人类MDSC的方法。
【专利说明】人类髓源抑制性细胞癌症标记
[0001]相关专利的交叉引用
[0002]根据美国法典第35章第119(e)条的规定，本申请要求于2011年4月28日提交的美国临时专利申请61/480，311和2011年12月5日提交的美国临时专利申请61/567，042的优先权，所述专利的全部内容在此以引用的方式并入本文。
【背景技术】
[0003]癌症的早期检测或复发检测对于保持良好的健康状态非常重要。确定癌症早期表面标记物能够使肿瘤医师治疗癌症病人的成功率提高。免疫抑制细胞，例如髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells (MDSC))引起肿瘤免疫耐受以及癌症病人免疫疗法和实验肿瘤模型(experimental tumor models) (I)的失败。据报道,MDSC通过多种机制抑制T细胞的功能，包括:调节L-精氨酸降解的精氨酸酶-1 (ARG-1)⑵；调节可产生活性氮和活性氧类的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(N0X2) (3,4);血管内皮生长因子过表达(5);半胱氨酸降解(6);以及增加调节性T细胞(T-regulatory, Treg)的细胞数量(7,8)。MDSC聚集在创伤位点、严重感染或败血位点以及癌症(9)位点，而在健康受试者体内很少或没有，可能是由于缺氧环境和低氧诱导因子(HIF)-1a表达(10)引起的。在结肠癌(11)、黑色素瘤(11)、肝细胞癌(12)、头颈部鳞状细胞癌(4)、非小细胞肺癌(13)、肾细胞癌(14)、胰腺癌(15)和乳腺癌(16)主体中均报道过MDSC。针对癌症主体，Diaz等人(16)认为MDSC的聚集与进一步的疾病和不良预后相关。在癌症主体中检测典型MDSC的能力能够使得肿瘤学家确定治疗的有效性，以及治疗后肿瘤是否复发。此外，外周血中的MDSC特性可以用来区分良性和恶性病变，以及难以通过常规成像、细针穿刺抽吸活检或现有血清化验辨别的肿块。因此，在本【技术领域】中，有必要发展检测MDSC数量的方法，以制定出合适的治疗方案。本发明实现了这种需求，且提供了相关的有利条件。
【发明内容】
[0004]本发明提供了确定受检样品中MDSC数量的方法以及治疗癌症主体的方法，所述方法包括如下步骤，可选地，所述方法基本上由如下步骤组成，或所述方法还进一步由如下步骤组成:a)在所述主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，其中所述MDSC具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DR1(WHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DRl0WHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlow HIFl a +/STAT3VpSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDl lb+HLA-DR^C/EBP β + ;以及 b)如果所述 MDSC 被检测到，实施癌症治疗；如果上述表型没有被检测到，则不需要实施治疗。另一方面，本发明提供了一种治疗已确定对所提供的治疗方法有反应的癌症主体的方法，所述方法包括，可选地，所述方法基本上由如下步骤组成，或所述方法还进一步由如下步骤组成:给癌症主体有效量的癌症治疗，其中通过从主体分离的细胞或组织中筛选髓源抑制性细胞(MDSC)来确定所述主体是否有反应，其中所述的MDSC的表型如下ADSS+HLA-DRltwHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRl0WHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DRlmVSTAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1t5wHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β +。
[0005]另一方面涉及一种治疗已确定对治疗有反应的癌症主体的方法,包括给癌症主体实施有效量的癌症治疗，其中通过一种方法确定所述主体对所述治疗有反应，所述方法包括在来自于主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，所述MDSC具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DRlOTHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOT/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1<)WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1? HIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DR1(WC/EBP β +。
