技术领域本发明属于医药技术领域，具体公开了含有乌司他丁的组合物在制备治疗膀胱癌药物中的用途。
背景技术：
膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤。是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是世界十大常见肿瘤之一。占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，而在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。膀胱癌可发生于任何年龄，甚至于儿童，其发病率随年龄增长而增加，高发年龄50～70岁。男性膀胱癌发病率为女性的3～4倍。膀胱癌中70～80％为浅表性膀胱癌，严重威胁着人们的健康和生活质量。膀胱癌的病因复杂，既有内在的遗传因素，又有外在的环境因素。较为明确的两大致病危险因素是吸烟和职业接触芳香胺类化学物质。膀胱尿路上皮癌分为非肌层浸润性尿路上皮癌和肌层浸润性尿路上皮癌。非肌层浸润性尿路上皮癌患者多采用经尿道膀胱肿瘤电切术，但是约70％的患者经尿道电切术后复发，术后膀胱内灌注卡介苗或化疗药治疗可使复发率降为25％～40％，常用的灌注化疗药物有丝裂霉素、阿霉素、噻替派、羟基喜树碱等。肌层浸润性尿路上皮癌和膀胱鳞癌、腺癌患者多采用全膀胱切除术治疗，有些患者可以采用膀胱部分切除术治疗。肌层浸润性尿路上皮癌患者也可先进行新辅助化疗+手术治疗的方法。转移性膀胱癌以化疗为主，常用的化疗方案有M-VAP(甲氨蝶呤+长春花碱+阿霉素+顺铂)和GC(吉西他滨+顺铂)及MVP(甲氨蝶呤+长春花碱+顺铂)方案，化疗的有效率为40％～65％。因此，寻找新的药物治疗和治疗方法是临床急需解决的问题。乌司他丁是从健康男性尿中分离纯化而得，分子量约为67000Da的酸性糖蛋白，是一种广谱的蛋白酶抑制制剂，能够抑制多种蛋白、糖和脂类水解酶的活性。其主要在肝脏中合成，由肾脏代谢随尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。1985年由日本首先开发上市，目前常用于治疗急性胰腺炎，慢性复发性胰腺炎，亦可用于急性循环衰竭的抢救辅助用药。也有研究表明乌司他丁对肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌等癌症细胞有较好的抑制作用。生长抑素于1973年首次从绵羊的下丘脑中分离出来，因发现它具有抑制垂体释放生长激素的作用而得名，其结构是一种环状的十四肽。生长抑素适用于肝硬化门脉高压所致的食管静脉出血；消化性溃疡应激性溃疡、糜烂性胃炎所致的上消化道出血；预防和治疗急性胰腺炎及其并发症；胰、胆、肠瘘的辅助治疗；其他：肢端肥大症、胃泌素瘤、胰岛素瘤及血管活性肠肽瘤。经检索，尚无发现有乌司他丁、生长抑素单独用药，以及乌司他丁和生长抑素组合用药在治疗膀胱癌的相关研究。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供含有乌司他丁的组合物在制备治疗膀胱癌药物中的用途。本发明的技术方案如下：含有乌司他丁的组合物在制备治疗膀胱癌药物中的用途，所述组合物包括乌司他丁和生长抑素。本发明将乌司他丁、生长抑素以单独及组合使用的形式进行抗人膀胱癌T24细胞株活性测试，发现乌司他丁对人膀胱癌T24细胞有一定的增殖抑制作用，而生长抑素对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用较弱，但当乌司他丁和生长抑素组合使用时，则表现出对人膀胱癌T24细胞有明显的增殖抑制作用。为此本发明提供了上述含有乌司他丁的组合物在制备治疗膀胱癌药物中的新应用，即该组合物可以作为治疗膀胱癌的药物使用。进一步的，所述乌司他丁和生长抑素的重量比为1:(0.2～0.6)。此时乌司他丁和生长抑素的组合物在抑制膀胱癌方面效果显著，与单独给药乌司他丁或生长抑素相比，在抑制膀胱癌方面具有协同作用。