本发明涉及一种测定冻蚕蛹酸价和过氧化值的方法，具体涉及一种测定冻蚕蛹酸价和过氧化值的样品前处理方法。
背景技术：
冻蚕蛹是以缫丝工业的副产品“蚕蛹”为原料，经清洗、挑选、蒸煮、冷冻加工而成的具有丰富的脂肪、蛋白质、维生素、矿物质和微量元素的食品。它是一种优质的昆虫蛋白，其中蛋白质含量在50%以上，且蛋白质中的必需氨基酸种类齐全，符合联合国粮农组织和世界卫生组织（简称FAO/WHO）所规定的理想蛋白质模式，具有极高的营养价值。
韩国素有食用冻蚕蛹的传统习惯，每年都会从江苏、浙江、山东等地进口大量的冻蚕蛹。韩国对冻蚕蛹的安全卫生质量要求比较严格，对冻蚕蛹等进口产品实施酸价和过氧化值的精密检验。韩国的食品安全法规对这两个指标予以明确规定：酸价≤5.0mgKOH/g；过氧化值≤60meq/kg。然而，冻蚕蛹由于加工或存储不当，易发生蛋白质变质，导致酸价偏高，加之目前我国尚无标准分析方法，测定影响因素较多，导致自2007年以来，我国出口冻蚕蛹屡次遭韩国官方通报，而通报主要原因就是酸价和/或过氧化值超标。
目前，对于含食用油脂样品酸价、过氧化值的测定，一般是先对样品进行前处理，提取出油脂作为试样，再按动植物油脂酸价、过氧化值的方法进行测定。其中动植物油脂的酸价、过氧化值测定方法已较成熟，因此对此类样品酸价、过氧化值的测定，确保结果值准确、可靠的关键步骤在于样品的前处理，即如何在不影响测定结果的前提下提取出油脂。将于2017年3月1日实施的GB 5009.229-2016《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》和GB 5009.227-2016《食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定》虽然针对不同样品增加了试样制备规范，但其提取制备步骤较笼统，且需要浸提12h以上，时间长，不便于冻蚕蛹出口企业通关。此外，目前虽然有较多蚕蛹油提取研究的文献报道，但大多是为了将提取出的蚕蛹油加以利用或研究蚕蛹油的成分，提取过程会对油脂质量造成一定影响，从而影响冻蚕蛹酸价和过氧化值测定的准确性。
综上所述，如何快速，准确地测定冻蚕蛹酸价和过氧化值，及时地发现问题，对于出口企业的品控十分重要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种可同时用于测定冻蚕蛹酸价和过氧化值的样品前处理方法，以该方法处理试样，处理方法简便、对试样测定结果影响小，确保了测定精度，大大缩短了试样的分析时间，可以及时为冻蚕蛹出口企业提供数据支持。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种测定冻蚕蛹酸价和过氧化值的样品前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
①分样及预粉碎：将待测冻蚕蛹的试样混和均匀并分成质量为200~300g的待粉碎的试样堆，然后用粉碎设备或研磨设备将所述试样堆制成粒径不大于5mm的颗粒；
该粒径为颗粒的最大直径；
②匀质及静置浸提：将步骤①所得的颗粒全部转移至容器中，加入样品体积1.0~2.5倍的有机溶剂，用匀浆机以8000~12000r/min的转速匀浆20~30min后， 在20±5 oC下静置浸提至少3h；
③过滤及减压蒸馏：将步骤②所得的上层浸提液经漏斗过滤，取滤液，减压蒸馏蒸干溶剂，残留液即作为待测试样用于酸价和过氧化值的测定；
作为上述技术方案的优选，步骤②中的有机溶剂为石油醚、正己烷、环己烷、丙酮、无水乙醇、无过氧化物的乙醚中的一种或几种的混合液。
作为上述技术方案的优选，步骤②具体为：将步骤①所得的颗粒全部转移至容器中，加入样品体积1.5倍的石油醚或正己烷，用匀浆机以8000~12000r/min的转速匀浆20~30min后，在20±5 oC下静置浸提3h。
作为上述技术方案的优选，步骤②中的有机溶剂为石油醚和丙酮，且石油醚和丙酮的体积比为4:1，浸提时间为3h。
