一种预防肾结石的罐子草提取物及其制备工艺和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种预防肾结石的罐子草提取物及其制备工艺和应用，所述的罐子草提取物为罐子草新鲜嫩叶的乙醇浸提物，它是在室温条件下，将罐子草的新鲜嫩叶磨浆后用浓度为92%-100%（v/v）的乙醇溶液浸提，提取液浓缩成稠膏，冷冻干燥，即得。本发明的提取物能明显降低机体尿液及肾组织中草酸和钙含量，从而达到预防肾结石的目的。
【专利说明】—种预防肾结石的罐子草提取物及其制备工艺和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药材提取【技术领域】，涉及一种预防肾结石的罐子草提取物及其制备工艺和应用。
【背景技术】
[0002]肾结石是泌尿系统常见疾病，发病率为3.4% -4.8%，发病率随年龄增加，危险性也增大。肾结石成分以草酸钙和磷酸钙结石为主，占全部尿路结石的80% -84%，其中草酸钙结石占58.8%。目前肾结石治疗主要运用体外冲击波碎石术(ESWL)和腔内泌尿外科手术，但难以根治肾结石，其术后复发率为78%-80%。我国在应用中医药治疗和预防结石病复发方面有着悠久的历史，但该方面的基础研究尚有待进一步深入研究并开发。
[0003]罐子草，灌木，高0.3-1.2m。茎四棱形或稀六棱形，被平贴的糙伏毛或上升的糙伏毛，叶对生或有时3枚轮生；叶柄长0.5-lcm，密被平贴糙伏毛；叶片坚纸质，卵形至卵状披针形，长5.5-11.5cm，宽2.3_3cm，先端渐尖，基部钝或圆形，全缘，具缘毛，两面被糙伏毛、微柔毛及透明腺点；基出脉5。稀疏聚伞花序组成圆锥花序，顶生；花萼长约2.3cm，长坛形，外面被刺手状有柄星状毛及微柔毛，裂片4，长三角形或卵状三角形，长约1.1cm ;花瓣4，深红色至紫色，卵形，长约2cm ;雄蕊8，花药具长喙，药隔基部微膨大，末端具刺毛2 ;子房半下位，4室，先端具一圈短刚毛，上半部被疏微柔毛。蒴果长卵形，为宿存萼所包，宿存萼长坛状，中部略上缢缩，长1.4-2cm，被刺毛状有柄星状毛。花果期7-9月。生于海拔250_800m的山坡、山谷、水边、路旁、疏林中或灌木丛中。分布于长江流域以南及台湾、广西、贵州等地。
[0004]目前，罐子草被用于湿热泻痢、淋痛、久咳、劳嗽、咯血、月经不调、白带等方面的疾病，尚无文献报道罐子草或其提取物具有预防肾结石的功效。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种以罐子草作为原料制备的预防肾结石罐子草提取物及其制备工艺和应用。
[0006]为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如下技术方案:
一种预防肾结石的罐子草提取物，所述的罐子草提取物为罐子草新鲜嫩叶的乙醇浸提物。需要说明的是，本发明所述的中药材罐子草选用野牡丹科植物朝天罐Osbeckiaopipara C.Y.Wuet C.Chen 的新鲜嫩叶。
[0007]—种上述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，该工艺包括如下步骤:将罐子草新鲜嫩叶磨浆后用浓度为92%_100% (v/v)的乙醇溶液浸提，提取液浓缩成稠膏，冷冻干燥，即得。
[0008]优选地，如上所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其中所述的浸提步骤为:将罐子草新鲜嫩叶磨浆后用浓度为92%-100% (v/v)的乙醇溶液超声振荡0.5-1.5h，然后在室温下放置36_720h。优选室温下放置浸提48_96h。
[0009]优选地，如上所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其中所述的浓缩步骤在42 °C以下进行。
[0010]优选地，如上所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其中乙醇溶液的用量为罐子草新鲜嫩叶质量的3-8倍(v/w)。
[0011]本发明通过设计试验观察小鼠负重游泳时间，检测小鼠负重游泳后血浆中乳酸的含量，证实了罐子草提取物具有提高小鼠运动耐力、降低运动后小鼠血清血中乳酸的作用。本发明试验还证明罐子草提取物组小鼠运动后肝糖元含量明显高于正常对照组，血清尿素氮明显低于正常对照组，说明罐子草提取物有较好维持肝糖元含量，提高动物对运动负荷的适应能力。
[0012]肾结石的形成是肾内一定大小的晶体潴留或粘附到肾小管上皮细胞，草酸钙晶体(CaOX)是肾结石中最常见的晶体。乙二醇是草酸的前体，进入体内后转化成羟乙酸，后者既可在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化为草酸，也可经乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸，乙醛酸又可以直接在非酶作用下转化为草酸。因此，给动物喂食乙二醇进入体内代谢后最终转化为草酸，经尿排出，增加尿中草酸的浓度，加服氯化铵，肾内结石形成率提高。本发明通过肾结石动物模型试验研究发现，能明显降低肾结石小鼠尿液及肾组织中草酸和钙含量，从而达到预防肾结石的目的，其抑制结石的形成可能是通过抑制草酸钙结晶的生长和聚集，减少草酸钙晶体在肾中的形成和沉积从而抑制草酸钙结石的形成。
【具体实施方式】
