用于在细胞抑制治疗中抑制或降低抗性产生的核苷的制作方法

专利名称：用于在细胞抑制治疗中抑制或降低抗性产生的核苷的制作方法
技术领域：
本发明涉及特殊的核苷，并且还涉及包含这些核苷的药物。此外， 本发明涉及这些核苷在制备药物(尤其是用于在细胞抑制治疗中抑制或 降>[氐抗性产生的药物)中的用途。
背景技术：
化疗是癌症疾病的标准疗法。细胞抑制影响细胞分裂并因此尤其对 快速生长的肿瘤细胞是有毒性的。细胞抑制诱导凋亡，即其可导致肿瘤 细胞的细胞死亡。遗憾的是，目前在售的细胞抑制剂的无抗性治疗期通 常没有长到足以完全破坏肿瘤。为改善这种状况，已开发出了 "化学增 敏剂"来对抗目前的耐药性。
如果抗性是由"多药抗性"基因(MDR-1)的扩增(倍增)和过度 表达而引起的，那么这种抗性可通过其基因产物(P-糖蛋白)的失活而 降低(Takara K, Sakaeda T， Okumura K. An update on overcoming MDRl-mediated multidrug resistance in cancer chemotherapy. Curr. Pharm. Des. 2006; 12 (3): 273 - 86 )。
迄今，严重的副作用已阻碍了 P-糖蛋白抑制剂的使用。由于第三代 物质的毒性作用，其很可能仅能用于短期治疗，并且还仅能用于少数某 些肿瘤中，这些肺瘤的抗性完全基于所述"多药抗性"基因的作用。此 外，已开发了用于酪氨酸激酶受体或个别癌基因过表达的抑制剂。但是， 仍然仅有少数胂瘤适于治疗(Desoize B., Jardillier J.， Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2000; 36: 193 - 207 )。
由EP0 806 956已知用于在细胞抑制治疗情况下抑制抗性产生的5-取代核苷。此处引用的化合物涉及(E)-5，-(2-溴乙烯基)-2'-脱氧尿苷 (BVDU)和(E)-5'-(2-溴乙烯基)尿嘧啶(BVU)。
这些化合物防止抗性的产生并对抗尚未存在的抗性。与数十年来对比的是，在世界范围内并没有针对该技术方法的竟争(Fahrig， R.， Heinrich, J.C.， Nickel, B., Wilfert, F" Leisser, C.， Krupitza, G" Praha, C.， Sonntag， D.， Fiedler, B., Scherthan, H., and Ernst, H. Inhibition of induced chemoresistance by co-treatment with
(E)-5-(2-bromovinyl)-2，-deoxyuridine (RP101), Cancer Res. 63 (2003) 5745 - 5753 )。第 一种药物BVDU在胰腺癌患者的两个临床研究中显示 统计学上显著的效果。细胞抑制剂与BVDU共治疗的效果较之任何其 它前述化学疗法都更有效。

发明内容
因此，本发明的目的是提供在细胞抑制治疗情况下抑制或降低抗性 产生方面相比现有技术中已知的化合物具有更高有效性的物质。
此目的是通过具有权利要求1特征的核苷和具有权利要求20特征的 药物而实现的。在权利要求22中提供了该类型核苷的用途。其它的从 属权利要求显示了有利的发展。
本发明提供了通式I的核苷
其中，
Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通过氧原 子键合的前药基团，
R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Q亚烷基，
R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NR^R7或者R4与t^一;fe^示与A和R4相邻的c碳原子之间的第二键，
R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及
R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，
排除具有以下基团的化合物
Ri-Ny R2=OH， R3=R4=R5 = H;
R,Ns， R^O陽乙SL^， R3 = R4 = R5 = H;
Ri-N3， 112=0-三苯甲基，R3 = R4=R5 = H;
R! = N3， R2=裤酸酯，R3 = R4 = R5=H;
Ri-N3， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5=H;
R,冊2， R2=OH， R3=R4=R5 = H;
R,NH2， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5 = H;
I^-F, R2=OH， R3 = R4 = R5=H;
R,F， R;j-O-乙酰基，R3 = R4 = R5 = H;
Ri-F， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5 = H;
R,Cl, R2=OH， R3=R4=R5=H;
R,OH， R2=N3， R3 = R4=R5 = H;
R,OH， R2 = NH2， R3 = R4=R5 = H;
R^OH, R2 = NHS02(CH2)3-C1， R3 = R4 = R5=H;
R^OH， R2=NH-S02-(CH2)3-S03H， R3 = R4 = R5 = H;
R,OH， R2=C1, R3 = R4 = R5=H;
R^OH, R2=Br， R3 = R4 = R5 = H;
R,OH， R2 = I, R3 = R4 = R5=H;1^ = 011， R2=前药基团，R3 = R4 = R5 = H;
Rl=选自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前药基团，R2=OH， R3 = R4=R5 = H;
Rl =选自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前药基团，R2 =选自酯、氨基酸 酯、碳酸酯和醚的前药基团，R3 = R4=R5 = H; R4 = N3, R2 = N3， R3 = R4=R5 = H;
R!-NH2， R2-NHR9并且R9-H、 COCH3、 COC3H7、 COPh、 COOC2H5、 COOCH2CH=CH2、 COCH=CHCH3、 CHO或COOCH2Ph， R3 = R4=R5 = H;
R!-NHR9并且R9-COCH3、 COOC2H5， R2 = NH2， R3 = R4=R5=H;
R^NHCOOCHzPh, R2= NHCOOCH2CHCH2， R3 = R4 = R5=H;
R;NHCOOCH2Ph， R2=NH2， R3 = R4=R5 = H;
Ri-NHCOOCH2CI^CH2, R2 = NH2， R3 = R4=R5=H;以及
RfNHCHO, R2 = NHCHO， R3 = R4 = R5 = H。 同样还提供了包含通式I核苷的药物。
就用途而言，本发明特别涉及在细胞抑制治疗情况下抑制或降低抗 性的产生。因此使用通式I的核苷其中，
Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、 子键合的前药基团，
OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通过M
R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-C8亚烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NRfiR" R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及
R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，
排除具有以下基团的所述化合物
R,OH， R2 = OH， R3 = R4 = R5 = H;以及
Ri-OH， R2=前药基团，R3 = R4 = R5 = H。
其它用途涉及针对由细菌、疟原虫或利什曼原虫(￡"^附"/|/")引 起的感染性疾病的无抗性(resistance-free)治疗。
因此，可通过单次制剂(即以组合制剂的形式)或分开的制剂来实 现本申请。在分开的制剂的情况下，时间分离性施用所述两种制剂也是 可以的。
就制剂(galenics)而言并没有限制，现有技术中已知的所有剂型均 可使用。用于此目的的剂型包括例如片剂、胶嚢剂、喷雾剂、糖锭剂、 乳液剂、液体剂和安瓿。
与目前并不十分成功的用于对抗抗药性的运作模式相比，本发明的 物质介入得要早得多。其防止抗性的产生。因此对抗了疾病的病因而非 其症状。


参考以下附图和实施例，旨在更详细地解释本发明的主题，而不希 望将本发明的主题限于本文中所示的具体实施方案。
图1至12显示了根据本发明的化合物联用丝裂霉素C (MMC)相 比于单独施用MMC或施用MMC和BVDU对时间进程中AH13r细胞计数的影响。因此，AH13r细胞接受增加剂量的细胞抑制性MMC。在 所有附图中可观察到，MMC与根据本发明的化合物一起使用的效果显 著好于MMC和BVDU。
具体实施例方式
实施例 概述
根据以下所述文献数据，合成了以下反应物5，-0-(4-氯苯曱SL^)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷(P. Herdewijn， J. Balzarini, E. De Clerq， R. Pauwels， M. Baba， J. Med. Chem. 1987, 30， 1270 — 1278 )、 5'-0-曱基碌酰基 -2'-脱氧誦5-(丑)-溴乙烯基尿苷(P. M. Reddy， T. C. Bruice; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003,13; 1281 - 1286 ), 5'-0-三苯甲基-2'國脱氧-5-乙基-尿苷(C. K. Chu， R. F: Raymond, M. K: Ahn， V. Giliyar， Z. P. Gu， J. Med. Chem. 1989， 32, 612 — 617 )、 S画(2隱羟乙基)画疏代特戊酸酯(I. Lefebvre， C. P6rigaud， A. Pompon， A. -M. Aubertin， J. -L. Girardet， A. Kirn, G Gilles和J.画L. Imbach， J. Med. Chem. 1995,38， 3941 - 3950 )、 5-(E)國溴乙烯基尿普(E. De Clercq, C. Desgranges， P. Herdewijn, A. S. Jones, M. J. McLean, R. T. Walker， J. Med. Chem. 1986， 29， 213 — 217 )、 5画珙尿嘧啶(J. Asakura， M. J. Robins, J. Org. Chem. 19卯，55， 4928 - 4933 )、 2'國脱氧-2'-氟尿苷(Y. Saito， K. Utsumi, T. Maruyama, T. Kimura， I. Yamamoto， D. D. Richman， Chem. Pharm. Bull. 1994， 42， 595 — 598 )、 5國碟國2，-脱氧-2'-氟尿苷(T. Kniess, M. Grote, B. Noll, B. Johannsen, P. Naturforsch. 2003, 58b， 226 — 230)、 3画(2'-脱氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸甲酯(J. Matulic-Adamic， A. T. Daniher， A. Karpeisky， P. Haeberli， D. Sweedler， L Beigdman， Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000， 10,1299 - 1302)、 3,5-二-0-苯甲酰基-2-脱氧-2-氟-a-D-溴化阿拉 伯糖、l-(2'-脱氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶(H. G Howell， P. R. Brodfuehrer, S. R. Brundige， D. A. Benigni, C. Sapino， J. Org. Chem. 1988,53,85-88)、 5-(E)-溴乙烯^^香(P. J. Barr, A. S. Jones, G Verhelst， R. T. Walker, J. Chem. Soc. Perkin Transactions 1， 1981, 565 — 570)和 l-(2，3，6-三-0-乙SL^-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碟尿嘧啶(M. J. Robins, S. Manfredini， S. G Wood, R. J. Wanklin, B. A. Rennie， S. L. Sacks, J. Med.Chem. 1991， 34, 2275 - 2280 )、 5，-^J^2',5，-双脱氧-5画(E)-溴乙烯基尿苷、 5'-溴-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷、5'-氯-2'，5，-双脱氧-5-(E)-澳乙烯基 尿苷、5'-叠氮基-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷、3'-氯-2'，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和3'-叠氮基-2，，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷(R. Busson, L. Colla， H. Vanderhaeghe, E. De Clercq, Nucleic Acids Research, Symposium Series, 1981， 9, 49 — 52)、 3'-0-(叔丁基二甲基曱珪烷基-2，-脱氧-5-(E)-溴乙 烯基尿香(P. Herdewijn， R. Ramamurthy， E. De. Clercq， W. Pfleiderer, Helv. Chim. Acta, 1989, 72， 1739 — 1748 )、 2'國脱氧誦3，画曱lt^國5-(E)-溴乙烯 基尿苷(M. Ashwell， A. S. Jones, A. Kumar, J. R. Sayers, R. T. Walker, Tetrahedron, 1987, 43, 20, 4601 — 4608 )。
所有其它的反应物都是可商业获得的。
通过在珪胶60 ( FLUKA, 0.040 -0.063 mm)上利用指定溶剂来进行 这些物质的柱色谱纯化。对于薄层色谱而言，使用硅胶薄层(Merck， silica gel 60 F254 )。
利用85%磷酸作为外部标准品测量"P-NMR谱。 1. 3'-取代的BVDU衍生物
1.1. 3'腸卣素國BVDU
1.1.1.2'，3，-双脱氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
1.1.1.1. 2，3'-脱7J^2'-脱氧-5'-0-苯甲StJ^5-(E)-溴乙烯基尿苷
在155分钟内，将13.8 g (68 mmol)偶氮二曱酸二异丙酯和8.3 g (68 mmol)苯曱酸在75 ml DMF中的溶液滴加到15.0 g (45 mmol) BVDU和 17.8 g (68 mmol)三苯基膦的溶液中。然后在室温下再搅拌30分钟并向其 中再加入17.8 g三苯基膦。在10分钟内，向其中滴加13.8 g (68 mmol)偶 氮二甲酸二异丙酯在10 ml DMF中的溶液，在室温下对其搅拌3小时。 DC-对照(二氯曱烷/甲醇5:1)显示反应完成。将反应混合物倒入L5升 乙醚中，抽滤出沉淀物并用乙醚清洗。干燥后产量为10.1 g (53.5%)。
1.1.1.2. 2',3，-双脱氧-3'-溴-5，-0-苯曱酰基-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将3.0 g (7.16 mmol) 2，3'-脱7J^2'陽脱氧誦5'國0國苯曱酰基國5國(E)隱溴乙烯基
29尿苷和2.40 g (15.0 mmol)氢溴酸吡啶混悬于20 ml DMF中并加热至100 r。 3小时后停止反应(DC-对照，20:1的二氯甲烷/曱醇)。用200ml水 稀释所得溶液并用乙酸乙酯萃取。将纯化的乙酸乙酯相分别用100 ml 0.5
M盐酸清洗两次和用100 ml食盐溶液清洗三次，用硫酸镁干燥，过滤并 通过柱色谱先用二氯甲烷/乙酸乙酯12 : 1纯化，然后再用氯仿/甲醇25 : 1 纯化数次。产量为2.0 g (55.8%)的无色泡沫。
1.1.1.3. 2'，3'-双脱氧-3，-溴-5'-(E)誦溴乙烯基尿苷
将1.92克(3.84 mmol)2',3'-双脱氧-3'-溴-5，-0-苯曱絲-5-(E)-溴乙烯基 尿苷溶于25 ml THF中并与10 ml水和9.6 ml (19.2 mmol) 2 M氬氧化钠溶 液混合。2.5小时后停止转化(DC-对照，15 : l的二氯甲烷/曱醇)。将该 批次倒入50 ml饱和食盐溶液中并用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用硫 酸镁干燥。过滤后蒸发掉溶剂，通过柱色镨(氯仿/甲醇15 : 1)反复纯化 而得到1.3 g (81.2%)白色稳定泡沫。
iH國NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.45 (m, 1H); 2.72 (m, 1H); 3.71 (m， 2H); 4.19 (m, 1H); 4.61 (m, 1H); 5.31 (s, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.83 (d， 1H); 7.25 (d， 1H); 8.07 (s， 1H); 11.60 (s， 1H) ppm。
图1显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC)相比于 单独施用MMC或者MMC联用BVDU的结果。
l.l丄 l-(3'-氯-2,3-双脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧咬二酮
1.1.2.1 l-(5'-0-(4國氯苯曱酰基)-3'-氯-2',3'-双脱氧-p-D-苏國呋喃戊糖
基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2,4-(lH，3H)-嘧咬二酮
将2.0 g (4.24 mmol) 5'-0-(4-氯苯甲酰基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于40gHMPT中，并向其中加入1.6g(13.44mmo1)亚石克酰氯。45分钟 后停止反应。将其与水混合并用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥后，过滤并 离心除去溶剂，通过柱色i脊纯化(环己烷/乙酸乙酯7:3)。得到1.32 g (64%) 熔点为89-9lX:的无色固体。
1.1.2.2.1-(3'-氯-2'，3'- 二脱氧-P-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2,4-(lH，3H)-嘧啶二酮
将0.9 g (1.84 mmol) l-(5'-0誦(4-氯苯甲絲)画3，隱氯國2'，3，-二脱氧-P-D-苏國 呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮溶于50 ml甲醇中， 加入0.15 g (2.78 mmol)甲醇钠。2小时后，DC对照(二氯曱烷/甲醇95 : 5 ) 显示反应已结束。加入离子交换剂(DOWEX-H+ 50 WX 4 (Merck， 105238)， 甲醇活化)，过滤并再次用甲醇清洗。离心甲醇后，通过柱色镨实现纯化 (乙酸乙酯)。得到0.43 g (67%)熔点183 - 185'C的无色固体。
^-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.37 (m， 1H); 3.00 (m， 1H); 3.77 (m， 2H); 4.20 (m， 1H); 4.76 (m， 1H); 5.00 (t, 1H); 6.00 (m， 1H); 6.95 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 7.92 (s， 1H); 11.63 (s， 1H) ppm.
1.2.3'-由素-BVDU的5'-0-衍生物 1.2.1. 3'-卣素-BVDU的5'-0-酰基衍生物
1.2.1.1. 5'-0-特戊酰基-3，-氯-2'，3'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿香
将1.25 g (3.55 mmol) 2'，3'-双脱氧-3'-氯-5誦(E)誦溴乙烯基尿普、0.05 g (0.41 mmol)4-二甲基氨基吡咬溶于THF/吡咬(各自5 ml)中，冷却至0 。C并与0.54 g (4.44 mol)特戊酰氯混合。4吏其升至室温。
2小时以后，停止反应(DC对照，二氯甲烷/甲醇20 : 1)。在倒入含 有柠檬酸的50ml水溶液中后，用乙酸乙酯萃取，用磷酸盐緩沖液清洗合 并的萃取物，用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色谱实现纯 化(二氯甲烷/甲醇75 : 1 )。得到1.33 g (86.4%)熔点136'C的无色固体。
力-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.14 (s, 9H); 2.57 (m， 1H); 2.71 (m, 1H); 4.28 (m， 3H); 4.70 (m, 1H); 6.23 (m, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.29 (s， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.65 (s， 1H) ppm.
1.2.1.2. 5'-0-乙IUJ1^-(E)腸5誦(2画溴乙烯基)-3，國氯-2'，3'-双脱氧尿苷)
将310 mg (0.88 mmol) 2',3'-双脱氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于二氯 甲烷/他咬(各3ml)中并与108mg(lmmol)乙氡基甲酰氯在0。C下混合。 2小时后停止反应(DC对照，二氯甲烷/甲醇25 : 1)。用20 ml二氯曱烷 进##释，用1M盐酸清洗，然后用磷酸盐緩冲液清洗。用硫酸镁干^，
31过滤并离心除去溶剂，通过柱色谱实现纯化(氯仿/甲醇25:l)。得到200 mg (53.6%)熔点181'C的无色固体。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.23 (t, 3H); 2.65 (m， 2H); 4.15 (q， 2H); 4.37 (m, 3H); 4.71 (m, 1H); 6.22 (m， 1H); 6.87 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.78 (s， 1H); 11.64 (s， 1H) ppm.
1.2.2. 3'國卣素-BVDU的^J^酸酯
1.2.2.1. 5'-0-(叔丁氧羰基氨基乙酰基)-3'-氯-2'，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙蹄基 尿苦
将1.06 g (3 mmol) 2'，3'-双脱氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷、0.58 g (3.3 mmol) N-BOC-甘氨酸、0.45 g (3.3 mmol)l-羟基苯并三唑和0.99 g (3.3 mmol) l画(3誦二甲基絲丙基)-3画乙基碳二亚胺曱;^f匕物溶于25 ml 二氯曱 烷中。8小时后，再次各自加入同样量的N-BOC-甘氨酸、1-羟基苯并三唑 和l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺曱碘化物。再过16小时后停止反 应(DC对照，二氯甲烷/甲醇25: 1)。用水清洗二氯甲烷溶液，用硫酸钠 干燥。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色镨实现纯化(二氯曱烷/甲醇25: 1 )。得到1.03 g (68%)无色泡沫。
tH-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.37 (s， 9H); 2.57 (m, 1H); 2.71 (m, 1H); 3.72 (m， 2H); 4.23 (m, 1H); 4.33 (m, 2H); 4.69 (m， 1H); 6.24 (m， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.26 (t, 1H); 7.31 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
1.2.2.2. 5，-0-(铵乙酰基-3'-氯-2'，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷-三氟乙酸 盐
将0.81 g (1.6 mmol) 5'國0誦(叔丁ltJJl^^J^乙絲)画3'-氯-2，，3'-双脱 氧一5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于20 ml三氟乙酸中。45分钟后BOC保护基的 脱除完成(DC对照，二氯甲烷/曱醇95 :5)。离心除去三氟乙酸，将残留 物吸收在一些曱醇中并用乙醚进行处理。将沉淀物抽滤出来，用乙醚清洗 并用甲醇/乙醚再次沉淀。过滤后，用乙醚清洗并千燥，得到产量为0,38g (45.7%)的无色粉末。
iH國匪R (300 MHz, DMSO-d6): 2.59 (m， 1H); 2.75 (m， 1H); 3.87 (m， 2H);4.26 (m, 1H); 4.44 (m, 2H); 4.73 (m， 1H); 6.24 (m， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.32 (d， 1H); 7.80 (s, 1H); 8.32 (s, 3H); 11.68 (s， 1H) ppm.
