专利名称：一种中药组合物在制备抑制白细胞黏附的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，具体涉及一种中药组合物在制备抑制白细胞黏附药物中的应用。
背景技术：
很多疾病过程都会导致白细胞与血管内皮细胞的黏附。缺血再灌注后产生的过氧化物降 解I-kB，活化NF-kB， NF-kb的亚基进入胞核，激活粘附分子、炎性因子和凋亡相关基因位点， 促进黏附分子的表达，炎性因子的释放和启动凋亡相关蛋白的合成。白细胞的L选择素和血管 内皮的E选择素表达增加引起白细胞沿血管壁的滚动，进而，过表达的白细胞黏附分子 CDllb/CD18与血管内皮细胞黏附分子ICAM-l的结合导致白细胞与血管内皮细胞的黏附。黏 附于血管内皮的白细胞释放大量过氧化物和蛋白酶，损伤血管内皮细胞和基底膜，引起血管 通透性增加和血浆白蛋白漏出，造成血管周围组织的水肿。过氧化物刺激又可引起血管周围 的肥大细胞脱颗粒释放炎性因子和血管活性因子，这些因子从血管外攻击血管加重白细胞与 血管内皮细胞的黏附和白蛋白的外漏。血管周围组织的水肿从血管外压迫血管，血管内皮细 胞的肿胀和白细胞黏附，血小板积聚等都成为阻碍血流的因素，导致再灌注后不复灌的区域 形成。
缺血再灌注引起的白细胞黏附是造成脑微循环障碍的重要因素。研究发现，辛伐他汀能 较少白细胞在早期糖尿病大鼠视网膜毛细管中的黏附；COX-l (环氧酶-l)抑制剂和COX-2 (环氧酶-2)抑制剂能在一定程度上减少白细胞在血管内皮的黏附；卡托普利由于能减少白 细胞在血管内皮的黏附，在减轻再灌注方面具有良好的疗效。另外今年研究发现，很多中药 如槲皮素、丹参、黄芪等也有类似的作用。由多组分组成的复方制剂可能具有更好的减少白 细胞黏附的作用。
本发明一种药物[专利号93100050.5]是由当归、川芎等组成。它是在祖国医学理论的指 导下，并经多年临床实践总结而成，具有治疗内伤引起的头痛的作用，临床上适用于血管神 经性头痛、偏头痛以及高血压引起的头晕、头痛等症状。按本处方比例，可以制成药剂学上 任何一种剂型。其中的颗粒剂型由天津天士力制药股份有限公司生产，名称为"养血清脑颗 粒"。获准的"功能与主治"为养血平肝，活血通络。用于血虚肝亢所致各种头痛、创伤性脑神经综合症、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等。临床上主要用于治疗血虚、血瘀、阴虚 阳亢所致的头痛。由于其确切的疗效，自上市以来，赢得了广大患者的信赖。
以往的体外研究结果虽然证明过养血清脑颗粒主要成分之一的川芎嗪对植物凝血素 Phytohemagglutinin (PHA)诱导的血管内皮细胞黏附分子ICAM-1表达有抑制作用，但是， 有关养血清脑颗粒及其成分对白细胞与血管内皮黏附影响的在体研究尚未见报道。
发明内容
本发明是在已有中国专利(专利号为93100050.5)的基础上，完成的新用途发明，处方 的组成按重量配比如下
当归4 9%，川芎4~9%，白芍2~8%，熟地2 8%，勾藤10~15%,鸡血藤10 15%， 夏枯草10~15%，决明子10~15%，珍珠母10~15%，元胡4~9%，细辛0.5~2%;
最佳配比为
当归6.75%，川芍6.75%,白芍5.4%，熟地5.4%，勾藤13.5%，鸡血藤13.5%,夏枯 草13.5%,决明子13.5%，珍珠母13.5%，元胡6.75%，细辛1.34%。
该专利药物组合物通过以下方案予以实施
按上述比例取生药材，加水提取3次，每次l小时；合并提取液，浓縮，加入2倍其重 量的乙醇，静置沉淀；取上清液，浓縮成浸膏，相对密度为1.3~1.4，出膏率为10%;加入药 剂上可接受的辅料，按照常规的工艺方法制成药学上可接受的剂型。其中所述静置的时间优 选为为24小时。药剂上可接受的辅料优选为蔗糖和糊精，优选比例为浸膏、蔗糖和糊精按1: 3: 1的重量比，按照常规的工艺方法制成颗粒剂。
本发明的药物组合物具有治疗内伤引起的头痛的作用，临床上适用于血管神经性头痛、 偏头痛以及高血压引起的头晕、头痛等症状。