[0013]以下是本发明罐子草乙醇浸提物干粉的制备实施例和效果试验例，对本发明做进一步说明和阐述。但是，本发明的保护范围并不受限于以下实施例，凡是基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0014]实施例1罐子草乙醇浸提物的制备
称取1.16kg罐子草的新鲜嫩叶，清洗干净，磨浆，所得浆液中加入6L体积百分浓度为95%的乙醇溶液，超声振荡lh，频率26.4kHz,随后在室温下放置72h后进行过滤，将滤液在40°C条件下减压浓缩成稠膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，过100目筛，得罐子草乙醇浸提物干粉。
[0015]对比例I罐子草提取物的制备
将1.0kg罐子草新鲜嫩叶，清洗干净，用6L体积百分浓度为95%的乙醇溶液加热回流提取2h，过滤，重复提取2次，合并2次滤液，将滤液在40°C条件下减压浓缩成稠膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，过100目筛，得罐子草提取物干粉。
[0016]实施例2罐子草乙醇浸提物对小鼠草酸钙肾结石模型的抗结石试验研究
ICR小鼠，雄性，体质量28-32g，随机分为如下四组:正常对照组、模型对照组、试验I组、试验II组，每小组12只。除正常对照组小鼠每天自由饮用正常水外，其他各组均自由饮用成石水(含1%乙二醇+1%氯化铵)，连续饮用6周，同时并进行如下灌胃给药干预:以体质量为基准，正常对照组和模型对照组灌胃纯化水，剂量为0.lml/10g ;试验I组灌胃对比例I制备的罐子草提取物干粉，试验II组灌胃本发明实施例1制备的罐子草乙醇浸提物，剂量均为0.76g/kg/d，每天上午9点和下午5点左右各灌胃一次，共给药6周。于实验第6周末次给药后，收集4h尿液，采用甲基百里酚蓝法测定尿钙含量，以及采用高锰酸钾退色法测定草酸含量。第6周末次给药后24h处死全部小鼠，取肾脏称重，用生理盐水进行组织匀浆，测定肾钙、草酸含量。
[0017]小鼠造模后，精神萎靡，畏寒卷缩，毛色变黄，呈耸毛状，体质量增长明显抑制，肾脏指数(肾脏/体质量比)增加，部分动物死亡。而试验II组组与模型对照组相比，症状有很大改善，但对肾脏指数的影响不显著，具体结果见表I。
[0018]表I各组小鼠体质量和肾脏重量比较
pmm^肾耐旨数绷Ij 样本量(
(g)(m?/g)
正顆挪担12 38.8±2.I16.1±1.0
模型对照10 30.4土1.8"19.仕 1.1**
试验 I 组11 31.?±1.620.3±0.9
试验 II 组12 33.1±2.0*19.2±1.4
与正常对照组比较，*Ρ < 0.05，蛛P < 0.01 ；
与模型对照组比较，?Ρ < 0.05，--Ρ < 0.01。
[0019]另外，肾组织形态学和肾组织草酸钙结晶观察发现，模型对照组和试验I组的动物肾脏水肿，表面苍白，质地变硬，肾脏表面可见散在白色小点。而试验II组动物的症状较轻，表面红润，质地正常。值得注意的是，通过表2的试验结果可以看出，试验II组的尿液和肾脏的钙含量、草酸含量明显低于模型对照组0° < 0.05或产< 0.01)，也显著低于试验I组{P < 0.05)，这说明罐子草乙醇浸提物对小鼠草酸钙肾结石模型具有非常显著的抗结石作用，而通过乙醇加热回流提取的罐子草提取物没有表现出抗结石的生物活性，这可能是高温破坏了相应的活性成分所致。
[0020]表2各组小鼠尿液、肾脏的钙和草酸含量比较
Wm Wm^Wm^^Wm.^
B.(mmol/L)(mmol/L) (mmol/g) (|imol/g)
正 SIS120.69 +0.120.08 !±0^0340.45tCLll0.86+0.41
模型组101.84 土 0.47**0.132±0.021**0.64±0.15*1.55±0.48**
试验丨组11 1.?1±0.300.139±0.0190.58±0.1S1.61+0.37
试验IIIi120.95±0.23*'s0.093±0.020'!>0.50*0.12—*0.97±0.35>!—'
模型组与正常组比较，*Ρ < 0.05,>< 0.01 ；
试验组与模型组比较，V <0.05，yyZ7 <0.01。
【权利要求】
1.一种预防肾结石的罐子草提取物，其特征在于:所述罐子草提取物为罐子草新鲜嫩叶的乙醇浸提物。
2.一种根据权利要求1所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其特征在于该工艺包括如下步骤:在室温条件下，将罐子草的新鲜嫩叶磨浆后用浓度为92%-100%v/v的乙醇溶液浸提，提取液浓缩成稠膏，冷冻干燥，即得。
3.根据权利要求2所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其特征在于，所述浸提步骤为:将罐子草的新鲜嫩叶磨浆后用浓度为92%-100%v/v的乙醇溶液超声振荡0.5-1.5h，然后在室温下放置36-720h。
4.根据权利要求2所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其特征在于:所述浓缩步骤在42 °C以下进行。
5.根据权利要求2所述预防肾结石的罐子草提取物的制备工艺，其特征在于:所述乙醇溶液的用量为罐子草新鲜嫩叶质量的3-8倍v/w。
6.权利要求1所述的罐子草新鲜嫩叶的乙醇浸提物在制备预防肾结石的药物中的应用。
【文档编号】A61K36/80GK104127454SQ201410422184
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年8月26日 优先权日:2014年8月26日
【发明者】武希芬 申请人:崔银方