1.2.2.3. 4-(叔丁氧基羰基)氨基小(3'-氯-2'，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 國5'-基)丁酸酯
将2.0 g (9.84 mmol) N画BOC-4-^Jl丁酸和1.2 g (9.84 mmol) 4國二曱基 #^吡咬溶于20 ml 二氯曱烷中。向其中加入3.46 g (9.84 mmol) 2',3'-双脱 氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷，冷却至0。C后，再向其中加入2.03 g (9.84 mmol) N，N，-二环己基碳二亚胺。使其升至室温并在室温下搅拌20小时后 停止反应(DC对照，二氯曱烷/曱醇20:l)。将该批次过滤并混合。在溶 于乙酸乙酯后，将其冷却至-20。C，过滤出沉淀物并用少量冷却至-20。C的 乙酸乙酯清洗。将滤液混合并通过柱色镨用二氯甲烷/乙酸乙酯(4:1)纯 化数次。得到3.2 g (60.6%)无色泡沫。
力曙匪R (500 MHz, DMSO-d6): 1.36 (s， 9H); 1.62 (m， 2H); 2.31 (m， 2H); 2.52 (m, 1H); 2.72 (m， 1H); 2.92 (m， 2H); 4.31 (m， 3H); 4.71 (m， 1H); 6.22 (m， 1H); 6.79 (m， 1H); 6.92 (d, 1H); 7.31 (m， 1H); 7.77 (s， 1H); 11.64 (s, 1H)。
图2显示了根据本发明的该化合物联用丝裂霉素C (MMC )相比于单 独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
1.2.2.4. 4-铵-l-(3'-氯-2',3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷-5'-基)丁酸酯-三 氟乙酸盐
将310 mg (0.577 mmol) 4-(叔丁|^^1^)#^-1-(3，-氯-2'，3'-双脱氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷-5'-基)丁酸酯溶于5 ml二氯甲烷中并与5 ml三氟乙酸 混合。在室温下搅拌30分钟后，转化完成(DC对照，二氯甲烷/甲醇20: 1)。蒸出二氯甲烷和三氟乙酸，将残留物与20 ml乙醚混合。对其搅拌2 小时直到产生微细的粉状沉淀，过滤，用乙醚清洗并在真空下干燥。得到 250 mg (78.7%)熔点89。C的无色固体。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.82 (m, 2H); 2.49 (m， 2H); 2.59 (m, 1H); 2.72 (m， 1H); 2.81 (m， 2H); 4.22 (m， 1H); 4.32 (m, 2H); 4.69 (m， 1H); 6.22 (m, 1H); 6.94 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.73 (s, 3H); 7.78 (s， 1H); 11.65 (s，
331H)。
1.2.2.5. 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰)-3'-氯-2，,3'-双脱氧-5-(E)-溴乙
婦基尿香
在0"C下，将1.00 g (2.84 mmol) 3'-氯-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20ml二氯甲烷中。然后加入618 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N-叔丁氧 基絲-L-缬氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N，N-二甲基絲吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N，N'-二环己基碳二亚胺，随后在室温下搅拌jl应 混合物20小时。滤出所得沉淀物并用二氯甲烷清洗。将滤液用稀柠檬酸溶 液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na;jS04干燥。在旋转蒸发仪 上除去溶剂。通过柱色if( CHCVMeOH， 95/5 )纯化，得到1.09 g (1.98 mmol， 70。/0)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰)-3'-氯-2'，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷白色固体，其熔点为75-76'C。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.85 (d， 3H); 0.87 (d, 3H); 1.38 (s, 9H); 1.98 (m， 1H); 2.54 (m, 1H); 2.73 (m, 1H); 3.81 (t， 1H); 4.26 (m， 2H); 4.34 (m， 1H); 4.68 (q, 1H); 6.24 (t， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.21 (d, 1H); 7.31 (d， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.6. (3'-氯-2'，3'-双脱氧-5'-0-L-缬氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸 盐
在0。C下，将600 mg (1.09 mmol) 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰 基)-3'-氯-2，,3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入1.0 ml (14 mmol)三氟乙酸，然后在室温下搅拌反应混合物3小时。在旋转蒸 发仪上除去溶剂。将粗产物与5ml乙醚混合并在室温下搅拌20小时。倾 析出溶剂，在40'C下将残留物置于旋转蒸发仪上1小时。得到540 mg (956 Hmol 880/c)的(3'-氯-2'，3，-双脱氧-5'-0-L-缬氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟 乙酸盐白色固体，其熔点为110-112°C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 0.95 (d， 3H); 0.97 (d, 3H); 2.17 (m， 1H); 2.60 (m, 1H); 2.79 (m， 1H); 3.93 (bs， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.46 (m， 2H); 4.74 (q, 1H); 6.26 (dd， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.32 (d, 1H); 7.80 (s， 1H); 8.34 (bs， 3H); 11.69 (s, 1H) ppm.1.2.2.7. 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酰)-3，-氯-2，，3，-双脱氧
-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下，将1.00 g (2.84 mmol)3，-氯-2'，3'-双脱氧-5'-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20 ml二氯曱烷中。然后加入880 mg (2.78 mmol， 1.0当量)N-叔丁氧 基餘-L-缬氨酰-L-翔氨酸、347 mg (2.84 mmol, 1.0当量)N，N-二曱基M 吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N,N'-二环己基碳二亚胺，然后在室温 下搅拌^^应混合物3天。过滤出所得的沉淀物并用二氯曱烷清洗。将滤液 用稀柠檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S(Xt干燥。 在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色谱纯化(二氯甲烷/乙酸3/1),得到 610 mg (939 nmol, 33%)的5'國0画(N-叔丁flJJli^L-缬氨酰(valvyl)画L曙 缬氨酰(valinoyl) )-3'-氯-2，,3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，其熔 点为102-103。C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.81画0.卯(m, 12H); 1.37 (s， 9H); 1.91 (m, 1H); 2.06 (m， 1H); 2.54 (m, 1H); 2.74 (m， 1H); 3.88 (t， 1H); 4.19 (t, 1H); 4.23-4.35 (m, 3H); 4.68 (q， 1H); 6.24 (t, 1H); 6.64 (d， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 8.03 (d, 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.8.3，-氯-2，，3，-双脱氧-5'-0-(L-缬氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴乙烯基尿 苷三氟乙酸盐
在0。C下，将300 mg (462 nmol)5'-0-(N-叔丁lLU^-L-缬氨酰-L-缬 氨酰)-3'-氯-2，,3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入 0.5ml(6.7mmol)三氟乙酸，然后将混合物在室温下搅拌3小时。在旋转蒸 发仪上除去溶剂。将粗产物与5ml乙醚混合并在室温下搅拌l小时。倾析 出溶剂，在40。C下将残留物置于旋转蒸发仪上1小时。得到280 mg (422 fimol， 91。/。)的[3'-氯-2',3'-双脱氧-5，-0-(L-缀氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴乙烯 基尿苷三氟乙酸盐白色固体，其熔点为169-170°C。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.91-0.96 (m， 12H); 2.08-2.14 (m, 2H); 2.59 (m, 1H); 2.76 (m, 1H); 3.71 (t, 1H); 4.22-4.26 (m, 2H); 4.31-4.38 (m, 2H); 4.68 (q， 1H); 6.25 (t, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.32 (d， 1H); 7.81 (s， 1H); 8.06 (bs， 3H); 8.56 (d， 1H); 11.68 (s， 1H) ppm.1.2.2.9 3，-叠氮基-5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酰)-2',3，-双脱
氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下，将1.02 g(2.84 mmol)3，-叠氮基-2，，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷置于20 ml 二氯甲烷中。然后加入880 mg (2.78 mmol， 1.0当量)N-叔 丁HiJl^-L-缬氨酰-L-翔氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N，N，-二甲 基^J^吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N,N，-二环己^^碳二亚胺，然后 在室温下搅拌^^应混合物24小时。过滤出所得的沉淀物并用二氯甲烷清 洗。用稀柠檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCI溶液清洗滤液，然后用Na2S04 干燥。在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(二氯曱烷/乙酸乙酯 3/1 )，得到550 mg (838 pmol, 30%)的3'國叠氮基陽5'國0-(N-叔丁？LiJl^-(L誦 缬氨酰-L-缬氨酰)-2'，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，其熔点为95 -97°C。
^國NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.81-0.91 (m， 12H); 1.37 (s， 9H); 1.91 (m， 1H); 2.07 (m， 1H); 2.38 (m， 1H); 2.51 (m， 1H); 3.88 (t， 1H); 4.01 (q, 1H); 4.19 (t, 1H); 4.30 (m， 2H); 4.45 (q， 1H); 6.12 (t, 1H); 6.64 (d， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); 8.04 (d, 1H); 11.66 (s, 1H) ppm.
1.2.2.10.3'-叠氮基-2，，3，-双脱氧-5，-0-(L-缬氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴乙烯
基尿苷三氟乙酸盐
在0。C下，将200 mg (305 ^111101)3'-叠氮基-5，-0-(]\-叔丁^^1^-(1^ 缬氨酰-L-缬氨酰)-2，，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于4 ml 二氯甲烷中， 加入0.33 ml (4.47 mmol)三氟乙酸，然后将室温下搅拌反应混合物3小时。 在旋转蒸发仪上除去溶剂。将粗产物与5 ml乙醚混合并在室温下搅拌1小 时。倾析出溶剂，在40。C下将残留物置于旋转蒸发仪上1小时。得到200 mg (298 nmol 98%)的[3，-叠氮基國2，，3'國双脱氧-5'-0-(L-缬氨酰-L-缬氨 酰)-5-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸盐白色固体，其熔点为113-115。C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.91-0.96 (m， 12H); 2.08-2.14 (m， 2H); 2.40 (m, 1H); 2.53 (m， 1H); 3.72 (t， 1H); 4.00 (q, 1H); 4.25 (m, 1H); 4.31-4.38 (m, 2H); 4.45 (q， 1H); 6.13 (t, 1H); 6.卯(d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.80 (s, 1H); 8.08 (m， 3H); 8.58 (d, 1H); 11.67 (s， 1H) ppm.
361.2.3. 3，-闺素-BVDU的^J^磷酸酯
1.2.3.1. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-氟-2，,3'-双脱氧尿苷-5'-[苯基-(甲猛-L-丙 氨酰)-磷酸酯
将255 mg (1.20 mmol)二氯磷酸苯酯和169 mg (1.20 mmol) L-丙氨酸 甲酯盐酸盐溶于或混悬于4mlTHF中。利用干水浴将其冷却到-78'C，在 此温度下滴加244 mg (2.40 mmol)溶解在4 ml THF中的三乙胺。30分钟 后停止滴加并逐渐使其升至室温，总共搅拌24小时。此后加入270 mg (0.80 mmol) 2'，3'-双脱氧-3'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿普并用干水浴冷却至-78r。向 所得的混悬液中滴加265 mg (3.22 mmol)N-甲基咪唑在5 ml THF中的溶 液。30分钟后停止滴加并逐渐使其升至室温。再过48小时停止反应(DC 对照，氯仿/乙酸乙酯3:2)。将该批次加入到20ml磷酸盐緩冲液和25ml 乙酸乙酯的混合物中，将水相分别用20 ml乙酸乙酯再萃取两次。用硫酸 镁干燥后，过滤并离心除去溶剂，通过柱色镨以二氯甲烷/乙酸乙酯3 : 2 实现纯化。得到180mg(38.8Yo)无色泡沫。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.23 (d， 3H); 2.35 (m， 1H); 2.49 (m, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.85 (m, 1H); 4.21 (m, 2H); 4.39 (m， 1H); 5.32 (m, 1H); 6.18 (m， 2H); 6.84 (d， 1H); 7.19 (m， 3H); 7.29 (d， 1H); 7.36 (m， 2H); 7.87 (s， 1H);11.67 (s， 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 5.08; 5.29 ppm.
1.2.3.2. (E)-5國(2-溴乙烯基)-3'-氯画2，，3，-双脱氧尿苷-5'誦[苯基-(甲l^画L誦丙 氨酰)]-磷酸酯
将1.19 g (5.67 mmol)二氯磷酸苯酯和0.79 g (5.67 mmol) L-丙氨酸曱酯 盐酸盐溶解或混悬于12mlTHF中。利用干水浴将其冷却到-78'C，在此温 度下滴加1.15 g (11.34 mmol)溶解在12 ml THF中的三乙胺。30分钟后停 止滴加并逐渐使其升至室温，总共搅拌24小时。
此后加入1.0 mg (2.84 mmol) 2',3'-双脱氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷 并用千水浴冷却至-78t:。向所得的混悬液中滴加1.17 g (14.2 mmol)N-甲基 咪唑在12 ml THF中的溶液。30分钟后停止滴加并逐渐^使其升至室温。再 过48小时停止>^应(DC对照，氯仿/乙酸乙酯3:2)。将该批次加入到75ml磷酸盐緩沖液和50ml乙酸乙酯的混合物中，将水相分别用40 ml乙酸 乙酯再萃取两次。用硫酸镁干燥后，过滤并离心除去溶剂，通过柱色语以 二氯曱烷/乙酸乙酯3 :2和氯仿/丙酮3:1实现纯化。得到950 mg (56.5%) 无色泡沫。
^國NMR (500 MHz, CDC13): 1.37 (m， 3H); 2.38 (m， 1H); 2.62 (m， 1H); 3.71， 3.72 (s， 3H); 3.75, 3.85 (m, 1H); 4.09 (m， 1H); 4.41 (m， 4H); 6.24， 6.32 (m， 1H); 6.71 (m， 1H); 7.41 (m, 6H); 7.66， 7.70 (s， 1H); 8.88. 8.92 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, CDC13): 2.87; 2.74 ppm.
图3显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC )相比于单 独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
1.2.3.3. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-氯-2，，3'-双脱氧尿苷-5'-[苯基-节氧基-L-丙 氨酰)-磷酸酯
将606 mg (2.87 mmol) 二氯磷酸苯酯和1010 mg (2.87 mmol) L-丙氨 酰苄基4誦曱基^^酸酯(L-alaninbenzylester 4國Methylbenzolsulfonat)溶 于15mlTHF中。利用干水浴将其冷却到-78。C，在此温度下滴加582 mg (5.75 mmol)溶解在5 ml THF中的三乙胺。35分钟后停止滴加并逐渐使其 升至室温，总共搅拌24小时。此后加入505 mg (1.44 mmol) 2，,3，-双脱氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷并用干水浴冷却至-78X:。向所得的混悬液中滴加 650 mg (8.0 mmol) N-甲基咪唑在5 ml THF中的溶液。30分钟后停止滴加 并逐渐使其升至室温。再过48小时停止反应(DC对照，氯仿/曱醇25:1 )。 将该批次加入到50 ml磷酸盐緩冲液和25 ml乙酸乙酯的混合物中，将水 相分別用25 ml乙酸乙酯再萃取两次。用硫酸镁干燥后，过滤并离心除去 溶剂，通过柱色镨以二氯甲烷/乙酸乙酯3 : 2实现纯化。得到520 mg (53.0%) 无色泡沫。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.25 (2 X d, 3H); 2.58 (m, 2H); 3.92 (m， 1H); 4.26 (m， 3H); 4.67 (m， 1H); 5.08 (m, 2H); 6.25 (m， 2H); 6.88 (2 X d, 1H); 7.18 (m， 3H); 7.36 (m, 8H); 7.81 (2 X s， 1H); 11.87 (2 X d， 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 4.40; 4.57 ppm.1.2.3.4. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-溴-2'，3'-双脱氧尿苷-5'-[苯基-(曱氣基-L-丙 氨酰)-磷酸酯
将401 mg (1.9 mmol)二氯磷酸苯酯和265 mg (1.9 mmol) L-丙氨酸曱 酯盐酸盐溶解或混悬于6mlTHF中。利用干冰^P其冷却到-78。C，在此 温度下滴加385 mg (3.8 mmol)溶解在6 ml THF中的三乙胺。30分钟后停 止滴加并逐渐使其升至室温，总共搅拌24小时。此后加入500 mg (1.26 mmol) 2，，3'-双脱氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷并用干水浴冷却至-78"C。向 所得的混悬液中滴加415 mg (5.05 mmol) N-甲基咪唑在6 ml THF中的溶 液。30分钟后停止滴加并逐渐使其升至室温。此后再过48小时停止反应 (DC对照，氯仿/乙酸乙酯1:1)。将该批次加入到25ml磷酸盐緩沖液和 25 ml乙酸乙酯的混合物中，将水相分别用20 ml乙酸乙酯再萃取两次。用 硫酸镁干燥后，过滤并离心除去溶剂，通过柱色镨实现纯化(二氯甲烷/ 乙酸乙西旨3:2)。得到386 g (48.1%)无色泡沫。
工H画NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.25 (d， 3H); 2.71 (m， 2H); 3.61 (s， 3H); 3.85 (m， 1H); 4.18 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.42 (m, 1H); 4.66 (m， 1H); 6.11 (m, 1H); 6.28 (m， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.19 (m， 3H); 7.31 (m， 1H); 7.38 (m， 2H); 7.81 (s, 1H); 11.65 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， DMSO-d6): 5.04; 5.11 ppm.
1.2.3.5. [3'-叠氮基-5-(E)-溴乙烯基-2，,3'-双脱氧尿苷l-5'-基-(甲氧基-L-丙
氨酰)-苯基磷酸酯
在陽78。C下将600 mg (2.84 mmol， 2当量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2当量)L-丙氨酸甲酯盐酸盐置于7 ml THF中。将576 mg (5.69 mmo1，4当量)三乙胺溶于7mlTHF中，在30分钟内逐滴加入，然后在室 温下搅拌20小时。将反应混合物冷却至-78"C并加入509 mg (1.42 mmol) 3，-叠氮基-2'，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分钟内向所得溶液中滴加 700 mg (8.53 mmol， 6当量)N-甲基咪唑在7 ml THF中的溶液，^在室 温下搅拌20小时。将该批次加入到25 ml磷酸盐緩沖液和25 ml乙酸乙酯 的混合物中，将水相分别用20 ml乙酸乙酯再萃取两次。将合并的有^M目 用Na2S04千燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(二
39氯甲烷/乙酸乙酯1/1;乙酸乙酯),得到250 mg (417 jtmol, 29%)的[3'-叠氮 基-5-(E)-溴乙烯基-2',3'-双脱氧尿苷-5，-基-(甲氧基-L-丙氨酰)-苯基磷酸酯 白色固体。
力誦醒R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20 (d, 3H); 1.23* (d, 3H); 2.38-2.47 (m， 4H); 3.57 (s， 3H); 3.59* (s， 3H); 3.80-3.91 (m， 2H); 4.03 (q， 1H); 4.08 (q, 1H); 4.16-4.21 (m, 1H); 4.23-4.29 (m, 3H); 4.45-4.52 (m， 2H); 6.09-6.16 (m， 4H); 6.86-6.89 (m, 2H); 7.16-7.22 (m, 6H); 7.28-7.32 (m, 2H); 7.34-7.38 (m， 4H); 7.82 (s, 2H); 11.65 (s, 1H); 11.66* (s, 1H) ppm.该物质包含非对映体 混合物(比例约为1.2 : 1 )。标有的*信号与较少的异构体相关。
31P-NMR (122 MHz， DMSO-d6): 5.06; 5.20 ppm 1.2.4. 3'-卣素-BVDU的磷酸衍生物
1.2.4.13'-氯-2，,3'-双脱氧-5-(E)-(2-溴乙烯基尿苷)-5'-基-二乙基磷酸酯
将500 mg (1.42 mmol)2，,3，-双脱氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于10 ml THF和1 ml吡咬中。在冰浴中冷却至0°C,在5分钟内滴加735 mg (4.3 mmol)氯磷酸二乙酯的溶液。18小时后，再次加入1 ml吡啶和735 mg氯 磷酸二乙酯，再18小时后，转化完成(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。将 该批次加入到20 ml磷酸盐緩冲液和25 ml乙酸乙酯的混合物中，将水相 用15 ml乙酸乙酯再萃取三次。将合并的有;M目用硫酸镁干燥。过滤并离 心除去溶剂后，通过反复柱层析(氯仿/甲醇15:1)实现纯化。所得的油 在用环己烷研磨之后固化。干燥后，得到510mg(73.6"/o)无色泡沫。
^隱NMR (300 MHz, CDC13): 1.38 (m， 6H); 2.55 (m, 1H); 2.67 (m， 1H); 4.21 (m, 5H); 4.32 (m， 2H); 4.49 (m, 1H); 6.35 (t， 1H); 6.78, (d， 1H); 7.44 (d, 1H); 7.74 (s, 1H); 8.91 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, CDC13): 0.75 ppm.
