一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、醋酸杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后纯化得各斜面菌种，备用；利用各斜面菌种制备相应的原菌液；将各原菌液按2：2：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，得复合微生态菌剂的一级种子；将一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中培养得复合微生态菌剂的二级种子；最后将二级种子按10%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ培养以获得复合微生态菌剂的成品。本发明复合微生态制剂对生猪的皮肤病起到较好的治疗和预防效果，且还具有使用方便、作用较为持久的特点。
【专利说明】—种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及一种养殖领域用的复合微生态制剂，尤其涉及一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂。
【【背景技术】】
[0002]我国的养猪业经过几十年的发展，规模化、集约化程度越来越高，随着国外新品种的引进，流通渠道的拓宽，及饲养密度的增大，为生猪皮肤性疾病的滋生创造了客观条件，生猪的皮肤疾病也越来越成为养猪业发展的一大障碍。当生猪感染皮肤病后会出现食欲减退、精神萎顿、被毛松乱、及怕冷嗜睡的问题；有的会堆挤一起，有的会因发痒而蹭墙，个别病猪还伴有腹泻现象，从而使生猪的生长发育受阻，严重的病猪还会瘦弱而死；另外，由于生猪个体好动，生长环境潮湿阴暗，采用药剂敷贴使用极不方便；所以，生猪的皮肤疾病发病率高，治疗效果较差。
【
【发明内容】
】
[0003]本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其对生猪的皮肤病起到较好的防治疗效果，且还具有使用方便、作用较为持久的特点。
[0004]本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的:一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下:
[0005](I)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、醋酸杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、醋酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
[0006](2)原菌种液体培养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天 得嗜酸乳杆菌原菌液；将醋酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于30°C下好氧培养1-2天得醋酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
[0007](3) 一级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、醋酸杆菌原菌液及酿酒酵母原菌液按2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种醋酸杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
[0008](4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养2天再厌氧培养5-10天，得复合微生态制剂的二级种子；
[0009](5)成品培养:将所得的二级种子按10%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧培养2天再厌氧培养5-10天，获得复合微生态制剂的成品。
[0010]进一步地，所述步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0011]进一步地，所述步骤(I)中醋酸杆菌在斜面中活化的具体操作为:制备斜面培养基II，并将斜面培养基II置于121°C下灭菌20min，接着冷却至60°C以下加入无水乙醇，且每IOOOml斜面培养基II需加入IOOml无水乙醇，之后用接种环将醋酸杆菌接种于斜面培养基II上，然后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH5.5。
[0012]进一步地，所述步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0013]进一步地，所述步骤(2)中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液体培养基III的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
[0014]进一步地，所述步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。
[0015]进一步地，所述步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。
[0016]进一步地，所述步骤(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜10%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%,30°白酒10%、醋10%、余量为水。
[0017]本发明一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂的有益效果在于:通过将该复合微生态制剂的原液或稀释液喷洒、涂刷在生猪身上，使良性的微生物有序地定植于生猪的粘膜、皮肤表面，能够迅速分解生猪皮肤表面上的真菌和其他皮肤分泌物，并形成一层良性微生物屏障，可以阻止病原微生物在生猪体表的定植，从而使得该复合微生态制剂对生猪的皮肤病起到较好的治疗效果；另外，该复合微生态制剂还具有使用方便、作用较为持久的特点。
【【具体实施方式】】
[0018]本发明一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下:
[0019](I)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、醋酸杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、醋酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
[0020](2)原菌种液体培养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将醋酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于30°c下好氧培养1-2天得醋酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
[0021](3) 一级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、醋酸杆菌原菌液及酿酒酵母原菌液按2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种醋酸杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
[0022](4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养2天再厌氧培养5-10天，得复合微生态制剂的二级种子；
[0023](5)成品培养:将所得的二级种子按10%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧培养2天再厌氧培养5-10天，获得复合微生态制剂的成品。
[0024]其中，步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。步骤(I)中醋酸杆菌在斜面中活化的具体操作为:制备斜面培养基II，并将斜面培养基II置于121°C下灭菌20min,接着冷却至60°C以下加入无水乙醇,且每IOOOml斜面培养基II需加入IOOml无水乙醇，之后用接种环将醋酸杆菌接种于斜面培养基II上，然后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH5.5。步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C 、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0025]步骤(2)中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液体培养基III的组分:马铃薯200克、蔗糖20 克、水 1000ml、PH 自然。
[0026]步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠
0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。步骤
(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜10%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%,30°白酒10%、醋10%、余量为水。
[0027]需要说明的是，本发明中各培养基的百分比均为质量百分比。
[0028]本发明所述的复合微生态制剂用于对生猪的皮肤进行清洁， 申请人:以该复合微生态制剂应用于某生猪养殖场为例进行阐述说明，具体地:
[0029]在福建福清某养殖场，选商品猪、及母猪各20头，随机分为实验组和对照组，每组中商品猪、及母猪各100头。实验组隔天喷洒、涂刷复合微生态制剂的20倍清水稀释液一次，严重皮肤病的用复合微生态制剂直接涂刷患处；对照组不喷洒、涂刷复合微生态制剂；由同一个饲养员操作管理；试验日期为5月10日至6月10日，试验记录参见如下表1。
[0030]表1本发明复合微生态制的试验记录
[0031]
【权利要求】
1.一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其特征在于:其制备方法的具体步骤如下: (1)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、醋酸杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、醋酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用； (2)原菌种液体培养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将醋酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于30°C下好氧培养1-2天得醋酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液； (3)—级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、醋酸杆菌原菌液及酿酒酵母原菌液按2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种醋酸杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子； (4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养2天再厌氧培养5-10天，得复合微生态制剂的二级种子； (5)成品培养:将所得的二级种子按10%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧培养2天再厌 氧培养5-10天，获得复合微生态制剂的成品。
2.根据权利要求1所述的 一用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°C下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
3.根据权利要求1所述的一用于生猪皮肤清洁的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中醋酸杆菌在斜面中活化的具体操作为:制备斜面培养基II，并将斜面培养基II置于121°C下灭菌20min，接着冷却至60°C以下加入无水乙醇，且每IOOOml斜面培养基II需加入IOOml无水乙醇，之后用接种环将醋酸杆菌接种于斜面培养基II上，然后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10克、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH5.5。
4.根据权利要求1所述的一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态菌剂，其特征在于:所述步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
5.根据权利要求1所述的一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态菌剂，其特征在于:所述步骤(2)中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基II的组分:酵母粉10克、葡萄糖10、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH5.5 ;液体培养基III的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、水 1000ml、PH 自然。
6.根据权利要求1所述的一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态菌剂，其特征在于:所述步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。
7.根据权利要求1所述的一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态菌剂，其特征在于:所述步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%、余量为水。
8.根据权利要求1所述的一种用于生猪皮肤清洁的复合微生态菌剂，其特征在于:所述步骤(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜10%、氯化铵0.1%、氯化钠0.1%、磷酸二氢钾.0.05%、硫酸镁0.05%、.硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%,30°白酒10%、醋10%、余量为水。
【文档编号】A61P17/00GK103463142SQ201310372962
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年8月23日 优先权日:2013年8月23日
【发明者】陈琳, 莫艳华, 秦火保, 周世须 申请人:福州大用生物应用科技有限公司