香豆素β抑制癌细胞生长的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医学领域，具体涉及香豆素 β抑制癌细胞生长的应用。
【背景技术】
[0002] 在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。相对 应的，起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组 织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。新 生物一旦形成，不因病因消除而停止生长，他的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常 组织与器官，这一点在恶性肿瘤尤其明显。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润 性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、 发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。
[0003] 癌细胞的繁殖速度很快，远超过传统药物杀灭癌细胞的速度，因此，使用传统药 物，防止癌细胞扩散效果并不明显。放化疗的时候射线杀死的是照射范围内的所有细胞，而 不仅是肿瘤细胞，也杀死人体的正常细胞。放、化疗常见的毒副作用：恶心、呕吐、腹泻、脱 发、白细胞下降、放射性胃肠炎、肺纤维化、肝功能受损等。不少肿瘤病人并不是死于肿瘤本 身，而是死于放、化疗引起的并发症。
【发明内容】
[0004] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了香豆素 β抑制肿瘤生长的应用。
[0005] 本发明涉及香豆素 β抑制肿瘤生长的应用，所述癌细胞为MG-63骨肉瘤细胞、肺 腺癌细胞Α549、乳腺癌MCF-7、肝癌细胞HEPG2、膀胱癌细胞EJ、T24、人宫颈癌细胞HELA、人 结肠癌细胞HT29、人胰腺癌细胞PANC-1、人乳腺癌细胞MDA。
[0006] 使用灭菌PBS配置lmg/ml的PBS香豆素 β溶液，选取各种癌细胞进行细胞生长 试验，使用ΜΤΤ方法检测细胞生长情况。
[0007] 本发明相对于现有技术具有以下优点：
[0008] 1、本发明的香豆素 β对实验用到的三种骨肉瘤细胞均有抑制作用，且均强于同 浓度下的临床用药甲氨蝶呤的抑制活性，香豆素 β对于MG-63的抑制活性最强，达到75% 左右。
[0009] 2、本发明的香豆素 β可以引起MG-63细胞的凋亡发生，并有浓度依赖性，主要引 起细胞进入早期凋亡，由E，F可以看出香豆素 β对细胞周期无明显影响。
[0010] 3、本发明的香豆素 β对肺腺癌细胞Α549系有最强的抑制作用，对人乳腺癌MCF-7 的抑制作用其次，对人肝癌细胞HEPG2、膀胱癌细胞EJ和Τ24有一点抑制作用，对人宫颈癌 细胞HELA、人结肠癌细胞ΗΤ29、人胰腺癌细胞PANC-1、人乳腺癌细胞MDA有轻微抑制活性。
[0011] 4、本发明的香豆素 β对这人成纤维细胞HSF、人肝星形细胞LX-2、人胚肾Τ细胞 293t、人脐静脉血管内皮细胞huvec等四种人正常细胞的生长影响不大，对HSF和LX-2有 轻微抑制。
【附图说明】
[0012] 图1为香豆素 β (ab)和对骨肉瘤的抑制作用图；
[0013] 图2为香豆素 Mab)对MG-63骨肉瘤细胞凋亡和周期的作用图；
[0014] 图3为香豆素 Mab)对癌细胞抑制作用图；
[0015] 图4为香豆素 β (AB)对正常细胞抑制作用图。
【具体实施方式】
[0016] 以下结合附图，对本发明的一种香豆素 β抑制癌细胞生长的应用做进一步的详 细说明。
[0017] 实施例1 :香豆素 β和对三种骨肉瘤细胞的生长抑制作用
[0018] 骨肉瘤是一种多见于年轻人的恶性肿瘤，现在主要的治療方法是切除和放射治 療，还没有成熟的化疗方案，传统的一线抗癌药，如顺铂，对骨肉瘤的治療效果不理想，现在 临床上主要使用甲氨蝶呤来进行辅助治療。于是想使用从箭毒木分出来的新化合物香豆素 Μ本外检测下其对骨肉瘤是否有细胞毒性。使用灭菌PBS配置lmg/ml的PBS香豆素 β溶 液，选取各种肺癌癌细胞进行细胞生长试验，设置4个重复，使用ΜΤΤ方法检测细胞生长情 况，阳性对照使用甲氨蝶呤，结果数据使用T-test分析差异显著性，使用的细胞介绍如下。
[0019] 表1实验使用到的骨肉瘤亚型：
[0021] 结果由图1可以看出，香豆素 β (ab)对实验用到的三种骨肉瘤细胞均有抑制作 用，且均强于同浓度下的临床用药甲氨蝶呤的抑制活性，香豆素 β对于MG-63的抑制活性 最强，达到75 %左右。
[0022] 实施例2:香豆素 β对的凋亡和细胞周期的影响
[0023] 由于香豆素 β对MG-63有最强的药效，使用Annexin V-FITC/PI双探针来检测香 豆素 β对MG-63骨肉瘤细胞凋亡的影响。其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨 酸（phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的 内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V (膜联蛋白-V)与PS高亲和力 结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