1.2.4.2. 环水杨醇基-5'-0-(E)-(2-溴乙烯基)-3'-氯-2'，3'-双脱氧尿苷基-磷
匕 曰
将265 mg (2.13 mmol)2-羟基千醇溶于5 ml THF中并冷却至-78匸(丙 酮/干冰)。此后加入327 mg磷酰氯，最后加入431 mg三乙胺在THF中的
405ml溶液。20分钟后停止反应。在-78C下再搅拌45分钟，然后移除冷浴 并使其升至室温。将形成的无色混悬液在室温下搅拌2.5小时。
此后再次冷却到-78C并加入溶解在2.5 ml THF中的466 mg (5.68 mmol)N-曱基咪唑。将500 mg (1.42 mmol)2'，3'-双脱氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯 基尿苷溶解在10 ml THF中并在30分钟内逐滴加入。逐渐使其升至室温 并在室温下再搅拌18小时。此后停止反应(DC对照，氯仿/甲烷20 : 1 )。 将该批次加入到20 ml磷酸盐緩沖液和20 ml MTBE的混合物中并用 MTBE萃取数次。将合并的萃取液用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂后， 通过柱色镨纯化(氯仿/甲醇3:2)，之后得到210 mg (28.5%)无色泡沫。
^-NMR (300 MHz, CDC13): 2.50 (m, 1H); 2.67 (m， 1H); 4.34 (m, 1H); 4.48, (m, 3H); 5.45 (m, 2H); 6.27 (m, 1H); 6.62 (m, 1H); 7.15, (m， 3H); 7.42 (m, 2H); 7.58 (m， 1H); 8.23 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， CDC13): -7.84; -7.99 ppm.
1.2.4.3.苯基-S-特戊酰基-2-硫乙基-3'-溴-2，,3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷-5'-基-磷酸酯
将1.50 g (9.24 mmol)S-(2-羟基乙基)-硫代特戊酸酯溶于80 ml THF中， 冷却至-78X:，并与0.95 g (9.44 mmol)三乙胺混合。将1.99 g (9.44 mmol) 二氯磷酸苯酯溶于5 ml THF中并在-78X:下逐滴加入。搅拌20小时，从而 逐渐使其升至室温。此后过滤，用THF (2x10 ml)清洗并蒸馏出溶剂。将 微黄色油吸收进50 ml四氯甲烷中，再次过滤，用四氯甲烷清洗残留物。 除去溶剂后，将油状残留物在真空下干燥。得到2.55 g (苯基-S-(2-羟基乙 基)-硫代特戊酸酯)-单氯磷酸酯的粗产物，其不经进一步纯化而使用。
将前述得到的粗产物(2.55 g)溶于15 ml THF中，然后加入l.Og (2.52 mmol)2',3，-双脱氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在室温下搅拌5分钟后，加 入1.24 g (15.15 mmol)N-甲基咪唑并在室温下搅拌3小时。然后停止反应 (DC对照，氯仿/甲醇20:1; 二氯曱烷/丙酮10:1)。将反应混合物倒入 100ml磷酸盐緩沖液和60ml乙酸乙酯的两相混合物中，并将水相用50 ml 乙酸乙酯分别再萃取两次。将合并的乙酸乙酯相用5%柠檬酸清洗，然后 用5%碳酸氢钠溶液清洗，最后用饱和食盐溶液清洗。用硫酸镁干燥后， 过滤并蒸馏出溶剂，用氯仿/丙酮10:1进行柱色镨，得到920 mg (52.6%)浅黄色泡沫。
iH画NMR (500 MHz， CDC13): 8.97 (s, 1H); 7.63 and 7.68 (s， 1H); 7.39 (m， 3H); 7.22， (m， 3H); 6.66 (d， 1H); 6.29 (m， 1H); 4.43 (m, 4H); 4.26 (m， 2H); 3.16 (m, 2H); 2.75 (m， 1H); 2.60 (m， 1H); 1.21 and 1.22 (s， 9H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， CDC13): -5.67; -5.90 ppm. 1.3. BVDU的3'-或5'-氣基酸酯
1.3.1. 5，-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己酰基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷
在0。C下，将7.72 g (23.2 mmol)5-(E)-溴乙烯基-2'-脱氧尿苷和9.12 g (34.8 mmol, 1.5当量)三苯基膦置于80 ml DMF中。然后将8.04 g (34.8 mmol, 1.5当量)N-叔丁fL&^J^-氣基己酸和7.03 g (34.8 mmol， 1.5当量) 偶氮二羧酸二异丙酯溶于50 mlDMF中并在1小时内逐滴加入。然后在室 温下搅拌反应混合物2小时。在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化 (CHCl3/MeOH， 95/5乙酸乙酯)，得到2.98 g (5.45 mmol， 23%)的5'誦0-(N訓 叔丁氧基羰基-s-JL&己酰基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，其熔 点为121 - 122'C。还能分离1.05 g (1.92 mmol， 8%)作为副产物的3'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-ll^己酰基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体(熔点 204-205。C)。
5'-0-(N-叔丁狄録-s-絲己絲)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
力-匪R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20-1.26 (m， 2H); 1.31-1.40 (m, 2H); 1.36 (s， 9H); 1.48-1.53 (m, 2H); 2.15-2.26 (m, 2H); 2.28-2.32 (m, 2H); 2.87 (q， 2H); 3.92 (q， 1H); 4.19-4.25 (m, 3H); 5.43 (d， 1H); 6.15 (t， 1H); 6.74 (t， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); 11.62 (s, 1H) ppm.
1.3.2. 3'-0-(N-叔丁氧基羰基《-氨基己酰基)-2，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷
3'-0-(N-叔丁llJ^^i^-氨基己S^)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 iH-醒R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20-1.26 (m， 2H); 1.31-1.40 (m, 2H); 1.36(s， 9H); 1.47-1.52 (m， 2H); 2.09-2.32 (m， 6H); 2.87 (q， 2H); 3.93-3.97 (m， 2H); 4.10-4.14 (m， 1H); 4.21-4.28 (m， 5H); 5.42 (d， 1H); 5.45 (d， 1H); 6.09-6.12 (m， 1H); 6.18-6.21 (m, 1H); 6.73 (t， 1H); 6.96 (d， 1H); 6.99 (d, 1H); 7.29-7.36 (m， 2H); 7.86 (s, 1H); 8.01 (s, 1H); 11.58 (s， 1H) ppm.存在两种旋 光异构体混合物。
1.3.3. [5'-0-(s-氨基己i^)-:2'-脱氧-S-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸盐
在0。C下，将300 mg (549 nmol)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己酰 基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入0.4 ml (5.6 mmol)三氟乙酸，然后在室温下搅拌反应混合物2小时。在旋转蒸发仪上 除去溶剂。将粗产物与5 ml乙醚混合并在室温下搅拌20小时。倾析出溶 剂并在40。C下将残留物置于旋转蒸发仪上1小时。得到300 mg (535 nmol， 98%)的[5，-0-(￡-氨基己酰基)-:2，-脱氧-S-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸盐白色 固体，其熔点为169-170。C。
丄H國NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.23-1.38 (m, 2H); 1.45-1.58 (m， 4H); 2.12-2.27 (m， 2H); 2.29-2.37 (m， 2H); 2.70-2.80 (m, 2H); 3.89-3.94 (m， 1H); 4.19-4.29 (m， 3H); 5.46 (d， 1H); 6.16 (t， 1H); 6.94 (d， 1H); 7.30 (d, 1H); 7.69 (bs， 3H); 7.77 (s， 1H); 11.62 (s, 1H) ppm.
1.3.4. [3'-0-(s-氨基己g)-2，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷l三氟乙酸盐
在0。C下，将300 mg (549 nmol)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己酰 基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入0.4 ml (5.6 mmol)三氟乙酸，然后在室温下搅拌反应混合物2小时。在旋转蒸发仪上 除去溶剂。将粗产物与5 ml乙醚混合并在室温下搅拌20小时。倾析出溶 剂并在40。C下将残留物置于旋转蒸发仪上1小时。得到280 mg (500 pmol， 91%)的[3'-0-(￡-#J^己酰基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸盐白色 固体，其在高于180'C的温度下分解。
^-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.21-1.35 (m, 2H); 1.45-1.58 (m, 4H); 2.08-2.38 (m， 6H); 2.70-2.80 (m， 2H); 3.91-3.98 (m, 2H); 4.10-4.32 (m， 6H); 5.41-5.49 (m, 2H); 6.08-6.15 (m, 1H); 6.16-6.23 (t， 1H); 6.95 (d, 1H); 7.00 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.35 (d， 1H); 7.62 (bs， 3H); 7.86 (s， 1H); 8.01 (s, 1H); 11.59 (s， 1H) ppm.该物质作为两种旋光异构体的混合物存在。
431.4. BVDU的3'-或5'-乙酰#^衍生物
1.4.1. 5，-乙酰"i^-3，-氯-2'，3',5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
1.4.1.1. 5'-乙酰絲-2',5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下将1.41 g (4.26 mmol)5，-^J^-2，，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于15 ml DMF中，加入674 mg (8.52 mmol)吡啶。滴加401 mg (5.11 mmol) 在5mlDMF中的乙酰氯，然后再搅拌2小时。将反应混合物倒于50g水 上并用浓盐酸调节pH-7。分别利用100 ml乙酸乙酯萃取混合物三次。将 有^W目用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯 化(CHCl3/MeOH， 9/1),得到870 mg (2.33 mmol， 55%)的5'画乙酰^J^ -2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体。
1.4.1.2. 5'-乙酰^^-2',3，-脱7jC-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将870 mg (2.33 mmol) 5'-乙酰^^-2'，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置 于15 ml DMF中并加入915 mg (3.49 mmol) PPH3。随后将705 mg (3.49 mmol)偶氮二羧酸二异丙酯溶于5 ml DMF中并逐滴加入。一'J、时后，将 反应混合物倒入100 ml乙醚中，抽滤出所得固体并用20 ml乙醚清洗三次。 干絲，得到720 mg (2.02 mmol， 87%)的5，國乙酰^J^画2，，3'-脱(2'，5'國双脱 氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体。
1.4.1.3. 5'-乙酰^jL-3'-氯-2，,3',5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿香
将720 mg (2.02 mmol)5，-乙酰^^-2，，3'-脱7K-2'，5'-双脱氧-5曙(E)-溴乙 烯基尿苷置于10 ml DMF中并加入467 mg (4.04 mmol)盐酸吡啶，然后在 回流下加热2小时。在旋转蒸发仪上除去溶剂，通过柱色镨纯化 (CHCWMeOH， 9/1, 二氯甲烷/乙酸乙酯1/2)，得到460 mg (1.17 mmol, 58%)的5，-乙酰^J^3'-氯-2'，3',5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，其 熔点为163-165'C。
力-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.83 (s, 3H); 2.47-2.73 (m, 2H); 3.36-3.43 (m, 2H); 4.02 (q, 1H); 4.55 (q, 1H); 6.19 (t， 1H); 6.96 (d, 1H); 7.32 (d, 1H); 7.84 (s， 1H); 8.10 (t, 1H); 11.64 (s， 1H).
1.4.2. 3'-乙酰氨基-5'-溴-2'，3'，5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
441.4.2.1. 3，-乙酰^tJ^2，,3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将l.OO g (2.79 mmol)3'-叠氮基-2，，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于 40 ml (0.1 M, pH = 7.4)磷酸盐緩冲溶液中，加入638 mg (8.38 mmol)硫代乙 酸并在6(TC下搅拌30小时。在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色语纯化 (CHCl3/MeOH， 9/1 )，得到470 mg (1.26 mmol， 45%)的3'-乙酰^J^誦2'，3'画 双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体。
1.4.2.23，-乙酰^J-5'-0-(甲基碌醃基)-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下将500 mg (1.34 mmol)3'-乙酰^J^2'，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苷置于5 ml吡啶中。滴加160 mg (1.40 mmol)甲磺酸在2 ml THF中 的溶液，随后在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒于水上，用浓盐酸调 节pH == 5并用乙酸乙酯萃取三次。将有;W目用稀盐酸和饱和NaCl溶液清 洗，用Na2S04干燥并在旋转蒸发仪上除去溶剂。得到440 mg (973 nmol， 73%)的3'-乙酰氨基-5'-0-(甲基磺酰基)-2'，3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 白色固体。
1.4.2.3. 3，-乙酰^J^5，-溴-2，，3，,5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将440 mg (973 pmol) 3'-乙酰氨基-5，-0-(曱基磺酰基)-2',3，-双脱氧 -5誦(E)-溴乙烯基尿苷置于5ml DMF中。加入253 mg (2.92 mmol) LiBr并 加热反应混合物3小时。在旋转蒸发器上除去溶剂。将反应混合物吸收进 20 ml乙酸乙酯中并利用NaCl溶液清洗有糸l4目。利用乙酸乙酯萃取水相三 次。将合并的有;M目用饱和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥并在旋转蒸发 仪上除去溶剂。通过柱色镨(氯仿/甲醇9/1)纯化，得到290 mg (663 nmol， 68%)的3'-乙酰^J^5'-溴-2，,3，，5，-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，其 熔点为178-180'C。
^-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.84 (s， 3H); 2.15-2.45 (m, 2H); 3.70-3.80 (m, 2H); 3.94 (q, 1H); 4.31 (m, 1H); 6.21 (t， 1H); 6.95 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.87 (s， 1H); 8.30 (t, 1H); 11.63 (s, 1H).
^_5'-取代的BVDU-和BVRU衍生物
2.1. 5'國卣素画BVDU2.1.1. 2'，5'-双脱氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将3.5 g (7.18 mmol)5'-0國甲基磺酰基誦2，誦脱氧譯5-(E)-溴乙烯基尿苷和 9.06 (28.72 mmol)氟化四丁基铵三水合物溶于50 ml DMF中。加入20 g分 子筛(3A)后加热到40。C。 4.5小时后停止jl应(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。在珪藻土上过滤，用DMF再次充分清洗，蒸馏出DMF。加入二甲苯 作为夹带剂(schlepper)。将残留物溶解在乙酸乙酯中并用1M盐酸清洗。 将乙酸乙酯相用磷酸盐緩冲液清洗，然后用饱和食盐溶液清洗。中和合并 的水相，然后用乙酸乙酯萃取。合并全部乙酸乙酯相并用硫酸镁干燥。过 滤和离心除去溶剂后，通过柱色镨进行纯化(氯仿/甲醇15 : 1)。得到熔 点为208'C的1.05 g (43.8%)无色固体。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.18 (m， 2H); 3.93 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.60 (m, 2H); 5.45 (d, 1H); 6.18 (d， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.28 (d， 1H); 7.74 (s, 1H); 11.60 (s, lH)ppm.
图4显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC )相比于单 独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
2.1.2. 3'-0-甲基-5'-氯-2',5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.55 g (1.56 mmol)2，,5，-双脱氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于9 ml 二^恶烷中。向其中加入3 ml曱苯、0.03 ml水和0.46 g (8.2 mmol)氢氧化钾。 2小时后形成了微细的混悬液。然后加入0.44 g (3.12 mmol)碘甲烷。l小 时后加入同样量的碘曱烷，再过一小时后再加入同样量的碘甲烷。然后停 止反应(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1 )。将该批次加入到25 ml乙酸乙酯和 25 ml磷酸盐緩冲液的两相混合物中，用乙酸乙酯萃取水相。用硫酸镁干 燥合并的有机相。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色语进行纯化(氯仿/ 曱醇60 : 1 )。得到熔点为145。C的430 mg (75.4%)无色固体。
力-匪R (500 MHz, DMSO-d6): 2.30 (m， 2H); 3.31 (s， 3H); 3.86 (m， 2H); 3.99 (m, 1H); 4.11 (m, 1H); 6.12 (m, 1H); 6.90 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.82 (s, 1H); 11.65 (s， 1H) ppm.
2.1.3. 3'-0-甲基-5'-氟-2，，5'-双脱氧-3-甲基-5-(E)-溴乙烯基尿苷 将1.24 g (3.7 mmol)2'，5'-双脱氧-5'-氟-5画(E)-溴乙烯基尿香溶于40 ml二嚅烷中并与15 ml甲苯混合。然后加入1.12 g (20 mmol)氢氧化钾和65 jil 水。在室温下搅拌2小时，形成微细混悬液。向其中加入碘甲烷1.57 g， 在搅拌2小时和4小时后，再加入同样量的碘甲烷。在室温下搅拌16小时 后，转化完成(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。将反应混合物倒入100 ml 磷酸盐緩冲溶液中并用乙酸乙酯萃取(3 x 50 ml )。用硫酸镁干燥合并的萃 取物。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色镨进行纯化(二氯甲烷/丙酮50: l;环己烷/乙酸乙酯1:1)。利用环己烷4吏产物从浓缩溶液中沉淀出来并干 燥产物。得到0.63g(46.9。/o)无色固体，其熔点为95。C。
力-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.24 (m, 1H); 2.35 (m， 1H); 3.18 (s, 3H); 3.30 (s， 3H); 4.05 (m， 1H); 4.19 (m， 1H); 4.61 (m， 1H); 4.71 (m, 1H); 6.15 (t， 1H); 6.94 (d, 1H); 7.33 (d, 1H); 7.82 (s， 1H) ppm.
