一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗肠易激综合征的药物口服制剂的检测方法，所述药物主要由柴胡炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草以及辅料制备而成，所述检测方法包括对口服制剂中炒白术、炒陈皮、炒枳实、乌梅和炙甘草的薄层色谱鉴别以及芍药苷盐酸小檗碱含量测定。所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，可有效检测治疗肠易激综合征的药物口服制剂的质量，各检测项标准能保证药物疗效。
【专利说明】一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，属于药品技术的领域。
【背景技术】
[0002] 肠易激综合征（IBS)是一组持续或间歇发作，以腹痛、腹胀、排便习惯和（或）大便 性状改变为临床表现的功能性肠胃病。致病原因有如下几个：1.胃肠道动力紊乱。2.内脏 感觉异常。3.精神因素。4.肠道感染。5.其他，部分IBS患者的症状与食物有关，肠道菌 群的紊乱可能也是产生症状的原因之一。
[0003] 肠易激综合征的临床表现有如下几种：根据主要症状分为：腹泻主导型；便秘主 导型；腹泻便秘交替型。腹痛是IBS的主要症状，伴有大便次数或形状的异常，腹痛多于排 便后缓解，部分病人应在进食后出现，腹痛可发生于腹部任何部位，局限性或弥漫性，疼痛 性质多样。持续性或间歇性腹泻，粪量少，呈糊状，含大量黏液，禁食72小时后症状消失；夜 间不出现，有别于器质性疾患；部分患者可因进食诱发；患者可有腹泻与便秘交替现象。便 秘，排便困难，大便干结，量少，可带较多黏液，便秘可间断或与腹泻相交替，常伴排便不尽 感。腹胀，白天较重，尤其在午后，夜间睡眠后减轻。近半数患者有胃灼热、恶心、呕吐等上胃 肠道症状，背痛、头痛、心悸、尿频、尿急、性功能障碍等胃肠外表现较器质性肠病显著多见， 部分病人尚有不同程度的心理精神异常表现，如焦虑、抑郁、紧张等。体征通常无阳性发现， 部分患者有多汗，脉快，血压高等自主神经失调表现，有时可于腹部触及乙状结肠曲或痛性 肠襻。
[0004] 目前IBS发病机制尚不清楚，由于发病机制复杂，现代医学尚无有效的治疗方 法，现今临床多以对症治疗为主，而药物治疗方面至今没有任何单一的药物可以有效地治 疗。以柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草制成的治疗肠易激 综合征的药物具有疏肝解郁，健脾益气的功效，能有效治疗肠易激综合征。为了更好地控制 该产品的质量，确保临床药效，本发明提供了这种药物的检测方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于，提供一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法；所述检测方 法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物的临床药效。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现： 一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述药物由柴胡250-400份、炒白芍 250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮100-300份、乌 梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料制备而成。
[0007] 具体地说，所述治疗肠易激综合征的药物，按照重量组份计算，由柴胡333份、炒 白芍333份、炒白术267份、防风200份、炒枳实200份、炒陈皮200份、乌梅200份、黄连 133份和炙甘草133份及辅料制备而成。
[0008] 其制备方法为：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干 燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂； 具体地说，其制备方法为：颗粒剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、 炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡Ih后，加10倍量水，煎 煮2次，每次lh，过滤，合并滤液，浓缩至80°C相对密度为1. 15?1. 25的浸膏，在60°C， 0. 07Mpa?0.08 Mpa环境下干燥，干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸 泡Ih后，加10倍量水，煎煮3次，每次lh，过滤，合并滤液，浓缩至80°C相对密度为1. 15? 1. 25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混 合，过80目筛，加入制成量50%糊精和0. 2%阿斯巴甜，混合均勻，以70%乙醇制粒，干燥，制 成颗粒，即得。
[0009] 胶囊剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、 黄连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡Ih后，加10倍量水，煎煮2次，每次lh，过滤，合 并滤液，浓缩至80°C相对密度为1. 15?1.25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa环境 下干燥，干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸泡Ih后，加10倍量水， 煎煮3次，每次lh，过滤，合并滤液，浓缩至80°C相对密度为1. 15?1.25的浸膏，在60°C， 0. 07Mpa?0. 08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合，过80目筛，加入 制成量25%的混合辅料混匀，混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成，用 90%乙醇为润湿剂制颗粒，制成颗粒后于60°C干燥，再过12目筛1次，并用60目筛分出细 粉，填装胶囊，即得。
[0010] 片剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄 连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡Ih后，加10倍量水，煎煮2次，每次lh，过滤，合并滤 液，浓缩至80°C相对密度为1. 15?1. 25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa环境下干燥， 干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸泡Ih后，加10倍量水，煎煮3次， 每次lh，过滤，合并滤液，浓缩至80°C相对密度为1. 15?1. 25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa? 0.08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合，过80目筛，加入制成量25%的 混合辅料混匀，混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成，用90%乙醇为润 湿剂制颗粒，压片，即得。
[0011] 所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对炒白术、防风、 炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对芍药 苷和/或盐酸小檗碱的含量测定。
[0012] 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炒白术的鉴别方法为：取颗粒 剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30?60°C的石油醚20mL，超声20min，过滤，挥 干，加入30?60°C石油醚ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照药材5g，同法制 得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 iU分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以石油醚：丙酮=10 : 1为展开剂展开，取出，瞭干，喷 以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
[0013] 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述防风的鉴别方法为：取颗粒剂/ 片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，加甲醇ImL溶解残渣， 作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试 验，吸取上述2种溶液各10 Ii 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以氯仿： 甲醇=3 : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置于 365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。 [0014] 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炒陈皮和炒枳实的鉴别方法为： 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至ImL 作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照药材5g， 加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇ImL使溶解，作为枳实对照药材溶液； 取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4 种溶液各10 U 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲醇：水 =100 : 17 : 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯：乙酸乙酯：甲酸：水=20 : 10 : 1 : 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm 紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点， 与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
[0015] 前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述乌梅的鉴别方法 为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸 干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用30? 60°C的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇lmL，作 为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成每 ImL含0. 6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10 ill分别点 于同一 100謹XlOCkm的娃胶G薄层板上，以环己烧：三氯甲烧：乙酸乙酯：甲酸=20 : 5 : 8 : 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置白光下检 视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
