一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂的制作方法

本发明涉及一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂，属于抗人乳头瘤病毒缓释给药技术领域。

背景技术：
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人乳头瘤病毒以人体的皮肤和粘膜的复层鳞状上皮为唯一宿主，可引起恶性增生，极易造成口腔、男女生殖器官的感染及病变。据权威机构发布的数据，女性一生中对人乳头瘤病毒的感染率高达80％-90％，其中超过10％的女性感染者发生病变，严重者导致宫颈癌的发生。感染人乳头瘤病毒的女性大多数患有阴道炎、宫颈炎等常见疾病，使得阴道微环境更加复杂，导致目前现有的凝胶剂和栓塞剂的给药效果降低且因其无缓释作用，易造成病情反复且机体易于产生耐药性，影响了药效的发挥和治疗的效果。因此，临床上急需一种既能控制人乳头瘤病毒感染又具有高效稳定的多重杀菌性能的缓释给药制剂。

技术实现要素：
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针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

本发明的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂以重量份计由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5-10份，致孔剂80-90份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白2-5份，所述的壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在50℃-80℃反应所得。

优选的，所述致孔剂为N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环或二甲基亚砜。

进一步优选，所述的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂以重量份计由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔剂85份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白5份；所述的壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在65℃反应所得，所述的致孔剂为二甲基亚砜。

本发明的一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂的制备方法为：步骤一、将原料中的壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应8-12小时，旋蒸法除去丙酮；其中所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为25-68∶10-35∶0.02-0.5；

步骤二、将步骤一所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过滤；

步骤三、将步骤二所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为5-10∶80-100∶2-5∶20-25；

步骤四：将步骤三所得的水相缓慢滴加到有机相中，以8000-10000r/min的转速剪切10-15分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

进一步优选，所述步骤二中所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为65∶35∶0.5；

进一步优选，所述的步骤三中聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为10∶100∶5∶25。

本发明的有益效果：采用聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯，致孔剂和含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白组成多孔缓释制剂，其中壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白采用壳聚糖季铵盐与乳球蛋白聚合的方法得到，该聚合物既保留了壳聚糖季铵盐的多重杀菌性能，又保留了乳球蛋白的特异性，抑制人乳头瘤病毒的DNA复制活性，提高了给药的有效性。本发明采用聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物为基质，该材料具有一定亲水性且降解时间适中，降解产物可完全被吸收，在人体内无残留；本发明采用冷冻干燥工艺，最大限度的保留了壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的生物特异性，致孔剂在冷冻干燥过程中被除掉而留下孔径适中的多孔结构，该结构利于壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的缓慢释放。

附图说明：

为了易于说明，本发明由下述的具体实施及附图作以详细描述。

图1为本发明实施例1-4中制备的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂临床使用结果分析图；

图2为多孔缓释制剂的溶出曲线。

具体实施方式：

本具体实施方式采用以下技术方案：所述的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂以重量份计由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5-10份，致孔剂80-90份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白2-5份，所述的壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在50℃-80℃反应所得。

优选的，所述致孔剂为N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环或二甲基亚砜。

进一步优选，所述的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂以重量份计，由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔剂85份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白5份；所述的壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在65℃反应所得，所述的致孔剂为二甲基亚砜。

本具体实施方式的一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂的制备方法为：步骤一、将原料中的壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应8-12小时，旋蒸法除去丙酮；其中所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为25-68∶10-35∶0.02-0.5；

步骤二、将步骤一所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过滤；

步骤三、将步骤二所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为5-10∶80-100∶2-5∶20-25；

步骤四：将步骤三所得的水相缓慢滴加到有机相中，以8000-10000r/min的转速剪切10-15分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

进一步优选，所述步骤二中所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为65∶35∶0.5；

进一步优选，所述的步骤三中聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为10∶100∶5∶25。

本具体实施方式含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂的用途，在于抗人乳头瘤病毒感染且多重杀菌的缓释给药。