2.1.4. 3'-0-曱基-5，-氟-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
2丄4丄5'-0-(4,4，-二曱ltJ^三苯曱基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将8.20 g (24.6 mmol)2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于100 ml吡啶中。 向其中加入0.75 g (6.15 mmol)4-N，N-二甲基^J^吡咬和5.06 g (50 mmol) 三乙胺。冷却至0。C，分别加入两份各5 g (总共IO.O g， 29.51 mmol)的 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯。搅拌30分钟，然后移除冷浴并4吏其升至室温。 22小时后转化完成(DC对照，二氯甲烷/甲醇15:1)。加入30ml乙醇并 搅拌20分钟后，利用甲苯数次蒸馏出吡啶。将获得的深棕色油溶于乙酸乙 酯(200 ml)中并用5%碳酸氢钾溶液清洗。用乙酸乙酯再萃取水相3次， 合并全部的乙酸乙酯相并用硫酸镁干燥。过滤并蒸馏出溶剂后，通过柱色 镨进行纯化(二氯甲烷/甲醇35 : 1，含有1%三乙胺)。得到13.57 g (86.8%) 无色泡沫。
2.1.4.2. 3'-0-曱基-5'-0-(4，4，-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷
将7.5 g (11.8 mmol)5'-0-(4，4，-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧-5-(E)-溴乙 烯基尿苷溶于150 ml 二"恶烷和50 ml甲苯的混合物中并向其中加入3.37 g (60 mmol)氢氧化钾和0.29 ml水。在室温下搅拌2小时后，得到微细的无 色混悬液。向其中加入6.71 g (47.3 mmol)碘曱烷并再搅拌1小时。然后再 次加入同样量的碘甲烷，再过2小时后再次加入一半量的碘曱烷。1.5小
47时后转化完全(DC对照，二氯甲烷/曱醇20:1;氯仿/甲醇20:1)。将该 批次倒入200ml磷酸盐緩冲溶液中，然后用乙酸乙酯萃取数次。将合并的 萃取物用硫酸镁干燥，离心除去溶剂后利用柱色语进行纯化(二氯甲烷/ 曱醇50 :1 )。得到6.32 g (82.5%)浅黄色泡沫。
2.1.4.3. 3'-0-甲基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿普
将6.32 g (9.72 mmol)3，画0隱甲基國5，腸0-(4，4，國二甲lL^三苯甲基)-2，画脱氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于120 ml氯仿中。向其中加入60 ml曱醇，冷却到 0。C后，加入1.85 g (9.72 mmol)4-甲差J黄酸一水合物。1小时后停止反应(DC 对照，二氯甲烷/甲醇15:1)。加入2.3经(2311111101)碳酸氢钾，搅拌5分钟 并与200 ml饱和食盐溶液混合。用氯仿和乙酸乙酯萃取，合并全部萃取物 并用硫酸镁干燥。过滤并蒸馏出溶剂后，用环己烷萃取，过滤并用环己烷 清洗残留物。干燥后，得到3.33§(98.5%)无色固体。
2.1.4.4. 5'-0-(4-曱基糾酰基)-3'-0-曱基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将3.33 g (9.6 mmol)3'-0-甲基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于30 ml 吡啶中并将所得溶液冷却至0。C。然后加入2.2§4-甲基苯磺酰氯，将其在 0t:下搅拌30分钟，然后4吏其升至室温。7小时后，再次加入1.55 g (8.13 mmol)4-甲基苯磺酰氯并搅拌20小时。然后转化完成(DC对照，二氯甲 烷/甲醇15:1)。将其倒于水上，搅拌30分钟并用6M盐酸酸化。用乙酸 乙酯萃取后，用1M盐酸清洗合并的萃取物，然后用磷酸盐緩冲液清洗并 用硫酸镁干燥。蒸馏出溶剂后，通过柱色谱纯化(环己烷/丙酮2:1)，得 到3.32 g (68.9%)无色固体。
2.1.4.5. 3'-0-甲基-5'-氟-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将2.5 g (4.98 mmol)5，画0-(4-甲基^t酰基)醒3'誦0画甲基-2'-脱氧-5-(E)-溴 乙烯基尿苷溶于40 ml DMF中并加入6.27 g (20 mmol)氟化四叔丁基铵三 7jC合物和15g分子筛(3A)。加热至35"C。 l小时后停止反应(DC对照， 环己烷/乙酸乙酯1:1)。通过分子筛过滤，随后利用DMF清洗。通过用 二甲苯蒸馏除去DMF，将残留物溶于乙酸乙酯中并用1M盐酸(80 ml) 清洗。用乙酸乙酯萃取7JC相并将全部合并的乙酸乙酯相利用磷酸盐緩冲溶 液清洗。在用硫酸镁干燥有^目并蒸馏出溶剂之后，通过柱色语进行纯化 (环己烷/乙酸乙酯1:1)。得到0.99 g (56.9%)无色固体，其熔点为177x:。
iH画NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.23 (m, 1H); 2.34 (m, 1H); 3.30 (s, 3H); 4.14 (m， 1H); 4.32 (m, 1H); 4.58 (m， 1H); 4.68 (m, 1H); 6.12 (m， 1H); 6.81 (d， 1H); 7.28 (d, 1H); 7.76 (s, 1H); 11.63 (s， 1H) ppm.
2.2. 5'-齒素-BVDU的酯
2.2.1. 3'-0乙錄-5'-氟-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将300 mg (0.9 mmol) 2'，5'-双脱氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷混悬于5 ml 二氯曱烷和1 ml吡咬的混合物中，冷却至0'C并与l卯mg (2.4 mmol) 乙酰氯混合。2小时后转化完成(DC对照，氯仿/甲醇15 : 1)。用25 ml 乙酸乙酯进行稀释并用2 x 25 ml 0.1 M盐酸清洗有^M目。用磷酸盐緩冲液 进行中性清洗。在减，酸镁干燥后，过滤并离心除去溶剂，通过柱色镨进行 纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯4:1)。从叔丁基甲基^/环己烷中沉淀后，得到 卯mg(27y。)无色固体，熔点81"C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.07 (s, 3H); 2.42 (m， 2H); 4.25 (m， 1H); 4.70 (m， 2H); 5.24 (m， 1H); 6.16 (m, 1H); 6.92 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.81 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
2.2.2. 5'國卣素画BVDU的^J^酸酯
2.2.2.1. 4-(叔丁氧基羰基)氨基-l-(5'-氟-2',5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿普 -3'-基)丁酸酯
将280 mg (1.33 mmol)N國BOC國4-^J^丁酸和2卯mg (2.39 mmol)4-二 甲基^J^比咬溶于20 ml 二氯甲烷中。向其中加入400 mg (1.19mmol)2',5'画 双脱氧-5，-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷和280 mg (1.34 mmol)N，N，-二环己基碳 二亚胺。2小时后停止反应(DC对照，氯仿/甲醇15:1)。将该批次过滤 并离心。溶于乙酸乙酯后，冷却至-20。C，过滤出沉淀并用少量已冷却至-20 。C的乙酸乙酯清洗。将滤液离心并通过柱色谱利用二氯曱烷/甲醇纯化(30: 1)数次。得到400 mg (64.1%)无色泡沫。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.37 (s， 9H); 1.62 (m， 2H); 2.37 (m， 2H); 2.40 (m， 1H); 2.51 (m, 1H); 2.94 (m， 2H); 4.25 (m， 1H); 4.68 (m， 2H); 5.24
49(m， 1H); 6.18 (m. 1H); 6.84 (t, 1H); 6.91 (d, 1H); 7.28 (d, 1H); 7.83 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
2.2.2.2. 4-铵國l-(5'國氟誦2',5'-双脱氧画5-(E)國溴乙烯基尿苷-3，-基)丁酸酯國三 氟乙酸盐
将2卯mg (0.56 mmol)来自2.2.2.1.的产物溶于5 ml二氯甲烷中并与5 ml三氟乙酸混合。30分钟后停止转化(DC对照，二氯甲烷/甲醇25:1)。 多次离心除去二氯甲烷后，用乙醚处理残留物，过滤出无色残留物并用乙 醚清洗。干燥后，得到270mg(卯.6"/。)无色粉末，熔点129'C。
力曙匪R (500 MHz， DMSO-d6): 11.75 (s， 1H); 7.82 (s, 1H); 7.71 (s (br.), 3H); 7.29 (d, 1H); 6.91 (d, 1H); 6.18 (m， 1H); 5.27 (m， 1H); 4.74 (m, 1H); 4.67 (m， 1H); 4.24 (m， 1H); 2.83 (m, 2H); 2.44 (m, 3H); 2.37 (m， 1H); 1.80 (m, 2H); ppm.
2.2.2.3. 4-(叔丁氧基羰基)氨基-l-(5，-氯-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 -3'-基)丁酸酯
向12 ml二氯甲烷中加入500 mg (1.42 mmol)5'-氯-2'，5'-双脱氧-5-(E)誦 溴乙烯基尿苷、290 mg (1.42 mmol)N-BOC-4-t^丁酸和175 mg (1.42 mmol)4-二甲基氨基吡咬，将所得混悬液冷却至0。C ，然后加入423 mg (1.42 mmol)l-(3-二曱基絲丙基)-3-乙M二亚胺甲^f匕物。移除冷浴后，搅拌 6小时。然后停止反应(DC对照，氯仿/甲醇10:1)。离心除去二氯曱烷， 然后将残留物吸收进乙酸乙酯中。用饱和食盐溶液清洗有W目数次。用乙 酸乙酯萃取合并的水相。合并全部有;W目并用硫酸镁干燥。过滤并离心除 去溶剂后，通过柱色镨进行纯化(二氯甲烷/甲醇50:1;环己烷/乙酸乙酯 1:1)。得到520mg(68.2o/。)无色泡沫。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.37 (s, 9H); 1.64 (m, 2H); 2.36 (m, 3H); 2.51 (m， 1H); 2.94 (m, 2H); 3.91 (m, 2H); 4.21 (m, 1H); 5.24 (m, 1H); 6.18 (m, 1H); 6.82 (t， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.87 (s, 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
2.2.2.4. 4-铵-l-(5'-氯-2',5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苦-3，-基)丁酸酯-三氟乙酸盐
将200 mg (0.372 mmol) 4-(叔丁猛絲)絲-l-(5'-氯-2，,5，-双脱氧 -5-(￡)-溴乙烯基尿苷-3，-基)丁酸酯溶于4 ml 二氯曱烷中，然后加入7 ml 三氟乙酸。30分钟后全部转化(DC对照，环己烷/乙酸乙酯l : 1)。多次 离心除去二氯甲烷后，用乙醚处理残留物，过滤无色沉淀并干燥。得到160 mg(78.0Vo)无色粉末，其熔点为148。C。
力國醒R (500 MHz, DMSO-d6): 11.75 (s， 1H); 7.87 (s, 1H); 7.72 (s, 3H); 7.30 (d, 1H); 6.91 (d, 1H); 6.20 (m， 1H); 5.25 (m， 1H); 4.21 (m， 1H); 3.91 (m, 2H); 2.83 (m, 2H); 2.35 (m， 4H); 1.81 (m， 2H) ppm.
图5显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC )相比于单 独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
2.2.2.5. 3'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰)-5'-氯-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙
在0r;下，将1.00 g (2.84 mmol) 5'-氯-2，，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20ml二氯甲烷中。然后加入618 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N-叔丁氧 基絲-L-缬氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N,N-二曱基絲吡啶和587 mg (2.84 mmol 1.0当量)N，N'-二环己基碳二亚胺，然后将反应混合物在室 温下搅拌20小时。将所得沉淀过滤并用二氯甲烷清洗。将滤液用稀柠檬酸 溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04干燥。在旋转蒸发 仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(CHCl3/MeOH， 95/5; 二氯甲烷/乙酸乙 酯，3/1),得到1.00 g (1.82 mmol, 64%)的3，-0-(N-叔丁IU^^-L-缬氨 酰)-5'-氯-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，熔点87 - 88*C 。
iH國NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.89-0.91 (m, 6H); 1.39 (s， 9H); 2.03 (m, 1H); 2.31 (m, 1H); 2.53 (m, 1H); 3.83 (t, 1H); 3.88-3.91 (m， 2H); 4.12 (m, 1H); 5.28 (m， 1H); 6.22 (t， 1H); 6.91 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.32 (d， 1H); 7.87 (s， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.6. (5'-氯-2，，5，-双脱氧-3'-0-L-缬氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸 盐在O"C下，将600 mg (1.09 mmol) 3，-0-(^叔丁#^^1&丄-缬氨酰)-5'-氯-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入1.0 ml (14 mmol)三氟乙酸，然后在室温下搅拌反应混合物2小时。在旋转蒸发仪上 除去溶剂。将粗产物与5 ml乙醚混合并在室温下搅拌20小时。倾析出溶 剂并使残留物在40X:下置于旋转蒸发仪上1小时。得到450 mg (797 jtmol， 730/0)的(5，-氯-2'，5'-双脱氧-3'-0-L-缬氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸盐 白色固体，熔点108-109匸。
iH國NMR (500 MHz， DMSO-d6): 0.97-1.01 (m， 6H); 2.19 (m, 1H); 2.37 (m, 1H); 2.58 (m, 1H); 3.89-3.97 (m， 2H); 4.00 (bs, 1H); 4.27 (m， 1H); 5.39 (m, 1H); 6.25 (dd， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.87 (s, 1H); 8.37 (bs， 3H); 11.71 (s, 1H) ppm.
2.2.2.7. 3，-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酰)-5，-氯-2',5，-双脱氧
画5-(E)-溴乙烯基尿苷
在Ot:下，将1.00 g (2.84 mmol) 5'-氯-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20 ml二氯甲烷中。然后加入卯0 mg (2.84 mmol, 1.0当量)N-叔丁氧 基n-L-缬氨酰-L-缬氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0当量)N，N-二甲基^J^ 吡啶和587 mg (2.84 mmol 1.0当量)N,N，-二环己基碳二亚胺，然后将>^应 混合物在室温下搅拌24小时。将所得沉淀过滤并用二氯甲烷清洗。将滤液 用稀柠檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04干燥。 在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色谱纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯，3/1)， 得到850 mg (1.31 mmol， 46%)的3，-0-(N-叔丁fU^^-L-缬氨酰-L-缬氨 酰)-5'-氯-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，熔点114 - 116匸。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.83-0.93 (m， 12H); 1.37 (s, 9H); 1.91 (m, 1H); 2.09 (m, 1H); 2.30 (m， 1H); 3.88-3.91 (m， 3H); 4.13-4.22 (m， 2H); 5.27 (m， 1H); 6，20 (m, 1H); 6.70 (m， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.87 (s， 1H); 8.15 (m， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.8. [5'-氯-2',5'-双脱氧-3，-0-(L-缬氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴乙烯基尿 苷三氟乙酸盐
在0t:下，将200 mg (308 nmol)3，-0-(N-叔丁fLi^l^-L-翔氨跣-L國缬
52氨酰)-5'-氯-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入 0.35ml(4.7mmol)三氟乙酸，然后将反应混合物在室温下搅拌3小时。在 旋转蒸发仪上除去溶剂。将粗产物与5 ml乙醚混合并在室温下搅拌1小时。 倾析出溶剂，将残留物在40n下置于旋转蒸发仪上l小时。得到180 mg (271 jimol, 88。/。)的[5'-氯-2，，5'-双脱氧-3'-0-(L-翔氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴 乙烯基尿苷三氟乙酸盐白色固体，熔点135-136匸。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.92-0.99 (m， 12H); 2.08-2.18 (m， 2H); 2.35 (m， 1H); 2.55 (m， 1H); 3.73 (m， 1H); 3.91 (m， 1H); 4.17 (m， 1H); 4.28 (m， 1H); 5.31 (m， 1H); 6.21 (m， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.87 (s， 1H); 8.10 (bs， 3H); 8.73 (d, 1H); 11.70 (s, 1H) ppm.
2.2.2.9. 5'-叠氮基-3，-0-(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酰)-2',5'-双脱
氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0X:下，将1.10 g (3.07 mmol) 5'-叠氮基-2，，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷置于20 ml 二氯曱烷中。然后加入950 mg (3.07 mmol， 1.0当量)N-叔 丁緣g-L-缬氨酰-L-缬氨酸、375 mg (3.07 mmol, 1.0当量)N,N-二甲基 ^J^吡咬和634 mg (3.07 mmol, 1.0当量)N,N'-二环己基碳二亚胺，随后将 反应混合物在室温下搅拌2天。过滤出所得的沉淀物并用二氯曱烷清洗。 将滤液用稀柠檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04 干燥。在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色谱纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯， 2/1 )，得到600 mg (914 jimol， 30%)的5，國叠氮基-3，-0誦(]\-叔丁氧基^&丄-缬氨酰-L-缬氨酰)-2'，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体，熔点133 -135"C。
力-画R (300 MHz, DMSO-d6): 0.83-0.94 (m， 12H); 1.38 (s， 9H); 1.93 (m, 1H); 2.10 (m， 1H); 2.34 (m， 1H); 2.53 (m， 1H); 3.58-3.76 (m, 2H); 3.91 (m, 1H); 4.04-4.24 (m, 2H); 5.24 (m， 1H); 6.22 (m， 1H); 6.72 (m, 1H); 6.94 (d， 1H); 7.32 (d, 1H); 7.92 (s， 1H); 8.14 (m， 1H); 11.70 (s, 1H) ppm.因为存在 按l:l比例的两种旋光异构体混合物，所以某些信号出现两次。
2.2.2.10. [5'-叠氮基-2',5'-双脱氧-3，-0-(L-缬氨酰-L-缬氨酰)-5-(E)-溴乙烯
基尿苷]三氟乙酸盐 在0"C下，将200 mg (305 nmol) 5'-叠氮基-3'-0-(1\-叔丁氧基羰基丄-
53缬氨酰-L-缬氨酰)-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯曱烷中， 加入0.33 ml (4.47 mmol)三氟乙酸，然后将反应混合物在室温下搅拌4小 时。在旋转蒸发仪上除去溶剂。将粗产物与5ml乙醚混合并在室温下搅拌 20小时。倾析出溶剂，将残留物在40"C下置于旋转蒸发仪上1小时。得到 160 mg (239 fimol， 78。/。)的[5'-叠氮基-2'，5'-双脱氧-3，-0-(L-缬氨酰-L-缬氨 酖)-5-(E)-溴乙烯基尿苷三^乙酸盐白色固体，熔点122画124匸。
工H誦NMR (300 MHz， DMSO-d6): 0.92-0.99 (m, 12H); 2.09-2.18 (m, 2H); 2.25-2.40 (m， 1H); 2.50-2.62 (m, 1H); 3.56-3.80 (m, 3H); 4.04-4.15 (m, 1H); 4.22-4.29 (m, 1H); 5.25 (m， 1H); 6.20 (m， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.91 (s， 1H); 8.10 (bs， 3H); 8.68 (d， 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.因为存在按1 : 2比例的两种旋光异构体混合物，所以某些信号出现两次。
2.2.3. 5'-卣素-BVDU的^tj^磷酸酯
2.2.3.1. (E)-5-(2-溴乙烯基)-5'-氯-2，,5'-双脱氧尿苷-3，-苯基-(曱狄-L画丙 氨酰)-磷酸酯
将1.55 g (7.35 mmol)二氯磷酸苯酯和1.03 g (7.35 mmol)L-丙氨酸甲酯 盐酸盐溶解或混悬于15 ml二氯甲烷中并冷却至-78t:。将三乙銜1.52 g (15 mmol))溶解在15 ml 二氯甲烷中并在-78。C下在2小时内逐滴加入。滴加 后，使其升至室温并搅拌18小时。离心除去二氯曱烷，将残留物吸收进乙 醚中并过滤出未溶解部分。然后除去乙醚，并将油状粗产物不经纯化而进 行进一步处理。
将0.57 g (1.62 mmol) 2'，5'-双脱氧曙5'-氯-5國(E)-溴乙烯基尿苷和前述获 得的粗产物溶于15 ml THF中并将溶液冷却至-78"C 。将0.82 g (10 mmol)N-曱基咪唑溶于5 ml THF并在20分钟内逐滴加入。逐渐使其升至室温并在 该温度下再搅拌20小时。然后>^应完成(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。 将该批次加入到磷酸盐緩冲液和乙酸乙酯的两相混合物中并将水相用乙 酸乙酯萃取数次。将合并的萃取物用硫酸镁干燥，过滤并离心除去溶剂。 通过柱色镨纯化(二氯甲烷/甲醇30 : 1;氯仿/丙酮5 : 1)后，得到0.62 g (64.6%)无色泡沫。
力-醒R (500 MHz, CDC13): 8.56 (s， 1H); 8.55* (s， 1H); 7.66 (s， 1H); 7.63* (s， 1H); 7.35 (m， 3H); 7.22 (m， 3H); 6.68 (d， 1H); 6.66* (d， 1H); 6.30 (m,1H); 5.11 (m， 1H); 4.50* (m, 1H); 4.37 (m， 1H); 4.02 (m, 1H); 3.91* (m, 2H); 3.83 (m, 2H)， 3.76* (s, 3H); 3.73 (s， 3H); 3.71* (m, 1H); 3.63 (m， 1H); 2.65 (m, 1H); 2.58* (m， 1H); 2.25 (m， 1H): 1.40 (d, 3H) ppm.
