一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法
【专利摘要】本发明公开了一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架乳化液的生产改进方法，包括如下步骤：(1)按处方进行原料配制；(2)利用高速剪切机对药液进行预处理，剪切速率为：10000-20000rpm，剪切时间为10-30min；(3)利用高压均质机进行均质；均质压力为：1000-2000bar，均质次数：2-4次；(4)对乳化液进行三级过滤，分别为：第1级为0.8-1.0μm，第2级为0.45-0.65μm；第3级为0.22μm。本发明所得产品不含钛粉杂质，乳化效果稳定，有利于实现除菌过滤。
【专利说明】一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物【技术领域】中红色诺卡氏菌细胞壁骨架乳化液的制备及过滤方 法，特别指红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉经乳化后除菌过滤的方法。
【背景技术】
[0002] 红色诺卡氏菌（Nocardia rubra)是具有较强免疫活性的微生物，经过细胞破碎、 去除细胞内容物和细胞膜蛋白质及脂类等组份物质，得到其细胞壁骨架。红色诺卡氏菌细 胞壁骨架是一种含诺卡氏霉菌酸、中性多糖以及粘肽的活性物质，可非特异性地刺激细胞 免疫功能，并可促进多种细胞因子分泌，参与抗肿瘤免疫过程，用于多种肿瘤的治疗或辅助 治疗。
[0003] 现有技术中，红色诺卡氏菌细胞壁骨架乳化液的生产方法为在超声波仪中进行乳 化，但采用该方法所得的产品存在含钛粉杂质（有黑色沉淀物）、乳化液较不稳定（通常两 天就会分层）以及难以过滤的缺陷。目前国内对于红色诺卡氏菌细胞壁骨架的研究多为剂 型及其治疗用途的拓展，本发明则从红色诺卡氏菌细胞壁骨架制剂的生产工艺着手，对其 进行改进。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是：目前生产工艺所得产品含钛粉杂质、乳化效果稳定 性较差、难以实现除菌过滤的问题。
[0005] 本发明的技术方案如下：
[0006] -种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，包括如下步骤：
[0007] (1)按处方进行原料配制；
[0008] (2)利用高速剪切机对药液进行预处理，使不溶性的红色诺卡氏菌细胞壁骨架较 好的分散于药液中；剪切速率为：10000-20000rpm，剪切时间为10-30min ;
[0009] (3)利用高压均质机进行均质，实现红色诺卡氏菌细胞壁骨架均匀地混悬于药液 中，并减小了其粒径，得到均一、稳定的乳化液；均质压力为：l〇〇〇-2〇〇〇bar，均质次数：2-4 次；
[0010] (4)对乳化液进行三级过滤，利用不同孔径的滤芯使乳化液中大颗粒物质逐步得 到去除，减轻除菌过滤滤芯的负荷，避免堵塞而影响收率；分别为：第1级为0.8-1. 0 μ m，第 2 级为 0· 45-0. 65 μ m ;第 3 级为 0· 22 μ m。
[0011] 在本发明的较佳实施例中，步骤（4)中，第一次过滤所用滤芯孔径为Ι.ομπι，第二 次过滤所用滤芯孔径为〇. 65 μ m,第三次过滤滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0012] 在本发明的较佳实施例中，步骤（4)中，第一次过滤所用滤芯孔径为0.8μπι，第二 次过滤所用滤芯孔径为〇. 45 μ m,第三次过滤滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0013] 在本发明的较佳实施例中，步骤（2)中，剪切速率优选为17000rpm，剪切20min。
[0014] 在本发明的较佳实施例中，步骤（3)中均质压力为1500bar。
[0015] 本发明提供了一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架乳化液的制备方法。本发明方法根据 红色诺卡氏菌细胞壁骨架的理化特性，在按处方进行配制后，利用剪切机对配制后液体进 行分散后，再利用高压均质机，对其进行均质，可以获得均一、稳定的乳化液，且外观佳：
[0016] 1.利用高速剪切机剪切速率为：10000-20000rpm，剪切时间为10-30min(优选 15000-17000rpm，20min)，对药液进行预处理，可以使不溶性的红色诺卡氏菌细胞壁骨架较 好的分散于药液中；
[0017] 2.利用高压均质机进行均质，均质压力为：1000-2000bar，均质次数：2_4次，可以 实现红色诺卡氏菌细胞壁骨架均匀地混悬于药液中，不含钛粉杂质，并减小了其粒径，易于 过滤，得到均一、稳定的乳化液；
[0018] 3.对乳化液进行三级过滤，利用不同孔径的滤芯使乳化液中大颗粒物质逐步得到 去除，减轻除菌过滤滤芯的负荷，避免堵塞而影响收率。
[0019] 本发明的有益效果：