经过近年来的临床与实验研究，申请人还发现了本发明药物组合物在增加脑血流、治疗 脑卒中后遗症等作用，还可以改善微循环障碍和预防脑卒中。但还未有文献报道用于抑制白 细胞黏附。下面以蒙古沙鼠脑细静脉为例，考察了本发明药物组合物抑制白细胞黏附的用途。
实验中用到的药物为本发明药物的颗粒剂型——养血清脑颗粒。具体研究了养血清脑颗 粒对缺血再灌注后蒙古沙鼠脑细静脉壁白细胞黏附的影响
1.材料与方法
(1) 动物
蒙古沙土鼠，雄性，体重65 90g，购于首都医科大学实验动物部，合格证号SCXK(京) 2000-0012。在北京大学医学部动物中心，按北京大学医学部实验动物处理规定，自由进食饮 水，单笼饲养，温度22'C，相对湿度40%， 12小时切换灯源(早晨7点开灯)。
(2) 试验药物
试验药物(养血清脑颗粒)为按照本发明实施例2的方法制成的颗粒剂，实验前配制成 80mg/ml和160mg/ml的水溶液。
(3) 化学试剂
二氢罗达明123 (Dihydrorhodamine 123， DHR123)购买于美国Eugene公司，异硫氰酸 荧光素标记白蛋白(FITC-albumin)购买于美国SIGMA公司，罗达明6G高氯酸盐(Rhodamine 6Gperchlorate)购买于美国FLUKA公司，乌拉坦(Urethane)购买于中国上海天莲精细化工
有限公司。
(4) 动物模型
取20%乌拉坦，按2.0g/kg.bw的用量，经腹腔注射麻醉蒙古沙土鼠。在颈部正中切开， 分离气管，连接小动物呼吸机(ALC-V8)，在整个观察过程保持机械通气。特殊设计的闭合 器(一根细的聚乙烯导管和一根粗的塑料管组成的套索)放置在双侧颈总动脉而不影响血流。 暴露股静脉，插入并留置直径为5mm的聚乙烯导管。切开脑部皮毛，用手提式颅钻在前囟点 前开一3X3mm的颅窗。将37。C的人工脑脊液连续滴加在颅窗上以保持大脑表面湿润。用连 接于荧光摄像机(C7190， HAMAMATSU， Japan)的正立生物显微镜(DMLFS， LEICA， Germany),用10倍物镜选择直径在30-50 u m， 200 y m长没有明显弯曲的细静脉，在监视器 上基础观察(J2118A,TCL,Huizhou, China) 10分钟后，闭索蒙古沙土鼠双侧颈动脉(缺血)， 30分后解除闭索(再灌注)。连续观察并用连接于荧光摄像机刻录机(DVR-R25, Malata, China) 记录微循环动态60分钟。假手术组不闭索双侧颈动脉，其他操作同缺血再灌注组。养血清脑 颗粒0.4g/kg +缺血再灌注组，养血清脑颗0.8g/kg +缺血再灌注组在缺血再灌注90分钟前， 分别用灌胃管，灌胃给予养血清脑颗粒水溶液0.4g/kg.bw和0.8g/kg.bw。(5) 黏附于细静脉壁白细胞测定
蒙古沙土鼠，在基础观察前10分钟，将荧光标记物Rhodamine 6G按5mg/kg.bw的使用 量，经股静脉缓慢推注。用连接于生物显微镜的共聚焦扫描装置(Bio-Rad Radiance 2100，England)和计算机处理系统(Dell optiplex Gx260，Germany)进行观察和记录。用波长 543nm的氦氖激光束照射在开颅部位进行观察，图像经8-bit A/D转换器数字华后，X-t扫描 荧光图像(512x512x8-bit)储存在计算机等待处理。设定30秒扫描的30张图片中部位没有 发生变化的白细胞为黏附白细胞。在直径30-50y m， 200um长的小静脉观察并纪录在缺血 前，以及再灌注O分、10分、30分、60分黏附于血管壁的白细胞。
(6) 统计
所有数值用平均值土标准误表示。数据分析用单因素方差分析one-way analysis of variance(ANOVA)处理和Fisher s post Hoc test检验。设p<0.05为显著性差异。
2.结果
养血清脑颗粒对缺血再灌注后蒙古沙鼠脑细静脉壁黏附白细胞的影响。 由图1可见，假手术组在观察结束时，黏附于脑细静脉壁的白细胞不到3个/200ym。缺 血再灌注组于蒙古沙鼠脑细静脉壁的白细胞数在再灌注开始增加，在再灌注结束时，已经达 到6个/200 u m。养血清脑颗粒0.4g/kg+缺血再灌注组，在再灌注30分后显著地抑制了白细 胞与大脑细静脉管壁粘附。养血清脑颗粒0.8g/kg+缺血再灌注组，在再灌注10分后就显著地 抑制了白细胞与大脑细静脉管壁粘附。