该物质包含非对映体混合物(比例约1.2 : 1 )。标有*的NMR信号与以 稍小比例存在的非对映体相关。
31P-NMR(202 MHz, CDC13); 2.31; 1.61 ppm
图6显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C ( MMC )相比于单 独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
2.2.3.2.[-5-(E)-溴乙烯基-5'-氟-2，，5'-双脱氧尿苷-3'-基-(甲氧基-L-丙氨 酰)-苯基磷酸酯
在-78"C下将600 mg (2.84 mmol, 2当量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2当量)L-丙氨酸甲酯盐酸盐置于7 ml THF中。将576 mg (5.69 mol， 4当量)三乙胺溶于7 ml THF中，在30分钟内逐滴加入，然后在室温下搅 拌20小时。将反应混合物冷却至-78匸并加入477 mg (1.42 mmol) 2'，5'-双 脱氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分钟内向所得混悬液中滴加700 mg (8.53 mmo1，6当量)N-曱基咪唑在7 ml THF中的溶液，然后在室温下搅拌 20小时。向25 ml ^酸盐緩冲液和25 ml乙酸乙酯的混合物中加入该批次， 并再分别用20 ml乙酸乙酯萃取7K相两次。将合并的有糸l4目用Na2S04干燥， 过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(二氯曱烷/乙酸乙酯 1/1;乙酸乙酯)，得到310 mg (523 jimol, 37。/。)的[5-(E)-溴乙烯基-5，-氟-2，,5'画 双脱氧尿苷-3'-基-(甲lL^-L-丙氨酰)-苯基磷酸酯白色固体。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.22 (d， 3H); 1.25* (d， 3H); 2.40-2.59 (m， 4H); 3.61 (s， 3H); 3.62 (8s， 3H); 3.81-3.98 (m, 2H); 4.19-4.35 (m, 2H); 4.52-4.82 (m， 4H); 5.00-5.12 (m， 2H); 6，13隱6.26 (m, 4H); 6.89* (d， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.16-7.43 (m, 12H); 7.79* (s, 1H); 7.80 (s, 1H), 11.67* (s， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
该物质包含非对映体混合物(比例约1.2 : 1)。标有*的信号与较少的 异构体相关。
55"P曙NMR (122 MHz, DMSO-d6): 3.91; 4.54 ppm.
2.2.3.3. [5'叠氮基-5-(E)-溴乙烯基-2'，5'-双脱氧尿苷-3'-基-(曱氧基-L-丙
氨酰)-苯基磷酸酯
在-78C下将600 mg (2.84 mmol， 2当量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2当量)L-丙氨酸甲酯盐酸盐置于7 ml THF中。将576 mg (5.69 mmo1，4当量)三乙胺溶于7mlTHF中，在30分钟内逐滴加入，然后在室 温下搅拌20小时。将反应混合物冷却到-78"C,加入509 mg (1.42 mmol)5，-叠氮基-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分钟内向所得的混悬液中 滴加700 mg (8.53 mmol， 6当量)N-曱基咪唑在7ml THF中的溶液，然后在 室温下搅拌20小时。将该批次加入到25 ml磷酸盐緩冲液和25 ml乙酸乙 酯的混合物中，再分别用20 ml乙酸乙酯萃取7jC相两次。将合并的有^W目 用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(二 氯曱烷/乙酸乙酯，1/1;乙酸乙酯)，得到160 mg (267 jimol， 19%)白色固体 的5'叠氮基-5-(E)-溴乙烯基-2',5'-双脱氧尿苷]-3，-基-(曱氧基-L-丙氨酰)-苯 基磷酸酯。
工H-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.22 (d， 3H); 1.25* (d， 3H); 2.35-2.58 (m, 4H); 3.57-3.70 (m, 4H); 3.62 (s, 6H); 3.87-3.92 (m, 2H); 4.13-4.18 (m， 2H); 4.94-4.99* (m, 1H); 5.00-5.05 (m， 1H); 6.14-6.22 (m, 4H); 6.90* (d, 1H); 6.93 (d, 1H); 7.16-7.24 (m， 6H); 7.28-7.32 (m， 2H); 7.36-7.42 (m， 4H)， 7.88* (s, 1H); 7.89 (s, 1H); 11.69 (s, 2H) ppm.
该物质包含非对映体混合物(比例约1.5 : 1)。标有*的信号与较少的 异构体相关。
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 3.93; 4.54 ppm. 2丄5'-溴-5，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿普
2.3.1. 2',3'-0-异丙叉-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将1.0 g (2.86 mmol)5-(E)-溴乙烯基尿苷混悬于15 ml丙酮中。向其中 加入3.13 g (30 mmol)2,2-二甲H^丙烷和0.05 g对甲^t酸。2小时后反 应完成(DC对照，氯仿/曱醇20:l)。加入(K50g碳酸氢钾、20 ml水和 25ml乙酸乙酯，进行相分离，用乙酸乙酯萃取7JC相数次。用硫酸镁干燥合并的有W目。过滤出干燥剂后蒸馏出溶剂，通过柱色谱进行纯化(氯仿
/甲醇30 : 1 )，得到0.57 g (51.2%)无色泡沫。
2.3.2. 2',3，-0-异丙叉-5，-溴-5'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.57 g (1.46 mmol)2'，3，-0-异丙叉-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.81 g (3.1 mmol)三苯基膦溶于12 ml吡啶中。滴加0.92 g (2.77 mmol)四溴甲烷在8 ml 吡啶中的溶液。卯分钟后转化完成(DC对照，氯仿/甲醇30 : 1)。利用 乙酸乙酯蒸馏出吡啶，通过柱色镨(二氯甲烷/乙酸乙酯12 : 1)纯化残留 物。得到380 mg (57.7%)无色泡沫。
2.3.3. 5'-溴-5，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.38 g (0.84 mmol)2，，3'-0-异丙叉-5，-溴-5'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于5 ml三氟乙酸和1 ml水中并在室温下溶解30分钟。然后转化完成(DC 对照，氯仿/甲醇30:l)。将其蒸干，吸收到甲醇中数次，然后再次蒸发。 通过柱色谱纯化后，得到0.25g(72.2。/。)无色固体，熔点201。C。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.71 (m， 1H); 3.81 (m， 1H); 3.99 (m, 2H); 4.19 (m, 1H); 5.41 (d, 1H); 5.55 (d， 1H); 5.82 (d, 1H); 6.93 (d, 1H); 7.30 (d， 1H); 7.81 (s, 1H); 11.68 (s， 1H) ppm.
2.4.BVDU的5，-或3'-tJ^磷酸酯
2.4.1. [5-(E)-溴乙烯基-5'-甲氧基-2'-脱氧尿苷-3，-基-(2-氰乙基)-二异 丙基^J^磷酸酯
2.4.1.1. 3'-0-(叔丁基二曱基曱硅烷基)-5'-曱氧基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯
基尿*
将1.33 g (2.97 mmol)3'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2，-脱氧-5-(E)-溴乙 烯基尿苷溶于17 ml 二嚅烷和6 ml甲苯中，加入0.88 g (15.6 mmol) KOH 和60 nl (3.3 mmol)水。在室温下搅拌反应混合物2^小时，然后加入0.85 g (6.0 mmol) Mel。再搅拌3小时后，加入120 ml磷酸盐緩冲溶液(pH = 7 ), 用50 ml乙酸乙酯萃取混合物3次。将合并的有:M目用MgS04干燥，过滤 并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色谱纯化(氯仿/曱醇100/1),得到 1.04g (2.25 mmol, 76%)白色固体的3'-0-(叔丁基二甲基甲珪烷基)-5，-甲氧
57基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。
2.4.1.2. 2'-脱氧-5'-甲緣-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将26.2 g (5.68 mmol)3，-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-5'-甲IL^-2'-脱氧 陽5國(E)-溴乙烯基尿苷溶于25 ml THF中，滴加2.69 g (8.52 mmol)在25 ml THF中的氟化四丁基铵。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在旋转 蒸发仪上除去溶剂。通过柱色语纯化(氯仿/曱醇25/1),得到1.73g (4.98 mmol， 88%)的2'-脱氧-5'-曱l^-5-(E)-溴乙烯^i^普白色固体。
2.4.1.3. [5-(E)-溴乙烯基-5，-甲lL基-2'-脱氧尿苷-3'-基-(2-氰乙基)-二异丙 基M磷酸酯
将200 mg (574 nmol)2'-脱氧-5'-甲fl^-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于5 ml 二氯曱烷中并加入200 jil(1.15mmol)二异丙基乙胺。将反应混合物冷却至 0°C，然后加入192 nl (861 nmol)2-氰乙基-二异丙基氯代^J^裤酸酯。3小 时后在0。C下，在旋转蒸发仪上除去溶剂，将残留物吸收进50 ml NaHC03 溶液中并用50 ml乙酸乙酯萃取三次。将合并的有;M目用50ml饱和NaCl 溶液清洗，用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色 镨纯化(氯仿/曱醇9/1，环己烷/乙酸乙酯1/1),得到130 mg (237 pmol, 41。/。)的[5-(E)-溴乙烯基-5，-甲lL^-2'-脱氧尿苷-3'-基-(2-氰乙基)-二异丙基 ^J^磷酸酯白色固体。
iH-NMR (300 MHz, CDC13): 1.19 (d, 12H); 2.17-2.24 (m, 1H); 2.41-2.58 (m, 1H); 2.64 (t， 2H); 3.46-3.47 (2 x s， 3H); 3.55-3.91 (m， 6H); 4.16-4.23 (m, 1H); 4.57-4.61 (m, 1H); 6.30-6.36 (m， 1H); 6.63 (d, 1H); 7.33 (d， 1H); 7.92-7.94 (2 x s， 1H); 8.23 (bs， 1H) ppm.
该物质包含非对映异构体混合物(比例约1:1)。
31P-NMR (122匪z, CDC13): 149.45; 149.51 ppm.
2.4.2. [5-(E)-溴乙烯基-3，-甲iL基-2'-脱氧尿苷-5'-基-(2-氰乙基)-二异丙 基M磷酸酯
将200 mg (574 jimol)2，-脱氧-3，-曱l^-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于5 ml 二氯曱烷中并加入200 jil (1.15 mmol)二异丙基乙胺。将反应混合物冷却到0。C，然后加入192 nl (861 jimol)2-氰乙基-二异丙基氯代^J^磷酸酯。2小 时后在0"C下，在旋转蒸发仪上除去溶剂，将残留物吸收进50 ml NaHC03 溶液中，用50 ml乙酸乙酯萃取三次。将合并的有;W目用50ml饱和NaCl 溶液清洗，用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色 谱纯化(氯仿/甲醇9/1; 二氯甲烷/乙酸乙酯1/1)，得到120 mg (219 nmol， 38%)的[5-(E)-溴乙烯基-3'-甲緣-2'-脱氧尿苷-5'-基-(2-氰乙基)-二异丙基 JL^磷酸酯白色固体。
^國NMR (300 MHz, CDC13): 1.17-1.26 (m, 12H); 1.96-2.17 (m， 1H); 2.45-2.57 (m, 1H); 2.65-2.74 (m, 2H); 3.35-3.37 (2x s, 3H); 3.55-3.65 (m， 2H); 3.81-4.09 (m， 5H); 4.17-4.25 (2x m， 1H); 6.20-6.34 (2x m， 1H); 6.74-6.83 (2x d, 1H); 7.40-7.42 (2x d, 1H); 7.85， 8.10 (2x s, 1H); 8.03 (bs， 1H) ppm.
该物质包含非对映异构体混合物(比例约1:1)。 31P-NMR(122 MHz, CDC13): 150.02; 150.48 ppm.
^_BVDU的3'，5'-二卣素衍生物
3.1.3',5'陽二氟-2',3',5'-三脱氧-5陽(E)-溴乙烯基尿苷
3.1.1. 5'-0-三苯甲基-2，3'-脱^2'-脱氧-5-乙基-尿苷
将17.84 g (35.78 mmol)5'-0-三苯甲基-2，-脱氧-5-乙基-尿苷和14.08 g (53.67 mmol)三苯基膦溶于170 ml THF中。在40分钟内滴加10.85 g (53.67 mmol)偶氮二碳酸二异丙酯在120 ml THF中的溶液。室温下搅拌l小时后， 转化完成(DC对照，氯仿/曱醇10:1)。混合后，通过柱色镨纯化(氯仿 /曱醇10 : 1)后得到13.00 g (75.6%)无色泡沫。
3.1.2. l-(5，-0-三苯曱基-2'-脱氧-P-D-苏-呋喃戊糖基)-5-乙基)-2,4-(lH， 3H)-嘧咬二酮
将14.24 g (29.63 mmol)5，-0-三苯甲基-2,3'-脱7j^2'-脱氧-5-乙基-尿苷 在500 ml乙醇和140 ml水的混合物中与3.03 g (75.85 mmol)氬氧化钠一起 加热卯分钟直至沸腾。然后停止反应(DC对照，氯仿/甲醇10:1)。将 溶液混匀，用磷酸盐緩冲液和乙酸乙酯处理并进行相分离。用乙酸乙酯萃 取水相数次。用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯相。过滤并离心除去溶剂后，
59干燥所得产物，得到13.25 g(卯.4。/。)无色固体。
3.1.3. 5'-0-三苯曱基-3'-氟-2，,3'-双脱氧-5-乙基-尿苷
在0。C下将7.73 g (15.51 mmol)l-(5'-0-三苯甲基-2'-脱氧-p-D-苏-呋喃 戊糖基)-5-乙基)-2，4-(lH,3H)-吡咬二酮溶于130 ml 二氯曱烷中，在30分钟 内滴加5.0 g (31.02 mmol)二乙基^J^三氟化硫(DAST)。在0。C下搅拌1 小时后，转化完成(DC对照，二氯甲烷/甲醇20:l)。将该批次倒入冰冷 的碳酸氩钠溶液(5%)中，进行相分离，再分别用50ml二氯甲烷萃取水 相两次。将合并的有W目用硫酸镁干燥，过滤并离心后，通过柱色镨进行 纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:1)，得到5.17 g (66.6%)无色泡沫。
3.1.4. 3'-氟-2'，3'-双脱氧-5-乙基-尿苷
将4.69 g (9.37 mmol)5'-0-三笨甲基-3，-氟-2，,3，-双脱氧-5-乙基-尿苷 溶于70 ml乙酸中并緩慢加入18 ml水。加热20分钟至90°C ，然后停止反 应(DC对照，氯仿/甲醇15:l)。将该批次置于水浴中1小时，过滤，用 80%乙酸清洗残留物。用400ml水稀释滤液并用乙酸乙酯萃取数次。将合 并的萃取物用饱和食盐溶液清洗并用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂 后，通过柱色镨进行纯化(氯仿/曱醇15:1)，得到1.33g(55.0。/。)无色固 体。
3.1.5. 5'-0-甲基磺酰基-3，國氟誦2，,3'國双脱氧誦5國乙基-尿苷
将1.33 g (5.15 mmol)3，-氟-2'，3'-双脱氧-5-乙基-尿苷溶于8 ml吡啶 中，在0。C下在20分钟内向其中加入1.78 g (15.5 mmol)甲基碌酰氯在2.5 ml THF中的溶液。使其升至室温。然后停止反应(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。将该批次倒入冰水中并搅拌15分钟。酸化(pH约1.5)后，用乙酸 乙酯进行萃取，用磷酸盐緩沖液清洗合并的萃取物。用硫酸镁干燥后，过 滤并蒸馏出溶剂，得到1.68 g (97.1%)无色泡沫。
3.1.6. 3，,5'画二氟國2，,3',5'画三脱氧-5画乙基國尿苷
将1.68 g (4.99 mmol)5'-0-曱基磺Sfe^-3'-氟-2'，3'-双脱氧-5國乙基國尿 苷和6.30 g (20.00 mmol)四丁基氟化铵三水合物溶于30 ml DMF中并加入 20g分子筛(3A)。加热1，5小时至40'C后，停止反应(DC对照，氯仿/ 甲醇20:1)。用二甲苯除去DMF并将残留物溶于乙酸乙酯中。用1M盐酸和磷酸盐緩冲液清洗乙酸乙酯相。将合并的水相中和并用乙酸乙酯萃 取。将全部合并的乙酸乙酯相用硫酸镁干燥，过滤并离心除去溶剂后，用
柱色谙纯化(氯仿/甲醇30 : 1;氯仿/乙酸乙酯3:1)数次，得到0.52 g (40.0%)无色固体。
3.1.7. 3'，5，-二氟-2'，3'，5'-三脱氧5-(E)-溴乙烯基尿苷
将520 mg (1.99 mmol)3'，5'-二氟-2'，3',5'-三脱氧-5-乙基-尿苷溶于15 ml氯仿中并加热直到沸腾。加入IO mg偶氮-双-异丁腈(AIBN)并滴加 702mg溴在2ml氯仿中的溶液。在滴加期间，用500W灯辐照。40分钟 后，所有溴都已加入，再在回流下加热l小时。冷却后，将氩气通入溶液 中并加入304mg三乙胺。在室温下搅拌1,5小时后，与磷酸盐緩冲液一起 振摇，再用乙酸乙酯萃取水相数次。用硫酸镁千燥合并的有;M目。过滤并 离心除去溶剂后，通过柱色镨进4亍多次纯化(氯仿/甲醇25:1;氯仿/乙酸 乙酯5 : 1),然后用乙醇和甲醇/水进行重结晶。得到211 mg (31.3%)无色 固体，熔点177-18(TC。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.38 (m， 2H); 4.43 (m， 1H); 4.69 (m， 2H); 5.42 (m， 1H); 6.19 (m, 1H); 6.89 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.79 (s, 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.
图7显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC)相比于 单独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
3.2.3'-氟-5，-氯-2',3，,5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将l卯mg (0.57 mmol)3'-氟-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和200 mg (0.76 mmol)三苯基膦溶于7 ml DMF中并向其中加入440 mg (2.83 mmol)四氯甲烷。在室温下搅拌18小时后，加入100 mg (0.38 mmol)三苯 基膦和220 mg (1.42 mmol)四氯甲烷。22小时后及^应完成(DC对照，二 氯甲烷/乙酸乙酯4:1)。通过与二甲苯共蒸馏除去DMF，将残留物通过 柱色镨纯化(二氯曱烷/乙酸乙酯5:1)，得到60 ml (30%)晶体，熔点203 。C。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.36 (m， 2H); 3.88 (m, 2H); 4.36 (m， 1H); 5.35 (d， 1H); 6.21 (m， 1H); 6.89 (d， 1H); 7.28 (d， 1H); 7.85 (s， 1H); 11.69 (s, 1H) ppm.3.3. 3',5'-二氯-2',3',5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.70 g (2.0 mmol)3，-氯-2',3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.70 g (2.7 mmol)三苯基膦溶于10 ml DMF中并向其中加入1.59 g (10.0 mmol)四 氯甲烷。在室温下24小时后反应完成(DC对照，二氯曱烷/乙酸乙酯4: 1)。通过与二甲苯共蒸馏除去DMF,将残留物通过柱色谦纯化(二氯甲 烷/乙酸乙酯4:1)。用正己烷/乙酸乙酯重结晶后，得到180 mg (24.3%) 晶体，熔点184'C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.59 (m， 1H); 2.76 (m， 1H); 3.94 (m, 2H); 4.27 (m, 1H); 4.71 (m， 1H); 6.26 (m, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.81 (s， 1H); 11，67 (s, 1H) ppm.
3.4. 3'-叠氮基-5'-氟-2',3,5"-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.4.1. 2'，3，-双脱氧-3'-叠氮基-5'-0-(4-甲基苯基磺酰基)-5-(E)-溴乙烯基 尿香
在0。C下将2.54 g (7.09 mmol)2'，3，-双脱氧-3'-叠氮基-5-(E)-溴乙烯基 尿苷溶于20 ml吡啶中并向其中加入2.56 g (13.42 mmol)4-甲基-苯基磺酰 氯。使其升至室温并搅拌20小时。然后反应完成(DC对照，氯仿/甲醇20 : 1)。将该批次倒入80ml冰水中并用6M盐酸酸化。用乙酸乙酯萃取，将 合并的萃取物用饱和食盐溶液清洗，用硫酸镁千燥。过滤并离心除去溶剂 后，得到3.32 g (91.5%)无色泡沫。
3.4.2. 3'-叠氮基-5，國氟-2'，3,5"-三脱氧画5画(E)画溴乙烯基尿苷
将3.32 g (6.48 mmol)2',3'-双脱氧-3'誦叠氮基-5，-0-(4-曱基苯基磺酰 基)-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于50 ml DMF中并向其中加入20 g分子筛(3 A) 和8.17 g四叔丁基氟化铵三水合物。加热至40。C6小时后，停止反应(DC 对照，环己烷/乙酸乙酯1:1)。利用二甲苯除去DMF，将棕色油状残留 物溶于乙酸乙酯中并用100mllM盐酸清洗，分别用50ml磷酸盐緩沖液 清洗两次以及用饱和食盐溶液清洗。将7JC相合并、中和并用乙酸乙酯萃取。 将全部合并的有M目用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色谱 进行纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:1;环己烷/乙酸乙酯1.2:1)，得到0.72 g(19.2。/o)无色固体，熔点135'C。
62丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.45 (m, 2H); 4.05 (m, 1H); 4.53 (m, 1H); 4.62 (m, 1H); 4.73 (m， 1H); 6.13 (m, 1H); 6.90 (d， 1H); 7.28 (d, 1H); 7.74 (s, 1H); 11.64 (s, 1H) ppm.