[0006]另一方面涉及一种检测或辅助检测主体是否有癌症的方法，所述方法包括如下步骤，可选地，所述方法基本上由如下步骤组成，或所述方法还进一步由如下步骤组成:在来自于主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，其中所述的MDSC具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DR1(W HIF I a +STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1(WHIF I a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIF I a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + ;其中所述MDSC存在则意味着有可能有癌症，所述MSDC不存在则意味着不太可能有癌症。
[0007]另一方面涉及一种检测癌症主体的癌症治疗效力的方法，所述方法包括如下步骤，可选地，所述方法基本上由如下步骤组成，或所述方法还进一步由如下步骤组成:在来自于主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，其中所述的MDSC具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOTHIF I a +STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1<)WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 或 CDllb+HLA-DRlowC/ΕΒΡβ + ;其中在癌症治疗过程中没有所述MDSC或所述MDSC减少则意味着有效的治疗应答，有所述MDSC或所述MDSC增加则意味着无效的治疗应答。
[0008]另一方面涉及一种从髓系细胞源(source of myeloid lineage cells)产生人类MDSC的方法，所述方法包括如下步骤，可选地，所述方法基本上由如下步骤组成，或所述方法还进一步由如下步骤组成:(a)在足以诱导MDSC的条件下，使肿瘤样品与髓系细胞源接触；以及(b)分离所述MDSC。分离的MDSC以及含有所述细胞的组合物在本文中会进一步叙述。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是用于体外产生肿瘤相关髓系抑制性细胞(tumor-associated myeloidsuppressor cells)的共培养 和MDSC抑制实验(Suppression Assays)示意图。诱导:正常供体的外周血单核细胞(PBMC)与人类实体瘤细胞系共培养一周。MDSC分离:通过CD33抗体微珠标记(microbead labeling)和磁选柱(magnetic column separation)从 PBMC-肿瘤共培养物中分离出CD33+细胞。抑制试验:在T细胞刺激因子存在的条件下，随后使肿瘤促使分化(Tumor-educated)的⑶33+细胞与新鲜的CFSE-标记的自体⑶8+T细胞以1:4的比例共培养。3天后，使用流式细胞术，以羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)的稀释度计算T细胞的增殖。以CD33+细胞抑制自体CD8+T细胞增殖的能力评估抑制功能。
[0010]图2显示由亚群MDSC-诱导细胞系诱导的CD33+MDSC产生上升的IL-Ιβ、IL-6(A)、TNF α (B)、VEGF (C)和 GM-CSF (D)。头颈部鱗状细胞癌(head and neck squamous cellcarcinoma) (HNSCC)细胞系产生的这些细胞因子的蛋白分泌是通过ELISA技术检测上清液测定的，以确认基因表达结果。平均蛋白水平(n=2，重复三次)以土SEM显示。*是指统计显著性，ρ〈0.05。
[0011]图3显示HNSCC诱导的MDSC抑制自体T细胞的增殖和IFNy的产生。HNSCC细胞系亚群诱导具有MDSC抑制功能特性的CD33+细胞群，包括抑制自体CD8+T细胞的增殖(a)和IFN Y的分泌(B)。肿瘤细胞系通过MDSC诱导强度分组:强(黑)，弱(灰色)以及不能诱导(白色)。这两组图表的平均值(n≥2个供体)以土SEM显示。*是指统计显著性，ρ〈0.05。
[0012]图4显示与⑶33"MDSC相比，人类乳腺癌、肺癌和神经胶质瘤细胞系更优先诱导⑶Ilb+MDSC,以及确定⑶Ilb+MDSC作为第二亚群(subset)。A.检测来自于乳腺癌、肺癌或神经胶质瘤细胞系-PBMC共培养物的CDllb+细胞对CD3/CD28刺激的自体T细胞的抑制功能。分别通过⑶33+或⑶11+与自体T细胞的抑制实验显示平均(n=2) T细胞增殖土SEM或T细胞增殖(n=l)。B.通过细胞因子FLT3L和TGFP可以从正常供体PBMC诱导⑶II+MDSC亚群。平均值(n=3)以土SEM显示。*是指与单独T细胞相比，在平均T细胞增殖中的统计显著性(p〈0.05)。
