本发明涉及生物医学领域，特别地，涉及一种包含干细胞分泌因子的组合物及其制备方法，以及用该组合物制备的包含干细胞分泌因子的口腔喷剂。
背景技术：
干细胞(stem cells，SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称之为“万用细胞”。干细胞可以在机体生命过程中无限期分裂，并在合适的条件或给予恰当的条件后，能分化产生多种不同的细胞类型。
干细胞可分泌许多生物活性分子，如间充质干细胞至少分泌免疫调节因子(HGF、LIF)、趋化因子(RANTES、SDF-1α、fractalkine、MIP-1α、MCP-1、MCP-2)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-β1、MCP-1、VEGF、GM-CSF)、TIMP-1)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等。
人口腔的舌下粘膜上皮未被角质化，最有利于生物有效分子的全身吸收；其次是齿龈和硬腭，一般来说，人口腔粘膜对生物分子的通透性：舌下粘膜>颊粘膜>牙龈。
人体的呼吸系统主要由鼻、咽、喉、气管、支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸细支气管、肺泡管及肺泡囊组成。从气管到肺泡，气道的管径越来越小，但数量却大大增加。呼吸道表面覆盖假复层纤毛柱状上皮，纤毛细胞间夹有杯状细胞，柱状细胞游离面可见纤毛。
生物有效分子在肺部主要的吸收部位是肺泡。正常成人大约有几亿个肺泡，总表面积约为200m2，与小肠粘膜的微绒毛总面积大致相当。肺泡是半球状的囊泡，由单层扁平上皮细胞构成，厚度仅0.1-0.5μm，相邻肺泡之间的薄层结缔组织为肺泡隔。肺泡隔内有丰富的毛细血管及胶原纤维和弹性纤维。肺泡壁和毛细血管壁间的厚度仅约1μm，是气体交换和生物有效分子吸收的良好场所。由于肺泡吸收表面积大、毛细血管网丰富、转运距离极小，因此肺部给药吸收迅速。另外，肺部吸收相对胃肠道吸收来说，对生物有效分子的代谢作用小，可避免肝脏的首过效应影响。
技术实现要素：
为解决以上技术问题，本发明提供了一种制备包含干细胞分泌因子的组合物的方法，其包括以下步骤：
S1：从胚性组织中分离出间充质干细胞；
S2：扩增培养所述间充质干细胞，得到包含干细胞分泌因子的培养物；
S3：从所述培养物中去除间充质干细胞得到包含干细胞分泌因子的溶液；
S4：纯化所述溶液，并进行真空冷冻干燥得到包含干细胞分泌因子的组合物。
进一步地，所述胚性组织来自脐带。
进一步地，去除脐带外膜，得到华通胶组织，剪成1mm3的组织块。
进一步地，通过用胰酶和胶原酶消化所述组织块来分离。时间为1-2小时左右。
进一步地，消化后用200目筛网过滤，然后用生理盐水洗涤，所得细胞加入干细胞培养基于含5％CO2的37℃培养箱培养。
进一步地，待细胞长至80％融合时传代培养，得到所述间充质干细胞。
进一步地，S2中用干细胞培养基来扩增培养所述间充质干细胞，直至所述间充质干细胞高表达细胞表面标志CD29和CD105。
进一步地，S4中通过离心的方法从所述培养物中去除所述间充质干细胞。
进一步地，S5中通过硫酸铵沉淀去除杂质然后通过透析除盐，由此纯化所述溶液。
本发明还提供了一种通过上述方法制备得到的包含干细胞分泌因子的组合物。
本发明还提供了一种由上述组合物制备得到的包含干细胞分泌因子的口腔喷剂。
本发明的有益效果是：本发明制备的口腔喷剂通过呼吸道由口腔、咽、喉、气管、支气管、肺部等部分完成吸收过程。主要经过口腔黏膜及肺部吸收，人口腔的舌下粘膜上皮未被角质化，最有利于生物有效分子的全身吸收；其次是齿龈和硬腭，一般来说，人口腔粘膜对生物分子的通透性：舌下粘膜>颊粘膜>牙龈。口腔粘膜吸收没有肝脏的首过效应，有效成分直接由颈内丰富的静脉进入循环系统，迅速发挥作用。起效所需时间短。对生物有效分子的依从性好，吸收过程和吸收效果易于控制；粘膜不易损伤，易于修复；避免胃肠道的消化酶的消化作用；可发挥局部或全身作用。
肺部具有巨大的表面积，毛细血管丰富，能够快速高效的吸收分子量较大的蛋白多肽类物质，有效吸收率高，肺泡囊壁由单层上皮细胞构成，这些细胞紧靠毛细血管网，气血屏障较小，蛋白和多肽类通过空气血液途径交换的距离短，速度快；肺部酶分布集中而且生物活性低，蛋白质和多肽类物质通过肺部吸收仍可保持生物活性；肺部吸收生物有效分子可以避免胃肠道对生物有效分子的不良影响及能避开肝脏的首关效应，提高生物利用度。
本发明的组合物和口腔喷剂中包含间充质干细胞分泌的细胞因子，间充质干细胞至少分泌免疫调节因子(HGF、LIF)、趋化因子(RANTES、SDF-1α、fractalkine、MIP-1α、MCP-1、MCP-2)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-β1、MCP-1、VEGF、GM-CSF)、TIMP-1)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等。干细胞分泌的这些生物活性分子可以支持干细胞自身的生物活性功能，同时改善机体整体健康状态，调节整体或者局部的微环境，修复细胞、改善细胞代谢、激活衰老细胞的功能，促进机体组织再生和器官功能恢复，刺激机体其他成体细胞的抗衰老作用。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
1.干细胞口腔喷剂的制备
1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带切割分为细小组织；
2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块1-2小时，以分化出细胞。收集分化出的细胞用干细胞培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞；
3)间充质干细胞的扩增培养，用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养，根据细胞生长状况进行换液，补液；
4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面标志CD29、CD105的表达情况，高表达上述检测物质时，离心去除细胞，得到含间充质干细胞分泌因子的细胞培养液；
5)取细胞培养液进行硫酸铵沉淀，透析除盐后，经真空冷冻干燥制成包含干细胞分泌因子的组合物，然后将该组合物制备成口腔喷剂。
2.培养液中一些干细胞分泌因子的含量
照常规方法培养间充质干细胞，观察间充质干细胞生长情况，当细胞达到80％-90％融合时，取部分上清，用ELISA法定量测定细胞培养上清中IL-6、IL-8、MCP-1、TIMP-1的含量，设3个平行孔，得到的结果如表1所示
表1培养液中一些细胞因子的含量
由表1中可知，培养液中含有一定浓度的干细胞分泌因子，因此，尤其制备的组合物和口腔喷剂中也含有干细胞分泌因子。可用于亚健康人群，需要改善免疫状态的人群、需要提高机体抗炎能力的人群，有抗衰老需求的人群。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。