专利名称：王枣子乙素作为免疫抑制剂的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中草药中活性成分的新的适应症，具体地说是中草药王枣子中活性成分王枣子乙素作为免疫抑制剂的应用。
背景技术：
王枣子(Rabdosia amethytoides)系唇形科香茶菜属植物中的一种，是民间常用草药，用于抗菌消炎等。江苏省1989年中药材标准已收载。
在正常情况下，人体的免疫系统保护机体有三个方面的作用，即抵抗外来因子入侵的防御作用，维持自身平衡和稳定的作用，消除突变细胞的监视作用。一旦免疫反应异常，均能引起组织损害而致病，称免疫性疾病。免疫性疾病有两种，一种是免疫功能低下引起的，称免疫缺陷病；另一种是免疫功能超常引起的，称自身免疫性疾病(自身免疫病、超敏反应等)。又分器官特异性和系统性自身免疫病两种，前者病变限于某一特定器官，后者病变危及多种器官和组织，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、多肌炎等。(《病理学》、第三版、武忠弼主编，人民卫生出版社1995年4月出版)。
关于香茶菜属类植物调节免疫功能的作用，所公开的多是增强机体的免疫功能，也就是适应免疫缺陷症。如《大萼香茶菜总二萜对小鼠免疫功能的调节作用》一文指出总二萜对正常及免疫功能低下小鼠的体液免疫和细胞免疫机能均有显著促进作用(《中药材》1999.22(7)p348～350)。《尾叶香茶菜对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究》一文指出尾叶香茶菜的抗肿瘤机制与提高荷瘤机体的细胞免疫功能有关(《中国中医药科技》2000.7(2).p89～89)。
自身免疫病(Autoimmunity disease，AID)是严重危害人类健康的常见难治性疾病之一，目前尚无满意的治疗药物。长期以来，现代医学实施的标准治疗是激素非特异性免疫抑制疗法，但只能改善症状，却无法消除病因，且副作用较大。
近年来，有关天然药物治疗自身免疫性疾病的相关研究是药学界的研究热点。从目前对天然药物治疗自身免疫病的相关药理学研究来看，天然药物比目前临床使用的西药有着明显的优势，其主要是通过免疫抑制、免疫调节、抗氧化、诱导细胞凋亡及影响神经递质而发挥治疗自身免疫疾病的作用。天然药物的免疫药理作用不是独立于其他功能的单一作用，而是紧密与神经、内分泌、免疫调节网络(NIM)相联系的统一的功能系统。因此，国内外把从自然界中寻找治疗自身免疫性疾病的药物作为此类药物研究的首选方法。
安徽省医学科学研究所王先荣等对王枣子中的活性成份进行过系统的研究，从中分离出王枣子甲素、乙素和丙素，均有贝克杉烷型(ent-kaurane)二萜基本骨架。甲素经Jone’s试剂氧化可转变为乙素，丙素用1％草酸水溶液处理，C14-乙酰基被水解后亦转化为乙素，从而确立王枣子乙素的结构为
《王枣子的新二萜-王枣子甲素》(《中草药》1982年第13卷第6期p.12～13。
发明内容
申请人曾就王枣子水煎液和醇提液在免疫功能影响方面对小鼠作了体内和体外实验，结果显示，水煎液和醇提液的含药血清均能抑制淋巴细胞增殖，具有免疫抑制作用，并于2003年2月21日申请了发明专利(申请号03112870.X)。在此基础上，申请人进一步分离提取液，采用药效学实验方法追踪活性部位，最终寻找到王枣子乙素是王枣子免疫抑制作用的有效成分。
研究结果表明，王枣子乙素能显著抑制ConA及LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，可抑制细胞免疫及体液免疫，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂使用。临床上，可以对系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、慢性肾炎、自身免疫性溶血性贫血、结核病等自身免疫性疾病以及器官移植进行运用治疗。
具体实施例方式
1、王枣子粗粉用乙醇或丙酮回流提取得到提取液，用活性炭或石油醚脱色(叶绿素)，减压脱溶得到浸膏，用乙酸乙酯再萃取，萃取物通过硅胶柱层析，用氯仿-丙酮递增洗脱，其中氯仿-丙酮(10∶1)洗脱液中得到目标产物王枣子乙素，脱去溶剂便得到无色针晶状王枣子乙素。
2、用王枣子乙素和雷公藤多甙进行免疫抑制作用的药效学实验见下表1、表2。