[0013]图5显示⑶33+和⑶I Ib+肿瘤细胞系诱导的MDSC的特性。A.通过与单独培养基、非抑制性⑶33+和⑶I Ib+细胞相比较，利用流式细胞仪检测HNSCC细胞系诱导的⑶33+和乳腺癌细胞系诱导的⑶Ilb+MDSC的表型。平均阳性细胞百分比(n>2)以土SD显示。B.通过流式细胞仪检测抗原呈递细胞(左)和抑制性细胞(右)标记在强抑制(由HNSCC细胞系SCCL-MTU SCC-4、CAL-27诱导)和非抑制(由SW2224、RPMI265诱导或单独培养基)CD33+髓系细胞中的表达。同型对照以上的平均荧光值(数据来自3组供体，在所有三种诱导条件下(n=9)的平均值)土SEM显示。为了比较抑制细胞和非抑制细胞之间的平均值，*指示统计显著性，Ρ〈0.05且“ +，，指示ρ=0.59。
[0014]图6显示人类MDSC通过上调ARG-1、Ν0Χ2、iNOS、VEGF和TGF β调节抑制。Α.在肿瘤细胞系诱导的⑶33+MDSC中，公认的抑制基因ARG-1、iNOS、N0X2-构成的NCFl (N0X2-component NCFI) ,VEGF和TGF β的表达。*是指统计显著性，ρ〈0.05，在对只有CD33+对照的培养基进行两两比较的Dunnett测试后，利用方差分析(ANOVA)每个基因的表达。B.肿瘤细胞系诱导的⑶33"MDSC抑制，⑶3/⑶28刺激的自体T细胞的增殖。MDSC抑制机制ARG-1和N0X2的特异性抑制因子调节部分但并非全部抑制的逆转。*是指平均T细胞增殖(平均值以土SEM显示，每个抑制因子的η > 7，数据来自两组具有相似结果的独立实验)中统计显著性差异，Ρ〈0.05，在两两比较的Tukey测试后，由方差分析得出。C.在⑶33+和CDllb+人类MDSC中ARG-1、iNOS、N0X2-构成的NCFl的基因表达比较，显示这些基因具有相似的表达水平。相对于作为对照的培养基，平均倍数改变(MDSC的3个独立的供体来自于与三个诱导肿瘤模型中的每一个的共培养物)以土SEM显示。通过对每个被观察基因进行Student’s测试，发现这些亚群的平均表达没有统计显著性差异。
[0015]图7显示转录因子促进人类MDSC抑制功能。A.在单独培养基作为对照的情况下，通过qRT-PCR测定HIFla和STAT3在肿瘤细胞系诱导的⑶33+或⑶IIb+MDSC中的表达。平均值(数据来自6组单独的供体，两个独立的试验)以土SEM显示；*指示统计显著性，ρ〈0.05，“ + ” 指示 CD33+和 CDlIb+MDSC 两两比较中 ρ=0.06。B.p_STAT3 和 C/ΕΒΡ β 在⑶33+(上部)和⑶llb+(下部)MDSC中的免疫组化分析。显示多个染色样品的典型图像(放大倍数为200倍)。C.通过toll样受体激动剂脂多糖激活的人类MDSC亚群发生HIFl a、C/ΕΒΡ β和STAT3的上调，与此同时，还有抑制调节因子ARG-1，iNOS和N0X2的表达上调。平均值(数据来自三组单独供体)以土SEM显示。D.MDSC亚群中，与抑制功能失活相关的的转录变化。通过ATRA，舒尼替尼(sunitinib)和CXB引起的⑶33+MDSC抑制功能逆转与3丁八了3和!1正10表达(箭头)下调相关。由ATRA和舒尼替尼引起的⑶Ilb+MDSC功能性抑制与C/ΕΒΡβ表达水平的下调相关(箭头)，但是HIFl a和STAT3的mRNA表达水平没有变化。发现CXB对⑶IIb+MDSC没有抑制作用，没有观察到C/ΕΒΡ β表达水平的下调。平均值(数据来自三组单独的供体)以土SEM显示，*指示在药物处理的MDSC和没有处理的MDSC中，转录水平的统计显著性下降(Ρ〈0.05)。
[0016]图8 是 STAT3 (SEQ.1D.N0.1)的氨基酸序列。
[0017]图9 是 HIFl a (SEQ.1D.N0.2)的氨基酸序列。
[0018]图10 是 C/ΕΒΡ β (SEQ.1D.N0.3)的氨基酸序列。
[0019]图11是癌症检测和监测的临床试验。A.癌症检测和监测微创临床试验的一个实施例示意图。对主体外周血细胞进行流式细胞术分析，以髓源抑制性细胞(MDSC)的存在作为肿瘤存在的标志。通过与抑制功能直接相关的3个标记表型区分活性MDSC和正常血细胞。活性MDSC的聚集与病变分期和肿瘤负荷直接相关，通过一个简单的血液测试就能够跟踪病变分期，治疗的肿瘤应答以及肿瘤复发或进展。B和C.证实癌症主体的外周血MDSC具有⑶33+HLA-DR1? HIFl a +表型。从正常的健康志愿者⑶或HNSCC癌症主体(C)采集20ml外周血，通过密度梯度分离法分离PBMC。通过使用荧光标记的单克隆抗体，使PBMC被标记上⑶33+和HLA-DR+,然后细胞被固定和透化(permeabiIized),通过第三抗体进行HIFla的细胞内染色。在FACS Calibur流式细胞仪上，利用CellQuestPro软件以及收集至少50000个白细胞样品分析染色的样品PBMC和同型对照(阳性细胞如中间面板所示)。发现HLA-DRltw HIFl α +细胞在正常供体(η=3)中占髓系细胞的0.12~1.99%，而在头颈部癌症主体(η=2)中占髓系细胞的16.23~15.78%，图中显示了典型的点阵图。下面的列表数据描述了图11中FACS分析结果。
[0020]正常健康供体A
【权利要求】
