海燕提取物的提取方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，涉及海燕提取物在抗肿瘤药物及保健食品中的应用。所得提取物为海燕干燥全体，经75%乙醇提取及大孔吸附树脂洗脱纯化后所得。本发明所得提取物具有较强体外抗肿瘤活性，可用于制备肿瘤药物及有抗肿瘤活性的保健食品，如抗结肠癌药物等。
【专利说明】海燕提取物的提取方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用
[0001]【技术领域】:
本发明涉及医药【技术领域】，具体涉及海燕抗肿瘤活性成分的提取纯化方法及其在抗肿瘤药物制备中的应用。
[0002]【背景技术】:
海星为沿海的养殖业带来了巨大的经济损失，海星的食量惊人，一个海星I天能吃掉十几只扇贝，给贝类养殖业造成巨大的经济损失。为了减少海星带来的经济损失和危害，迫切需要对海星带来的灾害进行治理，尤其是对前面提到的海星中对青岛海域造成严重危害的两个常见种，罗氏海盘车和海燕。近年来，海星的药用价值逐步被重视，而根据中国海洋药物词典记载，这两个种类当中的海燕本身具有很高的药用价值。海燕的干燥全体可以入药，有补肾壮阳、祛风湿、止痛的功效，主治阳痿、风湿腰痛、胃痛等症状。
[0003]现有技术中没有对海燕提取物的制备方法和其抗肿瘤活性的相关报道。
[0004]
【发明内容】
:
本发明的目的是提供一种海燕提取物的提取及精制方法，所述的海燕提取物含有抗肿瘤活性成分，能够很好地应用于制备抗肿瘤药物。
[0005]本发明所述海燕提取物是通过如下技术方案获得的:
(1)海燕干燥全体，用75%乙醇进行提取；
(2)提取液经浓缩后经大孔吸附树脂进行分离，先用纯水及10%乙醇进行洗脱，然后用20%-60%乙醇进行洗脱，得到洗脱液；
其中，步骤(I)的提取次数为2-3次，提取时间为1-3小时。
[0006]其中，步骤(2)所述的大孔树脂选自D101。
步骤(2)中40%至60%乙醇大孔吸附树脂分离所得馏分，经体外细胞增殖抑制实验测试表明，具有很好的抑制人结肠癌细胞HCTl 16增殖的作用。
[0007]本发明的海燕提取物可单独或与其他药学上可接受的成分构成组合物以制备抗肿瘤药物及食品和保健品。
[0008]所述的抗肿瘤药物剂型为胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。
[0009]【专利附图】
【附图说明】:
图1为海燕提取物抑制人结肠癌HCTl 16细胞增殖活性结果。
[0010]HX-4:海燕75%乙醇提取物大孔吸附树脂40%乙醇洗脱馏分；HX-6:海燕75%乙醇提取物大孔吸附树脂60%乙醇洗脱馏分。
[0011]【具体实施方式】:下面结合实例对本发明做进一步的描述，但具体实例并不对本发明做任何限定
实例1:海燕提取物的制备
(I)海燕(Asterina pectinifera)干燥全体5公斤,用3倍量75%乙醇进行提取3次，每次3小时。合并提取液。
[0012](2)提取液经浓缩后干燥后，所得浸膏用水溶解，经DlOl型大孔吸附树脂进行分离，先用纯水及10%乙醇进行洗脱，再用20%至60%乙醇进行洗脱，收集40%至60%乙醇洗脱液。
[0013]实例2:海燕提取物抑制人结肠癌HCTl 16细胞增长活性测试
(I)细胞培养
人结肠癌细胞HCTl 16从Human Sciences Research Resource Bank (日本人类科学基金会，东京，日本)获得，培养于含有10%热灭活小牛血清的RPMI 1640培养液中，37°C，5% CO2，饱和湿度条件下培养。选取对数生长期细胞进行实验。
[0014](2)体外细胞增殖抑制实验
噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长情况，PC3细胞分别种于96孔培养板，每个孔细胞数为5 X 13,培养于含有10%热灭活小牛血清的RPMI 1640培养液中，在37°C，5% 0)2条件下培养24 h。培养24 h后，以PBS冲洗细胞，然后分别加入新的培养液和系列浓度的待测样品。实验组设6个药物浓度组，每组药物的终浓度分别为5、10、20、50、100、200 Pg/ml，对照组加入同样浓度的二甲基亚砜(DMS0)，培养24 h。培养结束前4 h每孔加入20 μ? MTT溶液(5mg/ml)，离心弃上清，加入200 μ? DMSO充分溶解结晶物，酶标仪测570 nm处吸光度值。因为吸光度值与培养液中活细胞数成正比，所以通过吸光度值可以计算细胞存活百分率。所得结果如图1所示，经梯度洗脱馏分肿瘤生长抑制活性结果表明，海星75%乙醇提取物经大孔吸附树脂分离，40%到60%洗脱馏分具有很强的体外抑制人结肠癌HCT116细胞增殖活性。
【权利要求】
1.一种海燕提取物，其特征在于，制备步骤如下: (1)海燕干燥全体，用75%乙醇进行提取； (2)提取液经浓缩后经大孔吸附树脂进行分离，用20%、40%、60%乙醇进行洗脱，得到洗脱液； (3)收集40%至60%乙醇大孔吸附树脂分离所得馏分，浓缩干燥后得到海燕目标活性提取物。
2.根据权利要求1所述海燕提取物，其特征在于所述步骤(I)中，有机溶剂为75%乙醇。
3.根据权利要求1所述海燕提取物，其特征在于所述步骤(2)中，梯度洗脱浓度为40%至60%浓度百分比的乙醇。
4.根据权利要求3所述海燕提取物，其特征在于收集40%至60%乙醇洗脱液。
5.根据权利要求1所述海燕提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5所述，其特征在于所述抗肿瘤药物为抗结肠癌药物。
【文档编号】A61K35/616GK104434983SQ201410752544
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月10日 优先权日:2014年12月10日
【发明者】陈刚, 裴月湖, 王海峰, 何凤军, 白皎 申请人:沈阳药科大学