3.5.3'-氯-5，-溴-2',3',5，-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.5.1. 2',3，-双脱氧-3,-氯-5'-0-甲基磺絲-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下将1.0 g (2.84 mmol)3'-氯-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶 于5 ml THF/吡啶(1 : l)中，将溶解在5 ml THF中的1.10 g (9.6 mmol)甲基 磺酰氯逐滴加入。使其升至室温并搅拌总共20小时。然后转化完成(DC 对照，二氯甲烷/曱醇15:1)。将该批次倒入冰水中并搅拌15分钟。利用 2 M盐酸将其酸化并用乙酸乙酯萃取沉淀的油。用磷酸盐緩沖液清洗合并 的乙酸乙酯相并用硫酸镁干燥。过滤并蒸馏出溶剂后，得到1.22 g(定量 产量)无色泡沫。
3.5.2 3'-氯-5'-溴-2',3',5，-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将510 mg(1.18 mmol)3'-氯-5'-0-(甲基磺酰基)画5國(E)國溴乙烯基尿苷与 515mg(6mmol)溴化锂共同加热3小时。然后停止反应(DC对照，二氯 曱烷/甲醇25:1)。通过与二甲苯共蒸馏除去DMF，将残留物通过柱色谱 纯化(氯仿/甲醇60 : 1， 二氯甲烷/甲醇40 : 1以及环己烷/乙酸乙酯1.2 : 1 )，得到240 mg (49.1%)无色固体，熔点149'C 。
iH-醒R (500 MHz, DMSO-d6): 2.52 (m, 1H); 2.76 (m， 1H); 3.73 (m， 1H); 3.81 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.68 (m, 1H); 6.27 (m， 1H); 6.90 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.82 (s, 1H); 11.67 (s， 1H) ppm.
3.5.3 5'-叠氮基-3'-氯-2'，3，，5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在20 ml DMF中将3.50 g (8.15 11111101)3，-氯-5'陽0-(曱基磺^^)誦2,,3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷与1.20 g (24.4 mmo1,3.0当量)叠氮化锂一^ 热1小时。在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色语纯化(氯仿/曱醇12/1)， 得到2.12 g (5.63 mmol， 69%)白色固体的5，-叠氮基-3'-氯-2'，3'，5，-三脱氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷，熔点58 - 60。C 。
力國NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.58 (m, 1H); 2.75 (m， 1H); 3.60 (m， 1H); 3.71 (m， 1H); 4.19 (m， 1H); 4.71 (m， 1H); 6.25 (dd， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.30(d， 1H); 7.86 (s, 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.
3.5.4. 3'-叠氮基-5'-氯-2'，3，，5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.5.4.1. 5'-氯-3'-0-(曱基磺酰基)-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下将1.00 g (2.84 mmol)5'-氯-2'，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于10 ml吡咬中。向5 ml THF中滴加0.34 g (2.99 mmol)甲碌酰氯并随 后在室温下搅拌4小时。将v^应混合物倾倒于冰上，用浓盐酸调节至pH-5并用乙酸乙酯萃取3次。用稀盐酸、饱和NaCl溶液清洗有;M目，用Na2S04 干燥，在旋转蒸发仪上除去溶剂。得到1.03 g (2.40 mmol, 84%)的5，-氯 -3'-0-(甲基磺絲)-2，，5'-双脱氧-5-(￡)-溴乙烯基尿苷白色固体。
3.5.4.2. 2，3'-脱;^2'-脱氧-5'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿香
将800 mg (1.86 mmol)5'-氯醒3'國0誦(甲基磺酰基)謹2，，5'國双脱氧-5-(E)-溴 乙烯基尿普置于10 ml THF中。加入340 mg (2.23 mmol)l，8-二氮杂双环并5.4.0I十一烷-7-烯(DMU)并在回流下加热4小时。在旋转蒸发仪上除去溶 剂。通过柱色谱纯化(氯仿/甲醇9/1),得到470 mg (1.41 mmol， 76% ) 的2,3'-脱7J^2'-脱氧-5'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固体。
3.5.4.3. 3'-叠氮基-5'-氯-2',3'，5，-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将470 mg (1.41 mmol)2，3'-脱7j^5'-氯-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置 于10 ml DMF中。加入345 mg (7.05 mmol)LiN3并将>^应混合物加热20 小时。在旋转蒸发仪上除去溶剂。将反应混合物吸收进50ml乙酸乙酯中， 利用NaCl溶液清洗有;M目。利用乙酸乙酯萃取水相三次。将合并的有机 相用饱和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通 过柱色谙纯化(氯仿/甲醇9/1 )，得到370 mg (982 pmol， 70%)白色固体的 3'-叠氮基-5，-氯-2',3'，5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷，熔点124-125°C。
工H-NMR (300 MHz， CDC13): 2.33-2,57 (m， 2H); 3.58-3.66 (m， 1H); 3.80-3.87 (m, 1H); 3.96-4.02 (m, 1H); 4.21-4.28 (m, 1H); 6.14 (t, 1H); 6.68 (d 1H); 7.42 (d， 1H); 7.54， (s, 1H); 8.39 (bs, 1H).
3.6.3',5，-二溴-2',3',5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.52 g (1.31 mmol)2，，3，-双脱氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于15
64ml吡咬中并向其中加入0.69 g (2.62 mmol)三苯基膦。在10分钟内向此溶 液中滴加0.79 mg (2.36 mmol)四溴甲烷在5 ml吡咬中的溶液。1小时后停 止^^应(DC对照，氯仿/甲醇20 : 1)。将其倾倒于冰上并用37%盐酸酸 化。用乙酸乙酯萃取(3 x 40 ml )，然后用1 M盐酸和饱和食盐溶液清洗 合并的乙酸乙酯相。利用硫酸镁干燥并过滤后，将粗物质通过柱色镨纯化 (二氯曱烷/乙酸乙酯4:1)并用环己烷/乙酸乙酯再沉淀。干燥后，得到 0.21g(35.0。/o)无色固体，熔点153'C。
iH-醒R (500 MHz， DMSO-d6): 2.68 (m, 1H); 2.81 (m, 1H); 3.74 (m, 1H); 3.82 (m， 1H); 4.38 (m, 1H); 4.65 (m， 1H); 6.27 (m, 1H); 6.91 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.82 (s, 1H); 11.66 (s, 1H) ppm.
图8显示了根据本发明的此化合物联用丝裂霉素C (MMC)相比于 单独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
4. 2',3，-双脱氢-2'，3',5'-三脱氧-5'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.1 2',3，-双脱氢-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.1.1. l-(2，-脱氧-(5-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH， 3H)-嘧咬二酮
将20.07 g (47.87 mmol)2,3'-脱7jC-2，-脱氧-5'-0-苯甲跣基画5-(E)-溴乙 烯基尿苷混悬于400 ml乙醇中并与4.78 g (120 mmol)氢氧化钠在95 ml水 中的溶液混合。将其加热2.5小时至沸腾，然后停止^^应(DC对照，二氯 甲烷/甲醇10:l)。用盐酸中和后，蒸馏出溶剂至干，将残留物用丙酮/乙 酸乙酯混合物(1:1)萃取数次。得到13.5 g (84.6%)产物。
4.1.2. 5，-0-苯甲酰基-l-(2'-脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2,4(lH，3H)-嘧啶二酮
将5.0 g (15.00 mmol)l-(2，-脱氧-P-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯 基)-2,4(lH,3H)-嘧啶二酮溶于125 ml吡啶中并冷却至0"C。在此温度下向 其中滴加2.53 g (18.0 mmol)苯甲酰氯在30 ml吡啶中的溶液。60分钟后停 止滴加。在0X:下再搅拌60分钟。然后停止>^应(DC对照，二氯甲烷/ 甲醇20 :1 )。将该批次倒入400 ml冰水中，用4 x 100 ml乙酸乙酯萃取，将合并的萃取物用5%碳酸氢钾和饱和食盐溶液清洗。用硫酸镁干燥后， 过滤并蒸馏出溶剂，通过柱色语进行纯化(氯仿/甲醇20 : 1 )。得到5.52 g (84.1%)无色固体。
4.1.3. 3'-0-(甲磺酰基)-5，-0-苯曱酰基-1-(2，-脱氧-(5-0-苏-呋喃戊糖
基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH，3H)-嘧咬二酮
将3.50 g (8.00 mmol)5'-0-苯甲酰基-l-(2'-脱氧-(5-D-苏-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙)^基)-2,4(lH,3H)-嘧咬二酮溶于15 ml吡啶中并在0*€下 与1.14 g (10.00 mmol)甲磺酰氯混合。18小时后停止反应(DC对照，氯 仿/曱醇12:1)。然后将该批次倾倒于水上并使之静置20分钟。利用6M 盐酸将其酸化并用乙酸乙酯(3 x 50 ml)萃取。中性清洗合并的萃取物并 用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂后，得到3.95g(95.8。/。)微黄色泡沫。
4.1.4. 5'-0-苯曱酰基-2，,3，-双脱氢-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将3.38 (6.56 mmol)3'-0-(甲磺酰基)誦5'-0-苯曱^^-l國(2'-脱氧-p國D-苏 -呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH,3H)-嘧啶二酮溶于120 ml THF 中。向其中加入6.20 g (19.68 mmol)四正丁基氟化铵三水合物和25.0 g分 子筛(3 A)并使其在室温下搅拌20小时。然后反应完成(DC对照，二 氯甲烷/乙酸乙酯3:1)。通过珪藻土过滤，用乙酸乙酯充分清洗，浓缩至 80 ml并用3 x 80 ml饱和食盐溶液清洗。用硫酸镁干燥后，过滤并通过柱 色镨纯化，得到2.20 g (80.0%)无色固体。
4.1.5. 2',3'-双脱氢-2，，3，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将2.47 g (5.89 mmol)5'-0-苯甲酰基-2'，3'-双脱氢國2'，3'-双脱氧-5-(E)國 溴乙烯基尿苷混悬于70 ml THF中并与8.8 ml (17.6 mmol) 2 M氢氧化钠 溶液混合。5小时后转化完成(DC对照，二氯甲烷/甲醇20:1)。将该批 次倒入100 ml磷酸盐緩冲溶液(pH = 7)中并用5 x 50 ml乙酸乙酯萃取。 用硫酸镁千燥，蒸馏出溶剂并通过柱色镨纯化(氯仿/丙酮3 : 1)后，得 到1.73 g (93%)无色固体，熔点> 250X:(分解)。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.63 (m， 2H); 4.81 (m, 1H); 5.09 (t, 1H); 5.92 (m, 1H); 6.42 (m， 1H); 6.75 (d， 1H); 6.82 (m, 1H); 7.17 (d, 1H); 8.04 (s， 1H); 11.59 (s， 1H) ppm.
664.2.2',3，-双脱氬-2',3',5'-三脱氧-5'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.2.1. 5'-0-(4-甲基苯基碌酰基)-2',3，-双脱氢-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苦
将0.55 g (1.75 mmol)2',3'-双脱氢-2',3'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶 于5 ml吡咬中并在0"C下与0.67 g (3.5 mmol)4-甲基^t^酰氯混合。20小 时后转化完成(DC对照，氯仿/甲醇20 : 1)。将其倾倒于水上，搅拌20 小时并过滤。用水充分清洗后，通过氯化钧干燥。通过柱色语纯化(环己 烷/丙酮2 : 1)后，得到0.65 g (79.4%)无色固体。
4.2.2. 2'，3，-双脱氢-2',3，,5，-三脱氧誦5'誦溴画5-(E)國溴乙烯基尿苷
将0.65 g (1.39 mmol)5'-0國(4-曱基苯基碌酰基)-2'，3，-双脱氩-2'，3，-双 脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苦和0.87 g (10.00 mmol)溴化锂溶于10 ml DMF中 并加热至50t:。 3.5小时后，再加入400 mg (4.6 mmol)溴化锂，再过60 分钟后转化完成。将该批次倒入40 ml水中，过滤出沉淀的沉淀物并通过 氯化钩干燥。通过柱色谱纯化(环己烷/丙酮2 : 1 )后，得到510 mg (97.3%) 无色固体，熔点>150^！。
丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.75 (m， 2H); 5.03 (m， 1H); 6.06 (m， 1H); 6.47 (m， 1H); 6.82 (m, 1H); 6.96 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.65 (s, 1H); 11.68 (s, 1H) ppm争
^_BVDU的2'-氟衍生物
5.1.2'-氟-2，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
5.1.1. 3-(2'-脱氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸
将2.2 g (6.66 mmol)3-(2'-脱氧-2'-氟尿香-5-基)-丙烯酸甲酯溶于20 ml (40 mmol) 2 M氢氧化钠溶液中。3小时后，利用12 M盐酸将其酸化并在 冰浴中冷却l小时。过滤后，用水水清洗并在干燥器中干燥，得到1.31 g (62.1%)无色固体。
5.1.2. 2，-氟-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将1.31 g (3.97 mmol)3-(2'-脱氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸溶于40 mlDMF中，然后加入1.58 g (16.04 mmol)碳酸氢钾。在室温下搅拌20分钟 后，将溶解在20 ml DMF中的0.86 g (4.81 mmol)N-溴代琥珀酰亚胺在30 分钟内逐滴加入。在室温下搅拌4小时后，过滤，用DMF清洗残留物并 利用二甲苯蒸馏出DMF。通过柱色镨纯化(氯仿/甲醇9:1)残留物。在 乙醚中处理并干燥后，得到0.84g(62.7。/o)无色产物，熔点1821C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 3.63 (m， 1H); 3.85 (m, 1H); 3.89 (m， 1H); 4.17 (m， 1H); 5.04 (dd, 1H); 5.35 (t， 1H); 5.61 (d， 1H); 5.88 (d， 1H); 6.75 (d, 1H); 7.21 (d， 1H); 8.19 (s， 1H); 11.65 (s, 1H) ppm.
5.2. 2'-氟-5'-溴-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.25 g (0.71 mmol)2'-氟-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.37 g (1.42 mmol)三苯基膦溶于10 ml吡啶中。将0.42 g (1.28 mmol)四溴曱烷溶于5 ml 吡啶中并在5分钟内逐滴加入。l小时后停止反应(DC对照，氯仿/甲醇10 : 1)。利用曱苯除去吡咬后，通过柱色谱进行纯化(氯仿/曱醇30 : 1)，得 到0.23 g (78%)无色固体，熔点223"C。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.78 (m, 1H); 3.85 (m， 1H); 4.0 (m, 1H); 4.13 (m, 1H); 5.19 (dd， 1H); 5.87 (d, 1H); 5.91 (dd， 1H); 6.89 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 11.72 (s， 1H) ppm.
5.3. 5-(E)-2-溴乙烯基)-l-(2'-脱氧-2'-氟-B-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶 5.3.1 5-碘-l-(2，-脱氧-2，-氟-3',5'-双-0-苯甲酰基-B-D-阿拉伯呋喃糖基)
尿嘧啶
将7.08 g (29.75 mmol)5-械尿嘧啶混悬于105 ml 1，2-二氯乙烷中。向 其中加入13.32 g (65.47 mmol) N，O-双-三甲基甲硅烷基乙酰胺(BSA)并在 室温下搅拌5小时，得到澄清无色溶液。向其中加入11.40 g (26.9 mmol)3,5-双-0-苯甲酰基-2-脱氧-2-氟-a-D-阿拉伯糖基溴化物。将其在回流下加热22 小时。然后转化完成(DC对照，氯仿/甲醇100:1)。将该批次用450 ml 乙酸乙酯稀释并用400ml磷酸盐緩沖液(pH = 7)处理。分离有W目并用 3 x 150 ml乙酸乙酯萃取水相。将合并的女;W目用硫酸镁干燥后，过滤出 干燥剂并蒸愤出溶剂，用异丙醇重结晶。得到8.47g(54,3。/。)无色产物。5.3.2. 5-碟-l-(2，-脱氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶
将8.14 (14.03 11111101)5國凑1-(2'-脱氧-2'陽氟-3，，5'-双國0國苯曱酰基-卩"0-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬溶于250 ml THF中并与50 ml (100 mmol) 2 M氢 氧化钠溶液混合。4小时后停止反应。将溶液中和并用乙酸乙酯萃取数次。 将合并的萃取物用硫酸镁干燥。过滤并离心除去溶剂后，通过柱色镨进行 纯化(氯仿/甲醇10 : 1 )，得到4.80 g (91.8%)无色固体。
5.3.3. 3-((2'-脱氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)-丙烯酸甲酯
将0.75 g (2.84 mmol)三苯基膦、0.34 g (1.52 mmol)乙酸把(II)和6.17 g (61 mmol)三乙胺在160 ml 1,4-二^恶烷中加热至80"C。形成深红色。将其 在此温度下加热10分钟，然后加入6.54 g (76 mmol)丙烯酸甲酯、4.80 g (12.9 mmol)5-碘-l-(2，-脱氧-2'-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶和40 ml 1,4-二嚅烷。在回流下加热l小时后，转化完成(DC对照，氯仿/甲醇9:1)。 冷却后，将其通过硅藻土与未溶解部分过滤分离并用THF充分清洗直到 滤液变为无色。离心滤液，将油状残留物通过柱色镨纯化(氯仿/曱醇10: 1),得到2.72 g (54.4%)无色固体。
5.3.4. 3-((2'-脱氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)-丙烯酸
将2.72 g (8.25 mmol)3-((2，-脱氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶 -5-基)-丙烯酸甲酯溶于40 ml (80 mmol) 2 M氢氧化钠溶液中。4小时后停 止^^应(DC对照，氯仿/甲醇8:1)。将其用12 M盐酸酸化并在水浴中静 置1小时。抽滤出沉淀，用水水清洗并在干燥器中干燥。得到2.61 g (100%) 无色产物。
5.3.5. 5-(E)-(2-溴乙烯基)-l-(2'-脱氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶
将2.61 g (7.9 11111101)3-((2'-脱氧-2，-氟-&-0-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)國丙烯酸溶于60 ml DMF中并与3.2 g (32 mmol)碳酸氢钾混合。在室温 下搅拌30分钟，然后在50分钟内滴加1.78 g (10 mmol)在30 ml DMF中 的溶液。在室温下再搅拌3.5小时后，过滤出未溶解部分，将残留物用丙 酮/甲醇1 : 1充分清洗并离心。通过与二曱苯共蒸馏除去DMF。通过柱色 镨纯化(氯仿/甲醇9 : 1以及二氯甲烷/乙酸乙酯1 : 2)后，得到1.51 g (54.5%)无色固体，熔点202n。
69卫H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.62 (m， 1H); 3.65 (m， 1H); 3.81 (m, 1H); 4.25 (dq, 1H); 5.06 (dt, 1H); 5.14 (t, 1H); 5.89 (d, 1H); 6.11 (dd， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 7.99 (s， 1 H); 11.75 (s, 1H).
5.4. 5-(EW2-溴乙烯基M-(2，,5'-双脱氧-2'-氟-5'-溴-B-D-阿拉伯呋喃糖 基)-尿嘧啶
将0.60 g (1.71 mmol)5-(E)-(2-溴乙烯基)-l陽(2'誦脱氧-2'國氟-p-D-阿拉伯 呋喃糖基)尿嘧啶和950 mg (3.62 mmol)三苯基膦溶于10 ml吡啶中。然后 在10分钟内加入1.08 g (3.25 mmol)四溴甲烷在10 ml吡咬中的溶液。1.5 小时后反应完成(DC对照，氯仿/甲醇10:1)。利用曱苯蒸馏出吡啶，将 残留物通过柱色谱纯化(氯仿/曱醇30 : 1 )，得到0.63 g (89.0%)无色产物， 熔点237"C。
!H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 3.79 (m， 2H); 4.07 (m, 1H); 4.26 (dq， 1H); 5.09 (ddd, 1H); 6.16 (d, 1H); 6.23 (dd, 1H); 6.98 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.74 (d， 1H); 11.80 (s, 1H) ppm.
