抗-mif抗体和化学治疗剂的联合治疗的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗-MIF抗体，特别是它们联合癌症治疗剂即化学治疗剂用于癌 症的治疗。
【背景技术】
[0002] 巨噬细胞移动抑制因子（MIF)是一种细胞因子，起初是基于它能够抑制腹膜渗出 液细胞从对结核菌素高度敏感的豚鼠（包含巨噬细胞）中体外随机迀移的能力而被分离的 (Bloom et al. Science 1966, 153, 80-2 ;David et al. PNAS 1966, 56, 72-7)。今天，已经知 道MIF作为先天性和获得性免疫反应的一个关键的上游调控子，上述免疫反应具有广谱活 性。
[0003]人类 MIF cDNA 在 1989 年得到克隆（Weiser et al.，PNAS 1989, 86, 7522-6)，其 基因定位于22号染色体。人类MIF基因产品为具有114个氨基酸的蛋白质（N端蛋氨酸裂 解后），其表观分子量大约为12. 5kDa。MIF没有与其他蛋白存在显著的序列同源性。该蛋 白结晶成同一亚单位的三聚体。每个单体包含两个反向平行的a螺旋，所述a螺旋包裹 (pack against)四链|3片。该单体还有其他两个|3链，该|3链和相邻亚单位的|3片相 互作用以在单体之间形成界面。三个亚单位排布成一个包含亲溶剂通道的管道，该管道可 以沿着分子三重轴向穿过蛋白质中心（Sun et al. PNAS 1996,93,5191-5196)。
[0004] 据报道，低浓度糖皮质激素可以诱导巨噬细胞分泌MIF (Calandra et al. Nature 1995, 377, 68-71)。然而，MIF也会方向调节糖皮质激素的作用，并刺激其他细胞因子 的分泌，例如肿瘤坏死因子TNF-a和白介素IL-1 0 (Baugh et al.，Crit Care Med 2002, 30, S27-35) JIF同样表现出例如展示促血管生成、促增殖和抗凋亡的性质，因此能促 进肿瘤细胞的生长（Mitchell, R. A.，Cellular Signalling, 2004. 16 (I) :p. 13-19 ;Lue，H. et al.，Oncogene 2007. 26 (35) :p. 5046-59)。此外，例如它和淋巴瘤、黑素瘤和结肠癌的生 长也有直接联系（Nishihira et al. J Interferon Cytokine Res. 2000, 20:751-62) 〇
[0005] MIF是多种病理情况的中介物，因此，与各种疾病都有关联，其包括但不限于炎症 性肠病（IBD)、风湿性关节炎（RA)、急性呼吸窘迫综合征（ARDS)、哮喘、血管球性肾炎、IgA 肾病、心肌梗死（MI)、败血症和癌症。
[0006]多克隆和单克隆抗-MIF抗体已经用于抵抗重组人类MIF (Shimizu et al.，FEBS Lett. 1996 ;381，199-202 ;Kawaguchi et al, Leukoc. Biol. 1986, 39, 223-232，和Weiser et al. , Cell. Immunol. 1985, 90, 167-78) 〇
[0007]已经表明抗-MIF 抗体具有治疗用途。Calandra et al. , (J. Inflamm. (1995); 47,39-51)报道了使用抗-MIF抗体保护动物免于实验上诱发的革兰氏阴性和革兰氏阳性 感染性休克。表明抗-MIF抗体可作为一种治疗手段来调控感染性休克和其他炎症疾病状 态中的细胞因子产生。
[0008] US 6, 645, 493公开了一种源自杂交瘤细胞的单克隆抗-MIF抗体，其能够中和MIF 的生物学活性。在动物模型中表明这些源自鼠的抗-MIF抗体在治疗内毒素诱发的休克中 具有有益效果。
[0009] US 200310235584公开了一种在动物中制备对MIF具有高亲和性的抗体，所述动 物中的MIF基因已经被纯合（homozygously)敲除。
[0010] 糖基化抑制因子（GIF)是一种蛋白质，具体描述见Galat et al. (Eur. J. Biochem, 1994, 224, 417-21)。MIF 和 GIF 被认为是相同的。Watarai et al. (PNAS 2000, 97, 13251-6)描述了一种能够结合到不同的GIF表位的多克隆抗体以识别Ts细胞中 的GIF翻译后修饰的生物化学特性。Watarai et al, supra报道称GIF在体外出现在不同 的构象异构体中。该异构体的一个类型通过化学修饰单个半胱氨酸残基而产生。该化学修 饰导致GIF蛋白内部的构象改变。
