专利名称：儿茶素应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的制作方法
技术领域：
本发明属于制药领域，具体涉及儿茶素应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的新用途。
背景技术：
儿茶素及其氧化产物都是碳氢氧三元化合物，是由糖类经一系列酶的作用，通过莽草酸途径，形成苯环化合物，最后合成为儿茶素。儿茶素是茶叶的重要成分，约占茶多酚含量的75%到80%，也是茶的苦涩味的来源之一。儿茶素具有明显的酚的特性，能使重金属和蛋白质沉淀，在水溶液中易被空气氧化，常用作抗氧化剂。已报道儿茶素在防治心血管疾病、预防癌症等具有多种功能，但在解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的功效方面未见报道。
发明内容
本发明提供一种利用儿茶素制成的口服液，应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物的新用途。具体包括以下步骤:I)儿茶素按一定浓度配制成溶液；I)建立小鼠PAEs类环境内分泌干扰物染毒模型及儿茶素干预分组实验；2)干预效果生物学指标检测。本发明目的是利用儿茶素解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物。
图1为肝脏组织HE染色图2为睾丸组织HE染色图3为睾丸组织间质细胞芳香化酶表达免疫荧光
具体实施例方式本发明涉及一种利用儿茶素解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物，通过以下实验例加以说明。I材料和方法1.1 材料1.1实验动物雄性小鼠(ICR)购自杭州师范学院实验动物中心。1.2 试剂苏木素、伊红购自珠海贝 索生物技术有限公司；Giemsa染料购自上海生工生物工程有限公司；荧光染料Rhl23、FITC标记山羊抗兔二抗、兔抗芳香化酶多抗购自SantaCruz ;包埋石蜡购自Leica ;免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；环磷酰胺(CP)购自上海第二制药厂；邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)、邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP)购自上海百灵威科技有限公司。按等质量混合6种PAEs类化合物(DMP、DEP、DBP、BBP, DEHP, DPP)溶于植物油配制成浓度低、中、高(40mg/kg、400mg/kg、4000mg/kg)三种不同剂量的染毒试剂，4°C保存备用。儿茶素按10mg/kg 50mg/kg浓度配制水溶液。1.3 仪器突光显微镜购自Nicon ;切片机购自Leica ;突光分光光度计购自Thermo。1.2雄性小鼠骨髓微核率测定 雄性小鼠54只，体重约20g，随机分成9组，每组6只。包括:混合染毒低、中、高剂量组(40,400,4000mg/kg),单一剂量组(DBP, 4000mg/kg),干预复合高剂量组,干预对照组(儿茶素，25mg/kg)，阳性对照组(CP)，空白组(植物油)，正常组。染毒组连续染毒4天，阳性对照组于处死前两天给予腹腔注射CP40mg/kg，每天一次。各组于末次用药后次日脱颈椎致死，每只小鼠取其两侧股骨骨髓，制片。细胞涂片置显微镜油镜下观察，每只小鼠骨髓涂片计数1000个骨髓嗜多染红细胞， 若一个嗜多染红细胞中出现两个或两个以上微核，仍按一个有微核细胞计数。并计数200个细胞中多染红细胞(PCE)与正染红细胞(NCE)的比值。应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，平均值以标准差反映离散水平，两组之间差异显著性进行t检验分析。1.3雄性小鼠精子畸形率测定雄性小鼠54只，体重约20g，随机分成9组，每组6只，包括:混合染毒低、中、高剂量组(40,400,4000mg/kg),单一剂量组(DBP, 4000mg/kg),干预复合高剂量组,干预对照组(儿茶素，25mg/kg)，阳性对照组(CP)，空白组(植物油)，正常组。染毒组连续染毒5天，阳性对照组于第四、第五两天给予CP 40mg/kg，每天一次。各组小鼠在染毒后正常饲养至35天，脱颈椎致死，取出其双侧附睾放入盛有300 μ I生理盐水的离心管中制成涂片并染色，于显微镜下观察。每只小鼠观察1000个精子，按WyiObeks的分类标准，记录无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾等数目并统计畸形率。应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，平均值以标准差反映离散水平，两组之间差异显著性进行t检验分析。1.3雄性小鼠30天染毒及取材雄性小鼠36只，体重约20g，随机分为6组:混合毒性组(混合中剂量400mg/kg)、单一毒性组(DBP，400mg/kg，)、干预复合毒性组、干预对照组(儿茶素)、空白组(植物油)、正常组。PAEs类化合物连续染毒30天后，眼球取血，分离得到血清，委托杭州迪安医学检测公司检测其中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量。同时取材小鼠的肝脏组织和睾丸组织备用。1.4肝组织、睾丸组织HE染色按1.3中取材的肝脏组织和睾丸组织进行固定，然后依次经过85%酒精、95%酒精1、95%酒精11、95%酒精111、95%酒精IV、100%酒精1、100%酒精I1、二甲苯1、二甲苯I1、石蜡1、石蜡I1、石蜡III中进行脱水，脱水后进行石蜡包埋、切片，HE染色观察组织结构。1.5睾丸组织荧光免疫组化
睾丸切片脱蜡至水，然后置于0.lmol/L且PH = 6.0的枸橼酸液修复液中进行抗原修复，用微波炉100火力三分钟至微微沸腾，再用50火力维持7分钟，停止加热后自然冷却20-30分钟。用PBS 3分钟，用滤纸擦去标本外的PBS，滴加封闭血清(免疫组化试剂盒北京中衫中的封闭液)在湿盒中37°C封闭30分钟(室温30分钟也可)。用滤纸擦去封闭液，勿洗。滴加适宜浓度的芳香化酶一抗置湿盒中4°C孵育过夜(37°C I小时多也差不多)，再用PBS3分钟X5次洗去一抗，用滤纸擦去标本外的PBS。滴加荧光二抗室温置湿盒中避光孵育I小时，用PBS3分钟X3次洗去二抗，用滤纸擦去标本外的PBS。最后用含甘油PBS封片，并在荧光显微镜下立即观察。2.结果2.1雄性小鼠精子畸形分型结果显示各剂量混合染毒组精子畸形率均高于空白组，混合高剂量组精子畸形率高于单一高剂量组(P < 0.01)。结果见表2。表2各组小鼠精子畸形率的比较
权利要求
1.儿茶素在解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物中的应用。
2.—种如权 利I中所述儿茶素按10mg/kg 50mg/kg浓度与水配制成溶液,经口给药用于解毒。
全文摘要
本发明涉及儿茶素应用于解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物。本发明所述的儿茶素，制成口服液经口给予，其用量10mg/kg～50mg/kg，对解毒机体摄入PAEs类环境内分泌干扰物具有较好的疗效，具有良好的应用前景。
文档编号A61K31/353GK103110620SQ20131006009
公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月26日 优先权日2013年2月26日
发明者胡华军, 胡天宇, 葛建, 王敏君, 姚元发, 韩宝瑜, 屈叶青, 王慧, 杨丛军, 袁萍, 李燕, 冷贞贞, 刘晓菲 申请人:中国计量学院