1.一种治疗已确定对治疗有反应的癌症主体的方法，包括:给主体实施有效量的癌症治疗，其中通过一种方法确定所述癌症主体对所述治疗有反应，所述方法包括:在来自于所述主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，所述MDSC具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DRlOTHIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD66b+HLA-DRlOT/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1? HIFl a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β +。
2.一种检测或辅助检测主体体内是否有癌症的方法，包括: 在来自于所述主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，其中所述MDSC 具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlowHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD 6 6 b+HLA-D RlowH I F I a +/S T AT 3+/p S T AT 3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，和 CDllb+HLA-DR1? C/EBP β+;以及 其中所述MDSC存在则指示有癌症，所述MSDC不存在则指示没有癌症。
3.一种用于在癌症主体中确定癌症治疗效力的方法,包括: 在来自于所述主体的含有细胞的样品中检测髓源抑制性细胞(MDSC)，其中所述MDSC 具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+，CD14+HLA-DR1? HIF I a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+，CD66b+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1?HIF I a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和CDllb+HLA-DRl0WC/EBP β + ；以及 其中在癌症治疗过程中，所述MDSC减少或不存在所述MDSC则指示有效的治疗应答。
4.如权利要求1~3任一项所述的方法，其中所述的癌症选自由HNSCC、乳腺癌、淋巴瘤、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、脑癌、黑色素瘤、肉瘤、子宫内膜癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肝癌以及胰腺癌构成的组。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述的癌症选自由HNSCC、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和结肠癌构成的组。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述的癌症是淋巴癌。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述的淋巴癌选自由成熟细胞瘤、成熟T细胞或自然杀伤细胞瘤以及霍吉金斯淋巴瘤构成的组。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述的成熟细胞瘤选自由慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤(例如Waldenstrom巨球蛋白血症)、脾边缘带淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白病、重链病、结外边缘区B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、结内边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发积液淋巴瘤以及伯基特淋巴瘤/白血病构成的组。
9.如权利要求7所述的方法，其中所述的成熟T细胞或自然杀伤细胞瘤选自由T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样真菌/塞扎里综合征、原发性皮肤CD30-阳性皮肤T细胞增生性疾病、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤(非特定的)以及间变性大细胞淋巴瘤构成的组。
10.如上述任一权利要求所述的方法，其中所述含有细胞的样品包括:外周血、外周血淋巴细胞、全外周血的红细胞溶解产物、肿瘤、淋巴结组织、淋巴、脾细胞、脑脊液、胸腔积液或腹腔积液。
11.如上述任一权利要求所述的方法，其中所述的检测是使用抗体检测进行的。
12.如上述任一权利要求所述的方法，其中所述的检测是使用荧光激活流式细胞术进行的。