[0016] 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炙甘草的鉴别方法为：取颗粒剂 /片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加乙醚40mL，加热回流lh，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇 30mL，加热回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL， 合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇ImL溶解，作为供试品 溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述3种 溶液各10 U 1分别点于同一 200mmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯：冰醋酸 =20 : 7 : 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置 254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。 [0017] 前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述芍药苷的含量检测方法为：照 中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1 %磷 酸=28 : 72为流动相，检测波长为230nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇定容成50 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过 0. 45 的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述盐酸小檗碱的含量检测方法为：照中 国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：溶液 A=50 : 50为流动相，所述溶液A为取0.1%磷酸，再按每IOOmL的0.1 %磷酸加入0.1 g十二 烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000 ; 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足 损失的重量，过〇. 45 y m的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。 [0018] 前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述药物这样检测： 性状：颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色，片剂为棕褐色，气香，味酸苦； 鉴别：（1)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30?60°C的石油醚20mL，超 声20min，过滤，挥干，加入30?60°C石油醚ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照 药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 iU分 别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以石油醚：丙酮=10 : 1为展开剂展开,取 出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色 谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点； (2) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，力口 甲醇ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中 国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 ii 1分别点于同一 100_X IOOmm的娃胶G薄 层板上，以氯仿：甲醇=3 : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热 至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上 显相同颜色斑点； (3) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓 缩至ImL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照 药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇ImL使溶解，作为积实对照药 材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸 取上述4种溶液各10 y 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲 醇：水=100 : 17 : 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯：乙酸乙酯：甲酸：水 =20 : 10 : 1 : 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于 365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个 斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (4) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤 液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用 30?60°C的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇lmL， 作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成 每ImL含0. 6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10 ill分别 点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以环己烧：三氯甲烧：乙酸乙酯：甲酸=20 : 5 : 8 : 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置白光 下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (5)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细，加乙醚40mL,加热回流Ih,过滤弃去乙 醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提 取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇ImL 溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试 验，吸取上述3种溶液各IOii 1分别点于同一 200mmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以苯：乙酸 乙酯：冰醋酸=20 : 7 : 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至 斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相 同颜色斑点； 检查：应符合（《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定； 含量测定：（1)芍药苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1 %磷 酸=28 : 72为流动相，检测波长为230nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过 0. 45 的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0019] (2)盐酸小檗碱：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：溶液 A=50 : 50为流动相，所述溶液A为取0. 1%磷酸，再按每IOOmLO. 1 %磷酸加入0. I g十二 烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345 nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000 ; 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足 损失的重量，过〇. 45 y m的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0020] 发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究 实验例：检测方法研究 (一）样品及对照品来源 1、样品：陈皮，柴胡，白术(麸炒)，黄连，甘草(炎)，防风，枳实(麸炒)，乌梅，炒白巧，大 黄试药均购自贵州同济堂制药有限公司。
[0021] 颗粒剂：按照本发明所述颗粒剂制备方法进行制备，批号为：20121001、 20121002,20121003〇
[0022] 2、对照品：枳实对照药材(批号：963-9202)，陈皮对照药材(批号： 120969-201109)，乌梅对照药材(批号：121208-101)，甘草对照药材(批号： 120904-200914)，白术对照药材（批号：120913-200708)，柴胡对照药材（批号： 0992-200102)，柴胡对照药材（批号：0992-200102)，白芍对照药材(批号：0905-200106)，防 风对照药材(批号：120947-201108)，熊果酸（110742-200415)，柚皮苷（110722-201111)。[0023](二）鉴别。
[0024] 1、白术的薄层鉴别： (1)取颗粒剂5g，研细，加石油醚（30?60°C) 20mL，超声20min，过滤，挥干，加石油醚 (30?60°C) ImL溶解残渣，作为供试品溶液。另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶 液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10 iU分别 点于同一娃胶G薄层板上（IOOmmX 100mm)，以石油醚：丙酮（10 : 1)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以10%硫酸乙醇，l〇5°C加热至斑点清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