再进一步的，所述乌司他丁和生长抑素的重量比为1:0.4。此时乌司他丁和生长抑素的组合物在抑制人膀胱癌T24细胞增殖作用最强。经过对人膀胱癌裸鼠移植瘤的作用研究，证实乌司他丁+生长抑素组合物对荷瘤裸鼠肿瘤有明显的抑制作用，与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)，且优于现有药物顺铂。同时，实验小鼠未出现活动减少和精神萎靡等表现，实验期间小鼠进食无明显减少，无明显消瘦，无裸鼠死亡，移植瘤处皮肤无破溃或糜烂，且体重均有所增加。这些结果表明该组合物对膀胱癌有较好的治疗作用。为了更好的表达该组合物的形式，本发明所述组合物为冻干粉针剂或注射液。再进一步的，所述冻干粉针剂或注射液配以一种或多种药可接受的载体或添加剂。再进一步的，所述冻干粉针剂制药可接受载体或添加剂选自甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物；所述注射液可接受载体或添加剂选自注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物。因此，本发明的优势在于：本发明提供了含有乌司他丁的组合物在制备治疗膀胱癌药物中的新用途，即乌司他丁和生长抑素的组合物可以作为治疗膀胱癌的药物使用，开拓了乌司他丁和生长抑素的应用方向，同时也给广大膀胱癌患者提供一种新药，其疗效显著，毒副作用低。具体实施方式以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。实施例1乌司他丁57.14mg生长抑素11.428mg制备工艺：取处方量的乌司他丁和生长抑素，溶于500ml0.9％生理盐水注射液中，过滤、灌封，100摄氏度灭菌30min即得。实施例2乌司他丁57.14mg生长抑素22.856mg制备工艺：取处方量的乌司他丁和生长抑素，溶于500ml0.9％生理盐水注射液中，过滤、灌封，100摄氏度灭菌30min即得。实施例3乌司他丁57.14mg生长抑素34.284mg制备工艺：取处方量的乌司他丁和生长抑素，加20克甘露醇溶解，调节PH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装于1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。实施例4、抗人膀胱癌T24细胞株活性测试1、材料人膀胱癌T24细胞株，购自上海中科院细胞库；生长抑素，购自海南中和药业有限公司，国药准字H20034151。2、细胞的培养：用含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养液，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，实验时取对数生长期细胞。3、细胞生长抑制率的测定：将细胞浓度调至0.5×105·mL-1，每孔200μL接种于96孔板培养24h，加入以下的培养液，以下浓度均为终浓度：培养液1：2mg·mL-1乌司他丁+0.4mg·mL-1生长抑素培养液2：2mg·mL-1乌司他丁+0.8mg·mL-1生长抑素培养液3：2mg·mL-1乌司他丁+1.2mg·mL-1生长抑素培养液4：2mg·mL-1乌司他丁培养液5：2mg·mL-1生长抑素加入上述培养液后继续培养72h，各设4个复孔。培养72h后，每孔加入5mg·mL-1MTT20μL，再培养4h，吸弃孔内培养液，每孔加DMSO100μL，使结晶充分溶解，酶标仪测定吸光度，波长490nm。细胞生长抑制率(％)＝(1-处理组吸光度/对照组吸光度)×100％。4、结果抗人膀胱癌T24细胞株活性测试结果见表1所示。