13.如权利要求1以及4~12任一项所述的方法，其中在实施所述癌症治疗后，所述方法进一步包括: 评估来自于所述主体的含有细胞的样品中髓源抑制性细胞(MDSC)的存在，其中所述 MDSC 具有下组表型中的一种:CD33+HLA-DRlOT HIFl a +/STAT3+，CD14+HLA-DRlOTHIFIa 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb +，CD66b+HLA_DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+, CD33+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CDllb+HLA-DR1t5wHIFl a +/STAT3+/pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + ；以及 其中所述MDSC下降则指示治疗改善，所述MSDC水平上升或没有变化则指示治疗失败。
14.一种用于从髓系细胞源产生人类MDSC的方法，包括: Ca)在足以诱导MDSC的条件下，使所述髓系细胞源与肿瘤样品接触； (b)分离被诱导的MDSC。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述的髓系细胞源选自由血液、肿瘤、淋巴、淋巴结组织、脾细胞、脑脊液、腹腔积液和胸腔积液构成的组。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述的髓系细胞源是外周血单核细胞。
17.如权利要求14~16任一项所述的方法，其中所述的髓系细胞源来自于健康供体。
18.如权利要求14~17任一项所述的方法，其中所述被诱导的MDSC的表型选自由CD33+、CD14+、CD66b+ 和 CDllb+ 构成的组。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述被诱导的MDSC的表型选自由CD33+HLA-DRl0WHIFl a +/STAT3 +，CD14+HLA-DRlowHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb +，CD66b+HLA-DRlOTHIFl a 7STAT37pSTAT3+/C/EBPb+，CD33+HLA-DR1(WHIF1 a +/STAT3+/pSTAT37C/EBPb+，CDllb+HLA-DRlowHIFl a +/STAT37pSTAT3+/C/EBPb+ 和 CDllb+HLA-DRlowC/EBP β + 构成的组。
20.如权利要求14~16任一项所述的方法，其中所述的肿瘤样品选自由HNSCC、恶性淋巴瘤、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、脑癌、黑色素瘤、肉瘤、子宫内膜癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肝癌以及胰腺癌构成的组。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述的恶性淋巴瘤选自由成熟细胞瘤、成熟T细胞或自然杀伤细胞瘤以及霍吉金斯淋巴瘤构成的组。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述的成熟细胞瘤选自由慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤(例如Waldenstrom巨球蛋白血症)、脾边缘带淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白病、重链病、结外边缘区B细胞淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、结内边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发积液淋巴瘤以及伯基特淋巴瘤/白血病构成的组。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述的成熟T细胞或自然杀伤细胞瘤选自由T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样真菌/塞扎里综合征、原发性皮肤CD30-阳性皮肤T细胞增生性疾病、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤(非特定的)以及间变性大细胞淋巴瘤构成的组。
24.一种用于鉴别候选化合物作为抑制激动剂的方法，包括:比较所述候选化合物存在或不存在时肿瘤细胞系促使分化的⑶33+细胞、⑶14+细胞、⑶66b+细胞或⑶Ilb+人类MDSC的抑制活性功能，其中所述候选化合物存在时T细胞增殖的相对下降则指示促进抑制活性。
25.一种用于鉴别候选化合物作为抑制拮抗剂的方法，包括:比较所述候选化合物存在或不存在时肿瘤细胞系促使分化的⑶33+细胞、⑶14+细胞、⑶66b+细胞或⑶Ilb+人类MDSC的抑制活性功能，其中所述候选化合物存在时T细胞增殖的相对增加则指示反抑制活性。`
【文档编号】A61P35/00GK103608028SQ201280030591
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2012年4月27日 优先权日:2011年4月28日
【发明者】艾伦L.·艾普斯坦, 梅利莎G.·莱希纳 申请人:南加利福尼亚大学