[0025] (2)专属性实验取缺白术的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂， 展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图1。
[0026] 2、防风的薄层鉴别： (1)取颗粒剂5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，加甲醇ImL溶解残渔， 作为供试品溶液。取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药 典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10 iU分别点于同一硅胶G薄层板上 (IOOmmXlOOmm),以氯仿：甲醇（3 : 1)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷以10%硫酸乙醇， l〇5°C加热至斑点清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上显相同颜色斑点。
[0027] (2)专属性实验取缺防风的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂， 展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图2。
[0028] 3、陈皮、枳实的薄层鉴别： (1)取颗粒剂5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至ImL作为供试品溶 液。取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液。取积实对照药材5g，加甲醇20min， 超声处理20min，滤过，滤液挥干，加甲醇ImL使溶解，作为枳实对照药材溶液。取柚皮苷适 量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附VIB) 试验，吸取上述4种溶液各10 y 1分别点于同一娃胶G薄层板上（IOOmmX 100mm)，以乙酸乙 酯：甲醇：水（100 : 17 : 13)为展开齐[|，展至约3cm，取出，瞭干，再以甲苯：乙酸乙酯： 甲酸：水（20 : 10 : 1 : 1)的上层溶液我展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝 试液，置于紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相 同颜色的两个斑点。与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
[0029] (2)专属性实验取缺陈皮、枳实的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品 溶剂，展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图3。
[0030] 4、乌梅的薄层鉴别： (1)取颗粒剂5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渔加水20mL使 溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚（30?60°C )浸泡 两次，每次15mL，（2min)倾去石油醚，残渣加无水乙醇lmL，作为供试品溶液。取乌梅对照药 材5g，同法制成对照药材溶液。取熊果酸适量，加无水乙醇制成每ImL含0. 6mg的对照品溶 液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述4种溶液各10 iU分别 点于同一娃胶G薄层板上（IOCkmX 100謹)，以环己烧：三氯甲烧：乙酸乙酯：甲酸（20 : 5 : 8 : 0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置白 光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
[0031] (2)专属性实验取缺乌梅的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂， 展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图4。
[0032] 5、炙甘草的薄层鉴别： (1)取颗粒剂5g，研细，加乙醚40mL，加热回流Ih,过滤弃去乙醚液，药渔加甲醇30mL， 加热回流lg，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正 丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇ImL溶解，作为供试品溶液。甘 草对照药材5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B) 试验，吸取上述3种溶液各10 y 1分别点于同一娃胶G薄层板上（200mmX 100mm)，以苯：乙 酸乙酯：冰醋酸（20 : 7 : 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加 热至斑点清晰，，置紫外光灯（254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上显相同颜色斑点。
[0033] (2)专属性实验取缺甘草的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂， 展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图5。
[0034] (三）含量测定： 芍药苷 1方法：（1)仪器与试剂：LC-2010C HT高效液相色谱仪（日本岛津)，甲醇、磷酸、乙腈 为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余为分析纯。供试品（柴芍肠宁颗粒剂）批号：20121001、 20121002,20121003〇
[0035] (2)色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C18柱（250 X4.6mm，5 iim)，流动相：甲醇-0? 1 % 磷酸（28:72)，流速：1.〇1111^1^11_1，柱温：25 1：，检测波长：23〇11111。理论塔板数按芍药苷 计算不低于2000。
[0036] (3)对照品溶液的配制：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 y g 即得。
[0037] (4)供试品溶液的配制：取颗粒剂，研细，取约lg，精密称定，置具筛锥形瓶中，精 密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0. 45 ii m 的微孔滤膜，即得。
[0038] 2提取条件的选择： (1)提取方法的选择 精密称取颗粒剂2g，置于50mL锥形瓶中，以甲醇30mL作为溶剂分别用超声与回流 的方法处理30 min，放冷后，补重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品，测定结果见表1。
【权利要求】
1. 一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述药物由柴胡250-400 份、炒白芍250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮 100-300份、乌梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料按照下述方法制 备而成：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅 料按照常规工艺制备成常规口服制剂；所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述 鉴别方法包括对炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测； 所述含量测定方法包括对芍药苷和/或盐酸小檗碱的含量测定。
2. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述炒白术 的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30?60°C的石油醚20mL， 超声20min，过滤，挥干，加入30?60°C石油醚ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对 照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 iU 分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以石油醚：丙酮=10 : 1为展开剂展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
3. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述防风的 鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥 干，加甲醇ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液； 照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 分别点于同一 100_X IOOmm的硅胶 G薄层板上，以氯仿：甲醇=3 : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加 热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上显相同颜色斑点。
4. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述炒陈皮 和炒枳实的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流 20min，过滤，浓缩至ImL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶 液；取积实对照药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇ImL使溶解， 作为枳实对照药材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄 层色谱试验，吸取上述4种溶液各10 ii 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上， 以乙酸乙酯：甲醇：水=100 : 17 : 13为展开剂，展至约3cm，取出，瞭干，再以甲苯：乙酸 乙酯：甲酸：水=20 : 10 : I : 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯 化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显 相同颜色的两个斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
5. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述乌梅的 鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤 过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干， 残渣用30?60°C的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水 乙醇ImL,作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水 乙醇制成每ImL含0. 6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各 10 ii 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以环己烧：三氯甲烧：乙酸乙酯： 甲酸=20 : 5 : 8 : 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点 清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色 的斑点。
6. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述炙甘草 的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加乙醚40mL，加热回流lh，过滤 弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁 醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇 ImL溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色 谱试验，吸取上述3种溶液各10 ii 1分别点于同一 200mmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以苯： 乙酸乙酯：冰醋酸=20 : 7 : 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加 热至斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上 显相同颜色斑点。
7. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述芍药苷 的含量检测方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1 %磷 酸=28 : 72为流动相，检测波长为230nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇定容成50 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过 0. 45 的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
8. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述盐酸小 檗碱的含量检测方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：溶液 A=50 : 50为流动相，所述溶液A为取0.1%磷酸，再按每IOOmL的0.1 %磷酸加入0.1 g十二 烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000 ; 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足 损失的重量，过〇. 45 y m的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
9. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述药物这 样检测： 性状：颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色，片剂为棕褐色，气香，味酸苦； 鉴别：（1)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30?60°C的石油醚20mL，超 声20min，过滤，挥干，加入30?60°C石油醚ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照 药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 iU分 别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以石油醚：丙酮=10 : 1为展开剂展开,取 出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色 谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点； (2 )取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，力口 甲醇ImL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中 国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10 ii 1分别点于同一 100_X IOOmm的娃胶G薄 层板上，以氯仿：甲醇=3 : 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热 至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上 显相同颜色斑点； (3) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓 缩至ImL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照 药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇ImL使溶解，作为积实对照药 材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸 取上述4种溶液各10 y 1分别点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲 醇：水=100 : 17 : 13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯：乙酸乙酯：甲酸：水 =20 : 10 : I : 1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于 365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个 斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (4) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤 液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用 30?60°C的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇lmL， 作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成 每ImL含0. 6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10 ill分别 点于同一 IOOmmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以环己烧：三氯甲烧：乙酸乙酯：甲酸=20 : 5 : 8 : 0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点清晰，置白光 下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (5) 取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加乙醚40mL,加热回流Ih,过滤弃去乙 醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流lh，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提 取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇ImL 溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试 验，吸取上述3种溶液各10 ii 1分别点于同一 200mmX IOOmm的娃胶G薄层板上，以苯：乙酸 乙酯：冰醋酸=20 : 7 : 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105°C加热至 斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相 同颜色斑点； 检查：应符合（《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定； 含量测定：（1)芍药苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1 %磷 酸=28 : 72为流动相，检测波长为230nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过 0. 45 的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOy 1，注入液相色谱仪，测定，即得； (2)盐酸小檗碱：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：溶液 A=50 : 50为流动相，所述溶液A为取0. 1%磷酸，再按每IOOmLO. 1 %磷酸加入0. I g十二 烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345 nm ;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000 ; 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24 y g ? mL'即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取lg，精密称定，置于锥形 瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足 损失的重量，过〇. 45 y m的微孔滤膜，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各IOu 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】A61P1/00GK104306500SQ201410550262
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】张永萍, 叶祖光, 徐剑, 刘耀 申请人:叶祖光