以下结合具体实施例来对本发明作进一步的描述。

实施例1

一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂，由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯5份，致孔剂80份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白2份；所述壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在56℃反应所得，所述多孔缓释制剂的孔径为40微米，所述致孔剂为二甲基亚砜。实施例1的制备方法，包括以下步骤：

①将壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应10小时，旋蒸法除去丙酮；所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为60∶35∶0.02；

②将步骤①所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过夜；

③将步骤②所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为5g∶80g∶2g∶20g；

④将步骤③所得的水相缓慢滴加到有机相中，以10000r/min的转速剪切10分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

实施例2

一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂，由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯8份，致孔剂90份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白2份；所述壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在56℃反应所得，所述多孔缓释制剂的孔径为120微米，所述致孔剂为二甲基亚砜。实施例2的制备方法包括以下步骤：

①将壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应8小时，旋蒸法除去丙酮；所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为70∶30∶0.5；

②将步骤①所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过夜；

③将步骤②所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为10g∶80g∶2g∶25g；

④将步骤③所得的水相缓慢滴加到有机相中，以10000r/min的转速剪切10分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

实施例3

一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂，由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯10份，致孔剂85份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白5份；所述壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在56℃反应所得，所述多孔缓释制剂的孔径为80微米，所述致孔剂为二甲基亚砜。

实施例3的制备方法包括以下步骤：

①将壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应10小时，旋蒸法除去丙酮；所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为65∶35∶0.5；

②将步骤①所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过夜；

③将步骤②所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为10g∶100g∶5g∶25g；

④将步骤③所得的水相缓慢滴加到有机相中，以10000r/min的转速剪切10分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

实施例4

一种含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂，由以下原料组成：聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯8份，致孔剂85份和壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白5份；所述壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白是由壳聚糖季铵盐与乳球蛋白在56℃反应所得，所述多孔缓释制剂的孔径为60微米，所述致孔剂为二甲基亚砜。

实施例4的制备方法，包括以下步骤：

①将壳聚糖季铵盐与乳球蛋白加入反应瓶中，以丙酮为溶剂，在催化剂存在条件下回流反应12小时，旋蒸法除去丙酮；所述壳聚糖季铵盐、乳球蛋白和催化剂的质量比为75∶25∶0.05；

②将步骤①所得反应物加入PBS缓冲溶液中溶解，使用1000D透析袋透析过夜；

③将步骤②所得壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白溶于蒸馏水中，得到水相，将聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯溶于致孔剂中，得到有机相；所述聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯、致孔剂、壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白和蒸馏水的质量比为8g∶80g∶5g∶25g；

④将步骤③所得的水相缓慢滴加到有机相中，以10000r/min的转速剪切10分钟，经冷冻干燥工艺制备得到含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂。

将实施例1-4所得的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂进行临床应用试验，过程和结果如下：

选用150名既感染人乳头瘤病毒且有宫颈炎的妇女作为试验对象，实施例1-4每组随机分配30患者，随机分配30患者使用上市妇科凝胶。使用方法均为每晚睡前将含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂放入阴道深处，每晚一支，连续使用7天为一个疗程，一个疗程后复查，结果如图1所示。图1为临床使用结果分析图；

将实施例1-4所得的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂进行体外溶出实验，溶出曲线如图2所示，图2为多孔缓释制剂的溶出曲线。

体外溶出实验表明，本发明的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂具有优良的缓释给药效果，给药速度均匀、可控。临床统计结果表明，本发明的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂对人乳头瘤病毒和宫颈炎症具有良好的治愈效果，给药两天，病情得到有效控制且无不良反应。给药一个疗程后，治愈率高达90％以上，一个月后复查，未发生复发和药物依赖性。本发明的含壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的多孔缓释制剂既保留了壳聚糖季铵盐的多重杀菌性能，又保留了乳球蛋白的特异性，抑制人乳头瘤病毒的DNA复制活性，提高了给药的有效性。本发明制备的基质材料具有特殊的多孔结构，有利于壳聚糖季铵盐修饰的乳球蛋白的缓慢释放。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。