^_BVDU的2',2'-二氟衍生物
6.1. l-(2'-脱氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)-溴乙錄基尿 嘧啶和l-(2，-脱氧-2',2'-二氟-(3-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙 烯基尿嘧啶
6.1.1. l-(3，，5，-二-0-苯甲酰基-2',2'-二氟-a-D-呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)誦溴 乙烯基尿嘧咬和l-(3，,5，-双-0-苯甲酰基-2，,2，-二氟-p-D-呋喃戊糖
-1 '-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬
将1.89 g (8.70 mmol)5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶混悬于40 ml 1,2-二氯乙 烷中并加入4.28 g (19.23 mmol)三曱基甲硅烷基三氟甲磺酸酯和2.14 g (177 mmol) 2,4,6-三甲基他啶。1小时后，得到澄清溶液。将3.98 g (8.7 mmol)2-脱氧-2,2-二氟-D-呋喃核糖-3,5-二苯甲酸酯-l-甲磺酸酯(a/p混合 物)溶于25 ml 1,2-二氯乙烷中并在20分钟内逐滴加入。然后，在10分钟 内逐滴加入在15 ml 1,2-二氯乙烷中的1.94 g (8.7 mmol)三甲基曱^^基三氟甲磺酸酯并在回流下加热18小时。DC对照(氯仿/甲醇10 : 1和100: l)表明转化完全。蒸馏出溶剂并将油状残留物溶于80ml乙酸乙酯中。在 用2 x 80 ml 1 M盐酸、2 x 80 ml饱和食盐溶液和1 x 80 ml磷酸盐緩沖液 清洗后，用硫酸镁进行干燥。过滤并离心除去溶剂后，将粗物质通过柱色 镨纯化(氯仿/甲醇125 : 1 )，得到3.1 g (61.7%)(o/p = 1.2)无色泡沫。通过反复柱色镨(环己烷/乙酸乙酯3:1)进行a和p异头物的分离。 得到1.49 g a-异头物和1.15 g p-异头物。6.1.2. l-(2，-脱氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶将1.49 g (2.58 mmol)l-(3'，5，-双-0-苯甲酰基-2',2'-二氟-a-D-呋喃戊糖 國l'隱基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬溶于55 ml THF中并加入13 ml (26 mmol) 2 M氢氧化钠溶液。3小时后将其中和并用乙酸乙酯萃取。用硫酸镁干^， 过滤并离心除去溶剂，通过柱色谱进行纯化(氯仿/甲醇20 :1以及二氯甲 烷/甲醇20:1)。干燥后，得到0.82g(86。/o)无色固体，熔点192匸。^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.56 (m, 1H); 3.65 (m， 1H); 4.35 (m, 2H); 5.08 (s, 1H); 6.22 (m， 1H); 6.34 (d， 1H); 7.02 (d, 1H); 7.32 (d, 1H); 7.85 (s， 1H); 11.81 (s, 1H) ppm.6.1.3. l-(2'-脱氧-2'，2'-二氟-(5-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶将1.15 g (1.99 mmol)l-(3'，5'-双-0-苯甲^L^-2',2，-二氟-l5-D-呋喃戊糖 -l'-基)-S-(E)-溴乙烯基尿嘧吱溶于55 ml THF中并与10 ml (20 mmol)氢氧 化钠溶液混合。如上针对a-异头物所述，类似地进行处理和通过柱色i普的 纯化。得到740mg(100o/。)无色固体，熔点189"C。丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.64 (m, 1H); 3.81 (m, 1H); 3.87 (m， 1H); 4.22 (m， 1H); 5.36 (t, 1H); 6.06 (t, 1H); 6.33 (d， 1H); 6.83 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 8.05 (s， 1H); 11.86 (s, 1H) ppm.6.1.4. l-(5'-氯-2'，5'-双脱氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴71乙烯基尿嘧啶将350 mg (0.95加11101)1-(2'-脱氧-2'，2'-二氟-01-0-赤-呋喃戊糖誦1'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬溶于8 ml DMF中。加入337 mg (1.29 mmol)三 苯基膦，然后加入729 mg (4.74 mmol)四氯甲烷。在室温下搅拌20小时后， 转化完全(DC对照，氯仿/甲醇15 : 1)。加入2 ml甲醇后，利用二甲苯 除去DMF并将棕色残留物通过柱色镨纯化(氯仿/曱醇30 : 1)数次，得 到240 mg (65.2%)无色产物，熔点208*C 。^-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 3.87 (m， 1H); 3.94 (m， 1H); 4.42 (m， 1H); 4.61 (m, 1H); 6.31 (m， 1H); 6.61 (s (br.)， 1H); 6.99 (d， 1H); 7.33 (d， 1H); 7.89 (d， 1H); 11.82 (s， (br.)， 1H) ppm.6.1.5. l-(5'-氯-2，，5'-双脱氧-2，，2'-二氟-P-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)國溴 乙烯基尿嘧啶类似如上所述，转化520 mg (1.41 mmol)l-(2'-脱氧-2，，2'-二氟-p-D-赤 -呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶、500mg(l.卯mmol)三苯基膦，并 且用1083 mg (7.04 mmol)四氯曱烷处理。通过柱色傳(氯仿/甲醇20 : 1) 进4亍多次纯化后，得到460mg(84.1。/o)无色产物，熔点191t:。力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.99 (m， 2H); 4.05 (m， 1H); 4.25 (m, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.57 (d， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.33 (d, 1H); 7.76 (s, 1H); 11.卯(s， 1H) ppm.7. l-(B-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶7.1 3-(1-(2,3,6-三-0-乙酰基-P-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧啶-5-基)-丙烯酸甲酯将0.84 g (3.2 mmol)乙酸钽(II)、 0.89 g (3.38 mmol)三苯基膦和7.35 g (73.56 mmol)三乙胺在135 ml 二哺烷中加热至。产生深红色溶液。在 此温度下将其加热IO分钟，先加入22.74 g (264 mmol)丙烯酸甲酯，然后 再加入9.0 g (18.13 mmol)l-(2,3，6-三-0-乙跣基-P-D-阿拉伯呋喃糖基)-5誦捵 尿嘧咬和90 ml 二嚅烷。在回流下加热2,5小时后，停止反应(DC对照， 二氯甲烷/乙酸乙酯5:2)。冷却后，将其用乙酸乙酯稀释，通过过滤与未 溶解部分分离并蒸发滤液。将残留物通过柱色语纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:2),得到6.3 g (76.5%)无色泡沫。7.2. 3-(l-(B-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧咬-5-基)-丙烯酸将6.3 g (13.86 mmol)3-(l-(2，3，6-三-0-乙酰基-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)画 尿嘧咬-5-基)-丙烯酸甲酯溶于140 ml THF中并与140 ml (280 mmol) 2 M 氢氧化钠溶液混合。5小时后，浓缩溶液并用12M盐酸酸化。将该批次保 持在冰浴中l小时，抽滤出沉淀并用冰水清洗。在干燥器中干燥后，得到 3.45g(79.4。/o)无色固体。7.3. l-(B-D-阿拉伯吹喃糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶将3.46 g (11.01 mmol)3-(l-(p-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧咬-5-基)-丙烯 酸溶于100 ml DMF中并加入5.51 g (55.05 mmol)碳酸氢钾。室温下搅拌 30分钟后，在1小时内滴加2.37 g (13.4 mmol)N-溴琥珀酰亚胺的溶液。在 室温下搅拌4.5小时后，利用二甲苯除去DMF,将残留物通过柱色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇10:1)。从甲醇中重结晶后，得到无色晶体产物(0.84g， 21.8% )。力-麗R (500 MHz， DMSO-d6): 3.63 (m， 2H); 3.74 (m， 1H); 3.91 (m， 1H); 4.03 (m， 1H); 5.11 (t， 1H); 5.45 (d, 1H); 5.55 (d， 1H); 5.97 (d, 1H); 6.87 (d， 1H); 7.24 (d, 1H); 7.89 (s， 1H); (11.57 (s， 1H) ppm.^_5'-脱氧-BVDU和3',5'-双脱氧-3'-卣素-BVDU8.1. 5'-脱氧-BVPU8.1.1. 2',5'-双脱氧-5，-硤-5-乙基-尿普将8.0 g (31.22 mmol)2，-脱氧-5-乙基-尿苷和10.66 g (40.64 mmol)三苯 基膦溶于50 ml吡吱中。分几部分向其中加入10.32 g (40.64 mmol)碘。4 小时后转化完成(DC对照，二氯甲烷/甲醇15:1)。真空下蒸馏吡啶，将 残留物溶于乙酸乙酯中并用1M盐酸清洗。用乙酸乙酯萃取水相数次，将 合并的乙酸乙酯相用磷酸盐緩冲液清洗。用石危酸镁干燥后，过滤并用乙酸 乙酯清洗，蒸馏出溶剂至干，用甲苯和二氯甲烷清洗残留物。得到7.5 g (65.6%)微黄色的产物。8.1.2. 2'，5'-双脱氧-5-乙基-尿苷将4.68 g (12.78 mmol)2',5，-双脱氧-5'-硪國5-乙基画尿苷和1.08 g (27.0 mmol)氢氧化钠溶于280 ml乙醇中，与780 g氩化催化剂(钯活性炭，10% Pd )混合并氢化12小时。然后停止反应(DC对照，二氯甲烷/曱醇10 : 1 )。 过滤出氢化催化剂后，蒸发至干，将残留物与磷酸盐緩冲液混合。抽滤出 沉淀物并用冰水清洗，用氢氧化钾干燥。用乙酸乙酯萃取滤液数次。将合 并的萃取物用硫酸镁干燥。过滤出干燥剂后，用乙酸乙酯清洗，蒸发至干。 得到总共2.97 g (96.7%)无色固体。8.1.3. 2'，5，-双脱氧-3'-0-苯甲酰基-5-乙基-尿苷将3.28 g (13.65 mmol)2',5'-双脱氧-5-乙基-尿苷溶于35 ml吡咬中并 在Or下与2.14 g (15.21 mmol)苯曱酰氯混合。30分钟后，移除冷浴并在 室温下再搅拌l小时。然后转化完成。利用甲苯除去吡啶并将残留物溶于 氯仿中。利用O.IM盐酸清洗并用磷酸盐緩冲液中性清洗。利用硫酸镁干 燥有^4目后，过滤出干燥剂并离心除去溶剂，通过柱色谱进行纯化(二氯 曱烷/丙酮10:1)，得到3.82g(81,3。/n)白色泡沫。8.1.4. 2',5，-双脱氧-3'-0-苯曱酰基-5-(E)-溴乙烯基尿苷将2.79 g (8.1 mmol)2',5，-双脱氧-3'-0-苯甲酰基-5-乙基-尿苷和50 mg AIBN溶于45 ml氯仿中并加热到沸腾。在1.5小时内向其中滴加2.88 g (18 mmol)溴在15ml氯仿中的溶液。加热至沸腾并再保持0.5小时，冷却至室 温后，向溶液中通入氩气l小时。然后向溶液中加入2.88 g (19.8 mmol)三 乙胺并在室温下搅拌l小时。蒸餾出氯仿，将残留物吸收进乙酸乙酯中并 用饱和食盐溶液清洗。利用硫酸镁干燥有^M目后，过滤出干燥剂并离心除 去溶剂，通过柱色语进行纯化(二氯甲烷/丙酮20 : 1),得到1.97 g (57.8%) 白色泡沫。8.1.5. 2'，5，-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷将2.48 g (5.88 mmol)2',5，-双脱氧-3'-0-苯甲酰基-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于25 ml THF中并与15 ml (30 mmol) 2 M氢氧化钠溶液混合。在室温 下搅拌3小时后停止转化(DC对照，二氯曱烷/丙酮10:1)。与80ml磷 酸盐緩冲液混合并利用乙酸乙酯萃取数次。利用硫酸镁干燥有拟目后，过 滤出干燥剂并离心除去溶剂，通过柱色谱进行纯化(氯仿/曱醇20 : 1)。 得到1.65 g (88.7%)无色固体，熔点174n (分解)。工H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 2.11 (d, 3H); 2.15 (m, 2H); 3.81 (m, 1H); 3.98 (m, 1H); 5.26 (d, 1H); 6.09 (m, 1H); 6.99 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.76 (s， 1H); (11.58 (s， 1H) ppm.8.2. 3'-氯-2',3，,5'-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷8.2.1. 2，3'-脱水-l-(2',5，-双脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶将1.47 g (4.64 mmol)2'，5，-双脱氧醫5-(E)-溴乙烯基尿苷和1.83 g (6.96 mmol)三苯基膦溶于40 ml THF中，在20分钟内向此溶液中滴加1.44 g (7.16 mmol)偶氮二碳酸二异丙酯在10 ml THF中的溶液。4小时后停止反 应(DC对照，二氯甲烷/甲醇15 : 1)。蒸馏出THF并将残留物吸收进曱 苯中。将其过滤并用甲苯清洗残留物数次。得到无色固体(1.19 g， 85.7%)。8.2.2. 3'國氯-2',3，，5，國三脱氧-5画(E)腸溴乙烯基尿苷将0.59 g (1.97 mmol)2，3'-脱水-l-(2'，5'-双脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖 基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶和0.5 g (4.33 mmol)盐酸吡咬混悬于5 ml DMF 中并加热至卯t:。 l小时后停止反应(DC对照，二氯曱烷/甲醇15:1)。 利用二甲苯蒸馏出DMF，用乙酸乙酯和饱和食盐溶液处理残留物。用乙 酸乙酯萃取7JC相数次，用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯相。过滤出干燥剂后， 用乙酸乙酯清洗并蒸馏出溶剂，通过柱色谱进行纯化(氯仿/甲醇100 : 1 以及氯仿/乙酸乙酯5:1)，得到0.25 8(37.8%)无色固体，熔点134匸。1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.34 (d， 3H); 2.58 (m， 1H); 2.66 (m， 1H); 4.03 (m， 1H); 4.44 (m， 1H); 6.17 (dd， 1H); 6.97 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); (11.62 (s, 1H) ppm.8.3. 3'-溴-2',3，,5-三脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷如8.2.2下所述，将0.59 g (1.97 11111101)2,3'-脱^1-(2',5'-双脱氧-卩-0-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶和0.96 g盐酸吡咬(6.0 mmol)在 DMF中进行转化和处理。将产物通过柱色谱(氯仿/甲醇70 : 1)纯化数 次，得到0.22g(29.4。/。)无色固体，熔点128匸。iH國N匿(300 MHz, DMSO-d6): 1.35 (d， 3H); 2.65 (m， 2H); 4.12 (m， 1H);754.41 (m, 1H); 6.15 (dd， 1H); 6.98 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.62 (s， 1H) ppm.^_l-2，,5-双脱氧-B-D-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基l-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶(1 - f 2 ',5-dideoxv-j3-D國glvcero-pent—4-enofur anosyll國5-0EVbromo vinyluracil)9.1 2',5'-双脱氧-5'-磺-5-(E)-溴乙烯基尿苷将3.0 g (9.0 mmol)2，-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和3.07 g (11.7 mmol) 三苯基膦溶于30 ml吡啶中并冷却到10"C。分几部分向其中加入2.97 g (11.7 mmol)碘。使其升至室温。6小时后转化完成(DC对照，二氯甲烷/ 曱醇15:1)。蒸馏出吡啶并将残留物吸收进乙酸乙酯/2-丁酮(2:1)中， 用硫酸氢钠溶液清洗。用乙酸乙酯萃取7JC相数次，用硫酸镁干燥合并的有 W目。过滤出干燥剂并蒸馏出溶剂后，将残留物用曱苯/二氯甲烷1 : l处 理并将所得固体千燥。得到3.77 g (94.5%)无色固体。9.2. 2',5'-双脱氧-3'-0-乙g^-5'-缺-5-(E)-溴乙烯基尿苦将2.48 g (5.59 mmol)2，,5，-双脱氧-5，-硤-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于20 ml吡咬中并与3.20 g (31.34 mmol)乙酸酐混合。90分钟后停止>^应(DC 对照，二氯甲烷/甲醇10:1)。将该批次倒入磷酸盐緩沖溶液中，并在15 分钟后用乙酸乙酯萃取数次。将合并的萃取物用硫酸镁干燥，进行常规处 理后，通过柱色镨纯化(氯仿/丙酮10:1)，得到2.14g(78.7。/。)无色固体。9.3. 1-〖3'-0-乙酰基-2，,5'-双脱氣-0~0-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基1-5-(五)-溴乙烯基尿嘧啶将2.14 g (4.41 mmol)2',5'誦双脱氧-3，-0-乙酰基國5'誦凑5画(E)-溴乙烯基 尿苷溶于45 ml乙腈中并与2.08 g (13.73 mmol) DBU (1,8-二氮杂双环并 [5.4.0十一烷-7-烯)混合。在室温下搅拌18小时后转化完成(DC对照， 环己烷/乙酸乙酯1:1)。将其倒入磷酸盐緩冲液中并用乙酸乙酯萃取数 次。将合并的萃取物用硫酸镁干燥，在常规处理后，通过柱色谱纯化(环 己烷/乙酸乙酯1 : l以及氯仿/丙酮8:1)。得到1.248(77.3%)无色固体，熔点148 x:。
丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.07 (s, 3H); 2.44 (m， 1H); 2.71 (m, 1H); 4.27 (dd， 1H); 4.47 (d， 1H); 5.78 (m， 1H); 6.37 (t， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.90 (s, 1H)， 11.70 (s, 1H) ppm.
9.4. l-2',5，-双脱氧-B-D-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基l-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶
将0.86 g (2.41 mmol)l-[3'-0-乙酰基-2，,5，-双脱氧-(5-D-甘油基-呋喃戊 糖-4-烯基卜5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶溶于10 ml甲醇中并与氨在曱醇中的15 ml饱和溶液混合。7小时后停止转化(DC对照，氯仿/曱醇15:1)。除去 溶剂并将残留物通过柱色谱纯化(氯仿/甲醇15 : 1以及二氯甲烷/乙酸乙 酯1:1)，得到210 mg (27.6%)无色物质，熔点128匸。
力画NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.21 (m， 1H); 2.48 (m， 1H); 4.16 (d， 1H); 4.31 (d, 1H); 4.72 (m, 1H); 5.56 (d， 1H); 6.39 (t， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.29 (d, 1H); 7.80 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
10. 5'-^J^-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
10.1. 5'-氰基-2',5，-双脱氧-5-乙基-尿苷
将2.54 g (6.93 mmol)5'-碘-2，,5'-双脱氧-5-乙基-尿苷溶于50 ml DMSO中并向其中加入0.52 g (10.61 mmol)氰化钠。18小时后转化完成 (DC对照，乙酸乙酯)。将该批次倒入饱和食盐溶液中并用乙酸乙酯萃取 数次。将合并的萃取物用硫酸镁干燥，在常规处理后，通过柱色镨用乙酸 乙酯纯化。得到0.96 g (52.1%)无色物质。
10.2. 3'-0-乙^-5，-^^-2，,5，-双脱氧-5-乙基-尿苷
将0.96 g (3.62 mmol)5'-^J^-2，，5'-双脱氧-5-乙基-尿苷溶于15 ml吡 啶中并与1.77 g (17.35 mmol)乙酸酐混合。1小时后转化完成(DC对照， 乙酸乙酯)。将该批次倒入磷酸盐緩冲液中并用乙酸乙酯萃取数次。将合 并的萃取物用硫酸镁干燥，在常规处理后，通过柱色镨纯化(二氯甲烷/ 乙酸乙酯)，得到0.82 g (73.7%)无色物质。
7710.3. 3'-0-乙絲-5'-^J^-2，,5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.82 g (2.67 mmol)3'誦0誦乙^J^5'-^j^-2',5'-双脱氧画5誦乙基-尿苷 和0.01 g AIBN (偶氮-双-异丁腈)溶于30 ml氯仿中并加热至沸腾。向其 中滴加0.94 g (5.87 mmol)溴在10 ml氯仿中的溶液。滴加65分钟后停止。 再在回流下加热l小时，冷却至室温并加入0.66 g (6.52 mmol)三乙胺。1 小时后，蒸馏出溶剂，用乙酸乙酯和磷酸盐緩冲液处理残留物。用乙酸乙 酯萃取水相数次，用硫酸镁干燥合并的乙酸乙酯相。在常规处理后，通过
柱色语进行纯化(环己烷/乙酸乙酯2:3)，得到0.62 g (59.7%)无色物质，
熔点96t:。
1H-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.07 (s， 3H); 2.39 (m， 1H); 2.53 (m， 1H); 3.08 (m， 2H); 4.21 (m, 1H); 5.16 (m, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.88 (d, 1H); 7.28 (d, 1H); 7.88 (s, 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
10.4 5'-jfi^-2',5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
将0.41 g (1.07 mmol)3'陽0-乙^^-5'國H^誦2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苷溶于20 ml甲醇中并与氯化氢在甲醇中的10 ml饱和溶液混合。36 小时后转化完成(DC对照，氯仿/曱醇15:1)。蒸馏出溶剂后，通过柱色 谱进行纯化(氯仿/曱醇15 : 1 )，得到0.35 g (95.9%)无色物质，熔点177 ■C (分解)。
工H-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.15 (m， 1H); 2.29 (m， 1H); 2.99 (m， 2H); 3.92 (m， 1H); 4.18 (m， 1H); 5.55 (d， 1H); 6.19 (t, 1H); 6.91 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.80 (s, 1H); 11.63 (s, 1H) ppm.