[0020] 1.本发明所采用剪切机及高压均质机对红色诺卡氏菌细胞壁骨架药液进行分散 及均质，有利于药液的乳化，保证药液乳化效果；
[0021] 2.大大减小了红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉在药液中的粒径大小，明显提高除菌 过滤效果；
[0022] 3.高压均质乳化可连续处理，有利于提高效率与处理规模；
[0023] 4.本发明采用高压均质乳化，不会带入黑色钛粉杂质，避免了现有技术污染产品 的风险；
[0024] 5.本发明采用的高压均质机可在恒温水浴下操作，避免了破壁过程发热升温而影 响产品质量；
[0025] 6.本发明采用三级过滤的方式，逐步去除药液中较大颗粒杂质，利于除菌过滤的 有效进行。
[0026] 本发明所得的产品为均一乳白色，且放置超过2天未出现分层现象；不含钛粉杂 质（黑色沉淀）；过滤液无菌试验合格。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 图1为对比例1的结果，有黑色沉淀；
[0028] 图2为实施例2的结果，无黑色沉淀。
【具体实施方式】
[0029] 对比例1超声波乳化法（现有技术）
[0030] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量进行准确称量、配制。
[0031] 处方：
[0032] 红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉lg
[0033] 角鲨烯 2_4ml
[0034] 介质 适量
[0035] 介质配方：
[0036] 20 %甘露醇注射液 250ml
[0037] 聚山梨酯 80 l-2ml
[0038] 注射用水 1500_1600ml
[0039] 2.超声波处理参数：
[0040] 输出功率60% ;每次超声时间6min ;间歇6min ;每次处理量500ml。
[0041] 3.药液经过处理后，将乳化液转移至过滤系统中进行过滤，滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0042] 对比例2
[0043] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0044] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至9000rpm，剪切20min。
[0045] 对比例3
[0046] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0047] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至21000rpm，剪切20min。
[0048] 实施例1
[0049] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0050] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至17〇〇〇rpm，剪切20min。
[0051] 3.剪切后将药液转移至高压均质机进样杯中，开启高压均质机进行均质，工作压 力为 l5〇Obar。
[0052] 4.收集均质后药液，进行第二次均质。
[0053] 5.药液经过两次均质后，得到均一的乳化液。将乳化液转移至过滤系统中进行过 滤。过滤滤芯孔径为〇. 22 μ m。
[0054] 实施例2
[0055] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0056] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至17〇〇〇rpm，剪切20min。
[0057] 3.剪切后将药液转移至高压均质机进样杯中，开启高压均质机进行均质，工作压 力为 l5〇Obar。
[0058] 4.收集均质后药液，进行第二次均质。
[0059] 5.药液经过两次均质后，得到均一的乳化液。将乳化液转移至过滤系统中进行过 滤。第一次过滤所用滤芯孔径为1. 〇 μ m，第二次过滤所用滤芯孔径为0. 65 μ m，第三次过滤 滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0060] 实施例3
[0061] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0062] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至15000rpm，剪切20min。
[0063] 3.剪切后将药液转移至高压均质机进样杯中，开启高压均质机进行均质，工作压 力为 l5〇Obar。
[0064] 4.收集均质后药液，进行第二次均质。