表1不同培养液对T24细胞生长抑制率组别细胞生长抑制率(％)培养液149.65±7.06培养液265.48±10.58培养液346.12±6.76培养液435.84±3.02培养液58.29±1.78由表1可以看出，各培养液均对T24细胞生长有一定的作用，培养液1～3乌司他丁+生长抑素组合物的抑制率明显高于单独使用乌司他丁或生长抑素，其中以培养液2(2mg·mL-1乌司他丁+0.4mg·mL-1生长抑素)的抑制率最高，说明乌司他丁+生长抑素在重量比为1:0.4时抑制作用最强。实施例5、对人膀胱癌裸鼠移植瘤的作用研究1、材料动物：BALB/c裸鼠32只，鼠龄4～5周，体重16～20g，由广东医学院动物实验中心提供；细胞株：BIU-87膀胱癌细胞株，购自上海细胞生物研究所细胞库；顺铂，购自南京制药厂有限公司，国药准字H20104016；生长抑素，购自海南中和药业有限公司，国药准字H20034151。2、方法(1)细胞培养及动物模型建立：BIU-87细胞为人膀胱上皮肿瘤细胞株，用含有10％胎牛血清、2.0mmol/LL-glutamine、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养液，在37℃、5％CO2的条件下进行培养，每隔3d用0.125％的胰蛋白酶和0.02％EDTA消化传代后继续培养。待传代足够数量后取对数生长期的细胞配制成细胞悬液。收集酶-细胞溶液，1000r/min离心6min，用培养液洗1遍，重悬细胞台盼蓝染色并用牛鲍计数板计数活细胞数达90％后，将单细胞悬液调整细胞浓度至1×108·mL-1准备接种至裸鼠身上。用6号针头注射器抽取0.2mL瘤细胞悬液(含活细胞数1×107)均接种于32只裸鼠右侧前肢后部皮下。整个操作过程均要求无菌操作。(2)小鼠模型的分组及用药：接种后4d成瘤达到实验标准后把32只荷瘤裸鼠随机分为4个实验组，每组8只。对照组：尾静脉注射10ml/kg生理盐水；乌司他丁：尾静脉注射20mg/kg乌司他丁；乌司他丁+生长抑素组：尾静脉注射20mg/kg乌司他丁+8mg/kg生长抑素；顺铂组：尾静脉注射3mg/kg顺铂。各组每天定时给药1次，连用2周。治疗后15天颈椎脱臼法处死全部小鼠，剥离小鼠皮下的瘤体并称瘤重，按公式计算肿瘤的平均抑瘤率(inhibitoryrate，IR)，IR＝(1-治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)×100％。统计学分析：各组数据均为计量资料，使用统计分析软件SPSS17.0，采用单因素方差分析和t检验进行统计分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。3、结果见下表2。表2各组裸鼠体重、移植瘤重量和抑瘤率的比较组别n移植瘤重量(g)抑瘤率(％)裸鼠体重(g)对照组81.13±0.12-26.12±4.23乌司他丁组80.58±0.08**48.67％**25.34±4.18乌司他丁+生长抑素组80.33±0.06**70.80％**24.84±4.15顺铂组80.60±0.10**46.90％**22.95±3.86**与对照组相比，P＜0.01。(1)不良反应观察和各治疗组对荷瘤裸鼠体重的影响：乌司他丁+生长抑素组小鼠未出现活动减少和精神萎靡等表现，实验期间小鼠进食无明显减少，无明显消瘦，无裸鼠死亡，移植瘤处皮肤无破溃或糜烂。各实验组裸鼠体重均缓慢增长，其中各用药组裸鼠体重增长比对照组略慢，但差异无统计学意义。(2)各治疗组对荷瘤裸鼠肿瘤重量和抑瘤率的影响：用药结束后第15天处死裸鼠，剖开皮肤可见肿瘤呈现类圆形或结节状，解剖其他脏器未见肿瘤转移病灶。各用药组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)，其中，乌司他丁+生长抑素组对荷瘤裸鼠肿瘤的抑制率高于乌司他丁组和现有药物顺铂组。虽然本发明己以较佳实施例公开如上，但它们并不是用来限定本发明，本发明的保护范围应当以本申请的权利要求保护范围所界定的内容为准。任何熟习本技术领域者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的各种变化或等同替换，都应当属于本发明的保护范围。