一种蚕蛹多肽及其制备方法、应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及蚕蛹多肽1，能预防或治疗糖尿病。所述的多肽1序列为RLGRRLSEDPATPADQ。所述多肽1的制备方法，步骤包括（1）煎煮，（2）酶解，（3）蛋白质分离，（4）半制备RP-HPLC分离纯化，（5）冻干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解。所述的蛋白质分离采用大孔树脂、葡聚糖凝胶。所述多肽1在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。本发明中的蚕蛹多肽1，是从蚕蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的预防或治疗糖尿病。
【专利说明】一种奋蛹多肽及其制备方法、应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽提取物。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞 代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者 的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病 总人数的85-90%，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。
[0003] 目前，大多数患者通过注射胰岛素或者口服降糖药物来帮助控制体内血糖，或调 节胰岛素分泌等方法治疗糖尿病。但是这些药物副作用较大，临床上不能长期使用，不能满 足糖尿病患者的临床需要。如果能够从自然产物中提取的安全、有效的治疗糖尿病的药物， 将为广大糖尿病患者带来福音。
[0004] 蚕蛹作为"普通食品管理的食品新资源名单"中唯一的昆虫类食品，具有很高的药 用价值，药理作用也很广泛，除了可以促进生长、提高免疫力，还具有降血糖的作用。然而， 蚕蛹是蚕丝的主要副产品，我国每年可产鲜蚕蛹五十万吨以上。但是因为技术欠缺，相当一 段时期内蚕蛹基本上都被用作词料，导致了一定的资源浪费。因此，如果能从蚕蛹中提取出 治疗糖尿病的化合物成为药物开发的热点。尽管如此，并没有成熟开发的从蚕蛹中提取化 合物问世，用于预防或治疗糖尿病。
【发明内容】
：
[0005] 本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种蚕蛹多肽1，能安全、有效 治疗糖尿病。
[0006] 技术方案
[0007] -种蚕蛹多肽1，其氨基酸序列为RLGRRLSEDPATPADQ。所述多肽1的制备方法，其 特征在于：步骤包括（1)煎煮，（2)酶解，（3)蛋白质分离，（4)半制备RP-HPLC分离纯化， (5)冻干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解。所述的蛋白质分离采用大孔树 月旨、葡聚糖凝胶。所述多肽1在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发 症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。
[0008] 有益结果：
[0009] 本发明中的蚕蛹多肽1，是从蚕蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的预防或治 疗糖尿病。更优选是治疗糖尿病和/或糖尿病并发症药物中的用途。所述的糖尿病包括I 型糖尿病和Π 型糖尿病；所述的糖尿病并发症包括但不限于：糖尿病肾病、糖尿病高血压、 糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变等。
【具体实施方式】
[0010] 实施例I
[0011] 多肽的制备方法
[0012] 将蚕蛹加水煎煮2h后，冷却至室温；加入1 %木瓜蛋白酶和0. 5%碱性蛋白酶 酶解4h;采用大孔树脂按照分子量分离蛋白质，再用半制备RP-HPLC分离纯化，得到的 产物冻干后，即为蚕蛹多肽1。应用上述方法提取的蚕蛹多肽1，经过质谱鉴定，序列为 RLGRRLSEDPATPADQ，该序列为全新序列。也可以委托上海生工合成。
[0013] 实施例2
[0014] 蚕蛹多肽1的体外细胞活性测定
[0015] 采用MTT比色法。将对数生长的胰岛瘤细胞（INS-1细胞），以I. OX 105加入96 孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物蚕蛹多肽1 ; 空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMS0,孵育30min，在酶标仪570nm处测定吸光度A值，按公式细胞生长增殖率=(实验组吸 光值/对照组吸光值-I) X 100%。计算出实验药物的EC50为15. 04nmol/L。
[0016] 实施例3
[0017] 蚕蛹多肽1的体内降糖实验
[0018] 昆明小鼠，高脂高糖喂养至体重18?22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射链脲佐菌素（STZ) 50mg/kg (1 %的柠檬酸盐缓冲液溶解配制）。1周后小鼠尾静 脉采血测血糖（BS)，BS高于16mmol/L为造模成功。造模后将小鼠分为3组，每组10只，糖 尿病模型组（DM组）：给予等量的PBS缓冲液皮下注射；对照组（拜糖平）：20 μ g/kg皮下 注射给药（溶于〇· lmol/L PBS缓冲液），一天两次，连续15d ;样品组（蚕蛹多肽1):同对 照组；另取10只正常小鼠做为空白组。用药后第15d于尾静脉取血快速测量血糖。15d之 后，在停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。用25%葡萄糖溶液（2g/kg) 灌胃，灌胃后0、120分钟尾静脉取血检测血糖。
[0019] 结果：葡萄糖转运体蛋白多肽1具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈〇. 05,表 1);同时，可以缓解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其多肽1的作用与对照组拜糖平作 用相当。
[0020] 表1蚕蛹多肽1对小鼠降血糖作用
[0021]
[0022] *ρ〈0· 05，#p〈0. 01 与模型组相比
【权利要求】
1. 一种蚕蛹多肽，其特征在于：其氨基酸序列为RLGRRLSEDPATPADQ。
2. -种权利要求1所述多肽的制备方法，其特征在于：步骤包括（1)煎煮，（2)酶解， (3)蛋白质分离，（4)半制备RP-HPLC分离纯化，（5)冻干。
3. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：步骤（2)中酶解中所用的酶解 采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶。
4. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：步骤（3)中所述的蛋白质分离 采用大孔树脂、葡聚糖凝胶。
5. -种权利要求1所述的多肽在制备治疗糖尿病及糖尿病并发症药物中的应用。
6. 根据权利要求5的应用，其特征在于所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高 血压、糖尿病眼疾或糖尿病神经性病变。
【文档编号】A61P9/12GK104311632SQ201410508548
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】罗瑞雪 申请人:苏州普罗达生物科技有限公司