表1王枣子乙素及雷公藤多甙对伴刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的影响组别浓度(mg/L)0.001 0.01 0.1 1 10 100SI 0.237±0.046**Δ 0.258±0.022**ΔΔ 0.303±0.027**0.214±0.033**Δ0.199±0.019**Δ0.204±0.025**ΔΔL 0.300±0.040**0.297±0.027*Δ 0.302±0.024**0.236±0.023**0.224±0.022**0.229±0.039**D 0.408±0.092 0.371±0.027*0.300±0.042**0.273±0.037**0.286±0.057**0.279±0.030**ConA单纯刺激 0.534±0.131同上，分解组别 浓度(mg/L)0.001 0.01 0.1王枣子乙素(SI) 0.237±0.046**Δ 0.258±0.022**ΔΔ 0.303±0.027**雷公藤多甙(L)0.300±0.040**0.297±0.027*Δ 0.302±0.024**助溶剂(DMS0) 0.408±0.092 0.371±0.027*0.300±0.042**ConA单纯刺激 0.534±0.131组别 浓度(mg/L)1 10 100王枣子乙素(SI) 0.214±0.033**Δ 0.199±0.019**Δ 0.204±0.025**ΔΔ雷公藤多甙(L)0.236±0.023**0.224±0.022**0.229±0.039**助溶剂(DMS0) 0.273±0.037**0.286±0.057**0.279±0.030**ConA单纯刺激 0.534±0.131*表示与ConA单纯刺激组比较，P＜0.05，**表示与ConA单纯刺激组比较，P＜0.01；Δ表示与相同浓度的DMS0比较，P＜0.05，ΔΔ表示与相同浓度的DMS0比较，P＜0.01。
结果表明，王枣子乙素(0.001mg/L、0.01mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)及雷公藤多甙(0.01mg/L)能显著抑制ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，具有细胞免疫抑制作用。
表2王枣子乙素及雷公藤多甙对脂多糖(LPS)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的影响组别 浓度(mg/L)0.001 0.010.1 1 10 100SI 0.211±0.041**0.194±0.025**0.208±0.011**0.185±0.035**0.218±0.022**0.163±0.014**L 0.325±0.0390.225±0.061**0.231±0.042**0.247±0.016**0.185±0.020**0.181±0.019**LPS单纯刺激0.321±0.010同上，分解组别 浓度(mg/L)0.0010.010.1 1王枣子乙素(SI) 0.211±0.041**0.194±0.025**0.208±0.011**0.185±0.035**雷公藤多甙(L)0.325±0.0390.225±0.061**0.231±0.042**0.247±0.016**LPS单纯刺激 0.321±0.010组别 浓度(mg/L)110100王枣子乙素(SI) 0.185±0.035**0.218±0.022**0.163±0.014**雷公藤多甙(L)0.247±0.016**0.185±0.020**0.181±0.019**LPS单纯刺激 0.321±0.010
*表示与LPS单纯刺激组比较，P＜0.05，**表示与ConA单纯刺激组比较，P＜0.01。
结果表明，王枣子乙素(0.001mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)及雷公藤多甙(0.01mg/L)能显著抑制LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，具有体液免疫抑制作用。
权利要求
1.王枣子乙素作为免疫抑制剂的应用，其特征在于王枣子乙素作为制备治疗自身免疫疾病药物的应用。
全文摘要
王枣子乙素作为免疫抑制剂的应用，就是王枣子乙素作为制备治疗自身免疫疾病药物的应用。王枣子乙素是中草药王枣子中的一种活性成分。经药效学试验表明，其能显著抑制ConA诱导的和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，具有细胞免疫抑制和体液免疫抑制作用。在临床上可望治疗各种自身免疫性疾病。
文档编号A61P37/06GK1541643SQ0311336
公开日2004年11月3日 申请日期2003年4月29日 优先权日2003年4月29日
发明者李云森, 韩正宾, 许伟国, 陈子珺, 邱晓林, 王树新 申请人:宿州绿源中医药科技有限公司