[0011] 在过去几十年，和MIF有关的那些疾病和紊乱中的一个即为上述所指出的癌症。 一般通过各种途径治疗癌症，其中一种正在使用的即是所谓的化学治疗剂（其是抗癌化疗 的基础）。一般意义而言，化疗的潜在概念是假定一种疾病或紊乱（其由细菌、病毒、寄生 虫和癌细胞引起）可以通过化合物有效地治疗。化疗的一个特定指征就是癌症。化学治疗 剂可以起到如杀死比其他细胞分裂更快的细胞的作用，因而可以靶向通常比非-癌细胞分 裂更快的癌细胞。大多数化学治疗剂药物通过破坏细胞分裂起作用，即它们在细胞周期的 一个或若干个阶段起作用，因此能够靶向分裂更快的细胞。化学治疗剂也可以抑制细胞生 长，即它们可以减慢或废除细胞生长或分裂；其他化学治疗剂会导致细胞受损并杀死它们； 在那种情况下，它们被称作细胞毒性。大多数细胞毒性药物造成的损害不足以杀死细胞，但 是能够产生引起程序性细胞死亡（凋亡）的刺激物。
[0012] 一般而言，化学治疗药物的主要种类为烷基化剂、抗代谢物、蒽环类化合物、植物 生物碱、拓扑异构酶和其他抗肿瘤剂。最常见的，如上所述，这些药物能影响细胞分裂；它 们也能够影响DNA合成或其功能。其他化学治疗剂不直接干扰DNA。这些是化学治疗剂的 新种类，其被称为信号拦截子，包括单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂例如甲磺酸伊马替尼。 烷基化亲核官能团的烷基化剂的例子，可为二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法 伦（苯丙氨酸氮芥）（melphalane)、三芥环磷酰胺、异环磷酰胺、卡莫司汀、环己亚硝脲、达 卡巴嗪、替莫唑胺、丝裂霉素C和其他。顺铂、卡铂、奥沙利铂和其他含铂化合物能与DNA形 成稳定的复合物。
[0013] 细胞毒性抗代谢物为叶酸类似物（例如，氨甲蝶呤/氨喋呤、雷替曲塞、培美曲 塞）、嘌呤（例如，6-巯基嘌呤、咪唑硫嘌呤、硫鸟嘌呤、氟达拉滨、克拉屈滨）或嘧啶（阿糖 孢苷、吉西他滨、5-氟尿喃啶和它的前体、去氮杂胞苷（deazacytidine))。抗代谢物通过干 扰嘌呤和嘧啶核苷酸从头合成中的关键步骤而抑制DNA合成，或它们在细胞周期S期中被 整合到DNA，在这里它们干扰DNA折叠、DNA修复或甲基化。或者，一些化合物也被整合入 RNA 0
[0014] 源自植物和通过妨碍微管功能而阻止细胞分裂的生物碱和萜类的例子是长春花 生物碱和紫杉烷。特别出名的长春花生物碱是长春新碱、长春花碱、长春瑞滨和长春地辛。 足叶草毒素是植物来源化合物的另一个例子。紫杉烷的一个例子是多烯紫杉醇或紫杉醇。 雌莫司汀是靶向微管蛋白的合成化合物的一个例子。
[0015] 拓扑异构酶抑制剂是酶的抑制剂，其可以维持DNA的拓扑结构，举例包括喜树碱 例如伊立替康和拓扑替康（类型1拓扑异构酶抑制剂）或安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷 和替尼泊苷（拓扑异构酶类型2抑制剂）。
[0016] 最后，抗肿瘤药螯合剂的例子包括更生霉素、阿霉素、表阿霉素、博来霉素和其他。
[0017] 综述见如下所示的Goodman和Gilman的治疗药理学基础第12版："癌症化疗的一 般原则，简介部分"。几种肿瘤容易受到激素疗法的影响：糖皮质激素（例如氢化波尼松、地 塞米松和其他）能够促进淋巴瘤细胞的凋亡。因此，它们属于典型的化疗方法。类似地，几 种类型的癌症易受激素干扰。这包括，例如乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌。激素消融可以通过 促性腺激素释放激素受体激动剂（例如乙基酰胺、戈舍瑞林、亮丙瑞林、hisrelin等）抑制 垂体释放促性腺激素实现，其引起受体脱敏，因此抑制激素产生，或通过促性腺激素释放激 素受体拮抗剂（例如地加瑞克）来实现。或者，雌性激素和雄性激素的作用可能被激素受 体拮抗剂阻断：作为雌激素受体的部分激动剂作用的化合物（也被称为选择性雌激素受体 调控子，SERT s)包括它莫西芬、雷洛昔芬和托瑞米芬。氟维司群是纯粹的雌激素受体拮抗 剂的一个例子。雄激素受体能被诘抗剂例如氟他米特、bicalitamide和环丙孕酮阻断。最 后，激素消融可以通过阻断负责它们合成的相关酶来实现。以雌激素为例，芳香酶（CYP19) 可以被下述化合物阻断：例如氨鲁米特、福美司坦、依西美坦、阿那曲唑和来曲唑。雄性激 素的产生可以通过阿比特龙抑制酶17 a -羟化酶/C17, 20裂解酶（