专利名称：一种预知子籽提取物在治疗原发性肝癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预知子籽提取物在治疗原发性肝癌药物中的应用，具体说，是涉及一种预知子籽乙醇提取物在制备治疗原发性肝癌的药物制剂中的应用，属于中药技术领域。
背景技术：
预知子别名八 月札、八月炸、八月楂、八月瓜、八月果、百日瓜、牵藤瓜、腊瓜、拉拉果、木通子、压惊子、畜菖子、拿子、桴梭子、覆子、冷饭包、野香交、羊开口，为木通科植物木通(Akebia quinata (Thunb.)Decne.)、三叶木通(Akebia trifoliate (Thunb.)Koidz.)、白木通(Akebia trifoliate (Thunb.) Koidz.var.australis ((Diels)) Rehd.)的干燥近成熟果实。预知子性味苦寒，归肝、胆、胃、膀胱经；疏肝理气，和胃，活血止痛，软坚散结，利尿；用于肝胃气滞，脘胁胀痛，饮食不消，下痢便泄，痛经闭经，疝气疼痛，痰核痞块，小便不利等治疗。但是，现有技术中没有关于预知子籽的单独功效的论述。迄今为止，预知子相关论著、专利、科技成果等文献内容多以复方组成药物之一的形式在临床应用为主，单味药研究特别是临床常用功效机制研究罕见；在这些文献中，预知子参与的组方多次提及治疗肝癌，但未见其单味药和单味药的作用机制研究报道。预知子相关专利共计132项几乎全是复方临床应用，仅有I项单味药相关专利CN200910040491.1中公开了一种预知子提取物及其制剂和其在抗抑郁药物中的用途。对于预知子这一肝癌治疗中药复方常用药，其单味药应用于恶性肿瘤治疗的研究发明至目前未见相关报道。原发性肝癌是我国重大疾病，居恶性肿瘤死亡率第2位，发病人数约占全球的55%，严重威胁人民生命，造成家庭和社会经济负担。然而原发性肝癌治疗目前尚无特效治疗方法和药物。因此，寻找疗效确切的抗癌药物迫在眉睫。原发性肝癌发生发展的关键在于癌变细胞不可调控的恶性增殖，因此有效抑制癌细胞的增殖是原发性肝癌治疗的关键所在。经文献检索，迄今尚未见有预知子籽提取物用于抑制原发性肝癌细胞恶性增殖及其直接相关疾病方面的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种预知子籽提取物的新应用。本发明提供的预知子籽提取物的一种新应用是指以预知子籽提取物作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备治疗原发性肝癌的药物制剂。所述的预知子籽提取物优选为预知子籽的乙醇提取物。作为进一步优选方案，所述的预知子籽的乙醇提取物是由体积分数为60 90%的乙醇水溶液对预知子籽进行回流提取而得。作为更进一步优选方案，所述的预知子籽的乙醇提取物是由8 10倍重量体积的体积分数为70 80%的乙醇水溶液对预知子籽进行回流提取I 3次，每次I 3小时而得。所述的药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸齐 、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴齐 、贴剂；优选口服剂型，如:胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。所述的口服剂型可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适宜的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂；适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠；适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。本发明采用癌细胞生长增殖MTT检测方法，实验论证了预知子籽提取物具有非常显著地抑制原发性肝癌细胞恶性增殖的作用，有望通过抑制原发性肝癌细胞恶性增殖而作为活性成分应用于治疗原发性肝癌的药物制剂的制备中，为预知子籽提取物开拓了一种新的药用价值。
图1是各药物组对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用对比图，其中:a是普通细胞组，b是用药浓度为0.6mg/mL的G418组，c是用药浓度为2.5mg/mL的预知子非籽其余部分的乙醇提取物组，d是用药浓度为2.5mg/mL的预知子籽乙醇提取物组。图2体现了预知子籽提取物的用药对肝癌细胞的形态学影响(采用倒置镜相显微镜(400倍)观察的形态图片)，其中:a图是常规培养的SMMC7721肝癌细胞；b图是在给药浓度为1.88mg/mL的预知子籽提取物作用24h后的SMMC7721肝癌细胞；c图是在给药浓度为1.88mg/mL的预知子籽提取物作用48h后的SMMC7721肝癌细胞；d图是在给药浓度为1.88mg/mL的预知子籽提取物作用72h后的SMMC7721肝癌细胞。图3是不同剂量的预知 子籽提取物对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用对比图，其中:a是普通细胞组，b是用药浓度为0.6mg/mL的G418组，c是用药浓度为1.25mg/mL的预知子籽乙醇提取物组，d是用药浓度为1.88mg/mL的预知子籽乙醇提取物组，e是用药浓度为2.5mg/mL的预知子籽乙醇提取物组。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细阐述。实施例1:制备预知子籽及预知子非籽其余部分的乙醇提取物取中药饮片预知子，分离预知子籽；取预知子籽及预知子非籽其余部分各35g，于60°C烘箱中干燥24小时后粉碎至颗粒直径〈0.25cm。向粉碎的预知子籽及预知子非籽其余部分的颗粒中分别加入350mL的体积分数为75%的乙醇水溶液，室温下密闭浸泡2h后，水浴加热到回流，每次回流提取2h，共回流提取2次；收集乙醇提取液，过滤，分别浓缩至30mL，用碱调节pH为7.0，然后加双蒸水定容至35mL (Ig 生药/mL)。细胞培养条件抽滤灭菌，分别分装保存于-80°C备用。