11. 取代的 1-(2'-脱氧-B-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-2-溴乙烯
基)-2,4-(lH, 3H)-嘧咬二酮 11.1. 1-(5'-碟-2，,5，-双脱氧-B画D-苏國呋喃戊糖基)画5國(E)-(2國溴乙烯
基)-2,4-(lH,3H)-嘧咬二酮 11.1.1.l-(2'-脱氧-p-D-苏-吹喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH, 3H)-
嘧咬二酮在回流下，在600 ml乙醇/水(5/1)混合物中将15.8 g (37.6 mmol)2，3，-脱^5'-0-苯甲酖基-2'-脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷与65.7 ml (132 mmol， 3.5 当量)2 M氢氧化钠溶液加热1小时。将反应混合物冷却至室温后，利用 浓盐酸将其中和，然后在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(乙酸 乙酯/曱醇9/1以及氯仿/甲醇7/1 )，得到10.9 g (32.7 mmol， 87%)白色固体 的l-(2'-脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧啶二 酮。
11.1.2. l-(5'-甲基磺酰基-2'-脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2，4-(lH，3H)-嘧咬二酮
在0C下，将10.9 g (32.7 mmol)l-(2'-脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧咬二酮置于100 ml吡啶中。将3.94 g (34.4 mmol， 1.05当量)甲基碌酰氯溶于50 ml THF中并緩慢逐滴加入。然 后在0n下将反应混合物再搅拌3小时。将该批次倾倒于300g冰上，用浓 盐酸调节至pH-5，用3x100乙酸乙酯萃取混合物。将合并的有^目用1 M盐酸和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶 剂，得到11.8 g (28.7 mmol)白色固体的1-(5'-甲基磺酰基-2'-脱氧-|3-0-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH，3H)-嘧咬二酮。在不经进一步纯化 的情况下转化该粗产物。 11.1.3. 1-(5，-碘-2'，5'-双脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2，4-(lH，3H)-嘧啶二酮
将0.50 g (1.22 mmol)l-(5'-甲基磺酰基-2'-脱氧-!5-D-苏-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮与10 ml DMF中的911 mg (6.08 mmol， 5.0当量)^f匕钠共同加热20小时。将反应混合物吸收进50 ml 乙酸乙酯中，用水和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发 仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(氯仿/曱醇9/1 )，得到130 mg (293 nmol， 24%)微黄色固体的l-(5'-碘-2，,5'-双脱氧-p-D-苏-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴 乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮，熔点79 - 81 "C 。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.04 (d, 1H); 2.58 (m, 1H); 3.43-3.53 (m， 2H); 4.16 (m, 1H); 4.26 (m， 1H); 5.44 (d， 1H); 6.06 (dd, 1H); 6.93 (d， 1H);7.24 (d, 1H); 7.98 (s, 1H); 11.57 (s， 1H) ppm.
12. 1-(2，,3-双脱氩-2'-脱氧-2'-氟-13-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶
12.1. l-(2，-脱氧-2'-氟-5，-O-三苯甲基-0-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿 嘧啶
将22.8 g (83.2 mmol)l-(2'-脱氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿 嘧咬混悬于200 ml吡咬中并加入25.5 g (91.6 mmol)三苯曱基氯。将反应混 合物在室温下搅拌24小时，然后在旋转蒸发仪上除去溶剂。将残留物吸收 进300ml乙酸乙酯中并用稀盐酸、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗。将有 ;W目用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色i普纯化 (氯仿/甲醇9/1 )，得到26.1 g (50.5 mmol， 61%)白色固体的1-(2，-脱氧-2，-氟-5，-0-三苯甲基+D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.2. 2,3'-脱水-l-(2，-脱氧-2，-氟-5'-0-三苯甲基-B-D-阿拉伯呋喃糖
基)-5-乙基尿嘧咬
将26.1 g (50.5 mmol) l-(2，-脱氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-p陽D-阿拉伯呋 喃糖基)-5-乙基尿嘧啶置于300 ml DMF中并加入19.9 g (75.7 mmol) PPH3。然后将15.3 g (75.7 mmol)偶氮二碳酸二异丙酯溶于50 ml DMF中 并逐滴加入。两小时后在旋转蒸发仪上除去溶剂，将残留物吸收进l升乙 醚中并强烈搅拌16小时。抽滤所得固体并用50 ml乙醚清洗三次。用环己 烷/乙酸乙酯重结晶，得到25.5 g (50.5 mmol， 100%)白色固体的2，3'-脱水 -1-(2'-脱氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-[5-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.3. l-(2，,3'-双脱氩-2，-脱氧-2，-氟-5'-0-三苯曱基-B-D-阿拉伯呋喃糖
基)-5-乙基尿嘧啶
将25.5 g (50.5 11111101)2，3，-脱7^-1画(2'-脱氧-2'-氟誦5'國0画三苯甲基-|5-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧咬溶于600 ml甲醇中，加入125 ml水和62.5 ml (126 mmol) 2 M NaOH溶液，将反应混合物在回流下加热2小时。在旋 转蒸发仪上大量除去甲醇。将残留物用稀盐酸中和并用乙酸乙酯萃取。将 合并的有^W目用NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，过滤并在旋转蒸发仪上 除去溶剂。通过柱色镨纯化(氯仿/甲醇95/5 )，得到19.6 g (39.2 mmol， 78%)白色固体的l-(2'，3'-双脱氢-2'-脱氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-p-D-阿拉伯呋喃 糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.4 l-(2',3'-双脱氢-2，-脱氧-2，-氟-B-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧
将5.00g (10.0 mmol)l-(2，，3'-双脱氢-2，-脱氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基 -P-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶溶于50 ml 二哺、烷中并冷却至0'C。緩 慢滴加在二-恶烷中的4.2 ml (20.0 mmo1)4.8 M HC1。移除冷浴并将搅拌反 应混合物2小时。然后在旋转蒸发仪上除去溶剂。通过柱色镨纯化(氯仿/ 曱醇9/1 )，得到2.06 g (8.04 mmol， 80%)白色固体的l-(2，，3'-双脱氢-2，誦脱 氧_2，-氟-卩-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶，熔点145 - 。
iH-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.02 (t， 3H); 2.20 (q, 2H); 3.55-3.65 (m, 2H); 4.76-4.84 (m, 1H); 5.16 (t， 1H); 5.95-6.05 (m， 1H); 6.75-6.80 (m， 1H); 7.86 (s， 1H); 11.42 (s, 1H).
图9 12显示了根据本发明的另一些化合物的结果。
图9显示了 5'-溴-2，，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷联用丝裂霉素C (MMC )相比于单独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
图10显示了 5'-叠氮基-2'，5'-双脱氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷联用丝裂霉 素C (MMC )相比于单独使用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
图11显示了 1-(3'-叠氮基-2'，3，-双脱氧-卩-0-赤-呋喃戊糖基)-5-(￡)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH,3H)嘧咬二酮联用丝裂霉素C (MMC)相比于单独使用 MMC以及MMC联用BVDU的结果。
图12显示了 3，-Cl-BVDU联用丝裂霉素C (MMC)相比于单独使 用MMC以及MMC联用BVDU的结果。
8权利要求
1. 通式I的核苷其中，R1和R2彼此独立地选自H、卤素、OR8、CN、N3、NR6R7以及通过氧原子键合的前药基团，R3＝H、直链或支链的C1-C8烷基、直链或支链的C1-C8亚烷基，R4＝H、卤素、OR8、N3、NR6R7或者R4与R1一起表示与R1和R4相邻的C原子之间的第二键，R5＝H、C1-C8烷基或芳基，以及R6、R7和R8彼此独立地为H、直链或支链的C1-C8烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物R1＝N3，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝O-乙酰基，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝O-三苯甲基，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝O-乙酰基，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝Cl，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝N3，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH-SO2-(CH2)3-Cl，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH-SO2-(CH2)3-SO3H，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝Cl，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝Br，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝I，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝前药基团，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝N3，R3＝R4＝R5＝H；R1＝选自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前药基团，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝选自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前药基团，R2＝选自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前药基团，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝NHR9并且R9＝H、COCH3、COC3H7、COPh、COOC2H5、COOCH2CH＝CH2、COCH＝CHCH3、CHO或COOCH2Ph，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHR9并且R9＝COCH3、COOC2H5，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2Ph，R2＝NHCOOCH2CHCH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2Ph，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2CH＝CH2，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；以及R1＝NHCHO，R2＝NHCHO，R3＝R4＝R5＝H。
2.根据权利要求l的核苷，其中所述前药基团选自其中，Rw和Rn彼此独立地为直链或支链的Cr"Cs烷基、芳基，其还可含有杂原 子，R12=直链或支链的d-Cs烷基、芳亚烷基、芳基，其还可含有杂原子， R13 =直链或支链的CrCs烷基，R14 = O-d-Cs烷基、NH-d-C8烷基、 N-(C!-Q烷基)2，其中，Rw和Rn彼此独立地为直链或支链的CrC8烷基、芳基，其还可含有杂原 子，R12=直链或支链的d-Cs烷基、芳亚烷基、芳基，其还可含有杂原子, R13=直链或支链的d-Cs烷基，<formula>formula see original document page 5</formula>其中，R15=直链或支链的d-Cs烷基，其中，R15=直链或支链的d-Cs烷基，R16=直链或支链的d-Q烷基、O-芳基,<formula>formula see original document page 5</formula>其中，R17=直链或支链的d-Cg烷基、卣素，<formula>formula see original document page 6</formula>或其中，R18=直链或支链的d-C8烷基、芳基或杂芳基， R^烷基画CO-、芳基-CO-、o逸oR20O-R20cr 、o——、&。刚，、0一或 ， 其中，R20=直链或支链的C厂Cs烷基。
3. 根据权利要求1或2的核苷，其中所述基团Ri和R2彼此独立地选自面 素。
4. 根据权利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式II:r工其中，R2 = H、卤素、OR8、 CN、 N3、 N&R" OH或通过fuf、子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Q烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， R4 = H、卤素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C广Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物R2=OH， R3 = R4=R5 = H，R2= O-乙酰基，R3 = R4= R5 = H,R2 = O画三苯曱基,R3 = R4 = Rs = H, & = N3，R2=磷酸酯，R3-R4-Rs-H，以及 R2=三磷酸酯，R3-R^Rs-H。
5.根据权利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式III<formula>formula see original document page 7</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NI^R7、 OH或通过氧原子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Q烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， Ri = H、卣素、OR8、 N3或NR^R" R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基， 排除具有以下基团的所述化合物 R2=OH,R3 = R4 = R5 = H，以及R2=三裤酸酯，R3-R^R5-H。
6.根据权利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式IV其中，R2 = H、囟素、OR8、 CN、 N3、 NF^R7、 OH或通过fL^子H:合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， Ri = H、卣素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C广C8烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物Hal = F, R2= OH， R3 = & = R5 = H，Hal = F， R2= O-乙酰基，R3 = R4= R5= H，Hal = F，R2=三辨酸酯，R^R4-R5-H，以及Hal = Cl,R2=OH,R3=R4 = R5=H。
7.才艮据权利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式V其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或通过氧原子鍵合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， R4 = H、离素、OR8、 N3或NR6R7， R5 = H、 C广Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物R^OH,R3-R^Rs-H。
8.根据权利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式VI其中，1^ = 11、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7、 OH或通过氧原子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的CrQ烷基、直链或支链的d-C8亚烷基， Rt = H、卣素、OR8、 N3或NRgR7， R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-C8烷基或者乙酰基， 排除具有以下基团的所述化合物 Ri= OH, R3 = R4= R5 = H。
9.根据权利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式VII其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通过ft^子键合的前药基团，R3 = H、直链或支链的d-Q烷基、直链或支链的d-Q亚烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR^R7，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的C广Cs烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物Hal = Cl， R！ = OH， R3 = R4 = R5 = H,Hal二Br,Ri-OH，R3-R4-R5-H，以及Hal = I， RfOH，R3-R4-Rs-H。
10.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式vm:
11.根据权利要求1的核苷，其特征在于具有式IX:
12.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式X:<formula>formula see original document page 11</formula>
13.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式XI:<formula>formula see original document page 11</formula>
14.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式XII:<formula>formula see original document page 11</formula>
15.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式XIII:<formula>formula see original document page 12</formula>
16.根据权利要求1的核苷，其特征在于具有式XIV:<formula>formula see original document page 12</formula>
17.根据权利要求l的核苷，其特征在于具有式XV:<formula>formula see original document page 12</formula>
18.通式XVI的核苷H<formula>formula see original document page 12</formula>其中，和R2彼此独立地选自H、子^^的前药基团， 卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通过ft^、R3 = H、直链或支链的d-Q烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基，Rt和R9彼此独立地为卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
19.通式XVII的核普<formula>formula see original document page 13</formula>其中，Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通过IL^子键合的前药基团，R4和R9彼此独立地为卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Q烷基或者乙酰基。
20. 包含至少一种根据前述权利要求中任一项之核普的药物。
21. 根据权利要求20的药物，其中所述药物还包含至少一种细胞抑制剂。
22. 至少一种通式I<formula>formula see original document page 13</formula>以及至少 一种细胞抑制剂在制备用于在细胞抑制治疗中抑制或降4氐抗性的核普其中，Rw和Ru彼此独立地为直链或支链的CVC8烷基、芳基，其还可含有杂原子，R12=直链或支链的d-Cs烷基、芳亚烷基、芳基，其还可含有杂原子，R13=直链或支链的Cr"Q烷基，产生的药物中的用途，其中，Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NReR7以及通过氧原子键合的前药基团，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NRgR7或者R4与Ri—^^示与Ri和R4相邻的C原子之间的第二键，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及Rfi、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基，排除具有以下基团的所述化合物R^OH,R;^OH,R^R4-R5-H，以及Ri-OH,!^-前药基团，R3-R4-R^H。
23.根据权利要求22的用途，其中所述前药基团选自<formula>formula see original document page 14</formula>其中，Rw和Ru彼此独立地为直链或支链的CVC8烷基、芳基，其还可含有杂原子，R12=直链或支链的d-Cs烷基、芳亚烷基、芳基，其还可含有杂原子,R13 =直链或支链的d-C8烷基，R14 = O-d-Q烷基、NH-d-Cs烷基、N-(CrCs烷基)2，<formula>formula see original document page 15</formula>其中，R15=直链或支链的CrCs烷基,其中，R15=直链或支链的CVQ烷基，R16=直链或支链的Q-Cs烷基、O-芳基，其中，R17=直链或支链的C广C8烷基、卣素，<formula>formula see original document page 16</formula>19其中，R18=直链或支链的d-Cs烷基、芳基或杂芳基，R19=烷基-CO-、芳基-CO-或^J^酸，<formula>formula see original document page 16</formula>其中，R20=直链或支链的d-Cs烷基。
24. 根据权利要求22或23的用途，其中所述基团&和112彼此独立地选自卤素。
25. 根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式II的核普i;工其中，R2 = H、卤素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或前药基团，R3 = H、直链或支链的d-Cg烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基，R4 = H、卤素、ORs、 N3或NReR7，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
26.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式III的核苷:<formula>formula see original document page 17</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或前药基团， R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3或NReR" R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的C厂C8烷基或者乙酰基。
27.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式IV的核苷:<formula>formula see original document page 17</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通过氧原子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Q烷基、直链或支链的CrQ亚烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR^R7， R5 = H、 CrCs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Q烷基或者乙酰基。
28.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式V的核苷:其中，Ri:H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或通过氧原子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Cg烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， R4 = H、囟素、OR8、 N3或NReR7， R5 = H、 C广Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和R8彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
29.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式VI的核苷Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7、 OH或通过氧原子键合的前药基 5 N、其中，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Q亚烷基， R4 = H、卤素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C广Cs烷基或芳基，以及&、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的CVCs烷基或者乙酰基.
30.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用具有通式VII的核苷其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通过氧原子键合的前药基 团，R3 = H、直链或支链的d-Cg烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
31.至少一种通式XVI以及至少产生的药物中的用途，其中在所述通式XVI中，Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通过IL^ 子键合的前药基团，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的d-Cs亚烷基，Rt和R9彼此独立地为卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
32.至少一种通式XVII以及至少 一种细胞抑制剂在制备用于在细胞抑制治疗中抑制或降低抗性产生的药物中的用途，其中在所述通式XVII中，Ri和R2彼此独立地选自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7以及通过^U^ 子^^的前药基团，R4和R9彼此独立地为卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Cs烷基或者乙酰基。
33.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用通式XVIII的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
34.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用通式XIX的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
35.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用通式XX的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
36.根据权利要求22至24中任一项的用途，其中使用通式XXI的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
37. 根据权利要求20至36中任一项的用途，其中在单一制剂中使用所述 至少 一种核苷和所述至少 一种细胞抑制剂。
38. 根据权利要求20至36中任一项的用途，其中在分开的制剂中使用所 述至少一种核苷和所述至少一种细胞抑制剂。
39.至少一种通式I的核苷以及至少一种活性物质在制备用于无抗性地治疗由细菌、疟原虫或利什曼 虫引起的感染性疾病的药物中的用途，其中在所述通式I中，Ri和R2彼此独立地选自H、卤素、OR8、 CN、 N3、 1^117以及通过|1^、 子键合的前药基团，R3 = H、直链或支链的d-Cs烷基、直链或支链的OCs亚烷基， R4 = H、卣素、ORg、 N3或NRfiR7， R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及Re、 R7和Rs彼此独立地为H、直链或支链的d-Q烷基或者乙跣基， 排除具有以下基团的所述化合物 Ri二OH，R;^OH,R3-R4-R5-H，以及 Ri-OH,!^-前药基团，R3-R^Rs-H。
40. 根据权利要求39的用途，其中在单一制剂中使用所述至少一种核苷和 所述至少一种细胞抑制剂。
41. 根据权利要求39或40的用途，其中在单一制剂中使用所述至少一种 核苷和所述至少一种细胞抑制剂。
全文摘要
本发明涉及特殊的核苷，并且还涉及包含这些核苷的药物。此外，本发明涉及这些核苷在制备药物(尤其是用于在细胞抑制治疗中抑制或降低抗性产生的药物)中的用途。
文档编号C07D405/04GK101522666SQ200780036649
公开日2009年9月2日 申请日期2007年8月13日 优先权日2006年8月11日
发明者亨利克·迪克斯, 安德烈亚斯·罗尔夫斯, 约尔格-克里斯蒂安·海因里希, 迪特尔·洛曼, 雅内克·托伊布纳, 鲁道夫·法里希 申请人:雷斯普罗泰克特有限公司