申请人意外的发现：当使用石油醚和丙酮的混合溶剂，并二者的体积比为4:1时，有机溶剂对试样中的油脂的提取速率和提取效率最高，且该有机溶剂提取对油脂的质量影响最小。
上述技术效果是相对于其他有机溶剂和其他体积比的石油醚和丙酮的混合溶剂而言的。
作为上述技术方案的优选，步骤③中的减压蒸馏是先在25~35 oC下减压蒸馏至残留溶剂少于30mL后，再升温至45oC减压蒸馏至无馏出。
申请人再次意外的发现：采用这种方式进行减压蒸馏，可以快速地彻底地将溶剂与油分离，并且对油的酸价和过氧化值的影响最小；作为对比，直接采用45℃进行减压蒸馏会使得残留液含量偏少，其原因可能是在蒸馏过程中样品被部分带出。
作为上述技术方案的优选，为了降低处理过程中油脂中的不饱和脂肪酸的氧化，对过氧化值的测定造成影响，步骤②中的容器为棕色容器。
作为上述技术方案的优选，步骤①为：将待测冻蚕蛹试样置于玻璃板上，用分样板把试样混和均匀，摊平，用四分法缩分试样至200~300g，然后用食品粉碎机或研磨机将缩分后的试样粉碎至粒径不大于5mm的颗粒。
作为上述技术方案的优选，步骤③的漏斗内装有无水硫酸钠。
综上所述，本发明与现有技术相比，具有以下突出优点及有益效果：
1、采用本发明的试样处理方法所得的油脂可同时用于测定冻蚕蛹的酸价和过氧化值，无需针对酸价、过氧化值的测定对冻蚕蛹进行不同的前处理，操作简便；
2、本发明的试样前处理方法，避免了前处理过程中可能发生的油脂酸败或氧化，使得测定结果更接近实际值，重复性好，结果准确可靠。
3、采用本发明的试样前处理方法，油脂的浸提时间由原来的至少12h 缩短为3h 左右，大大节约了分析时间，可以及时为冻蚕蛹出口企业提供数据支持。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
表1为实施例1~实施例6的前处理方法参数：
表1 实施例1~实施例6的前处理方法参数
其中，实施例1~实施例6的步骤①均采用分样板混合，用四分法缩分；步骤②采用棕色容器；步骤③的漏斗内装有无水硫酸钠。
采用上述实施例1~6前处理方法处理同一批冻蚕蛹样品，所得残留液再按GB/T 5009.37-2003中4.1和4.2的方法分别进行酸价和过氧化值的测定，所测得的冻蚕蛹酸价和过氧化值结果与使用国标GB 5009.229-2016《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》，GB 5009.227-2016《食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定》的所述方法测定同一批冻蚕蛹样品所得结果的比较分别见表2和表3。
表2冻蚕蛹酸价的测定结果
由表1、表2和表3可见，实施例1所用前处理方法所测得的酸价和过氧化值与国标法最为接近；实施例2和实施例3由于采用了不同混合比例的石油醚和丙酮的混合液作为提取液，即使延长了提取时间至4小时，其测定结果也和国标法相接近；实施例4由于负压蒸馏时温度较高，导致检测结果与国标法有较大差距；实施例5和实施例6分别采用石油醚和正己烷作为提取溶剂，其结果不如实施例1可靠。
证明了以体积比为4：1的石油醚和丙酮混合作为提取溶剂，配合合适的减压蒸馏步骤可以达到与国标法检测几乎相同的检测结果。
并且，采用本发明的试样处理方法所得的油脂可同时用于测定冻蚕蛹的酸价和过氧化值，操作更简便。实验结果表明，本发明的试样前处理方法，避免了前处理过程中可能发生的油脂酸败或氧化，方法的精密度较高，结果准确可靠，本发明浸提时间短，大大缩短了分析时间，同时降低了油脂了酸败和氧化，采用本发明前处理方法测定冻蚕蛹酸价和过氧化值与即将实施的国标法的比较见表4。
表4 国标法与本方法比较表
本发明实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出任何修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。