本发明以蒙古沙鼠脑细静脉为例，用可视化微循环观察方法证明了养血清脑颗粒抑制白 细胞黏附的作用。
本发明药物组合物可以口服或冲服，或通过其他常规的给药方法给药。每天用量为相当 于5~20g生药材重量。
经过大量的研究发现，本发明中的药物组合物能明显地抑制白细胞黏附，从而对白细胞 黏附引起的相关疾病例如感染性休克、慢性阻塞性肺疾病、肿瘤的侵袭转移等，具有潜在的 治疗价值。
图l表示假手术组，缺血再灌注组，养血清脑颗粒0.4g/kg+缺血再灌注组，养血清脑颗粒0. 8g/kg+缺血再灌注组在缺血前和再灌注后蒙古沙鼠细静脉壁黏附白细胞的连续变化。 数据是每组6只沙鼠平均值士标准误。* P〈0.05 vs基础值；# P〈0.05 vs缺血再灌注组。
具体实施例方式
下面通过具体的实施方式进一步说明本发明中的药物组合物在制备抑制白细胞黏附的药 物中的应用，但不作为对本发明的限制。
实施例1
(1) 取当归80g，川芎80g,白芍80g,熟地80g，勾藤120g，鸡血藤120g，夏枯草120g， 决明子120g,珍珠母120g，元胡70g，细辛10g;
(2) 将上述药材加水提取3次，每次1小时，合并提取液，适当浓縮，加2倍量的乙醇，静置 24小时沉淀，取上清液浓縮成浸膏，相对密度为1.3，出膏率为10%，取浸膏、蔗糖和糊 精按l: 3: 1的重量比例制成片剂200片。
实施例2
(1) 取当归67.5g，川芎67.5g，白芍54g，熟地54g，勾藤135g，鸡血藤135g，夏枯草135g， 决明子135g，珍珠母135g，元胡67.5g，细辛13.4g;
(2) 将上述药材加水提取3次，每次1小时，合并提取液，适当浓縮，加2倍量的乙醇，静置 24小时沉淀，取上清液浓缩成浸膏，相对密度为1.4，出膏率为10%，取浸膏、蔗糖和糊 精按h 3: 1的重量比例制成颗粒剂125袋。
权利要求
1. 一种药物组合物在制备抑制白细胞黏附的药物中的应用，该药物组合物由以下重量百分含量的生药材制成当归4～9％，川芎4～9％，白芍2～8％，熟地2～8％，勾藤10～15％，鸡血藤10～15％，夏枯草10～15％，决明子10～15％，珍珠母10～15％，元胡4～9％，细辛0.5～2％。
2. 权利要求l所述的应用，其特征在于所述的白细胞黏附由缺血再灌注引起。
3. 权利要求2所述的应用，其特征在于白细胞黏附于细静脉血管内皮。
4. 权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物组合物由以下重量百分含量的生药材制 成当归6.75%，川芎6.75%，白芍5.4%，熟地5.4%,勾藤13.5%,鸡血藤13.5%,夏枯 草13.5%,决明子13.5%，珍珠母13.5%，元胡6.75%,细辛1.34%。
5. 权利要求l-4任意一项所述的应用，其特征在于所述的药物组合物是按照下述方法制备的 按比例取生药材，加水提取3次，每次l小时；合并提取液，浓縮，加入2倍其重量的乙 醇，静置沉淀；取上清液，浓縮成浸膏，相对密度为1.3~1.4;加入药剂上可接受的辅料， 制成制剂。
6. 权利要求5所述的应用，其特征在于所述静置的时间为24小时。
7. 权利要求5所述的应用，其特征在于药剂上可接受的辅料为蔗糖和糊精。
8. 权利要求7所述的应用，其特征在于浸膏、蔗糖和糊精按h 3: 1的重量比，制成颗粒剂。
全文摘要
本发明涉及一种中药组合物在制备抑制白细胞黏附的药物中的应用。该药物由以下重量百分含量的生药材制成当归4～9％，川芎4～9％，白芍2～8％，熟地2～8％，勾藤10～15％，鸡血藤10～15％，夏枯草10～15％，决明子10～15％，珍珠母10～15％，元胡4～9％，细辛0.5～2％。
文档编号A61P9/00GK101428092SQ200710150070
公开日2009年5月13日 申请日期2007年11月6日 优先权日2007年11月6日
发明者徐想顺, 韩晶岩 申请人:天津天士力制药股份有限公司