[0024] 碘化丙啶（Propidium Iodide，PI)不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细 胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI 联合使用时，前者可以分辨活细胞（Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-)， 而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC和PI结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+)。同 时通过70 %乙醇处理的细胞，PI可以透过细胞膜然后将核酸染色，通过流式细胞可以对细 胞内染色体的数量进行定量，以对细胞的周期情况进行分析。
[0025] 将MG-63细胞均匀铺于12孔板中，8小时后加入20 μ g/ml，40 μ g/ml，80 μ g/ml的 香豆素 β。48小时后，使用Annexin V-FITC/PI方法检测细胞凋亡和周期的情况。结果如 下：
[0026] 如图2所示，香豆素 Mab)对MG-63骨肉瘤细胞凋亡和周期的作用。图中，A : MG_63control的凋亡情况。Β :5 μ g/ml香豆素 β处理MG-63细胞的凋亡情况。C :10 μ g/ ml香豆素 β处理MG-63细胞的凋亡情况。D :20 μ g/ml香豆素 β处理MG-63细胞的凋亡 情况。E :MG-63control的细胞周期情况。F :10 μ g/ml香豆素 β处理MG-63细胞的细胞周 期情况。G:香豆素 β处理MG-63细胞的细胞周期情况统计。
[0027] 由图2可以看出，香豆素 β可以引起MG-63细胞的凋亡发生，并有浓度依赖性，主 要引起细胞进入早期凋亡，由E，F可以看出香豆素 β对细胞周期无明显影响。
[0028] 实施例3:香豆素 β对癌细胞的生长抑制作用
[0029] 使用灭菌PBS配置lmg/ml的PBS香豆素 β溶液，选取各种贴壁癌细胞进行细胞 生长试验，设置4个重复，使用ΜΤΤ方法检测细胞生长情况，阳性对照使用紫衫醇，结果数据 使用T-test分析差异显著性，结果如图3所示。
[0030] 其中，香豆素 β溶液浓度均为23. 6 μ mol (10 μ g/ml)，紫杉醇（toxal)浓度均为 11.8ymol(10μg/ml)〇
[0031] 由图3可以看出，香豆素 β (ab)对肺腺癌细胞A549系有最强的抑制作用，对人乳 腺癌MCF-7的抑制作用其次，对人肝癌细胞HEPG2、膀胱癌细胞EJ和T24有一点抑制作用， 对人宫颈癌细胞HELA、人结肠癌细胞HT29、人胰腺癌细胞PANC-1、人乳腺癌细胞MDA有轻微 抑制活性。
[0032] 实施例4:香豆素 β对普通细胞的生长抑制作用
[0033] 选取各种人正常细胞进行试验，阳性对照使用紫衫醇，设置4个重复，使用ΜΤΤ方 法检测细胞生长情况，结果数据使用T-test分析差异显著性，结果如图4所示。其中，香豆 素 β溶液浓度均为23. 6 μ mol (10 μ g/ml)，紫杉醇（toxal)浓度均为11. 8 μ mol (10 μ g/ ml)
[0034] 由图4可以看出，香豆素 β (AB)对这四种人正常细胞（人成纤维细胞HSF、人肝星 形细胞LX-2、人胚肾T细胞293t、人脐静脉血管内皮细胞huvec)的生长影响不大，对HSF 和LX-2有轻微抑制，对另两种细胞的生长没有显著影响。
[0035] 香豆素 β抑制癌细胞生长的应用，用于开发治疗骨肉瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、膀 胱癌、宫颈癌、结肠癌、胰腺癌等；香豆素 β治疗癌症的剂型包括但不仅限于散剂、片剂、颗 粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等。
[0036] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 香豆素β抑制癌细胞生长的应用。2. 如权利要求1所述的香豆素β抑制癌细胞生长的应用，其特征在于：所述癌细胞为 MG-63骨肉瘤细胞、肺癌细胞Α549、乳腺癌MCF-7、肝癌细胞HEPG2、膀胱癌细胞EJ、Τ24、人 宫颈癌细胞HELA、人结肠癌细胞ΗΤ29、人胰腺癌细胞PANC-1、人乳腺癌细胞MDA。
【专利摘要】本发明提供了一种香豆素β对实验用到的三种骨肉瘤细胞均有抑制作用，且均强于同浓度下的临床用药甲氨蝶呤的抑制活性，香豆素β对于MG-63的抑制活性最强，达到75％左右；可以引起MG-63细胞的凋亡发生，并有浓度依赖性，主要引起细胞进入早期凋亡，香豆素β对细胞周期无明显影响；香豆素β对肺腺癌细胞A549系有最强的抑制作用，对人乳腺癌MCF-7的抑制作用其次，对人肝癌细胞HEPG2、膀胱癌细胞EJ和T24有一点抑制作用，对人宫颈癌细胞HELA、人结肠癌细胞HT29、人胰腺癌细胞PANC-1、人乳腺癌细胞MDA有轻微抑制活性。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/37
【公开号】CN105287510
【申请号】CN201510793622
【发明人】赖仞, 王淦, 容明强
【申请人】中国科学院昆明动物研究所
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月18日