实施例2:预知子籽及预知子非籽其余部分的乙醇提取物对原发性肝癌细胞增殖的抑制作用实验将SMMC7721肝癌细胞进行96孔板铺皿；过夜细胞贴壁后，均以2.5mg/mL的用药浓度进行预知子籽乙醇提取物及预知子非籽其余部分的乙醇提取物的给药；并取用药浓度为0.6mg/mL的细胞毒抗生素G418为阳性对照。分别在给药24、48、72h后采用MTT法检测SMMC7721肝癌细胞增殖生长率，并绘制
量效曲线。图1是各药物组对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用对比图，其中:a是普通细胞组，b是用药浓度为0.6mg/mL的G418组，c是用药浓度为2.5mg/mL的预知子非籽其余部分的乙醇提取物组，d是用药浓度为2.5mg/mL的预知子籽乙醇提取物组。由图1对比结果可见:用药浓度为2.5mg/mL的预知子籽提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖的抑制作用明显优于相同用药浓度的预知子非籽其余部分的乙醇提取物，并强于用药浓度为0.6mg/mL的阳性对照药一细胞毒抗生素G418。实施例3:不同剂量的预知子籽提取物对原发性肝癌细胞增殖的抑制作用实验将SMMC7721肝癌细胞进行96孔板铺皿；过夜细胞贴壁后，分别以最终浓度为1.25mg/mL、1.88mg/mL、2.5mg/mL的3个剂量的预知子籽提取物进行给药；并取用药浓度为0.6mg/mL的细胞毒抗生素G418为阳性对照。分别在给药24、48、72h后采用MTT法检测SMMC7721肝癌细胞增殖生长率，并绘制
量效曲线。图2体现了预知子籽提取物的用药对肝癌细胞的形态学影响(采用倒置镜相显微镜(400倍)观察的形态图片)；其中:a图是常规培养的SMMC7721肝癌细胞；b图是在给药浓度为1.88mg/mL的预知子籽提取物作用24h后的SMMC7721肝癌细胞；c图是在给药浓度为1.88mg/mL的预知子籽提取物作用48h后的SMMC7721肝癌细胞；d图是在给药浓度为
1.88mg/mL的预知子籽提取物作用72h后的SMMC7721肝癌细胞。由图2可见:随着预知子籽提取物的作用时间的延长，肝癌细胞内空泡逐步变大，部分细胞出现凋亡现象。图3是不同剂量的预知子籽提取物对SMMC7721肝癌细胞恶性增殖的抑制作用对比图，其中:a是普通细胞组，b是用药浓度为0.6mg/mL的G418组，c是用药浓度为1.25mg/mL的预知子籽乙醇提取物组，d是用药浓度为1.88mg/mL的预知子籽乙醇提取物组，e是用药浓度为2.5mg/mL的预知子籽乙醇提取物组。由图3的对比结果可见:当预知子籽提取物的用药浓度为1.25mg/mL时，已显示出对SMMC7721肝癌细胞增殖的抑制作用；当用药浓度增加到1.88mg/mL时，预知子籽提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖的抑制作用已接近用药浓度为0.6mg/mL的阳性对照组一细胞毒抗生素G418组；当用药浓度增加到2.5mg/mL时，预知子籽提取物对SMMC7721肝癌细胞增殖的抑制作用已强于用药浓度为0.6mg/mL的阳性对照组一细胞毒抗生素G418组。综上所述可见:预知子籽乙醇提取物对肝癌细胞恶性增殖具有显著地抑制作用，并呈量效关系，有望通过抑制原发性肝癌细胞恶性 增殖而作为活性成分应用于治疗原发性肝癌的药物制剂的制备中，具有药用价值。
最后有必要在此说明的是:以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进 和调整均属于本发明的保护范围。
权利要求
1.一种预知子籽提取物在治疗原发性肝癌药物中的应用，其特征在于:是以预知子籽提取物作为活性成分用于制备治疗原发性肝癌的药物制剂。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于:是以预知子籽提取物作为唯一活性成分用于制备治疗原发性肝癌的药物制剂。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于:所述的预知子籽提取物为预知子籽的乙醇提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于:所述的预知子籽的乙醇提取物是由体积分数为60 90%的乙醇水溶液对预知子籽进行回流提取而得。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于:所述的预知子籽的乙醇提取物是由8 10倍重量体积的体积分数为70 80%的乙醇水溶液对预知子籽进行回流提取I 3次，每次I 3小时而得 。
全文摘要
本发明公开了一种预知子籽提取物在治疗原发性肝癌药物中的应用，所述应用是指以预知子籽提取物作为活性成分用于制备治疗原发性肝癌的药物制剂。本发明采用癌细胞生长增殖MTT检测方法，实验论证了预知子籽提取物具有非常显著地抑制原发性肝癌细胞恶性增殖的作用，有望通过抑制原发性肝癌细胞恶性增殖而作为活性成分应用于治疗原发性肝癌的药物制剂的制备中，为预知子籽提取物开拓了一种新的药用价值。
文档编号A61K131/00GK103191162SQ201310140809
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月22日 优先权日2013年4月22日
发明者方肇勤, 任红艳, 梁超, 张园园, 潘志强, 卢文丽, 刘小美 申请人:上海中医药大学