[0065] 5.药液经过两次均质后，得到均一的乳化液。将乳化液转移至过滤系统中进行过 滤。第一次过滤所用滤芯孔径为1. 〇 μ m，第二次过滤所用滤芯孔径为0. 65 μ m，第三次过滤 滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0066] 实施例4
[0067] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0068] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至20000rpm，剪切20min。
[0069] 3.剪切后将药液转移至高压均质机进样杯中，开启高压均质机进行均质，工作压 力为 l5〇Obar。
[0070] 4.收集均质后药液，进行第二次均质。
[0071] 5.药液经过两次均质后，得到均一的乳化液。将乳化液转移至过滤系统中进行过 滤。第一次过滤所用滤芯孔径为1. 〇 μ m，第二次过滤所用滤芯孔径为0. 65 μ m，第三次过滤 滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0072] 实施例5
[0073] 1.红色诺卡氏菌细胞壁骨架原粉及辅料按处方量（处方同对比例1)进行准确称 量、配制。
[0074] 2.将高速剪切机分散头深入药液，至底部约l-2cm，开启电源进行剪切分散。将转 速调至l〇〇〇〇rpm，剪切20min。
[0075] 3.剪切后将药液转移至高压均质机进样杯中，开启高压均质机进行均质，工作压 力为 l5〇Obar。
[0076] 4.收集均质后药液，进行第二次均质。
[0077] 5.药液经过两次均质后，得到均一的乳化液。将乳化液转移至过滤系统中进行过 滤。第一次过滤所用滤芯孔径为1. 〇 μ m，第二次过滤所用滤芯孔径为0. 65 μ m，第三次过滤 滤芯孔径为0. 22 μ m。
[0078] 备注：对比例及实施例进行过滤的过程中所用滤芯均为同规格的科百特囊式滤 芯，滤膜材质为PES。
[0079] 不同乳化方法对比
[0080] 1.乳化情况
[0081] 对比例1 :超声波乳化过程中，药液升温很快，需在冰浴下进行。
[0082] 对比例2 :药液经9000rpm剪切20min后，仍可见较大的颗粒物质。
[0083] 对比例3 :药液在21000rpm剪切速度下出现大量起沫现象。
[0084] 实施例1、2、3 :乳化过程无起沫现象，均质过程压力无波动。
[0085] 实施例4 :药液经lOOOOrpm剪切20min后，未见明显大颗粒物质。但药液转移至 均质机进行均质后，引起均质机压力出现小幅上升现象，说明药液里颗粒粒径仍未达到均 质机的要求。
[0086] 实施例5 :药液在20000rpm剪切速度下开始出现明显起沫现象，泡沫挂壁后破碎， 药液成份滞留容器内壁上，导致药液成份的损失。
[0087] 2.乳化结果对比
[0088]
【权利要求】
1. 一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，包括如下步骤： (1) 按处方进行原料配制； (2) 利用高速剪切机对药液进行预处理，剪切速率为：10000-20000rpm，剪切时间为 l〇-30min ； (3) 利用高压均质机进行均质；均质压力为：1000-2000bar，均质次数：2-4次； (4) 对乳化液进行三级过滤，分别为：第1级为0. 8-1. Ο μ m，第2级为0. 45-0. 65 μ m ; 第3级为0. 22 μ m。
2. 如权利要求1所述的一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，其特征在于： 步骤（4)中，第一次过滤所用滤芯孔径为Ι.Ομπι，第二次过滤所用滤芯孔径为0.65μπι，第 三次过滤滤芯孔径为0. 22 μ m。
3. 如权利要求1所述的一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，其特征在于： 步骤（4)中，第一次过滤所用滤芯孔径为0. 8 μ m，第二次过滤所用滤芯孔径为0. 45 μ m，第 三次过滤滤芯孔径为0. 22 μ m。
4. 如权利要求1所述的一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，其特征在于： 步骤（2)中，剪切速率为15000-17000rpm，剪切20min。
5. 如权利要求1所述的一种红色诺卡氏菌骨架乳化液的生产改进方法，其特征在于： 步骤（3)中均质压力为1500bar。
6. 如权利要求1所述的一种制备红色诺卡氏菌细胞壁骨架乳化液的改进方法，其特征 在于：步骤（4)所用的过滤滤芯材质为亲水性滤膜，包括聚砜类或聚酰胺类或纤维素酯类 或改性PTFE。
【文档编号】A61K9/107GK104083407SQ201410322540
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月8日 优先权日:2014年7月8日
【发明者】徐镜, 蔡金柱, 查贝贝, 谢必峰, 王曦, 邵恩文 申请人:福建省山河药业有限公司