一种提高猴头菇多糖肠道吸收的纳米化方法与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种提高猴头菇多糖肠道吸收的纳米化方法。

背景技术：

猴头菇多糖是从优质猴头菇子实体中提取的有效活性成分，猴头菇的主要成分是多糖类和猴头菌素，经热水提取的猴头菇多糖对小白鼠肉瘤180和艾氏腹水癌有明显的抑制作用，同时具有助消化、利五脏的功能，对慢性胃炎、十二指肠溃疡等多种消化道疾病均有较好的疗效，能提高人体免疫能力。

目前针对的猴头菇多糖的纳米化方法包括了PLGA溶剂扩散法，但其存在三个问题：1.直接将多糖与PLGA混合不利于多糖的包裹，降低了包封率。2..用二氯甲烷作为有机相不利于形成较小的纳米粒子。3. 将该混悬液滴加到明胶水溶液容易造成水溶性药物从聚合物相的泄漏。4.猴头菇浸膏所含物质复杂，不利于有效成分的确定和提高药效。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提高猴头菇多糖肠道吸收的纳米化方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种提高猴头菇多糖肠道吸收的纳米化方法，所述方法包括如下：

（1）将纯化的猴头菇多糖配成5wt.%的溶液置于烧杯中，然后将5wt.%PEG 溶液按照猴头菇多糖溶液：PEG 溶液体积比为1：40的量加入，磁力搅拌机2000 rpm 搅拌10 min，静置待表面气泡基本消失后，置于-20℃的冰箱预冻12 小时；

（2）冻好的样品放到真空冷冻干燥机中冻干24 h；用二氯甲烷洗涤冻干的粉末，经涡旋使PEG 充分溶解后用12000 rpm 离心5 min，除去上清液，加入新的二氯甲烷，重复3次，放入真空干燥箱过夜，得到干燥的多糖纳米颗粒；

（3）将多糖纳米颗粒和PLGA溶解于二氯甲烷与丙酮的混合液中，多糖纳米颗粒和PLGA的质量比为1:5，超声得到混悬液，边搅拌边加入到5wt.%的普朗尼克水溶液中，溶液置于旋转蒸发仪中，温度为60℃，直至二氯甲烷与丙酮挥发完全，离心，微球沉降析出；收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得成品。

二氯甲烷与丙酮的体积比例为2.2:1。

本发明的优点在于：

本发明通过使用分段式的制备，将多糖与PEG混合后再与PLGA混合提高了纳米多糖的包封率和载药量。将二氯甲烷与丙酮以2.2：1混合，促进聚合物的分散，容易形成较小的粒子。将该混悬液滴加到明胶水溶液容易造成水溶性药物从聚合物相的泄漏，本发明通过三甘油脂代替明矾水溶液解决了此类问题。猴头菇浸膏所含物质复杂，不利于有效成分的确定，本发明首次采用纳米扩散法包裹纯化多糖，明确了药物构成，提高了药物药效。

附图说明

图1 不同猴头菇多糖的转运量。

图2不同猴头菇多糖的转运率。

具体实施方式

实施例1

一种提高猴头菇多糖肠道吸收的纳米化方法，所述方法包括如下：

（1）将纯化的猴头菇多糖配成5wt.%的溶液置于烧杯中，然后将5wt.%PEG 溶液按照猴头菇多糖溶液：PEG 溶液体积比为1：40的量加入，磁力搅拌机2000 rpm 搅拌10 min，静置待表面气泡基本消失后，置于-20℃的冰箱预冻12 小时；

（2）冻好的样品放到真空冷冻干燥机中冻干24 h；用二氯甲烷洗涤冻干的粉末，经涡旋使PEG 充分溶解后用12000 rpm 离心5 min，除去上清液，加入新的二氯甲烷，重复3次，放入真空干燥箱过夜，得到干燥的多糖纳米颗粒；

（3）将多糖纳米颗粒和PLGA溶解于二氯甲烷与丙酮的混合液中，多糖纳米颗粒和PLGA的质量比为1:5，超声得到混悬液，边搅拌边加入到5wt.%的普朗尼克水溶液中，溶液置于旋转蒸发仪中，温度为60℃，直至二氯甲烷与丙酮挥发完全，离心，微球沉降析出；收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得成品。

使用该制备方法后，纳米多糖的包封率从传统方法的44%提高到56%，载药量从4.15%提高到6.64%。

实施例2

1. 鸡肠上皮原代细胞的制备

无菌取鸡胚肠组织，PBS反复洗涤，剔除肠系膜，剪成小于1 mm³的组织块，Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶联合消化，在37 ℃水浴箱中，80 r/min搅拌30 min。消化完成后以1000 r/min离心10 min，向细胞沉淀中加入少量DMEM培养基悬浮细胞，离心洗涤3次后，收集的细胞用含10% FBS的细胞培养液DMEM 12 g/L +20 μg/L 表皮生长因子+100 mg/L 肝素钠+110 mg/L 丙酮酸钠+2.5 mg /L胰岛素+200 mmol/L 谷氨酸氨+100 U/L 青霉素+100 μg/L 链霉素悬浮，种植到玻璃细胞瓶中。

2. 鸡小肠上皮细胞单层模型的建立

将对数生长期细胞按 1×10⁵/cm² 利用Transwell 12孔板上培养，倒置显微镜观察培养后第2、5、12、20 d的生长情况，并通过透射电镜对生长20 d的细胞进行超微结构观察，确定鸡小肠上皮细胞从形态学上看已形成完整的细胞单层。

3. 纳米猴头菇多糖在鸡小肠上皮细胞上的跨膜转运

鸡小肠上皮细胞在Transwell 12孔板上培养成单层细胞后，设2个试验组（37 ℃，pH值7.4），分别是猴头菇多糖和纳米猴头菇多糖。各组从AP→BL侧的转运时，将多糖加入到细胞AP侧（0.4 mL），在BL侧加入不含药物的HBSS液（0.6 mL），每组重复 4 孔。放置37℃恒温摇床中孵育，根据实验需要，不同时间点从BL侧取样检测转运量。

4.结果

从图1-2可以看出，纳米猴头菇多糖的转运量与转运率优于猴头菇多糖。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。