Egr-1基因在制备抗膀胱癌药物中的应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及EGR-I基因的新用途，具体是EGR-I基因在制备抗癌药物特别是抗膀 胱癌药物中的应用。
【背景技术】：
[0002] EGR-1，是早期应答基因中的一员，别名有 zif268, NGFI-A，Krox24 和 TIS8tl-Sl， 为锌指结构的转录因子，对细胞的早期生长起到调节作用。该基因定位于染色体5q23_31 上，mRNA全长3300bp，编码533个氨基酸，分子量约为59000Da。EGR-I在诱导分化、促进生 长、参与细胞凋亡等多个方面发挥生物学功能。EGR-I受多种因素如激素、细胞因子、生长 因子的刺激而通过蛋白激酶途径（如raS-Raf-MEK-ERK/JNK/p38-转录因子）而活化，其活 化后在不同细胞中能引起不同的基因表达调控模式。在癌症相关方面，EGR-I在包括乳腺 癌、肺癌、淋巴瘤、白血病等肿瘤细胞中常呈现低表达。其高表达可能促进细胞凋亡，抑制肿 瘤细胞生长。EGR-I基因在前列腺癌、Wilms肿瘤和淋巴肿瘤高表达而促进癌症的发生和发 展，在胶质母细胞瘤和星状细胞瘤中参与细胞转移。但该基因在膀胱癌细胞中的功能还未 见报道。
【发明内容】
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[0003] 本发明的目的在于提供EGR-I基因的一种新用途。
[0004] 本发明提供EGR-I基因在制备抗癌药物中的应用，特别是EGR-I基因在制备抗膀 胱癌药物中的应用。所述的EGR-I基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO :1。
[0005] 本发明通过构建EGR-I基因的超表达载体，转染膀胱癌细胞，结果表明：转染后的 膀胱癌细胞中EGR-I基因的mRNA水平均显著上调，肿瘤细胞出现变圆，贴壁性变差，细胞活 性显著降低，最终出现死亡。
[0006] 本发明筛选得到一个高效抑制膀胱癌细胞的基因，为新药靶的发现及肿瘤药物设 计提供基础数据。
【附图说明】：
[0007] 图I :EGR-1超表达后mRNA水平表达：qPCR结果（pcDNA3. 1为空载体； pcDNA3. 1-EGR-1为带有EGRl基因的超表达载体
[0008] 图2 :超表达EGR-I后肿瘤细胞形态变化：A重组质粒pcDNA3. 1-EGR-1转染到T24 细胞24h后细胞形态；B重组质粒pcDNA3. 1-EGR-1转染到T24细胞48h后细胞形态
[0009] 图3 :EGR-1超表达后细胞活性检测
【具体实施方式】：
[0010] 实施例1 :EGR-1基因抑制膀胱癌T24细胞
[0011] 一、重组表达载体的构建
[0012] I、PCR产物的制备
[0013] 以T24细胞RNA反转录的cDNA为模板，基于EGR-I基因的全长cDNA序列（Gene ID: 1958)设计用带有酶切位点的表达引物进行PCR扩增。反应条件为：94°C预变性3min，94°〇变性3〇8,60°0退火4〇8,72°0延伸31^11，共35个循环，72°0保温1〇1^11，引物序列见表 1。PCR产物回收过程严格按照OMEGA公司的Gel Extraction Kit的说明书进行。
[0014] 表 1EGR-1PCR 引物
[0015]
【主权项】
1. EGR-I基因在制备抗癌药物中的应用；所述的EGR-I基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO :1〇 2. EGR-I基因在制备抗膀胱癌药物中的应用；所述的EGR-I基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO :1〇
【专利摘要】本发明提供EGR-1基因在制备抗癌药物中的应用，特别是EGR-1基因在制备抗膀胱癌药物中的应用。本发明通过构建EGR-1基因的超表达载体，转染肿瘤细胞，结果表明：转染后的肿瘤细胞中EGR-1基因的mRNA显著上调，肿瘤细胞出现变圆，贴壁性变差，细胞活性下降66.2％，最终出现死亡。本发明筛选得到一个高效抑制肿瘤细胞的基因，为新药靶的发现及肿瘤药物设计提供基础数据。
【IPC分类】A61K48-00, A61P35-00
【公开号】CN104857529
【申请号】CN201510259508
【发明人】张建珍, 任璐, 张婷婷, 马恩波, 郑耀武, 任连生
【申请人】山西大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月20日